凝聚胺交叉配血试验 PPT
血型鉴定及交叉配血 ppt课件
二、ABO血型鉴定：
正定型 判定结果：
试管法：轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC浮起， 观察有无凝集或溶血，
如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为 凝集（＋）；
如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮 起或成为均匀的RBC悬液，则为不凝集（一）；
若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微镜下观察。
注意：若上层为清亮的樱红色，考虑是否溶血
二、ABO血型鉴定：
二、反定型： 原理：用标准红细胞检测被检血清（血浆）,在盐
水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检血 清（血浆）中有无与标准红细胞相对应的抗体， 进一步判定血型。
二、ABO血型鉴定：
二、反定型 方法： 1、试管法：
-A
-B
加待测血清2滴
加标准红细 胞悬液1滴
混匀，离心 1000r/min 观察结果（方法同正定型） 1min
二、ABO血型鉴定：
抗A
抗B
结果
结果判定：
＋
—
A
—
＋
B
正定型
＋
＋
AB
—
—
O
反定型
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
A(RBC) B(RBC) 结果
＋
—
B
—
＋
A
＋
＋
O
—
—
AB
二、ABO血型鉴定
凝集强度的判断见实验指导表格
室温条件下盐水介质中产生特异性反应，根据是否 出现凝集判断是否有D抗原的存在。
Rh（D）血型鉴定
加抗D血清1滴
加红细胞悬 液1滴（5%
）
轻轻摇动玻片混匀， 2min内判断结果， 有凝集（＋），无凝 集需按照说明书进一 步实验确认是否为阴 性
凝聚胺交叉配血试验 ppt课件
操作
❖ 1. 取试管两支，标明主侧次侧，主侧管加受 血者血清(血浆)1滴，和供血者3～5％红细胞 悬液(洗涤或不洗涤均可)1滴，次侧管受血者 3～5％红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)l滴， 加供血者血清(血浆)1滴。
❖ 2. 各加LIM溶液3滴，混合均匀后，再各加 Polybrene溶液1滴，并混合均匀，置室温1分钟或 参照说明书。
11
【注意事项】
❖ 1.可以用含EDTA抗凝血浆代替血清使用。 ❖ 2.若受血者血清(血浆)含肝素，如洗肾患者，
须多加4～6滴Po1ybrene溶液以中和肝素。 ❖ 3.试剂使用前请放置至室温平衡后再行操
作。
12
❖ 4.在冬天室温极低的情况下进行交叉配血试 验操作，由于某些受血者血清中可能含有寒 冷凝集素等因素，而导致假阳性的结果出现， 建议进行交叉配血试验操作时室温保持在 22℃左右，最后滴加Resuspending时，将 试管立即置入37℃水浴中，轻轻转动试管混 合，并在30秒内观察结果。
实验三 凝聚胺法交叉配血
医学检验系 张晨光
1
目的：掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。
原理：聚凝胺分子是带高价阳离子多聚季铵盐，溶
解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷， 有利于红细胞凝聚，低离子强度溶液也能降低红 细胞的Zeta电位 ，可进一步增加抗原抗体间的吸 引力。
当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，与红细胞发生 紧密结合，此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胺的正电 荷，使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生的凝集不散开； 如果血清中不存在IgM或IgG类血型抗体，加入解聚液可使 非特异性凝集消失。
灵敏度高；但费时，准确性和稳定性差。
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❖ 4.卡式配血（微柱凝胶法）已成为国际安
交叉配血试验 (凝聚胺法)
1．抽取受血者静脉血3-4ml（操作中小心防止红细胞破损），放入一已贴标签干燥洁净的试管中为血清管(也可用EDTA-K2抗凝血液)，并将注射器中余下的少量血液配成2%红细胞生理盐水悬液，放入另一已贴标签干燥洁净的试管中为红细胞悬液管。
以上标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。
9．进行交叉配血前逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO血型（正、反定型），并常规检查患者Rh（D）血型，正确无误时可进行交叉配血。
页码：第4页，共4页
6、
6、不凝集，可能是标本中含有肝素。如洗肾病人的标本或其他干扰存在，此时需多加2-4滴*2凝聚胺溶液以中和肝素或干扰因子。
7．0.85% 氯化钠溶液启用时，及时贴上启用时间；超期的溶液要及时更换。使用过程中，怀疑污染到溶液时或配血结果可疑时，必须更新该溶液。
8．受血者标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。2%红细胞悬液要求准确，必要时用生理盐水洗涤红细胞后重新配制。
5．在冬天气温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清（浆）中可能含有寒冷凝集素等因子而导致假阳性的结果出现。若有此怀疑，请再滴入2滴*3复悬液，将试管立即置入37 C水浴中轻轻混匀，并在一分钟内观察结果。
**医院
输血科
文件编号：
HF2Y-SXK-SOP-06
交叉配血试验（凝聚胺法）
版序：2007-05
2．2% 红细胞悬液：
用生理盐水洗涤红细胞3次。
根据下表进行红细胞悬液的配制。
悬液浓度（%） 压积红细胞（滴） 盐水（滴）
交叉配血(凝聚胺法)
精心整理交叉配血（凝聚胺法）1.原理凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合，再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。
加入中和液后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。
2.标本采集：2.1标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将细胞配成5％盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。
2.2标本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐全。
3.标本储存：急诊标本30分钟内完成操作，标本应至4℃冰箱保存7天。
4.标本运输：室温运输。
5.标本拒收标准：细菌污染。
溶血标本，标签不齐全不能作测定。
6.试剂：6.1试剂名称：凝聚胺试剂(polymatching)6.2试剂生产厂家：(台资)珠海贝索生物技术有限公司。
6.3试剂组成：试剂 1.低离子介质(LowLonicMedium，LIM).试剂打开使用后，可置室温贮存，未开封者2-25度贮存，有效期为2年。
试剂2.凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。
试剂3.重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。
试剂4.8.5％生理盐水。
7.仪器：7.1血型血清离心机：80-2型离心机江苏金坛市大地自动仪器厂7.2离心机：江苏金坛市大地自动仪器厂7.3电热恒温水箱：江苏金坛市医疗器械厂精心整理精心整理7.4显微镜：XSZ-H3(中国）8.操作步骤及结果判断：8.1供受者红细胞用生理盐水配成3-5％的细胞悬液。
加样量均为：血清2滴，红细胞悬液1滴。
主管：受血者血清+供者红细胞悬液;次管：受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。
交叉配血试验临床应用PPT课件
交叉配血试验临床应用
4
实验原理
红细胞表面带有大量的负电荷，悬浮在电解 质溶液中，会吸引大量阳离子，红细胞则被扩散 的双层离子云所围绕，形成zeta电位。
交叉配血试验临床应用
5
实验原理
凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM）降低 介质的离子强度，减少红细胞周围的电子云， 如有红细胞抗原相应的血清抗体存在，则可促 进红细胞抗原与血清抗体的特异结合。
交叉配血试验临床应用
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临床新进展
流式细胞术 基因分ຫໍສະໝຸດ 技术 卡式微柱凝胶法交叉配血试验临床应用
22
卡式微柱凝胶法
交叉配血试验临床应用
23
卡式微柱凝胶法
交叉配血试验临床应用
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戴安娜全自动配血系统
卡式微柱凝胶法可实现自动检测
交叉配血试验临床应用
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二 实验原理
谢谢！ 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在
11
实验步骤
四、剪下供血者血袋上的血辫，将供血者红 细胞1滴加入主侧管，血浆2滴加入次侧管
交叉配血试验临床应用
12
实验步骤
五、在主次侧各加入低离子溶液各0.65毫 升，混合均匀。
交叉配血试验临床应用
13
实验步骤
六、在主、次侧管分别加入2滴凝聚胺溶液， 混匀后3400r/min离心10秒，弃去上清， 观察红细胞的非特异凝集现象。
交叉配血试验临床应用
26
弃 上 清
交叉配血试验临床应用
14
实验步骤
七、最后各加入悬浮液2滴，轻轻转动试管 混匀并观察结果。
交叉配血试验临床应用
15
实验步骤
八、如果在60秒内，主、侧管凝集均散开， 说明是由凝聚胺溶液引起的非特异性凝集， 配血相合。
交叉配血(凝聚胺法)
4.各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时， 可溶性血型物质中和了相应的抗体。
交叉配血（卡式配血）
原理
凝胶具有分子筛效应和亲合效应，在微柱凝胶介质中红细 胞抗原与相应抗体结合，经低速离心，凝集的红细胞悬浮 在凝胶上层，而未和抗体结合的红细胞则沉于凝胶底部， 试验结果可用肉眼观察。
合；反之，依照不同强度的凝块，试验结果判为阳性， 供受者血液不配合。实验结果必须在3分钟内判读。
异常结果处理：
1. 细胞自凝： 在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝 集素而导致交叉配血假阳性；遇此现象可用37℃-40℃生 理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动，观察结果。
2.若病人血清(血浆)含有肝素，如洗肾患者能影响配血，须 多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。
交叉配血（凝聚胺法）
血型鉴定
原理
根据红细胞膜表面有无A抗原和(或)B抗原，将血型分为 A型、B型、AB型和O型4种。可利用红细胞凝集试验， 通过正反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是指用 标准抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗 原和（或）B抗原；所谓反定型，是指用标准A型细胞和 B型细胞来测定血清中有无相应的抗A和（或）抗B。
结果判定（同血型鉴定）
－ 100﹪的红细胞沉在微管的底部 ﹢/ 100﹪的红细胞沉在微管的下端1/3之内 1+ 80﹪的红细胞沉在微管的下端2/3之内 2+ 80﹪的红细胞沉在微管的上端2/3之内 3+ 80﹪的红细胞沉在微管的上端1/3之内 4+ 凝集的细胞全部处于微管的顶部 d.p. 双群 Hemo.. 溶血
结果判定（同血型鉴定）
交叉配血试验50384精编PPT课件
实验原理
天然IGM类血型抗体与对应的红细胞抗原在室温下盐水介质中发生凝集现象。可以检查供、受者血清中是 否存在破坏对方RBC 的IgM抗体(ABO 血型中抗A 抗B抗体以IgM抗体为主)。 实验步骤 取二试管， 分别注明“主”、“次”字样， 主侧滴入供血者红细胞悬液 一滴和受血者血清一滴；次则滴 入受血者红细胞悬液一滴和供血者血清 一滴。混匀后 1000rpm离心1min， 取出观察结果。 如两侧均 无凝集现象，可多量输血；如主侧无凝集而次侧有凝集只可考虑少量输血；如主侧凝集则不能输血。 低离子聚凝胺介质交叉配血试验 实验原理
Байду номын сангаас
实验原理
微柱凝胶介质交叉配血试验 实验原理 利用抗原抗体特异性反应的作用→通过离心技术→利用凝胶的 微孔过滤作用，将发生凝集反应的RBC阻滞于凝胶之内，而未 凝集的单个RBC则穿过微孔运动至柱底→从而区分有无凝集。 实验步骤 见PPT所述。结果判定肉眼直接观察。
实验注意事项
实验注意事项
1.器材、试剂、反应温度、 离心、标本等注意事项同ABO 血型鉴定。 2.血清优于血浆；不用溶血标本；配血后，标本置冰箱内保存至少7天 。 3. RBC要用生理盐水洗干净。 4.溶血现象， 实质是阳性结果， 为配血不合。 5. ABO血型系统同型而不容，应首先排除ABO血型鉴定是否有误。 6.盐水介质法仅能检测 IgM型RBC血型抗体，不能检测 IgG型 RBC抗体。凝聚胺法 可以检查出IgG 型的血型抗体 7.临床输血进行交叉配血试验时，应当首先进行盐水介质法试验，再进行聚凝胺介 质法试验。 8. 聚凝胺介质法试验尽快观察结果(<3min)
交叉配血试验50384精 编PPT课件
演讲人
目录
01
【实验器材和药品】
凝聚胺方法不规则抗体 PPT课件
疗效判定标准
1.取试管3支，各加被检血清（或血浆）100ul，分别加入 3-5%筛检红细胞各50ul。 2. 各加 LIM0.65ml，混匀后，再加入 Polybrene 溶液 100ul， 并混合均匀。
3.用输血科专用离心机3400rpm/min离心10秒，然后倒掉 上清液，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
技术路线
（包括总体安排和进度步骤及其可行性论证）
不规则抗体筛选试验（凝聚胺法）是在凝聚胺试验法的
辅助作用下让受检者血清与特殊试剂红细胞 ---筛选红细 胞发生免疫反应，以发现在 37℃下有活性抗体的试验方 法。
抗体筛选试验（凝聚胺法）不一定能检验出所有有临床
意义的抗体，一些低频率抗原产生的抗体或者剂量效应 的抗体，可能被漏检，这时需选择抗原性更完全和特异 性更敏感的筛选细胞做试验，或用更高敏感度的技术作
一、献血者的血清或血浆进行抗体筛查，可以防止 含有不规则抗体的血液输注给病人，避免由于献血者血 液中的不规则抗体引起病人红细胞的破坏而引起的溶血
性输血反应，同时可以减少血液浪费，可将有不规则抗
体的血液制备成抗体血清，用于稀有血型的检测。 二、对需要输血治疗的患者，进行不规则抗体筛查， 有利于血液的选择，从而有充分的时间来选择不含有针 对某抗体的相应抗原的血液，从而防止因为输注含有某 抗体相应抗原的血液而引起溶血性输血反应，保证输血 安全。
适应症
适应症：禁忌症来自不良反应不规则抗体筛选试验（凝聚胺法）
第一类产前病人：测定非典型抗体以排除新生儿溶血病
发生的可能。
第二类输血前病人：确定供应相应抗原阴性血液，供血
者、受血者之间相容性评估。
第三类献血员：避免有阳性抗体阳性血，发现稀有血型
凝聚胺交叉配血试验
1 实验原理凝聚胺试验应用于血库作业上，进行血型鉴定、交叉配血、完全抗体与不完全抗体的筛选，其灵敏度、特异性远高于其他介质1倍～250倍，方法简单快速，因此，陆续取代了盐水、木瓜酶试验。
其原理是利用低离子溶液降低离子强度，加速分子运动，减弱红细胞静电斥力，缩短红细胞间距，促进红细胞抗原和血清(血浆)中抗体结合发生非特异凝集，当附加假凝集清除液后非特异凝集立即散开，而由抗原抗体反应引起的特异性凝聚将依然存在。
由此，检出完全抗体或不完全性抗体。
2 试剂组合低离子介质-凝聚胺溶液：含葡萄糖、凝集胺、氯化钠、乙二胺四醋酸2钠及稳定剂；悬浮液：含柠檬酸钠、葡萄糖及稳定剂。
试剂由台湾贝索生物技术有限公司提供。
3 交叉配血试验取试管2支，分别标明主与次，主侧加入受(供)血清2滴，加供(受)血者3%～4%红细胞盐水悬液1滴。
各管加入低离子介质0.8 ml，混匀静置1 min，加凝聚胺1滴，混匀，以3 500 r/min离心10 s～15 s，倒出上清液(残留0.1 ml)，轻摇试管肉眼可见明显的凝集状，如无凝集须重做。
再加1滴假凝集清除液，边摇动边观察结果。
如果凝集散开为阴性，即为非特异性凝集，如不能散开为阳性，即为特异性凝集。
如反应可疑应用显微镜观察，上述凝聚胺配血方法见(输血技术学)［1］。
4 注意事项可以用含EDTA血浆代替血清进行交叉配血使用。
若使用血清可把标本放入37 ℃水浴箱,使其纤维蛋白析出后再用，否则，红细胞缠绕在纤维蛋白上造成假凝集现象。
如洗肾患者，血清(浆)中含有肝素，可出现假凝集，此时，须多加2滴～4滴凝聚胺溶液，以中和肝素。
冬天室温低，某些患者可能含有冷凝集素而导致假阳性结果出现，遇此情况，须再滴入2滴悬浮液后37 ℃水浴1 min，再观察，若凝集消失说明为冷凝集。
如盐水试验不凝集，凝集胺试验凝集说明有不完全抗体，必须进一步做抗体鉴定。
5 讨论凝聚胺交叉配血技术主要用于检测患者血清(浆)中是否有具有临床意义的红血球异体抗体。
交叉配血图示(3)
没有血是最不安全的 不输血是最安全的
感谢聆听
聚凝胺
枸橼酸钠
3 加入枸橼酸钠中和聚凝胺
4 由于不完全抗体的 结合，红细胞的特异 性凝集不消失
不完全抗体
IgG凝集红细胞示意图
IgG 在盐水介质中一般不产生凝集
IgM抗体凝集红细胞示意图
IgGM在盐水介质中产生凝集
抗球蛋白试验
抗球蛋白
红细胞间的距离缩短， IgG产生凝集
酶处理、凝聚胺
IgG凝集红细胞示意图
聚凝胺交叉配血技术示意图1
1 红细胞间有一定间距
聚凝胺
枸橼酸钠
2 加入聚凝胺后，可以 缩短红细胞之间的距离， 使其非特异Байду номын сангаас凝集
3 加入枸橼酸钠，可以 中和聚凝胺
4 红细胞的非特异性 凝集消失
聚凝胺交叉配血技术示意图2
1 红细胞上已有不完全 抗体致敏
2 加入聚凝胺后，缩短红 细胞之间的距离，让不完 全抗体可以同时与两个红 细胞结合使其特异性凝集
交叉配血示意图
世博高新医院输血科 牛树疆
低离子聚凝胺交叉配血技术
➢ 原理：聚凝胺（Polybrene），一种高价阳 离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正 电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使 红细胞之间距离减少，能引起正常红细胞 可逆性的非特异性凝集。如果使抗体致敏 的红细胞被聚凝胺凝集，则凝集不可逆。
交叉配血(聚凝胺法、微柱凝胶法)PPT课件
精选PPT课件
13
操作步骤：
按照试剂说明配制好献血者、受血者的红细胞悬液 以及分离血清。
主侧：25ul 受血者血清 + 50ul 1%献血者红细胞， 加入主侧管反应室内；
次侧： 25ul献血者血清+ 50ul 1%受血者红细胞， 加入到次侧管反应室内；
加样后的试剂卡放置专用孵育器37℃孵育15min； 取出试剂卡，放置专用离心机1000g离心9min；
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6
LIM:降低 溶液的离子强度,减少红细胞周围的阳离子云，
可促进抗体和红细胞膜血型抗精原选PP结T课件合。
7
聚凝胺:高价阳离子,中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞
间距,促进红细胞非特异性凝集。
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8
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9
重悬液:电荷中精选和PPT课。件
10
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11
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3
操作步骤：
抽取受血者静脉血3～4ml，枸橼酸钠抗凝，以生理盐 水洗涤受血者红细胞3次，配成3% 红细胞悬液，同样 方法处理献血者样本；
取洁净小试管2支，1支标记为主侧管，另1支标为次 侧管；
主侧管内加受血者血清2滴、献血者红细胞悬液1滴； 次侧管加献血者血清2滴、受血者红细胞悬液1滴；
每管各加LIM溶液0.6ml，混匀，室温孵育1min;
每管各加2滴聚凝胺溶液，混合后静置15s;
1300g离心15s，倾去上清液；
轻轻摇动试管，目测细胞有无凝集，如无凝集，必须 重做；
加入2滴重新悬浮液，并轻轻转动试管混合，肉眼观察
结果，必要时用显微镜观察结果。
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4
结果判断：
主侧管和次侧管内红细胞凝集在1min散开， 则为聚凝胺引起的非特异性凝集，表示受血者 和献血者配血相容。
交叉配血试验.ppt
演讲人
交叉配血实验主要是用于供血前确认供者血型与受者血型是不是配合，尽量的避免 输血反应。输血前必须进行两项输血实验，血型鉴定和交叉匹配。
理论上一旦已知受血者血型便可输注配合的血液，是在实践中供者血和受者血可以 仍然有不相容的情况，主要是因为供血可能包含其他非常规血型抗原，而受血者血 清中如存在针对这些抗原的抗体就可能会造成输血反应，所以交叉配血是非常重要 的。
交叉配血实验是观察主副实验是不是发生凝集决定临床输血的可行性，血型完全配 合，输血是最安全的。血型部分配合，尽在应急的时候少量输血并需要严密观察是 不是有输血反应，血型完全不配合是绝对不要输血的。
总之血型完全配合或者是部分配合是可以输血的指征，血型完全不配合也就是主实验和 副实验均凝集是严禁输血的。
交叉配血试验ppt课件
献 血 者
• 主侧配血
用患者血清与供
主
者红细胞进行试验
侧
• 次测配血
次
供血者血清与患
侧
者红细胞进行试验
主侧配血要求：
• 绝对不可以有凝集或溶血
凝
现象。
集
次测配血要求：
• 供血者血清加受血者红细
胞在允许范围内，可以有
凝集现象，但不可以有溶 血。
不 凝
集
交叉配血试验是输血前必要的步骤，主要是检查受 血者血清中有无能破坏供血者红细胞的抗体。主要 目的是为了防止输血后产生溶血性反应。
阴
血
性
者
患
者
37 ℃主Biblioteka 侧献次 侧
37℃ 水浴30分钟
三洗
血
者
阳
加
性
抗 球 蛋
离心 看结果
白
阴 性
患 者
主 侧
次
献
侧
血
者
主次侧 均加酶
37 ℃
阳
性
37℃
离心
水浴30分钟
看结果
阴
性
二、Rh定型 1、使用盐水介质试剂
用LIM配制的红细胞悬液，可以代替 由生理盐水配制的红细胞悬液在盐水介质 试剂中进行Rh定型，两者定型方法和效果 均相同。
患
者
主
侧
献
室温放置
次 侧
1 分钟
主次侧均 加聚凝胺
血
者
阳 性
离
主次侧均
心 聚凝胺引起 红细胞非特
加重悬液 看结果
阴 性
异性凝集
尽可能确保对人和一个病人来说，输了供血者的血 不会引起有害反应，并且使红细胞在输注后能保持 最长的存活时间。
交叉配血凝聚胺法
交叉配血（凝聚胺法）1. 原理凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合，再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。
加入中和液后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。
2. 标本采集：2.1 标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将细胞配成5％盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。
2.2 标本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐全。
3. 标本储存：急诊标本30分钟内完成操作，标本应至4℃冰箱保存7天。
4. 标本运输：室温运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染。
溶血标本，标签不齐全不能作测定。
6. 试剂：6.1 试剂名称：凝聚胺试剂(polymatching)6.2 试剂生产厂家：(台资)珠海贝索生物技术有限公司。
6.3 试剂组成：试剂1. 低离子介质(LowLonic Medium，LIM).试剂打开使用后，可置室温贮存，未开封者2-25度贮存，有效期为2年。
试剂2. 凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。
试剂3. 重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。
试剂4. 8.5％生理盐水。
7. 仪器：7.1 血型血清离心机：80-2型离心机江苏金坛市大地自动仪器厂7.2 离心机：江苏金坛市大地自动仪器厂7.3 电热恒温水箱：江苏金坛市医疗器械厂7.4 显微镜：XSZ-H3(中国）8. 操作步骤及结果判断：8.1 供受者红细胞用生理盐水配成3-5％的细胞悬液。
加样量均为：血清2滴，红细胞悬液1滴。
主管：受血者血清+供者红细胞悬液;次管：受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。
交叉配血(凝聚胺法)
接叉配血（凝结胺法）之阳早格格创做1. 本理凝结胺（polymatching）法最先利用矮离子介量落矮溶液的离子强度，缩小白细胞周围的阳离子云，促进血浑（浆）中的抗体与白细胞相映抗本分散，再加进戴亚电荷的下价阳离子多散物-凝结胺溶液，中战白细胞表面的背电荷，支缩细胞间距，产死可顺的非特同性汇集，并使IgG型抗体间接凝集白细胞.加进中战液后，仅由凝结胺引起的非特同性汇集，会果电荷中战而分别，而由抗体介导的特同性凝集则没有会分别.2. 标本支集：2.1 标本种类：抽与静脉血3-4ml待凝固后分散血浑，将细胞配成5％盐火悬液将供血者血样以共样要领分散血浑(浆)战白细胞悬液.2.2 标本央供：抗凝战搞燥管均可，如用抗凝血主弛用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐齐.3. 标本储藏：慢诊标本30分钟内完毕支配，标本应至4℃冰箱死存7天.4. 标本输送：室温输送.5. 标本拒支尺度：细菌传染.溶血标本，标签没有齐齐没有克没有及做测定.6. 试剂：6.1 试剂称呼：凝结胺试剂(polymatching)6.2 试剂死产厂家：(台资)珠海贝索死物技能有限公司.6.3 试剂组成：试剂 1. 矮离子介量(LowLonic Medium，LIM).试剂挨启使用后，可置室温贮存，已启启者2-25度贮存，灵验期为2年.试剂2. 凝结胺溶液(PolybreneSolution).贮存及灵验期共上.试剂 3. 沉悬液(ResuspendingSolution).贮存及灵验期共上.试剂4. 8.5％死理盐火.7. 仪器：7.1 血型血浑离心机：80-2型离心机江苏金坛市天里自动仪器厂7.2 离心机：江苏金坛市天里自动仪器厂7.3 电热恒温火箱：江苏金坛市调理器械厂7.4 隐微镜：XSZ-H3(华夏）8. 支配步调及截行推断：8.1 供受者白细胞用死理盐火配成3-5％的细胞悬液.加样量均为：血浑2滴，白细胞悬液1滴.主管：受血者血浑+供者白细胞悬液;次管：受者白细胞悬液+供者血浑;(阳阳对于照管另设).5ml混匀置室温1分钟.加凝结胺溶液2滴，混匀，置室温15秒.8.3 1000g(3400rpm)，离心10秒，弃上浑液，管底死存约液体.沉摇试管，目测白细胞有无凝集.如无凝集，则沉搞前里考查.8.4 加进2滴沉悬液，沉沉混同，肉眼或者隐微镜下瞅察截行.8.5 凝块正在1分钟内分别，考查截行为阳性，供受者血液协共;反之，如依照为分歧强度的凝块，考查截行判为阳性，供受者血液没有协共.真验截行必须正在3分钟内判读.9. 支配本能：赶快烦琐，特同性强，敏捷度较下，沉复性佳.10. 超出范畴截行处理：10.1 细胞自凝：正在冬天气温较矮时，某些病人血浑中含有热凝集素而引导接叉配血假阳性;逢此局里可用37℃-40℃死理盐火洗涤白细胞并置37℃火溶中沉沉摇动，瞅察截行.10.2 若病人血浑(血浆)含有肝素，如洗肾患者能做用配血，须多加4-6滴polybrene溶液以中战肝素.10.3 白细胞悬液为5％为宜，过浓或者过浓可使抗本抗体比率没有适合，反应没有明隐易误判.10.4 百般本果引起的白细胞溶解，误判为没有凝集，部分溶血时，可溶性血型物量中战了相映的抗体.11. 要领限制性：11.1 试管，滴管吸头战玻片必须浑净搞燥，预防溶血.11.2 支配要领应按确定，先加血浑，而后再加白细胞悬液，以便简单核真是可漏加血浑.11.3 离心时间没有宜过少或者过短，速度没有宜过快或者过缓，以防假阳性或者假阳性截行.11.4 瞅察时应注意白细胞呈特同性凝集，继收性凝固及线状排列的辨别.。
交叉配血试验课件
一、凝聚胺配血法
目的 掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。 原理 红细胞表面带有大量的负电荷，凝聚胺 溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞 表面的负电荷，缩短红细胞之间的距离，使 红细胞产生非特异性的集聚。悬浮液具有中 和凝聚胺的作用，使正常的红细胞非特异性 凝集散开，试验结果为阴性；如果红细胞被 相应的抗体致敏，则凝集就不会散开，试验 结果为阳性。
注意事项
1.肝素治疗患者，多加几滴聚凝胺以中 和肝素。 2.试剂使用前请放置至室温平衡后再行 操作。
3.天冷时，冷凝集素会干扰交叉配血。 4.按说明书操作。 5.先盐水观察，再做聚凝胺法。
二、抗人球蛋白法配血试验
目的 掌握抗人球法原理、方法 原理 检查有无IgG抗体 器材 小试管、滴管、试管架、记号笔、显微
镜、离心机、37℃水浴箱。
试剂 抗人球试剂（多抗）、生理盐水。 标本 静脉血。
操 作
1.标记试管，标明主侧、次侧 2.加样 主侧管：供血者3～5%悬红1滴+受血者血清2滴 次侧管：受血者3～5%悬红1滴+供血者血清2滴 3.离心15秒,观察是否凝集 4.混匀，37℃水浴30min，盐水洗涤3次（快）， 扣干。 5.加抗人球蛋白试剂1滴，混匀，离心15秒。 6.轻摇，观察结果。
注 意 事 项
1.洗涤要迅速，中途不能停，洗彻底。 2.严格把握离心速度和时间。 3.观察结果时，须轻摇。 4.冷凝集素、脐血有网织红细胞、洗涤不充分、抗人球 蛋白血清中含有抗运铁蛋白，可使红细胞凝集。 5.先盐水观察，有溶血标本弃用。 6.加阳性、阴性对照。主侧次侧交叉结束后，加1滴阳性 对照细胞，离心后应有红细胞凝集，若不凝需重做。 7.抗人球试验费时、繁琐，但灵敏度好、特异性强。
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操作
❖ 1. 取试管两支，标明主侧次侧，主侧管加受 血者血清(血浆)1滴，和供血者3～5％红细胞 悬液(洗涤或不洗涤均可)1滴，次侧管受血者 3～5％红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)l滴， 加供血者血清(血浆)1滴。
❖ 2. 各加LIM溶液3滴，混合均匀后，再各加 Polybrene溶液1滴，并混合均匀，置室温1分钟或 参照说明书。
【注意事项】
❖ 1.可以用含EDTA抗凝血浆代替血清使用。 ❖ 2.若受血者血清(血浆)含肝素，如洗肾患者，
须多加4～6滴Po1ybrene溶液以中和肝素。 ❖ 3.试剂使用前请放置至室温平衡后再行操
作。
❖ 4.在冬天室温极低的情况下进行交叉配血试 验操作，由于某些受血者血清中可能含有寒 冷凝集素等因素，而导致假阳性的结果出现， 建议进行交叉配血试验操作时室温保持在 22℃左右，最后滴加Resuspending时，将 试管立即置入37℃水浴中，轻轻转动试管混 合，并在30秒内观察结果。
❖ 3．普通离心机1000g离心15秒，然后把上清液 倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
❖ 4．轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如 无凝集，则必须重作。
❖ 5．最后加入Resuspending2滴，轻轻转动试管混 匀并时观察结果。
❖ 6. 结果判定：如果在30秒内（或按说明书） 凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性 聚集，配血结果相合；如凝集不散开，则为 红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结 果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片 上用显微镜观察。
试验分步原理
加重悬液
加入重悬液减 弱 了 Polybrene 的作用
试验分步原理
阳性结果
已被血型抗体 致敏的红细胞 不会散开
试验分步原理
阴性结果
未被血型抗体致敏 的红细胞很快散开
大家学习辛苦了，还是要坚持
继续保持安静
❖试剂: 凝聚胺试剂盒；生理盐水 ❖ 器材：小试管、滴管、试管架、记
号笔、显微镜、离心机。 ❖ 标本：静脉血。
凝聚胺交叉配血试验
目的：掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。
原理：聚凝胺分子是带高价阳离子多聚季铵盐，溶
解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷， 有利于红细胞凝聚，低离子强度溶液也能降低红 细胞的Zeta电位 ，可进一步增加抗原抗体间的吸 引力。
当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，与红细胞发生 紧密结合，此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胺的正电 荷，使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生的凝集不散开； 如果血清中不存在IgM或IgG类血型抗体，加入解聚液可使 非特异性凝集消失。
灵敏度高；但费时，准确性和稳定性差。
❖ 4.卡式配血（微柱凝胶法）已成为国际安
全输血检查的推荐方法，该法具有：①检测 项目全②灵敏度高③特异性强④重复性好⑤ 客观性好⑥节省样品、试剂，结果易保存⑦ 可自动化操作。不足之处是成本昂贵。
❖ 5.抗球蛋白介质配血法是检查不完全抗体
最敏感、可靠的方法；但试剂价格较贵，操 作复杂、费时。
试验分步原理
血清
加入LIM
混合液 红细胞悬液
Polybrene 受体
IgG 抗 体 迅速致敏
血型抗原
试验分步原理
加入 Polybrene
Polybrene 分 子 连 接到红细胞上
试验分步原理
离心
Polybrene 拉 近 红细胞间的距 离并造成凝集
1 个 IgG 分 子 同时连接两 个红细胞
❖ 5．不同的凝聚胺试剂盒操作方法各不相同， 实验时请严格按照说明书操作。
【方法学评价】
1. 凝聚胺介质配血法反应较盐水法灵敏度高，
能检测几乎所有规则与不规则血型抗体，适用 于各类输血患者的配血。
2. 盐水介质配血法操作简单、反应快速，但
只能发现完全抗体。
3. 酶介质配血法操作较为简便，试剂便宜，