柴胡黄芩不同比例配伍的药代动力学研究

柴胡黄芩不同比例配伍的药代动力学研究

发表时间：2019-04-01T10:05:53.517Z 来源：《医师在线》2019年1月2期作者：刘世军1 李克明2 刘宪勇1通讯作者孙付军2 谷雨1 王伟[导读] 利用药代动力学方法，以黄芩苷为考察指标，研究柴胡黄芩药对配伍的体内代谢情况，为药效学提供更有力的数据支持。

刘世军1 李克明2 刘宪勇1通讯作者孙付军2 谷雨1 王伟1

（1 武警山东省总队医院；2 山东省中医药研究院；山东济南250014）

【摘要】目的：利用药代动力学方法，以黄芩苷为考察指标，研究柴胡黄芩药对配伍的体内代谢情况，为药效学提供更有力的数据支持。方法：①黄芩苷血药浓度测定方法学研究：色谱柱Diamonsil C18柱（4.6mm*250mm，5µm）；流动相为水-甲醇-0.2%磷酸（53：47）；进样量为20µL；柱温：35℃；流速：1mL/min。进行含药血清黄芩苷方法学考察。②不同配伍柴胡黄芩含药血清主要考察指标黄芩苷的含量测定：采集灌胃后10min，20min，1h，2h，3h，4h，5h，6h，7h，8h，9h，10h，11h，12h， 14h，24h时间点的血样，按照建立的黄芩苷检测方法进行含量测定。结果：大鼠灌胃黄芩柴胡1:0提取物后，黄芩苷经0.67 h 可达最大吸收峰，峰浓度（Cmax）为53.96mg·mL-1，血药浓度-时间曲线下面积（AUC0→24h）为314.082 mg·（L﹡h）-1，黄芩苷在体内的滞留时间（MRT0→24为8.671h）；1:1提取物组，Tmax为0.33 h，Cmax为26.07 mg·mL-1，血药浓度-时间曲线下面积（AUC0→24h）为284.796 mg·（L﹡h）-1，黄芩苷在体内的滞留时间

（MRT0→24h为10.39 h）；1:2提取物黄芩苷经14 h可达最大吸收峰，黄芩苷在滞留时间14 h可达最大吸收峰，峰浓度（Cmax）为

25.84mg·mL-1，血药浓度-时间曲线下面积（AUC0→24h）为344.121 mg·（L﹡h）-1，黄芩苷在体内的滞留时间（MRT0→24h为

11.879h）。结论：1:1提取物黄芩苷吸收加快，吸收量无明显变化，但在体内的滞留时间增长；黄芩柴胡1:2提取物黄芩苷吸收滞后，吸收量增加，在体内的滞留时间更长，从而能使其在体内发挥药效时间增长，可见三个配伍比例中，柴胡黄芩1:2配伍组黄芩苷在体内滞留的时间更长。

【关键词】药对/柴胡黄芩；药代动力学；黄芩苷

[ 中图分类号 ]R2 [ 文献标号 ]A [ 文章编号 ]2095-7165（2019）02-0233-01

1、仪器与材料

1.1仪器

Waters高效液相色谱仪514泵，色谱工作站（采用ANASTAR数据处理系统），紫外检测器（Model 500 laballiance型，美国SSI公司产品）；超声波清洗器（中国玉环曙风企业制造）；微量进样针（Finnpipette 20-200µL，100-1000µL）；XW-80A漩涡混合器（上海其林贝尔仪器制造有限公司）；PICO17型高速离心机（北京路达恒宇科技有限公司）；DDL-5型低速冷冻离心机（冠森生物仪器厂）；恒温水浴箱（上海医疗器械五厂）；SM-06型电吹风（宁波市塑料电机厂）；BP211D型十万分之一分析天平（上海赞维衡器有限公司）；SLSH-74型肝素化离心管（湖南省浏阳医用仪具厂，3mL）；一次性离心管（1mL）；ZH06-16型大鼠灌胃针（北京中西远大科技有限公司）；微量进样针（北京捷安杰微量进样器厂，25µL）；标准熔点毛细管（上海同兴化工仪器有限公司，外径0.9-1.1mm）。

1.2试验用药

实验中所用药材黄芩（批号20120901）、柴胡（批号20120801）购于山东天一中药饮片有限公司，经山东中医药研究院研究员鉴定为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi和伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC1（北柴胡）的干燥根；黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：1215-9707）；色谱乙腈（天津四有精细化学品有限公司用品，批号：080612101）；色谱甲醇（北京市恒大化学试剂开发中心，批号：20130821）；磷酸（四川省琳宇化工有限公司，分析纯）；95%乙醇（山东酒精总厂，药用酒精，批号：2013122001）；实验用水（杭州娃哈哈集团有限公司，纯净水）。

1.3实验动物：雄性SPF级wistar大鼠，体重约300±25g，由山东中医药大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK（鲁）20130001，№：0008636。

2、黄芩苷血药浓度测定方法学研究

2.1色谱条件：色谱柱Diamonsil C18柱（4.6mm*250mm，5µm）；流动相为甲醇-水-0.2%磷酸（47：53）；检测的波长：280nm；进样量为20µL；柱温：35℃；流速：1mL/min。

2.2对照品溶液的制备

2.2.1黄芩苷对照品溶液：取黄芩苷对照品加甲醇,配成41µg/mL的对照品溶液。

2.2.2空白对照液：取大鼠空白血浆作空白对照液。

2.3供试品溶液的制备[1-2]：称取黄芩为100g，加8倍量水浸泡0.5 h，加热回流1h，过滤后，药渣再加8倍量,70%酒精回流提取1h，过滤后，回收乙醇后与水提液后合并，于3000r/min的转速离心10min，取离心后的上清液浓缩至100mL，制得黄芩提取液（每mL提取液约相当于黄芩药材的1g）。

2.4含药血清制备：雄性wistar大鼠5只，按顺序编号（1、2、3、4、5），禁食不禁水，12h后以1mL/100g灌胃,1、2、3号大鼠给予黄芩提取液，4、5号大鼠给予生理盐水做对照，给药8h后,从大鼠腹主动脉处取血，将所取血液置于3mL肝素钠真空采血管中，摇晃均匀后以3000r/min离心15min，分离血浆置1mL离心管中，每管约1mL，-20℃下冷冻保存。精密量取给药大鼠血浆200µL加甲醇400µL，涡漩2min 后，再以3000r/ min离心5min，取得上清液，即得含药血浆供试品溶液，备用。

2.5系统适应性试验：分别取4号大鼠血浆、4号大鼠血浆加黄芩苷对照品溶液和1号大鼠血浆，按照“2.3” 项下溶液处理方法操作，得到相应的色谱图，黄芩苷和周围峰已经完全分离，黄芩苷的保留时间分别约为25min，血浆中杂质峰不会干扰对黄芩苷的测定。结果表明：本方法具有较高的专属性。

2.6标准曲线的绘制：取低温冷冻保存的5号大鼠血浆，解冻后精密量取200µL10份，各置于1mL离心管中，分别配制黄芩苷浓度为

0.177，0.352，0.707，1.413，2.827，5.653，11.307，22.083，44.167，66.25µg/ml的标准系列血浆样品，按照“2.4”项下溶液处理方法操作，记录待测物黄芩苷峰面积。以峰面积积分值为纵坐标（S），对黄芩苷的质量浓度（C，μg/mL）为横坐标进行线性回归，结果得到

S=32935C+2958.7，黄芩苷在0.177-66.25μg/mL范围内线性关系良好（r = 0.9998）。