色谱柱常见故障

色谱柱
色谱柱的再生
正相色谱柱(如Si, NH2, CN, DIOL基色谱填料)的再生： 用以下溶剂至少各50mL冲洗色谱柱 50%甲醇+50%三氯甲烷 100%乙酸乙酯
反相色谱柱(如反相色谱填料C8,C18等)的再生： 用以下溶剂至少各30mL冲洗色谱柱 100%甲醇100%乙腈 75%乙腈+25%异丙醇 100%异丙醇 100%二氯 甲烷 100%己烷 若使用己烷 或二氯甲烷冲洗色谱柱，则在重新使用反相流动相前，必须用异丙 醇冲洗色谱柱！！
色谱柱故障排除
色谱柱的组成
• 主要部件：柱管、柱头、筛板
• 故障特征 1. 色谱峰形不好 2. 柱压高
色谱柱
避免问题的
•使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度） •大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2 - 8.0 •避免流动相组成及极性的剧烈变化 •流动相使用前必须经脱气和过滤处理 •如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕将柱子冲洗干净， 并保存在乙腈中 •压力升高是需要更换预柱的信号
检查管路连接
色谱柱有“塌陷”、短流或断流
更换色谱柱； 使用性质较温和的分离条件
解决问题
保留时间变长
可能原因
流速降低
硅胶表面有活性点 键合相流失 流动相的组成有变化 温度降低
解决办法
检查系统是否有漏； 更换泵的密封圈； 排净气泡；
使用流动相改性剂（如加入三乙胺）； 使用碱性去活的色谱柱
保持流动相pH值在2-7.5 范围内
干扰峰；杂质
改进样品预处理； 调节流动相的组成； 使用测试样品混合物检查色谱柱； 使用色谱纯溶剂
使用流动相改性剂（如三乙胺）； 硅胶表面未完全键合的硅羟基的影响提高缓冲溶液或盐溶液的浓度（离子对色谱）
降低流动相的pH值； 使用碱性去活的色谱柱
色谱柱的滤网堵塞
更换滤网；使用柱前过滤系统； 将样品过滤
柱外效应的影响； 死体积
色谱柱柱压问题
当色谱柱连接到泵 和进样器时，压力 特别高
挖去柱头变脏的填料，
可能原因 柱头滤网堵塞
柱头填料变脏
解决办法 将柱子反向冲洗；
更换滤网； 更换色谱柱
将柱子反向冲洗；
填入新的填料；
取下滤网，
更换色谱柱
当柱子连接到检测 器时,压力很高
柱子和检测器之间的管道堵塞
更换管子
停泵
解决问题
噪音高或基线漂移
解决办法
更换色谱柱或预柱 减少进样体积；稀释样品 用流动相溶解样品 使用浓度稍高的缓冲溶液或者 换用其它的缓冲溶液 检查是否有漏；使用小的检测池
提高色谱柱温度
检查柱外死体积 使用较小粒径填料的色谱柱； 更换色谱柱
解决问题
出现脱尾峰
可能原因
色谱柱过载
解决办法
减少样品体积； 增大色谱柱内径； 使用高容量的固定相
更换色谱柱； 使用预柱
色谱柱过载 柱外效应的影响
将样品稀释 检查连接色谱柱入口端的管道
解决问题
峰形展宽
可能原因
色谱柱或预柱被污染或不合适 色谱柱“过载”或进样体积过大 溶解样品的溶剂选用不当 缓冲溶液的浓度太稀
色谱柱和检测器之间有漏； 检测器的检测池过大 色谱柱温度太低； 流动相的黏度太高 柱外死体积太大 色谱柱柱效下降
电压不稳造成干扰
使用稳压电源；检查供电系统
解决问题
出现肩峰或 前延峰
可能原因
解决办法
预柱被污染或选用了不合适的预柱 更换预柱
柱头“塌陷”造成死体积或是 柱子内部有短流出现
更换色谱柱
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溶解样品的溶剂选择错误
用流动相溶解样品
改进样品预处理；用测试的混合物 干扰物质的存在；样品中的杂质 检验色谱柱；使用色谱纯溶剂
可能原因
解决办法
柱子没有平衡好
继续冲洗色谱柱至平衡
杂质组分从色谱柱中缓慢流出 利用强极性的溶剂冲洗色谱柱
杂质在柱子中的富集
冲洗色谱柱；改进和提高样品的预处理； 使用液相色谱纯的溶剂
检测器或色谱柱的温度差异 使用色谱柱恒温箱
系统有气泡
流动相脱气；使用反压调节器
检测器氘灯需更换
更换氘灯（氘灯使用寿命一般为1000小时）
检查泵；检查滤网； 防止流动相的挥发或降解
使用色谱柱恒温箱
解决问题
保留时间缩短
可能原因
流速升高 色谱柱过载 键合相流失 流动相组成发生变化
温度升高
色谱柱老化
解决办法
检查泵；检查流速
降低样品的浓度或进样体积
流动相的pH值保持在2-7.5 范 围内 检查泵；检查滤网； 防止流动相的挥发或降解
使用色谱柱恒温箱