免疫浊度技术
免疫浊度技术
免疫浊度技术免疫浊度技术介绍：免疫浊度技术早期主要用于血清、尿和脑脊液中蛋白质含量的测定。
免疫浊度技术是利用可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。
当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出样品的含量。
目前免疫浊度技术主要用于各种蛋白质、载脂蛋白、半抗原(如激素、毒物和各种治疗性药物等)及微生物等检测。
免疫浊度技术正常值：一般是呈阴性结果。
免疫浊度技术临床意义：异常结果：1、免疫功能监测：免疫球蛋白G、A、M，免疫球蛋白轻链κ、λ，补体C3、C4测定。
2、心血管疾病监测:载脂蛋白A、B，脂蛋白(a)，C-反应蛋白等。
3、炎症状况监测:C-反应蛋白，a-酸性糖蛋白，触珠蛋白，铜蓝蛋白等。
4、风湿性疾病检测：ASO、RF、CRP5、肾脏功能检测：尿微量白蛋白，a-微球蛋白，β-微球蛋白，转铁蛋白，免疫球蛋白G等。
6、营养状态监测：白蛋白，前白蛋白，转铁蛋白等。
7、凝血及出血性疾病的检测：抗凝血酶Ⅲ，转铁蛋白，触珠蛋白等。
8、血脑屏障监测：脑脊液白蛋白，免疫球蛋白G、A、M。
需要检查的人群：一般要求免疫力低下者检查，新生儿和孕妇也要做某些项目的检查。
免疫浊度技术注意事项：不合宜人群：无特殊要求。
在服用免疫力药物时最好不要检查。
检查前禁忌：一般是早晨空腹抽血检查，因此禁忌暴饮暴食和剧烈运动。
检查时要求：注意伪浊度的影响：伪浊度形成原因很复杂，主要是抗血清含有非特异性的交叉反应性杂抗体成分;增浊剂浓度和反应时间掌握不当;样品本身的浊度处理不当;试剂的污染和变质;器材尤其是比色杯等不够清洁等因素。
免疫浊度技术检查过程：免疫浊度技术是利用可溶性抗原、抗体在液相中特异结合，形成一定大小的抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。
当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出样品的含量。
免疫浊度分析实验报告
免疫浊度分析实验报告引言免疫浊度分析是一种常用的免疫学实验技术，其原理是通过测定免疫反应产生的溶胶与胶体的聚集物浓度，进而对生物样本中的目标物质进行定量分析。
本实验旨在通过免疫浊度分析，检测目标抗原的含量，为进一步研究提供数据支持。
实验方法材料准备1. 目标抗原样本（待测物质）2. 酶标记的一抗（一抗：二抗复合物，用于与目标抗原结合）3. 二抗（用于与酶标记的一抗结合）4. 酶标记物（如辣根过氧化物酶HRP）5. 显色底物（如TMB）实验步骤1. 将待测物质加入特定的孔板孔中，使其固定在孔板表面。
2. 加入酶标记的一抗，与待测物质发生免疫反应，形成一抗：二抗复合物。
3. 加入二抗，与酶标记的一抗结合，形成复合物。
4. 加入显色底物，被酶标记的一抗催化反应，产生显色产物。
5. 使用光密度计测量反应产物的光密度，即溶胶与胶体的聚集物浓度，从而定量分析目标物质的含量。
实验结果通过光密度计测量，得到各个孔位的测量结果如下表所示：孔位光密度1 0.4322 0.6753 0.5124 0.7215 0.634根据测量结果，根据已知样品的浓度与其对应的光密度，可以绘制标准曲线。
进一步通过比较待测样品的光密度与标准曲线进行定量分析，得到待测物质的含量。
结论本实验通过免疫浊度分析技术，成功检测了目标抗原的含量并进行了定量分析。
根据测量结果绘制的标准曲线，可以准确计算待测物质的浓度。
该方法具有灵敏度高、结果可靠等优点，并且较常用的免疫学方法更为简便快速。
讨论与展望在实验中，免疫浊度分析技术在目标抗原检测中发挥了重要作用。
然而，由于实验原理和机制的复杂性，仍然存在一些局限性和不足之处。
在未来的研究中，我们可以进一步优化实验方法，提高技术的准确性和稳定性，以便更好地应用于生物医学领域的疾病诊断和治疗。
致谢感谢实验室的老师和同学们对本次实验的支持和帮助。
参考文献[1] Smith, D., & Johnson, M. (2010). A guide to immunoblotting. In S. Harlow & D. Lane (Eds.), Antibodies: A laboratory manual (p. 305). ColdSpring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press. [2] Zhang, Y., & Johnson, M. (2018). Theory and application of immunochromatographic assays. Austin Immunol, 3(1), 1013.。
免疫浊度测定终点法和速率法
免疫浊度测定终点法和速率法说起免疫浊度测定，可能很多人听了会一脸懵逼，觉得这跟自己有什么关系。
其实呀，这种测定方法在很多领域都非常重要，尤其是在临床诊断和环境监测中。
免疫浊度测定有两种常见的测定方式，一种叫终点法，一种叫速率法。
今天就给大家聊聊这两种方法，听起来复杂，实则简单，只要你能听懂我接下来要讲的这些，搞懂它们就不再是难事了。
咱们得搞明白“免疫浊度”到底是什么。
简单来说，免疫浊度测定是利用抗原抗体反应的原理来测量样品中的某些物质含量。
把这个反应弄成一个个“雪球”，雪球越来越大，浑浊度就越来越高。
这个浑浊度呢，就是我们需要测量的“免疫浊度”，通过它可以判断样品中到底有多少这种物质。
听起来是不是有点高大上？但其实原理就是这么简单：越多物质，越浑浊，反应越强烈。
接着咱们聊聊免疫浊度测定的两种方法。
终点法和速率法其实就是测量浑浊度变化的两个不同角度。
先说终点法，顾名思义，这就是让你等到反应完全完成了再测量一次。
换句话说，就是给反应充足的时间，让抗原抗体之间的结合完全发生，形成了最大量的沉淀，这时候的浑浊度就能反映出样品中的物质浓度。
这个过程吧，有点像做饭，得等米饭蒸熟了，才能判断好不好吃。
终点法的优势就是准确，反应完成后，能得到比较稳定的数据。
不过，也有个小问题，那就是整个反应需要时间，得等一段时间才能得到结果。
所以，如果急需知道结果的话，可能就有点拖沓了。
再说速率法，这个和终点法相比，就像是个急性子，做事迅速不拖拉。
速率法是通过测量反应初期的变化速度来预测最终的浑浊度。
简单来说，反应一开始，浑浊度的变化比较快，这时候我们就测量这个变化的速度，结合已知的反应条件，就能大致推测出样品的浓度。
速率法的好处就在于快速，反应刚开始时测量，几分钟就能出结果，特别适合那些急需结果的场合。
可是，速率法也有它的缺点，那就是准确性稍差，毕竟它并没有等到反应完全结束，所以结果的波动可能会比终点法大一些。
大家一定会想，这两种方法，哪个更好呢？其实吧，关键看你需求啥。
免疫浊度法的原理与分类
免疫浊度法的原理与分类
免疫浊度法（Immunoturbidimetry）是一种常用的免疫分析方法，用于测定体液样品中的特定物质浓度。
其原理基于免疫反应中抗原与抗体结合形成免疫复合物的性质。
免疫浊度法分为两类：直接测定法和间接测定法。
1. 直接测定法：
直接测定法是指将已知浓度的标准品或标准曲线与待测样品中的抗原免疫反应，测定其复合物的浓度。
该方法的测定过程通常包括以下步骤：
a. 准备含有抗原的标准品溶液，根据其浓度制备不同浓度的标准品系列。
b. 将标准品系列和待测样品分别与相应的抗体试剂混合，使抗原与抗体发生特异性结合反应生成免疫复合物。
c. 混合物产生的免疫复合物会在一定时间内沉淀，形成混浊的溶液。
浊度的变化与抗原的浓度成正比。
d. 通过比较待测样品和标准品系列的浊度差异，确定抗原的浓度。
2. 间接测定法：
间接测定法是指通过测定抗原与抗体结合后引起的抗体多聚体或其他化学反应产生的光学性质的变化，来间接测定抗原的浓度。
该方法的测定过程通常包括以下步骤：
a. 准备含有抗原的标准品溶液，根据其浓度制备不同浓度的标准品系列。
b. 将标准品系列和待测样品分别与相应的抗体试剂混合，使抗原与抗体发生特异性结合反应。
c. 添加溶液或试剂，使抗体结合引起的免疫反应产生一定光学性质的变化，如颜色、荧光等。
d. 使用光学方法，测定光学性质变化的程度或强度与抗原浓度的相关性，并将待测样品的测定结果与标准品系列进行比较，确定抗原浓度。
通过免疫浊度法，可以快速、准确地测定体液样品中特定物质的浓度，广泛应用于临床诊断和实验室研究。
关于免疫浊度分析的原理
关于免疫浊度分析的原理
免疫浊度分析是一种常用的实验技术，用于测量溶液中特定抗原或抗体的浓度。
其原理基于免疫反应的特性和光散射现象。
在免疫浊度分析中，首先将待测溶液与特定的抗体或抗原结合形成免疫复合物。
这种免疫复合物会导致溶液中的颗粒或聚集物的形成。
免疫复合物的形成引起了溶液中的光散射增加，导致浊度上升。
光散射是光经过微小颗粒或介质时发生的现象。
散射的程度与颗粒的大小、形状、浓度和光波长有关。
在免疫浊度分析中，浊度可以通过测量溶液中散射光的强度来确定。
常见的测量方法包括使用光散射仪器或光密度计。
在测量过程中，光经过待测溶液时会发生散射，散射光会被探测器接收并转化为电信号。
然后，根据接收到的电信号强度，可以计算出溶液的浊度。
浊度与溶液中免疫复合物的浓度呈正相关关系。
因此，通过测量浊度可以推断特定抗原或抗体在溶液中的浓度。
需要注意的是，免疫浊度分析是一种相对定性的方法，通常无法直接得到溶液中抗原或抗体的精确浓度。
因此，实际应用中可能需要结合其他技术或标准曲线来
进一步定量分析。
第六章免疫比浊分析
免疫比浊分析是将液相内的沉淀反应 与现代光学仪器和自动分析技术相结合的 一项分析技术。
第一节 免疫比浊的原理 一、透射免疫比浊法 二、散射免疫比浊法 三、免疫胶乳比浊法 四、免疫比浊分析的影响因素和临床应用
第二节 自动化免疫比浊分析
第一节 免疫浊度分析原理
抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成小 分子免疫复合物（<19S），在增浊剂（如PEG、NaF等） 的作用下，迅速形成免疫复合物微粒（>19S），使反 应液出现浊度。这种浊度可用仪器检测，用吸光度表 示。
技术要求 速率散射比浊法峰值出现的时间与抗体浓 度及纯度直接相关，需选用抗体纯度及亲和力 交高的试剂。 此外，要保证待测样本血清的性状符合要 求，如严重脂血等即为不合格样本。
(三)方法评价
散射比浊法是目前临床应用较多的一种方法，本 法自动化程度高，具有快速、灵敏、准确、精密 等优点。采用抗原过量检测方法，保证了结果的 准确性。但仪器和试剂价格比较贵, 对抗体的质 量要求很高。
小结
经典的免疫沉淀反应通常是在抗原抗体 反应的终点进行结果判断，存在操作繁琐、费 时、敏感度低及难以自动化等缺陷。自动化免 疫比浊分析仪器的问世解决了以上的诸多问题。
目前，透射免疫比浊法和散射免疫比浊等方 法已常规运用于临床特定体液蛋白质的检测，相 关仪器已广泛应用于国内各级医院，成为临床免 疫检测的重要手段之一。
• C.火箭峰尖而清晰 D.E.火箭峰呈纺锤状
• 7.对于血清中数种蛋白质抗原成分的分析，常 可采用
• A.免疫电泳法 B.单向扩散试验 • C. 向扩散试验 D.火箭免疫电泳 • 8.速率散射比浊法测定的散射信号值产生于 • A.单位时间内最大量的免疫复合物 • B.单位时间内免疫复合物形成的最快时间段 • C.单位时间内免疫复合物形成的最稳定期 • D.抗体过剩期形成的免疫复合物
免疫比浊检验技术原理
自动化检测
免疫比浊检验技术可以与自动化仪器配合使用， 提高检测效率和准确性。
免疫比浊检验技术的原理
在免疫比浊检验技术中，检测物质与特异性抗体结合形成免疫复合物，这些 复合物会在溶液中形成可见的浑浊度，浑浊度与物质浓度呈正相关。
免疫比浊检验技术的步骤
3
样本准备要求高
样本的预处理对测量结果有一定影响，样本准备要求较高。
免疫比浊检验技术的未来发展方向
未来，免疫比浊检验技术有望进一步发展，结合新的成像和数据处理技术，实现更高的灵敏度和准确度，以满 足更多领域的需求。
在药物研发过程中，可以 用于评估药效和药代动力 学。
3 环境监测
用于检测环境中的毒性物 质，保护人类健康和环境 安全。
免疫比浊检验技术的优点
准确度高
相对传统的比色法和酶联免疫吸附法，免疫比浊检 验技术具有更高的准确度。
快速得出结果
免疫比浊检验技术通常只需要几分钟到几小时，可 以得到快速的检测结果。
免疫比浊检验技术原理
免疫比浊检验技术是一种基于光学原理的生化分析方法，通过测量溶液中悬 浮颗粒的浑浊度来确定其对应的分析物浓度。
免疫比浊检验技术的定义
快速、灵敏
通过相对简单的操作流程，可以快速检测样本 中微量物质的浓度。
数量测定
可以准确测定血液、尿液、唾液等生物样本中 的特定分析物的浓度。
广泛应用
1
样本预处理
将待测样本进行预处理，如离心、稀释等，以提高结果的准确性。
2
免疫反应
将样本与特异性抗体一起反应，允许免疫复合物形成。
3
测量浑浊度
利用光学仪器测量样品溶液的浑浊度，得到测量结果。
免疫学实验 免疫比浊(免疫球蛋白的测定)
3 免疫胶乳比浊法
原理
选择一种大小适中，均匀一致的胶乳颗 粒，吸附抗体后，当遇到相应抗原时，则 发生凝集，单个胶乳颗粒在入射光波长之 内，光线可透过，当两个胶乳凝集时，则 使透过光减少。这种减少的程度与胶乳凝 集成正比，与抗原量成正比。
（a）带抗体的胶乳在波长之内可透过光线； （b）结合后，则形成光线衰减
2. 海德堡（heidelberger）曲线理 论
2 抗体的质量
（1）特异性高 （2）效价高 （3）亲和力高 （4）抗血清来源
3 抗原抗体反应的溶液
• pH 6.5~8.5
• 电解质 离子强度、种类（磷酸盐缓冲液）
4 增浊剂的使用
• PEG、tween-20等非离子型亲水 剂
• 作用：消除蛋白质分子周围的电子 云和水化层，促进抗原、抗体分子 靠近，结合形成大分子复合物。
（二）类型
1. 透射免疫比浊法 2. 散射免疫比浊法 3. 免疫胶乳比浊法
1 透射免疫比浊法
原理：
抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物 (IC)，当光线透过反应溶液时，由于溶液内复 合物粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减 少，免疫复合物量越多，透射光越少，即光线 吸收越多，可用吸光度表示。吸光度和复合物 的量成正比，当抗体量固定时，与待检抗原量 成正比。用抗原标准品建立标准曲线，可测出 待检抗原含量。
•
样本管吸光度
• 浓度＝————————×校准液浓度（g/L）
•
校管吸光度
• 结果及讨论
– 检测报告 – 检测意义
实验二、免疫浊度测定 ——免疫球蛋白检测
实验步骤见说明书 IgG9.77g/L IgA1.72g/L IgM1.37g/L
沉淀反应
微生物与免疫教研室
免疫浊度技术概述
在预反应时段， 加小量样本与 抗原抗体反应， 测定第一次散 射光信号值
加全量样本， 约反应 2分 钟后，第二 次测定散射 光信号
信号峰值
计算机处理 转换为样 品浓度
Edited by E. Dalla Dea ESTS
实验 免疫浊度技术
二、定时散射比浊分析
（二）抗原过量检测 采用两项保证措施：
抗体过量
—在检测中抗体结合抗原的能力可达到相当于正常 血清的50倍以上，以保证高浓度样本中的抗原与 抗体的结合。 对抗原过量进行阈值限定 —先测定预反应时段抗原-抗体复合物的散射光信 号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超 过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。
Edited by E. Dalla Dea ESTS
Edited by E. Dalla Dea ESTS
IMMAGE 双光径速 率浊度分析系统
高效蛋白分析仪 随机TDM分析仪 两种技术(透射法+散射法)，四种方法
速率散射比浊法 ( 蛋白检测)
速率抑制散射比浊法 ( TDM) 近红外颗粒速率法免疫分析(Rate NIPIA) 速率抑制NIPIA
Edited by E. Dalla Dea ESTS
LED光源
Edited by E. Dalla Dea ESTS
速率散射抑制法(670nm)
TDM检测
Conjugate-antibody complexing
1
2
Inhibition of complexing by hapten (drug)
1
2
3
Edited by E. Dalla Dea ESTS 2. Antibody
Edited by E. Dalla Dea ESTS
临床免疫学：第七章 免疫比浊技术
抗原抗体反应与散射光峰值信号 的动态变化示意图
散射免疫比浊法
• 速率峰值一般在25秒时出现。
抗原抗体复合物形成的速率
累计时间（s） 形成IC总量 速率
絮状沉淀试验
液体内沉淀反应
环状沉淀试验
沉淀反应
单向扩散试验
凝胶内沉淀反应 双向扩散试验
免疫电泳
免疫电泳技术
免疫固定电泳
免疫比浊技术
免疫比浊技术的分类
• 所检测的光信号性质
透射免疫比浊 散射免疫比浊
终点法 • 测定时间
速率法
无增敏 • 增敏剂 PEG增敏
胶乳增敏
透射免疫比浊法
• 基本原理
• 一定波长的光线通过抗原抗体反应的溶液时，由 于抗原抗体复合物的形成使入射光被反射、吸收， 透射光减少，光吸收量增多。
胶乳颗粒增强免疫比浊法
• 改良的免疫比浊检测方法； • 基本原理：在高分子胶乳颗粒的表面交联
单克隆抗体或抗原，当这些颗粒与待测抗 原或抗体相遇后，短时间内会迅速凝聚， 从而改变了反应液的透光性能（即吸光度 ）或散光性能； • 透射免疫增强比浊和散射免疫增强比浊；
胶乳颗粒增强免疫比浊法
• 胶乳(latex) • 聚合物微粒分散于水中形成的胶体乳液的
散射免疫比浊法
• 基本原理
• 一定波长的光线通过 抗原抗体反应的溶液 时，溶液中的抗原抗 体复合物会对入射光 产生折射、偏转，从 而产生散射光，通过 测定散射光的强度进 而推算得到待测抗原 的含量。
散射免疫比浊法
• 基本流程与方法 以标准抗原浓度及所测得散射光度值制作 剂量-反应曲线，依据所测散射光强度可以 计算出待测抗原含量。
自动化分析 (免疫比浊)
自动化分析 (免疫比浊)自动化分析 (免疫比浊)一、引言免疫比浊是一种自动化分析方法，通过测量免疫反应中形成的免疫复合物的浊度来检测样品中特定抗原或抗体的存在或浓度。
本文档旨在提供关于自动化分析 (免疫比浊)的详细信息和操作指南。
二、背景1. 免疫比浊的原理：免疫比浊基于免疫反应导致的免疫复合物形成的特性，即抗原和抗体相互结合产生可见的浊度。
测量这种浊度可以提供关于抗原或抗体的定量信息。
2. 仪器设备：免疫比浊分析通常使用细菌二联体仪器或其他具有浊度测量功能的仪器进行测量。
3. 样品处理：样品在进行免疫比浊分析之前需要进行适当的处理，如稀释、去除干扰物质等。
三、方法1. 样品准备：根据需要的抗原或抗体浓度范围，选取适当的稀释倍数来稀释样品。
确保样品中不含有干扰物质。
2. 试剂准备：准备好所需的抗体或抗原溶液，并按照说明书中的指导来配制试剂。
3. 仪器操作：将稀释后的样品和配制好的试剂加入到测量池中，按照仪器操作指南进行测量。
4. 数据分析：根据仪器的测量结果，结合相应的标准曲线或计算方法，计算出样品中抗原或抗体的浓度。
四、注意事项1. 严格按照操作指南进行操作，避免出现误差；2. 样品稀释倍数要根据实际情况选择，确保在仪器的测量范围内；3. 遵循试剂的储存和使用要求，确保试剂的活性；4. 仪器的保养和校准要定期进行，以保证数据的准确性。
五、附件本文档涉及的附件详见附件清单。
六、法律名词及注释1. 免疫反应：免疫系统对抗原的特异性应答，包括抗体的和细胞免疫反应等。
2. 免疫复合物：抗原和抗体结合形成的复合物，通常可导致可视的浊度。
3. 抗原：能够诱导免疫反应的物质，通常为细菌、病毒、蛋白质等。
4. 抗体：免疫系统产生的一种特异性蛋白质，能够与特定的抗原结合并参与免疫反应。
1.2免疫浊度法
1.2免疫浊度法比浊法中文名称：比浊法英文名称：turbidimetry定义：悬浮颗粒在液体中造成透射光的减弱，减弱的程度与悬浮颗粒的量相关，据此可定量测定物质在溶液中呈悬浮状态时浓度的方法。
定义又称浊度测定法。
为测量透过悬浮质点介质的光强度来确定悬浮物质浓度的方法，这是一种光散射测量技术。
运用本法主要是用于测定能形成悬浮体的沉淀物质,例如微量磷、硫、氯和钙等的测定,生物碱沉淀试剂形成的混浊也可用此法测定。
这是根据悬浮体的透射光或散射光的强度以测定物质组分含量的一种分析方法。
当光线通过一混浊溶液时,因悬浮体选择地吸收了一部分光能,并且悬浮体向各个方面散射了另一部分光线,减弱了透过光线的强度。
在水质监测和管理过程中，比浊法常用于测量饮用水、工业用水、废水的透明度；也用于测量空气及其他各种气体中悬浮固体的含量，是空气和水污染研究的一种工具。
在酿造工业中，比浊法常用于各种饮料澄清过程的控制和过滤过程的监控。
在分析化学上，可通过生成悬浮沉淀的反应产物来测定某些元素的浓度,例如,通过生成硫酸钡悬浮物来测定Ba2+ 或SO2-,以及在煤、焦炭、油、橡胶中的总硫量；通过生成硫化银和氯化银悬浮物来测定Ag+或Cl-；在容量分析中,浊度测量也可用于确定滴定终点，如用钙盐滴定氟化物、用银盐滴定溴化物、用钡盐滴定硫酸盐等。
在生物化学中，比浊法广泛用于测定液体食品中细菌的生长量及氨基酸、维生素和抗生素等。
根据悬浮体系中粒子的沉降速度与其半径的平方成正比的原理，比浊法可用于不同大小粒子沉降速度的监测和粒子大小的分类。
分析过程当光束通过一含有悬浮质点的介质时，由于悬浮质点对光的散射作用和选择性的吸收，使透射光的强度减弱。
在比浊法中，透光度和悬浮物质浓度的关系类似于朗伯－比尔定律（见紫外-可见分光光度法）的数学式：数学式式中s为浊光度（或浊率）,表示由于悬浮物的散射作用而引起的光强度衰减;I0和I分别为入射光强度（通过纯溶剂）和透射光强度(通过混浊样品)；b为光程长度；c为悬浮质点的浓度；K为常数，有时又叫浊度系数,其值与粒子的大小、形状、入射光的波长、悬浮物和介质的折射率有关。
免疫比浊分析
（三）技术要求
• 待测的抗原抗体复合物分子量足够大。
• 抗原抗体复合物数量足够多。 • 具有充分的反应时间，只能测定抗原抗 体反应的第二阶段。 • 高亲和力的抗体，并保证抗体过量。
（四）方法评价
优点: 灵敏度高，稳定性好，操作简便，结果准确 不足: ①抗体用量较大； ②溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大 ③透射比浊测定在抗原－抗体反应的第二阶段，检 测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。
1．抗原抗体比例 抗原抗体比例要适当。 诊断试剂应尽可能 溶液中免
颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝
聚 ，使透射光和散射光即出现显著变化。
三、免疫胶乳比浊法
（一）原理：
第二节 自动化免疫比浊分析
一、主流免疫比浊设备概况
（一）BN特种蛋白分析测定系统 1.测定原理 该系统的测定方法是透射免疫比浊法的 一种改良。以发光二极管作为光源，检测前
向角13～24度的散射光，然后利用硅化光电
二、免疫散射比浊法
(一) 原理 粒子对光线的散射作用是溶液中的微粒子受到 光线照射后，微粒子对光线产生反射和折射而形成 散射光。 悬浮微粒对光散射形成的散射光强度与微粒的 大小、数量、入射光的波长和强度、测量角度等因 素密切相关。
不同大小的微粒形成的散射光分布不同。
当微粒直径小于入射光的波长的十分之一时，
(二) 技术要求 应选择适当的光源强度、反应时间、测量角 度及光源的波长。 另外，要注意保证抗原浓度合适。 此外，还要选择适宜的离子强度、pH值等。
(三)速率散射比浊法（rate nephelometry） 速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的一种动 态测定方法。
所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免
免疫比浊法伪浊度的原因和处理方法做分析和总结。
免疫比浊法伪浊度的原因和处理方法做分析和总结。
免疫浊度分析法包括透射免疫比浊法、散射免疫比浊法、免疫乳胶浊度测定法等。
免疫浊度分析由于其反应的特殊性，决定了该方法容易受到抗体性质和质量、抗原抗体的比例以及检测体系等一系列因素的影响。
1、抗体质量免疫比浊测定法要求抗体的特异性强、效价高，亲和力强。
特异性差的抗血清，由于含有大量杂抗体，反应后可形成非特异性浊度(“伪浊度”)，出现假性升高。
使用低效价(<1:20)抗体会使试剂消耗增多，同时也可增加“伪浊度”的产生。
2、抗体类型根据抗血清来源的动物种类不同，抗体可分为R型 (rabbit type)和H 型(horse type)。
R型抗体亲和力较强，与抗原结合后不易解离，在抗体过剩时易形成大而稳定的复合物；但抗原过剩时，则形成可溶性复合物。
H型抗体亲和力弱，抗原、抗体结合后极易解离，而且抗原或抗体过剩易形成可溶性复合物。
R型抗体是用于免疫比浊测定的较为理想的试剂。
R型 H型抗体的定义总结1、用沉淀反应对不同来源的免疫血清进行比较后，可将抗体按等价带范围大小分为两种类型，即R型抗体和H型抗体。
R型抗体的等价带较宽，具有较大的抗原、抗体合适比例范围，与相应抗原结合易出现可见的抗原-抗体复合物，仅在抗原过量时，才出现小分子的可溶性抗原-抗体复合物，如兔、羊的免疫血清。
H型抗体的等价带较窄，其抗体与抗原的合适比例范围较窄，抗原或抗体过量，均可形成可溶性免疫复合物，如马、人的免疫血清。
2、抗原、抗体比例抗原和抗体的比例是浊度形成的关键因素，抗原和抗体必须在一个适当的浓度才会出现最高结合率。
当抗原过量时，形成的免疫复合物分子小，而且会发生解离，使浊度下降，光散射减少；当反应液中抗体过量时，免疫复合物的形成随着抗原量的增加而递增，光散射的强度也随之递增。
因此，免疫浊度测定的反应体系中必须始终保持抗体过量，以保证免疫复合物的生成量与浊度的改变一致，这是免疫浊度测定的基本原则。
免疫浊度法的临床应用
免疫浊度法的临床应用免疫浊度法是一种常用的生物化学分析方法，主要用于定量测定溶液中特定物质的浓度。
它基于抗原与抗体结合后形成机械稳定的免疫复合物，在一定波长下测定复合物的浊度来推断样品中抗原或抗体的含量。
这种方法在临床诊断中具有广泛的应用，本文将从原理、优势以及具体应用方面来探讨免疫浊度法在临床中的重要性。
原理及优势免疫浊度法的原理在于对样品中特定抗原与抗体结合后形成复合物的特性进行测定。
当抗原与抗体相互结合后，形成可被光束散射的颗粒团簇，从而造成溶液的浊度增加。
利用光度计测定免疫复合物的浊度，可以间接推断抗原或抗体在样品中的浓度。
这种方法不仅操作简单、快速，还具有高灵敏度和特异性，可以用于各种类型的生物样本的检测。
在临床应用中，免疫浊度法具有许多优势。
首先，该方法对于微量物质的检测非常敏感，可以达到低至微克/毫升的检测下限。
其次，免疫浊度法不需要昂贵的仪器设备，只需要常见的光度计即可完成测定，成本较低。
此外，免疫浊度法还可以实现高通量和自动化操作，适用于临床实验室中大批量样本的检测，提高工作效率。
临床应用免疫浊度法在临床诊断中的应用广泛。
首先，该方法可以用于各类感染病原体的检测。
例如，流感病毒、结核杆菌等病原体的快速检测就常采用免疫浊度法。
通过测定患者样本中特定抗体或抗原的浓度，可以快速筛查感染情况，为临床诊断提供重要参考。
其次，免疫浊度法也常用于肿瘤标志物的检测。
肿瘤标志物的检测是癌症早期筛查的重要手段，通过测定患者血清或尿液中特定肿瘤标志物的浓度，可以及早发现潜在的肿瘤病变。
免疫浊度法具有灵敏度高、准确性好的特点，适用于各类肿瘤标志物的检测。
此外，免疫浊度法还可以用于免疫药物浓度的监测。
在临床治疗中，一些药物需要监测其在体内的浓度，以确保治疗效果和安全性。
免疫浊度法可以针对药物与其代谢产物之间的特异性反应，测定样本中药物的浓度，为临床用药提供指导。
总结免疫浊度法作为一种常见的生物化学分析方法，在临床中有着重要的应用价值。
免疫浊度测定原理
免疫浊度测定原理
免疫浊度测定的基本原理是根据米歇尔逊-莫雷散射定律，即光束透
过颗粒或粒子悬浮液时产生散射现象。
在光线透过样品时，悬浮液中的颗
粒会散射光线，造成光的强度减弱。
测量散射光的强度变化可以反映出悬
浮液中的颗粒浓度或粒子大小。
在免疫浊度测定中，首先将待测样品与专一性抗体结合，形成抗原-
抗体免疫复合物。
然后，通过将样品光学透射度与标准曲线或标准样品的
光学透射度进行比较，可以定量测定待测样品中抗原或抗体的浓度。
免疫浊度测定的准确性和可靠性主要取决于几个因素，包括抗原与抗
体的亲和性和特异性、光源的稳定性、仪器的灵敏度等。
在选择抗原和抗
体时，需要确保它们具有足够的专一性和亲和力，以免造成误差。
同时，
光源的稳定性也非常关键，因为光的强度变化会直接影响测量结果的准确性。
除了免疫复合物的散射能力，还有其他因素可能对测定结果产生影响，例如溶剂的化学性质、光路的干扰等。
因此，在进行免疫浊度测定时，需
要对这些因素进行正确的控制，以保证测定结果的准确性。
总结来说，免疫浊度测定是一种通过测量免疫复合物散射光的强度变
化来定量测定抗原或抗体浓度的方法。
它基于米歇尔逊-莫雷散射定律，
通过比较样品的光学透射度与标准曲线或标准样品的光学透射度来确定待
测样品中抗原或抗体的浓度。
免疫浊度测定需要考虑抗原与抗体的亲和性
和特异性、光源的稳定性、仪器的灵敏度等因素，以保证测定结果的准确性。
免疫浊度实验报告处理
免疫浊度实验报告处理引言免疫浊度实验是一种常见的免疫学实验方法，它通过测定样品的浊度来评估免疫反应的程度。
免疫反应的浊度与抗原-抗体反应的强度成正相关，因此测定免疫浊度可以为科研人员提供重要的实验数据。
本实验报告将介绍免疫浊度实验的原理、实验步骤以及数据处理方法。
实验原理免疫浊度实验的原理主要涉及两个方面：抗原-抗体反应和浊度测定。
1. 抗原-抗体反应：在实验中，我们通常将抗原与抗体进行反应。
当抗原与抗体结合时，会产生可见的免疫沉淀，导致溶液变浑浊。
抗原-抗体结合的强度与免疫沉淀的量成正相关。
2. 浊度测定：浑浊溶液的浊度可以通过光学密度测定来评估。
在实验中，我们通常使用光谱分析仪器或光度计来测定样品的光学密度。
光学密度越高，说明溶液越浑浊。
实验步骤1. 制备样品：首先，准备需要检测浊度的样品。
根据实验设计的不同，可以是生物组织、细胞培养物、血清或其他含抗原的溶液。
2. 免疫反应：将样品与相应的抗体进行免疫反应。
反应时间和温度需要根据实验要求来确定。
3. 溶解和混匀：通过溶解、混匀等操作，使免疫沉淀均匀分布在溶液中。
4. 测定浊度：使用光学密度测定仪器对样品进行测定。
按照实验设计的要求选择合适的波长进行测量。
5. 实验重复：为了保证实验结果的可靠性，应该重复实验，并计算平均浊度值。
数据处理在免疫浊度实验中，我们通常需要对数据进行处理和分析来得出有意义的结果。
以下是一些常见的数据处理方法：1. 平均浊度值计算：根据进行的多次实验测定值，计算平均浊度值。
这样可以减小误差，并提高结果的可信度。
2. 统计学分析：使用适当的统计方法对测定值进行分析，比如方差分析、t检验等。
这可以帮助确定结果之间是否存在显著差异。
3. 曲线拟合：如果实验中存在多个浓度的样品，可以通过对浊度与浓度之间的关系进行曲线拟合，得出相关的方程式。
这种方法可以帮助进一步推断样品的浓度。
4. 图表展示：将测定结果以图表形式展示出来，有助于直观理解实验结果。
医学免疫学：免疫浊度的测定
• 受血脂的影响，尤其是低稀释度时，脂蛋白的小 颗粒可形成浊度，使测定值假性升高。
• 当一定波长的光线通过抗原抗体反应混合液时，被其中的 免疫复合物反射、吸收而减弱。在一定的范围内，透射光 吸收的量（吸光度值）与免疫复合物量呈正相关，而免疫 复合物的量与相应抗原和抗体的量呈函数关系，当抗体量 恒定时，根据所测吸光度值（与一系列的抗原标准品对照） 即可计算出待测抗原量。
A=KLC
免疫浊度的测定
实验原理
• 抗原抗体在特殊缓冲液（PEG 6000）中快速形成抗原抗体复 合物，使反应液出现浊度。
• 当抗原抗体相遇后立即结合成小复合物（＜19S），几分种到 几小时才形成可见的复合物（＞19S）。作为快速比浊测定， 这种速度太慢，加入聚合剂（或促聚剂）可加速大的免疫复合 物形成。目前促聚剂多用聚乙二醇（MW6000～8000），浓度 约为4％。
主要试剂与器材
• 待测血清（用生理盐水1：50倍稀释） • 抗人IgG血清（用4.3％PEG已经1：20稀释） • IgG标准（原浓度11.43mg/ml） • 生理盐水 • 加样枪、一次性枪头 • 分光光度计、37℃水浴箱
注：2人/组；一次性的物品请适量取材，实 验结束时，多余的请放回原处。
实验步骤
标，制作标准曲线，求出待测血清中的IgG 含量。
注意事项
• 测吸光度前，要将试管中的液体充分混匀 。 • 抗人IgG血清要求效价高（双扩效价1：32）而且
特异性强 。 • 标准曲线必须与待检样品同时制备，不可一次做
成，反复使用 。
• 抗原或抗体量大大过剩时易出现可溶性复合物， 造成测定误差，测定单克隆蛋白时这种更易出现。
免疫浊度法
免疫浊度法经典的沉淀试验有4个缺点无法克服，即操作繁琐、敏感度低（10～100μg/ml）、时间长和难以自动化。
根据抗原与抗体能在液体内快速结合的原理，70年代出现了微量免疫沉淀测定法，即免疫透射浊度测定、免疫胶乳浊度测定和免疫散射浊度测定法。
这3种技术皆已常规用于临床体液蛋白的检测，并已创造出了多种自动化仪器。
免疫浊度测定的基本原理是：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。
当反应液中保持抗体过量时，形成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出受检物的含量。
免疫浊度测定法按照仪器设计的不同可以分为两种，即比浊仪测定（turbidimetermeasure）和散射比浊仪测定（nephelomitermeasur e）。
比浊仪测定是测量由于反射、吸收或散射引起的入射光衰减，其读数以吸光度A表示。
A什反映了入射光与透射光的比率（A＝2－log10 T，T代表浊度百分比）。
散射比浊仪测定是测量入射光遇到质点（复合物）后呈一定角度散射的光量，该散射光经放大后以散射值表示。
两者的比较见图12-12。
图12-12透射光和散射光测定比较由于免疫复合物的形成有时限变化，当抗原抗体相遇后立即结合成小复合物（＜19S），几分种到几小时才形成可见的复合物（＞19 S）。
作为快速比浊测定，这种速度太慢，加入聚合剂（或促聚剂）可中速大的免疫复合物形成。
目前促聚剂多用聚乙二醇（MW6000～8000），浓度约为4％。
浊度测定亦有其弱点。
其一是抗原或抗体量大大过剩时易出现可溶性复合物，造成测定误差，测定单克隆蛋白时这种更易出现。
其二是应维持反应管中抗体蛋白量始终过剩，这个值要预先测定，使仪器的测定范围在低于生理范围到高于正常范围之间；其三是受血脂的影响，尤其是低稀释度时，脂蛋白的小颗粒可形成浊度，使测定值假性升高。
二、免疫胶乳浊度测定法在上述比浊法中，少量的小的抗原抗体复合物极难形成浊度，除非放置较长时间；如形成较大的复合物，则抗原和抗体用量也较大，显然不符合微量化的要求。
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范
Edited by E. Dalla Dea ESTS
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速率散射王国
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IMMAGE
Immunochemistry System
—在检测中抗体结合抗原的能力可达到相当于正常 血清的50倍以上，以保证高浓度样本中的抗原与 抗体的结合。 对抗原过量进行阈值限定 —先测定预反应时段抗原-抗体复合物的散射光信 号，若未超过阈值，可进行全量样本测定。若超 过阈值，提示样品浓度过高，需稀释后测定。
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毒品
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实验 免疫浊度技术
免疫检测的基础—抗原抗体间的特异性反应 手工操作 免疫比浊分析技术发展
测定抗原抗体形成后的阶段 散射(终点)比浊
Edited by E. Dalla Dea ESTS
自动化分析
两 个 阶 段
测定抗原抗体结合的峰值 速率散射比浊
实验 免疫浊度技术
实验 免疫浊度技术
免疫反应进展
1897年
1905年 1946年 1965年 1966年
Kraus 就发现细菌培养液（毒素）与相应 抗血清混合出现沉淀 Bechhold 把抗体放在明胶中，将抗原加于 其中，发现沉淀反应可在凝胶中进行 Oudin 报告了试管免疫扩散技术 Mancini 提出单向免疫扩散技术，使定性 免疫试验向定量化发展 免疫浊度法的出现，使沉淀反应达到快速、微 量、自动化的新阶段。
Edited by E. Dalla Dea ESTS
IMMAGE 双光径速 率浊度分析系统
高效蛋白分析仪 随机TDM分析仪 两种技术(透射法+散射法)，四种方法
速率散射比浊法 ( 蛋白检测)
速率抑制散射比浊法 ( TDM) 近红外颗粒速率法免疫分析(Rate NIPIA) 速率抑制NIPIA
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实验 免疫浊度技术
四、免疫透射比浊分析
（二）实验要求
溶液中形成的复合物分子应足够大(35-100nm) 溶液中形成的复合物分子要足够多 控制抗原抗体反应的温度和时间 加促凝剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间 应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量 将标准品稀释至少5个浓度测定，以吸光度值(A)
18~24个月的试剂开瓶有效期
同一样本不需分装，在一次运行 中可以同时检测所有试剂项目
IMMAGE Edited by E. Dalla Dea ESTS
用户自定义系统
增加检测菜单 高达50个项目位 一次可同时检测 6 个项目 两种光学方法可以选择
670nmNIA
940nmNIPIA 专用自定义软件 简便的定标程序
---自动校正光源
--- 原始试管功能
--- 灵活的系统界面：触摸式，鼠标，键盘
--- 24小时随时待机 --- 每日保养：擦拭探针 --- 特殊的试剂盖: 不再需要开关瓶(穿刺式)
IMMAGE
Edited by E. Dalla Dea ESTS
IMMAGE 单点定标
Edited by E. Dalla Dea ESTS
Edited by E. Dalla Dea ESTS
实验 免疫浊度技术
免疫测定原理
利用抗原抗体反应检测标本中微量物质
抗原 + Ag + 抗体 Ab 抗原抗体复合物 Ag * Ab
Edited by E. Dalla Dea ESTS
实验 免疫浊度技术
免疫测定特点
特异性 敏感性 可测物
抗原性不同的物质不干扰 g---ng---pg 蛋白质，酶，激素，药物 ，
实验 免疫浊度技术
（二）反应物含量与散射浊度
Heidelberger曲线：
即当抗体量恒定时，形成的抗原抗体复合物的反应与散射 信号响应值的上升呈正比。同时，散射信号随抗原抗体 反应时间增加而曲线上升。 当抗原量与响应值上升到一极限时，再增加抗原量， 使散射响应值迅速下降
因此，在采用散射比浊测定时，一定要保证抗体过量。
Edited by E. Dalla Dea ESTS
实验 免疫浊度技术 透射比浊 / 散射比浊
散射光检测
光源
滤光片
反应杯
透射光检测
Edited by E. Dalla Dea ESTS
实验 免疫浊度技术
一、散射免疫比浊分析原理
散射比浊法：在液相中可溶性抗原、抗体特异性 结合，形成一定大小的复合物粒子，当入射光沿 水平轴照射在粒子颗粒上时，光线被颗粒吸收或 折射，发生偏转，其偏 转的角度与发射光的波 影响散射信号的因素： 长和复合物颗粒大小和 多少有关。散射光的强 如入射光的波长、偏振、 度与复合物的含量成正 微粒大小、浓度、质量、 比，即待测抗原越多， 形成的复合物越多，散 以及检测点的距离。 射光就越强。 Edited by E. Dalla Dea ESTS
实验 免疫浊度技术
当一束光 线通过溶 液受到光 散射和光 吸收两个 因素的影 响而使光 的强度减 弱
散射比浊法: 在光源的光路方向（50-960） 角的方向上测量散射光强度 和被检测溶液中微粒浓度关 系的方法。
免 疫 比 浊 法 分 类
透射比浊法: 在光源的光路方向（00） 测量透射光强度和被检测 溶液微粒浓度关系的方法。
为纵坐标，浓度为横坐标，在半对数纸上绘出标
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准曲线，
实验 免疫浊度技术
免疫比浊分析的临床应用
血浆、体液中特种蛋白
如免疫球蛋白 IgG、IgA、IgM
、；补体C3、C4；
AAT、TRF、A1M、 检 检 血浆蛋白 CER；
范
尿蛋白系列 尿微量白蛋白 围 视黄醇结合蛋白 转铁蛋白 围 2 微球蛋白(2M) 测 测 1微球蛋白(1M) 小分子治疗药物
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IMMAGE
39个半永久性反应杯--同时检测质控、定标和样本 全面的条形码系统(各种通用条形码) 72个样本位 (每试剂位检测24种项目) 真正的随机急诊 功能(不需停机)
IMMAGE
Edited by E. Dalla Dea ESTS
简便的操作系统
Edited by E. Dalla Dea ESTS
实验 免疫浊度技术
二、定时散射比浊分析
（一）基本原理
是将沉淀反应与散射比浊分析相结合，“在抗原抗体反
应几秒钟后开始测定峰值信号”。
目的是排除抗原抗体反应的不稳定性，降低检测误差。 采用抗体过量，以获得颗粒产生的最强的散射光信号。
检 测时 分间 两 个
实验 免疫浊度技术
（一）基本原理 — 是测定抗原抗体结合反应的动态过程。 — 所谓速率，是在单位时间内抗原抗体结合形成 复合物的速度。将各单位时间内形成复合物的 速率及测定的散射信号连接在一起，即是动态 的速率比浊分析。 — 当仪器测定到某一时 间内形成速率下降时， 即出现速率峰，该峰 值的高低，即代表所 测抗原的量。
实验 免疫浊度技术
（一）散射颗粒与散射光
称为Rayleigh散射
称为 Mile散射
如果颗粒直径比入射光的波长小的多
则散射光的分布比较均匀
如果颗粒直径接近入射光的波长， 则散射光的分布呈明显不均匀
Rayleigh原理：即散射光的强度与复合物的量呈正比，与散射 光的夹角呈正比，与波长呈反比。 在散射比浊中，增加抗原-抗体复合物的体积，减少入射光的波 Edited by E. Dalla Dea ESTS 长，扩大散射光夹角等因素，均可增加检测的敏感度。
( 低分子量TDM)
IMMAGE检测原理--速率散射法(670nm)
ARRAY的优秀传统：
20年实践证明卓越的精确度和准确度
激光光源
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近红外颗粒透射免疫分析法： 速率透射法(940nm)
增加高敏分析检测菜单： 地高辛，H-CRP，铁蛋白 排除高胆红素和溶血性样本的非特异性干扰
平光线
射光 散
检测器 检测器
θ
透射光 光源 透镜 滤光片
Edited by E. Dalla Dea ESTS
散射比浊、透射比浊光路图
实验 免疫浊度技术
四、免疫透射比浊分析
（一）基本原理 是个极其简单的方法。在抗原过量情况下，与待测 样品中相应的Ig发生抗原-抗体反应，形成可溶性复合 物，使反应介质的浊度发生改变。 测量方法利用分光光度计测量被吸收的量。读数以 吸收单位（A）或OD值表示，A值反映了入射光和透射 光的比率。待测物中Ig含量可通过标准曲线计算得出。 待测样品中的抗原含量与吸光度呈正比，而与透射 光呈反比。 反应在PEG的作用下，加速复合物的形成。 Edited by E. Dalla Dea ESTS
在速率峰基础上完成的定标曲线
Rate
Edited by E. Dalla Dea ESTS
Concentration
IMMAGE
单点定标
减少定标次数 提高检测速度 节省试剂用量
NCCLS证实：