Xfect转染试剂操作中文手册(clontech)

Xfect 质粒DNA 转染试剂

• 操作简便且兼容血清 • 转染效率高 • 细胞毒性极低 • 细胞类型广泛

操作流程图：

Xfect 质粒DNA 转染试剂操作步骤(6-孔板)：

1. 转染前的准备

贴壁细胞: 在转染的前1d ，接种1ml 合适密度的细胞于6-孔板的单孔中，使转染当天细胞融合度能够达到50–80%。

悬浮细胞: 在混匀Xfect Polymer 前，将细胞以5 x10e5–1.25 x10e6/1ml 接种于6-孔板中培养。

2. 漩涡混匀Xfect Polymer 。

3. 对于单孔转染，分别在2个离心管中混匀以下试剂： Tube 1 (质粒DNA)

---μl (5 μg) 质粒DNA

---μl Xfect 反应缓冲液 100 μl 总体积

T ube 2 (Polymer) 1.5 μl Xfect Polymer (100μg /μl ) 98.5 μl Xfect 反应缓冲液 100 μl 总体积

注意:

• 上述为6-孔板单孔转染所需的量。 • 每1μg 质粒DNA 加0.3 μl Xfect Polymer 。 • 对于大多细胞来说，5 μg 的质粒DNA 是最佳使用量。若您是首次使用Xfect 转染细胞，需要按照2.5 μg ，5 μg 和7.5 μg 的质粒DNA 的量进行梯度实验，确定质粒DNA 的最优使用量。 实验证明，质粒DNA 的量

不能少于2.5 μg ，不然会造成转染效率低（经转染Hela 细胞实验验证）。 • Xfect Polymer 预混液室温放置不要超过30min 。

4. 漩涡混匀每管混合物。

5. 将Xfect Polymer 预混液和DNA 预混液混合，再将混合液以适中的速度漩涡10sec 。

6. 室温孵育10 min ，形成Xfect/DNA 复合物。

7. 将200μl 纳米复合物逐滴加入细胞培养基中，轻柔地前后摇晃混匀。

注意:

无需去除培养基中的血清，当纳米复合物加入培养基后，培养基的颜色会有些改变，这是正常的。

8. 37℃孵育培养板。

9. 4 hr 后，吸走培养基，向培养板中加入2ml新鲜培养基，再将培养板放回37℃培养箱继续培养，48 hr后检测基因的表达。

Xfect 成人干细胞转染试剂

•转染效率优于其他竞争产品

• 人间质干细胞的转染效率为67%

• 人脂肪干细胞的转染效率99%

• 对细胞分化无任何影响

成人干细胞专用Xfect质粒DNA转染试剂操作步骤(6-孔板)：

1.转染前1d，接种2ml细胞，不同类型的细胞需要不同的接种密度，

转染时细胞应该达到的融合度：

hMSC的融合度为50–60%

hADSC的融合度为60–70%

2. 室温下解冻Xfect Adult Stem Cell Polymer，漩涡混匀。

3. 对于每个孔转染实验，将以下试剂分别在2个离心管中混匀：

Tube 1 (质粒DNA)

---μl (7.5 μg) 质粒DNA

---μl Xfect 反应缓冲液100 μl 总体积

T ube 2 (Polymer)

3 μl Xfect ASC Polymer(50μg/μl) 97 μl Xfect 反应缓冲液

100 μl 总体积

注意:

• Xfect ASC Polymer预混液室温放置不要超过30min。Xfect ASC Polymer在4℃放置不超过3个月。

•上述为6-孔板单孔转染所需的量。

4. 将各管中混合物漩涡混匀。

5. 将Xfect ASC Polymer预混液和DNA预混液以适中的速度漩涡10sec。

6. 室温孵育10 min，形成Xfect ASC/质粒DNA复合物。

7. 从步骤1的6-孔培养板中吸掉1ml培养液，保证在转染时6-孔板中剩余1ml培养基。

8. 将200μl复合物逐滴加入细胞培养基中，轻柔地前后摇晃混匀。

注意: 无需去除培养基中的血清。当纳米复合物加入培养基后，培养基的颜色会有些改变，这是正常的。

9. 37℃孵育培养板。

10. 4 hr后，吸掉培养基，然后向培养板中加入2ml新鲜培养基，37℃继续培养。

11. 每天更换一次培养基，48 hr后检测基因的表达。

Xfect 小鼠胚胎干细胞转染试剂

•转染效率优于其他竞争产品

•超高的基因表达Superior gene expression in mES cells

•操作简便且兼容血清

小鼠胚胎干细胞专用Xfect质粒DNA转染试剂操作步骤(6-孔板)：

1.转染前的准备

在转染前5hr，接种5 x 10e5/1ml–1 x 10e6/1ml细胞于6-孔板中。为了防止ES细胞分化，建议使用0.2%明胶包被的培养板（使用2%明胶母液(Sigma cat.No.G1393)去包被培养板）。将包被好的培养板过夜干燥后接种ES细胞。

2. 漩涡混匀Xfect mESC Polymer。

3. 对于单孔转染，分别在2个离心管中混匀以下试剂：

Tube 1 (质粒DNA)

---μl (5 μg) 质粒DNA

---μl Xfect 反应缓冲液100 μl 总体积T ube 2 (Polymer)

2.5 μl Xfect mESC Polymer(100μg/μl) 97.5 μl Xfect 反应缓冲液

100 μl 总体积

注意:

• 上述为6-孔板单孔转染所需的量。

• 每1ug 质粒DNA加0.5 μl Xfect mESC Polymer。

• 对于大多细胞来说，5 μg 的质粒DNA是最佳使用量。若您是首次使用Xfect mESC转染您的细胞，按2.5 μg，5 μg和7.5 μg的质粒DNA进行梯度转染实验，确定质粒DNA的最优使用量。实验验证，质粒DNA 使用量最少不能少于2.5 μg，不然会造成转染效率低。

•Xfect mESC Polymer预混液室温放置不要超过30min。

4. 漩涡混匀各管混合物。

5. 将Xfect mESC Polymer预混液和DNA预混液以适中的速度漩涡10sec。

6. 室温孵育10 min，形成复合物。

7. 将200μl复合物逐滴加入细胞培养基中，轻柔地前后摇晃混匀。

注意: 无需去除培养基中的血清。当纳米复合物加入培养基后，培养基的颜色会有些改变，这是正常的。

8. 37℃孵育培养板。

9. 3 hr 后，吸走培养基，然后加入2ml新鲜完全生长培养基，放回37℃培养箱继续培养。

10. 每天更换一次培养基，48 hr后检测基因的表达。