ABO血型正反定型
ABO正反定型不一致的原因
ABO正反定型不一致的原因
1.新生儿尚未形成ABO同种抗体，所以三个月以内的新生儿只要求做正定型确定ABO血型。
2.漏加试剂、试剂污染或失效、血标本和试剂弄错，均可以造成假阴性或假阳性结果。
3.器材不洁可造成假阳性结果。
4.分型血清效价太低，亲和力不强均可造成凝集试验的强度减低，容易误定血型。
5.红细胞悬液过浓或过淡，导致抗原抗体比例不当，出现前带或后带现象，易误判为假阴性。
6.受检者红细胞上的抗原位点过少（亚型）或抗原性减弱（白血病、恶性肿瘤）、类A或CisAB等，均可使凝集反应强度减弱。
7.受检者血清蛋白紊乱（巨球蛋白血症）、实验室温度过高，常引起细胞呈緍钱状排列。
8.受检者血清中缺乏应有的抗体（抗-A、抗B）、如丙种球蛋白缺乏症，均可引起正反定型不合。
9.各种原因引起的红细胞溶血，误判为不凝集；部分溶血时，可溶性物质中和了相应的抗体，或患者血清中血型物质过多，中和了相应的抗体，可导致假阴性结果。
10.有细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。
11.近期曾输过异型血，使患者的血液标本成为不同血型的红细胞混合物，定型时出现“混合外观凝集”现象。
12.钳合体血型体内有两群红细胞，定型时显示“混合外观凝集”现象。
13.获得性类B，由于革兰氏阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B”的活性。
14.药物因素：药物、右旋糖酐及静脉注射某些造影剂聚集而类似凝集。
15.血清有不规则抗体，如自身抗体抗-I，常干扰定型。
16.老年人血清中抗体水平大幅度下降，影响反定型结果。
ABO血型鉴定正反定型试验方法
ABO血型鉴定正反定型试验方法正定型试验是通过将被测血清与已知的A和B抗原的红细胞混合反应来确定被测血型。
具体步骤如下：1.准备供试者的血液样本。
采集一个血液样本，可以是静脉血或者指尖血。
2.分别将供试者的血液样本分为两个离心管中。
在两个离心管中加入等量的稀释液，使血液与稀释液比例为1：2，充分混合。
3.在一个离心管中加入已知含有A抗原的红细胞悬液，同时在另一个离心管中加入已知含有B抗原的红细胞悬液。
充分混合。
4.将两个离心管分别离心，离心后可观察到两个离心管中红细胞的沉淀情况。
5.如果被试者的血清与含有A抗原的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有B血型。
如果与含有B抗原的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有A 血型。
如果与两者都沉淀，说明被试者具有AB血型。
如果与两者都未发生沉淀，说明被试者具有O血型。
反定型试验是通过将被测血清与已知的A和B型抗体的红细胞混合反应来确定被测血型。
具体步骤如下：1.准备供试者的血液样本。
采集一个血液样本，可以是静脉血或者指尖血。
2.分别将供试者的血液样本分为两个离心管中。
在一个离心管中加入已知含有A型抗体的红细胞悬液，同时在另一个离心管中加入已知含有B 型抗体的红细胞悬液。
充分混合。
3.将两个离心管分别离心，离心后可观察到两个离心管中红细胞的沉淀情况。
4.如果被试者的血清与含有A型抗体的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有B血型。
如果与含有B型抗体的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有A血型。
如果与两者都沉淀，说明被试者具有AB血型。
如果与两者都未发生沉淀，说明被试者具有O血型。
在正定型试验和反定型试验中，如果在任意一次实验中发生了沉淀反应，就能确定被试者的血型。
如果在正定型试验和反定型试验中都未发生沉淀反应，则需要重新进行试验或者采用其他额外的手段来鉴定个体的血型。
需要注意的是，血型鉴定是一种简单、安全、快速且可靠的方法，但在特殊情况下，如婴儿出生后的一段时间内，由于母婴免疫传递可以导致血型存在变化。
ABO血型鉴定正反不一致的原因及处理流程
ABO血型鉴定正反不一致的原因及处理流程摘要】目的探讨ABO血型鉴定正反不一致的原因及解决办法。
方法我院输血科2006年-2010年发现了63例ABO血型鉴定正反不一致的患者，对其正反定型不一致血液样本通过采用消除红细胞自凝、红细胞不规则抗体检查、A1抗原检测、直接抗人球蛋白试验、吸收放散试验、唾液血型物质的检测等方法找出原因,正确鉴定血型,最终总结原因及对策。
结果红细胞因素造成的ABO正反定型不符11例，抗体因素造成的9例，红细胞和抗体混合因素造成的43例。
结论对ABO血型正反定型不一致无法定型的血液样本,应根据血清学试验并结合临床资料以正确鉴定ABO血型,以保证输血安全。
【关键词】 ABO血型正反不一致原因解决方法ABO血型鉴定，即指ABH血型抗原的检测。
输血时若血型不符会使输入的红细胞发生凝集，引起血管阻塞和血管内大量溶血，造成严重后果。
所以在输血前必须作血型鉴定。
ABO血型正反定型一致是ABO血型鉴定关键所在，出现ABO血型正反定型结果不一致原因可能是检验技术错误或是被鉴定者自身ABO血型抗原或抗体存在问题[1]。
笔者将我院输血科2006年-2010年发现的63例ABO血型鉴定正反不一致的资料回顾分析如下。
1.资料与方法1.1一般资料我院输血科2006年-2010年发现了63例ABO血型鉴定正反不一致的患者，年龄1-76岁，男性36例，女性27例。
1.2试剂正定型: 抗-A、抗-B、抗-AB和抗-H 单克隆标准血清购买于上海生物技术有限公司，特异性、亲和力及效价均符合国家标准。
反定型: 3%-5%的标准红细胞悬液购买于长春博德生物技术有限公司。
1.3方法 ABO血型鉴定采用正反定型立刻离心试管法。
出现ABO血型鉴定正反不一致的时候，首选要排除检验人员操作技术的错误，如：血清与红细胞比例不当、离心速度或时间不当、试剂失效或收到细菌污染、实验器皿不干净，结果记录错误等；通过红细胞抗体的测定、直接抗球蛋白试验，红细胞吸收放散试验，唾液血型物质的测定等一系列的方法来确定干扰因素及处理方法，并最终确定血型。
ABO疑难血型鉴定
ABO正、反定型不合疑难血型三步分析法”ABO正反定型不符定义：①ABO正反定型不符，即正定型与反定型提示的血型结果不一致②ABO正反定型相符，但为弱反应，正定型反应强度＜3+，或反定型反应强度＜2+③正定型为O型，反定型与A细胞、B细胞凝集强度差别≥2+凡是遇到ABO正、反定型不合的病人第一步: 排除人为因素／操作失误１，重新采集血样⑴分抗凝，不抗凝两管⑵排除采错人，输血/输液处采样……２，核对试剂，器材仔细阅读试剂效期，说明书，操作方法，注意事项３，规范化操作复检复检ABO 血型仍然正、反定型不合，就确定为疑难血型进入三步法第二步第二步：凡是ABO正、反定型不合的病例按下面方法，分析病人的抗原、抗体是“变多？还是变少？”正、反定型结果判断1，正定型AB, (两种抗原) 抗原变多正定型O, (无抗原) 抗原变少2，反定型O, (两种抗体) 抗体变多反定型AB, (无抗体) 抗体变少3，正定型A, 或B (一种抗原) ①抗原变多;②抗原变少反定型A, 或B (一种抗体) ①抗体变多;②抗体变少★不要过问“真滴变多变少没有”，你依样画葫芦就是了规律很好记，不管是抗原/抗体：两种→肯定是变多没有→肯定是变少；一种→可能是变多，也可能是变少归纳ABO正,反定型不合的“五大类30种原因”知道有个“五大类30种原因”就可以了不要记，书上有这些表，现用现翻书★用排除法（1）红细胞抗原变少7种（2）红细胞抗原变多7种①＜6月,老年（临床）□①自身凝集素（临床诊断）□②白血病（临床诊断）□②红细胞粘附大量蛋白（RBC未洗）□③输异型血（输血史）□③样本含试剂反应物（RBC未洗）□④造血干细胞移植（病史）□④造血干细胞移植（病史）□⑤血型物质↑□⑤获得性B抗原（类B）（临床感染）□⑥急性大失血（临床病史）□⑥B(A)表型□⑦ABO亚型□⑦输异型血（输血史）□注意：每条的临床提示（3）血清抗体变少6种（4）血清抗体变多7种①<6个月/老年（临床）□①自身抗体（临床诊断AIHA）□②ABO亚型□②同种抗体（抗筛）□③低丙种球蛋白血症（化验）□③对试剂反应的物质□④造血干细胞移植（病史）□④血清蛋白异常（化验）□⑤先天性ABO抗体缺失□⑤输异型血浆（输血史）□⑥大量输液（输血史）□⑥造血干细胞移植（病史）□⑦输含血型抗体Ig（输血史）□注意：每条的临床提示5）混合凝集（mf）3种①3个月内输异型血（输血史）□②造血干细胞移植（病史）□③双精子受精/嵌合体（问家系）□注意：每条的临床提示归纳剩下不能排除的原因：第三步: 实验验证针对剩下几种不能排除的原因, 选择针对性实验验证，如何选择针对性实验呢?翻看书本:《输血免疫血液学实验技术》人民卫生出版社,2011 .1; P131。
ABO疑难定型
ABO疑难定型一、ABO疑难血型鉴定的方法（一）正反定型：正定型：-A, -B，-AB, -H, -A1反定型：Ac, Bc, Oc, 自身对照1. ABO正定型中各种试剂用途疑难定型中正定型用抗血清抗-A及抗-B抗-AB:确认弱A和弱B抗原,与弱A及弱 B抗原亲和力强,会产生强反应抗-H:用于检查亚型及孟买型, A亚型红细胞上的H抗原多于正常A型抗-A1: 用于A亚型(如A2, A3)检测2. H抗原在红细胞上的分布3. ABO反定型中各种试剂的用途反定型中试剂红细胞的意义A及B细胞: 确认抗-A或抗-B抗体O型红细胞:检查是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型自身对照: 用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等)A2细胞: 用于亚型的鉴定, 尤其是在怀疑是A亚型且又存在抗-A1抗体的情况下（二）型物质测定型物质准备：1~2ml唾液，沸水煮10分钟，离心后得到的上清。
标清的调制：标清用盐水稀释至其效价为1：16中和：将0.5ml型物质与调制后的标清0.5ml等体积混合,室温放置30分钟检测：用Ac检测中和后的抗-A, Bc检测中和后的抗-B.结果判断：如果抗-A被中和，则被检者为A型，如果抗-B被中和，则被检者为B 型。
（三）吸收放散吸收用RBC：盐水洗涤5次的被检者压积RBC 1ml。
吸收用的标准血清将压积RBC和标清按等体积比例混合，在相应的温度条件下（4℃）孵育1小时，每隔15分钟混匀一次用盐水洗涤孵育后的细胞6次，得到压积RBC，加入等量盐水。
56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。
用标准试剂红细胞检测放散液。
（四）O型筛选红细胞的应用抗原组成:三组合细胞,要求必须具备全部的Rh因子I: O型R1R1(CDe/CDe); II:O型 R2R2(cDE/cDE); III: O型rr(cde/cde)用途: 用于受血者、献血员及孕产妇等的ABO系统以外不规则抗体的筛选目的: 在配血之前,有针对性、按比例的去寻找与带有抗体的病人相配合的血（五）自家冷凝集血样的ABO定型正定型用红细胞的准备:血样采集后,立即离心,获得压积红细胞用37℃温盐水洗涤红细胞45℃热放散3分钟巯基试剂处理: 破坏IgM抗体自家冷凝集血样的ABO定型反定型用血浆或血清的准备血样采集后放置4℃冰箱静置24小时,使红细胞充分吸收自身冷凝集抗体用自身红细胞吸收去除自身冷抗体用O型红细胞吸收去除ABO系统以外的非特异性及特异性抗体（六）获得性B1. 获得性B及多凝集现象获得性B:肠紊乱及感染病人, 细菌酶影响A抗原的受体肠内壁通透性增加,而后细菌多糖吸附在红细胞表面多凝集现象:异常或变形的RBC被所有正常人的血清凝集(微生物酶作用暴露或激活膜隐蔽受体多凝集血样中的血清不与自身反应)2. 获得性B产生的主要机理二、ABO正反定型不符的问题分析（一）ABO定型问题经常发生的情况为：1. 明显缺失应该出现的抗-A或抗-B：(1) 新生儿血样(2) 免疫缺陷、免疫紊乱(3) 前带现象(4) 血型型物质过多(5) 抗原太弱，常规方法检查不出来，相应血清中无抗体(6) 亚型，反应是混合视野2. 由于试剂被污染，或试剂中有额外抗体3. 明显多出抗原(或多出抗体)(1) 亚型，如A2型可能血清中有抗-A1(2) 自家凝集(3) 获得性B（二）引起ABO正反定型不一致的原因分析1. 技术因素：(1) 试剂贮存不当(2) 使用技术错误(3) 使用错误的试剂(4) 使用污染或失效的试剂(5) 离心速度不当2. 存在IgM性质的自家冷抗体由于自家冷抗体(冷凝集病,CHD)而导致自家溶血的病人，在低于37℃时血细胞自发凝集，影响正反定型。
ABO血型抗体缺失致ABO血型正反定型不符的检测分析
ABO血型抗体缺失致ABO血型正反定型不符的检测分析目录一、内容综述 (2)1. 研究背景 (3)2. 研究目的与意义 (4)二、ABO血型系统概述 (5)1. ABO血型系统的基本概念 (5)2. ABO血型系统的遗传特性 (6)3. ABO血型系统在临床输血中的应用 (7)三、ABO血型抗体缺失的原因分析 (9)1. 遗传因素 (9)2. 免疫因素 (10)3. 感染因素 (11)4. 药物因素 (12)四、ABO血型正反定型不符的临床表现及诊断方法 (13)1. 临床表现 (15)2. 诊断方法 (15)血型鉴定 (16)抗体检测 (17)家族调查 (17)五、ABO血型抗体缺失致ABO血型正反定型不符的检测策略 (18)1. 传统检测方法的应用与局限性 (19)2. 新型检测技术的研发与应用 (20)酶免疫分析法 (21)聚合酶链反应技术 (22)流式细胞术 (23)六、案例分析 (24)1. 案例一 (26)2. 案例二 (26)3. 案例三 (27)七、讨论与展望 (28)1. ABO血型抗体缺失对输血安全的影响 (29)2. ABO血型抗体缺失在法医学中的应用价值 (30)3. 对未来检测技术发展的展望 (31)八、结论 (32)1. ABO血型抗体缺失致ABO血型正反定型不符的检测分析的重要性332. 积极应对ABO血型抗体缺失带来的挑战，提高输血安全性 (34)一、内容综述在现代医学实践中，血型鉴定作为一项基础而重要的检测技术，在众多临床应用中发挥着至关重要的作用。
ABO血型系统作为最基础的血液分类方法之一，其抗体缺失所引发的ABO血型正反定型不符问题，一直是输血医学和血液病学研究的热点议题。
当个体因遗传或后天因素导致ABO血型系统中某些抗体的缺失时，其血型的正反定型可能会出现不一致的情况。
这种现象的发生，不仅给血型鉴定工作带来了极大的困扰，还可能对患者的输血治疗和器官移植等高风险手术产生重大影响。
ABO血型鉴定正反定型试验方法
ABO血型鉴定正反定型试验方法正定型试验方法：1.准备试验所需材料：A、B和O型血浆，还原血红蛋白（RBCs），生理盐水（PBS）和试管。
2.在试管中加入一定量的PBS。
3.取一滴A型血浆滴在PBS中的一根试管中，取另一滴B型血浆滴在PBS中的另一根试管中，取一滴O型血浆滴在PBS中的另一根试管中。
4.在每个试管中分别加入一滴RBCs。
5.轻轻摇晃每个试管，观察RBCs和血浆的反应。
反定型试验方法：1.准备试验所需材料：A、B和O型RBCs，A和B型血浆，抗人类血球定向凝集试验（AHG试剂），患者的血清和试管。
2.在试管中加入一定量的患者血清。
3.取一滴A型RBCs滴在血清中的一根试管中，取另一滴B型RBCs滴在血清中的另一根试管中，取一滴O型RBCs滴在血清中的另一根试管中。
4.分别制备三个试管，将A、B和O型RBCs与患者的血清混合。
5.将三个试管分别加入AHG试剂。
6.轻轻摇晃每个试管，观察RBCs和血清的反应。
分析结果：正定型试验的结果是通过观察每个试管中RBCs与血浆的反应来确定的。
如果A型血浆与A型RBCs在试验中凝集，B型血浆与B型RBCs在试验中凝集，而O型血浆不与任何RBCs发生凝集，则可以初步断定该患者的血型是A型、B型或O型。
反定型试验的结果是通过观察每个试管中RBCs与患者血清和AHG试剂的反应来确定的。
如果A型RBCs与患者血清和AHG试剂在试验中凝集，B型RBCs与患者血清和AHG试剂在试验中凝集，而O型RBCs与患者血清和AHG试剂不发生凝集，则可以最终确定该患者的血型。
总结：。
ABO血型正定型标准操作规程
ABO血型正定型标准操作规程一．目的：规范ABO血型正反定型的操作。
二．适用范围：适用于ABO血型正反定型。
三．支持性文件：全国临床检验操作规程第二版。
四．原理：根据红细胞上有或无A抗原或／和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型。
可利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或／和B抗原；五．仪器：离心机。
六．试剂：1．抗A、抗B分型血清；定期进行效价滴定,以保分型血清质量性能符合要求。
抗A：1∶128，抗B：1∶128。
七．样本要求：1．红细胞可用针刺手指采血，并直接用生理盐水稀释制成5%红细胞悬液；也可静脉采血，用1∶9枸橼酸钠抗凝．。
2．血清取静脉血将血液沿管壁慢慢注入干燥试管中，待自然凝固后用玻璃棒轻轻搅动血块，使之与试管壁分离。
或置37℃水浴1小时，使血块收缩离心分离血清。
八．操作步骤：1．取洁净小试管3支，分别标明抗Ａ．抗Ｂ和抗A＋B，用滴管分别加抗Ａ．抗B和抗A＋B分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞悬液1滴，混合。
2．另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞；用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5%试剂红细胞悬液1滴，混合。
3．用离心机以1000r／min离心1分钟；或3400r/10秒。
4．将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象。
如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
5．观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型；类B或cisAB的发现。
6．凝集强度判断标准：4＋＝红细胞凝集成一大块，血清清晰透明1．观察结果时不可用力振摇；2．严格按规程操作，避免操作失误，以免重新试验浪费时间和试剂；3．试验结束后，试剂置2-6℃冰箱保存，以免试剂中的免疫球蛋白变质聚凝胺法交叉配血实验操作规程1. 目的：检出和鉴定意外抗体。
ABO血型鉴定正反向定型不符的原因与分析
ABO血型鉴定正反向定型不符的原因与分析【摘要】目的分析ABO血型正反向定型不符的原因及防治措施。
方法应用正反向定型、唾液血型物质测定试验及吸收放散试验，检测16例ABO血型正反定型不符标本。
分析其原因，并正确分型。
结果本组16例出现正反向定型不符。
其中冷抗体6例，血浆异常3例，ABO亚型3例，抗原或抗体减弱2例，人为操作因素和试剂因素2例。
结论对ABO血型正反向定型不符，无法定型的血液样本，可针对原因，采取多种方法，正确鉴定ABO血型。
【关键词】ABO血型鉴定；正反定型不符；原因；解决方法正确的血型鉴定，是保证临床输血安全和抢救生命的重要工作。
输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血，结果完全相合才能输血［1］。
但在临床血型鉴定时，也会遇到正反向定型不符等情况，给临床输血带来隐患，2008年8月至2010年10月，我院共接受各科申请血型鉴定2380例，其中ABO 血型正反定型不符16例，现分析如下。
1 资料与方法1.1 一般资料血型鉴定对象：2380例血型鉴定者，均为我院2008年8月至2010年10月间住院患者；其中男1630例，女750例；年龄1.6~86岁，平均58.6岁；正反向定型不符16例。
1.2 方法1.2.1 试剂来源正定型单克隆抗A、抗B、抗AB试剂由长春生物制品有限公司提供。
反定型标准红细胞A、B、O有上海血液研究所提供。
1.2.2 鉴定方法①血型正反定型：玻片法和试管法；②唾液血型物质的检测：检测分泌型者唾液中的血型物质，并结合临床病史、用药史、输血史等为血型鉴定提供依据；③ABO亚型鉴定及抗人球蛋白试验、抗体鉴定试验等均按照文献操作［2］。
2 结果本组血型鉴定者2380例，其中16例出现正反向定型不符。
经过对16例血液样本各种方法的综合检查，其中冷抗体6例，血浆异常3例，ABO亚型3例，抗原或抗体减弱2例，人为操作因素和试剂因素2例。
3 讨论3.1 血型鉴定的意义随着现代工业、交通的发达，很多肿瘤、创伤的发病率呈上升趋势；而外科手术，器官移植，创伤急救等均需要进行治疗性输血。
ABO血型鉴定正反不符及其原因
二、血液标本的问题
19
20
红细胞多凝集现象，遗传性或获得 性红细胞膜改变，隐蔽的自身抗原暴 露，也称T-激活红细胞，因为人血清 中都含有这些暴露的抗原的自然发生 的抗体，故ABO血型相容的血清和T激活红细胞发生凝集反应。单克隆抗 体血型试剂不发生这类反应。
血清标本中如果含有试剂红细胞保护 剂成份相应的抗体，则可能发生与ABO 血型抗原抗体反应无关的红细胞凝集反应。
02
正反定型不符的原因查找和处理
（1）基本程序
首先
，如果先前试验中红细胞悬浮在血清或血浆中，则改为洗涤
后的红细胞并悬浮在盐水中，进行重复试验。如果重复试验仍是正反定型不符，
则继续下列试验：
01
02
03
04
重新采集献血 员和受血者的 血液新鲜标本， 这样可能解决 标本采集或标 记的错误或原 标本受污染所 致的错误结果。
可能被误判为红细胞凝集。
2 3
出现混合视野凝集现象，病人血液中不只是一个 ABO血型的红细胞，如将O型红细胞，或O型造血细胞输 给A型人。病人接受了ABO血型不相容的骨髓细胞移植， 并产生了耐受。比如，A型病人接受了O型人的骨髓后， 血循环中有O型红细胞，但血清中只存在抗-B。病人近期 接受了大量ABO血型相容但不同型的红细胞，如非O型人 接受了O型红细胞，或骨髓移植病人血液循环中有多于一 个ABO型别的红细胞。
ABO血型正反定型不符及其原因
目录
CONTENTS
01ABO血型正反定型 结果不相符合的原因
03 正定型的意外反应 结果
02 正反定型不符的原 因查找和处理
04 反定型的意外反应 结果
除对新生儿只检测其红细胞抗原，即只进行正定型外，临床常规检测ABO血型，必 须正反定型，正定型是检测红细胞抗原，反定型是检测血清中抗体，判定ABO血型，结 果相符。病人或者献血者（待输血液）ABO正反定型结果不相符合，要详细记录实验， 不能确定ABO血型，记录该标本血型结果有疑问。如果是待输血的标本，该袋血就不能 发出使用，应换一袋正反定型相符的血液，或者在时间允许情况下，重新进行试验，如确 定是否试验操作错误等原因，即已经明确该袋血ABO正反定型相符，可以重新考虑使用 该袋血。除此之外，不管是什么原因，只要是ABO正反定型不符的血，都不能用于临床 输血。如受血者（病人）标本ABO正反定型不符，必须首先为该受血者准备RhD同型的 O型血，以应病人治疗急需。然后进行研究，查找该受血者ABO正反定型不符的原因。
ABO血型鉴定及交叉配血
（一）排除人为因素或操作失误(第一步) 复检ABO血型:
1)重新采集血样:分抗凝血和不抗凝血的2管, 排除血样采错、静脉输液处采样和血样 不规范等因素。 2)核对试剂、器材：核对试剂效期, 仔细阅读试剂说明书, 特别是操作规程和注意事 项;核对离心机转速、时间、离心力, 以及其它器材有无污染, 排除试剂、器材, 特别是 离心力不标准的干扰。
（三）临床治疗的影响 1.大量输液 患者ABO抗体被稀释, 干扰ABO反定型。 2.静脉输入高分子药物 静脉输入高分子药物，如甘露醇、右旋糖苷和羟乙基淀粉等， 可导致红细胞成钱串状，干扰结果判定。 3.近期输过异型红细胞、异型血浆 近期输过异型血的样本正定型可能呈mf, 近期输 异型血浆可能干扰ABO反定型。 4.单采血浆或血浆置换治疗 如果患者血浆被稀释,干扰ABO反定型。 5.异基因造血干细胞移植：ABO或RhD异基因造血干细胞移植, 可一度呈嵌合体。
（二）复习临床资料(第二步) 分析可能导致正、反定型不一致的原因并予以, 归纳、分类 1.患者年龄、性别 <6个月的婴儿或老年人ABO正反定型不合可能为生理性的因素, 有妊娠生育史的妇女可能产生不规则抗体干扰ABO反定型。 2.临床治疗 1)大量输液； 2)静脉输注高分子药物； 3)输异型血； 4)血浆置换治疗； 5)造血干细胞移植 。
在标记好的三支管中各加1滴对应的试剂红细胞
无凝集
无凝集 凝集
血型：A型
ABO反定型鉴定
受检者红细胞与标准血清 （正定型）
ABO血型表现型反应格局表
受检者血清（浆）与标准红细 胞（反定型）
抗-A + +
抗-B + +
Ac
Bc
Oc
-
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（完整版）ABO血型鉴定正反定型试验方法
（完整版）ABO⾎型鉴定正反定型试验⽅法ABO⾎型鉴定正反定型试验⽅法⼀、试剂和材料：（⼀）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂⼚家提供）（⼆）显微镜、载玻⽚（三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液）（四）EDTA抗凝的待测红细胞全⾎（五）⽵签⼆、⽅法（玻⽚法）：（⼀）正定型：1.在⼀块⼲净的玻⽚上，间隔⼀定距离做好标记，分别滴⼀滴抗A和抗B试剂；2.在每滴试剂中加⼀滴待测红细胞全⾎；3.⽤⽵签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm；4.轻摇玻⽚，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；5.判读、解释并记录反应结果。
（⼆）反定型：1.在玻⽚上间隔⼀定距离标明Ac和Bc字样。
分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各⼀滴；2.在玻⽚每滴红细胞悬液上滴加待测⾎清各⼀滴；3.混匀（同正定型）；4.轻摇玻⽚，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；5.判读、解释并记录反应结果。
6.结合正反定型反应结果、判定⾎型，见表1表1 ABO⾎型正反定型试验结果判定三、附注：（⼀）表中“O”表⽰⽆凝集，“+”表⽰凝集，⼀般都是3-4个+的强凝集反应；（⼆）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应⽤试管法重新试验；（四）由于新⽣⼉在出⽣4~6个⽉内，⾎浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来⾃母亲的抗体，故新⽣⼉⾎型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO⾎型；（五）做正定型时，还可加⼀抗A、B⾎清（O型⼈⾎清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试⼀O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。
ABO正反定型不符原因分析及对策精选全文
精选全文完整版（可编辑修改）红细胞凝集强度判断标准【《输血免疫血液学实验技术》】ABO正反定型不符常见情况有：一、弱反应或缺失抗原。
二、多余的抗原反应。
患者正定型结果均为阴性，但在反定型试验中，与A1细胞不反应，而与B型红细胞出现正常反应强度的凝集，不属于抗体水平减弱的现象，依据反定型结（1）患者正定型结果与正常的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型结果，应该可以预见患者具有A抗原，正定型患者红细胞与抗AB的弱反应且与抗A 缺乏凝集反应提示为A亚型。
患者正定型结果与抗A出现1+混合视野反应，与正常的4+反应强度明显减弱，但在反定型试验中，与A1细胞不反应，而与B型红细胞出现正常反应强（1）患者正定型结果与正常抗A的凝集强度反应出现明显减弱。
依据反定型结果，应该可以预见患者具有A抗原，正定型患者红细胞与抗A、抗AB的弱（1）患者正定型结果与正常的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型结果，应该可以预见患者具有A抗原，正定型患者红细胞与抗AB的弱反应且与抗A患者正定型结果与抗B出现混合视野反应，与正常的4+反应强度明显减弱，但在反定型试验中，与B细胞不反应，而与A1型红细胞出现正常反应强度的（1）患者正定型结果与正常抗B的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型结果，应该可以预见患者具有B抗原，正定型患者红细胞与抗B、抗AB的弱患者正定型结果与抗A出现4+混合视野反应，与正常的4+反应强度出现减弱，但在反定型试验中，与A1细胞不反应，而与B型红细胞出现正常反应强（1）患者正定型结果与正常抗A的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型解决方法:解决方案:在37℃定型,去除自身冷抗体(红细胞用DTT处理血浆用白身红细胞吸收)干扰后定型，或进行血型物质检测2.致敏lgG抗体的红细胞引起自身凝集多凝集是在正定型试验中使用人血清来源的定型血清时出现,现在定型试剂使用鼠单克隆来源的定型血清不存在此问题。
（三）血清中存在针对试剂红细胞保存液成分的抗体。
abo正反定型操作步骤
abo正反定型操作步骤一、概述ABO血型正反定型操作是确定个体血型的重要方法，主要基于红细胞凝集实验和酶法鉴定原理。
本操作步骤将详细介绍正反定型的全过程，包括试剂和器材的准备、取样、标记、红细胞悬液制备以及结果观察等。
二、血型鉴定原理1.红细胞凝集实验：利用不同血型抗原抗体反应的原理，通过观察红细胞是否凝集来判断血型。
2.酶法鉴定：通过酶处理红细胞表面的抗原，使其性质发生改变，再与相应抗体结合，从而确定血型。
三、正定型操作步骤1.准备试剂和器材：准备好抗A、抗B标准血清、已知A、B型标准红细胞、受检者血液样本等。
同时需要准备的器材包括显微镜、离心机、滴管等。
2.取样：从受检者体内抽取适量血液样本。
3.标记试剂：分别标记抗A、抗B标准血清，便于后续观察。
4.红细胞悬液制备：将受检者血液样本与已知A、B型标准红细胞分别制备成红细胞悬液。
5.观察结果：将标记好的抗A、抗B标准血清分别与受检者红细胞悬液混合，观察是否发生凝集反应。
根据凝集反应的情况判断受检者的血型。
四、反定型操作步骤1.准备试剂和器材：准备好已知A、B型标准血清、受检者血液样本等。
同时需要准备的器材包括显微镜、离心机、滴管等。
2.取样：从受检者体内抽取适量血液样本。
3.标记抗体：分别标记已知A、B型标准血清，便于后续观察。
4.细胞悬液制备：将受检者血液样本制备成红细胞悬液。
5.观察结果：将标记好的已知A、B型标准血清与受检者红细胞悬液分别混合，观察是否发生凝集反应。
根据凝集反应的情况判断受检者的血型。
五、结果判断与分析根据正反定型的结果，综合判断受检者的血型。
若正反定型结果不一致，可能存在异型输血、血型变异或实验室误差，需进一步核实。
六、注意事项1.所有试剂和器材必须清洁无菌，避免污染。
2.取样时应注意安全，防止交叉感染。
3.操作过程中应严格遵守无菌操作规程，避免人为污染。
4.观察结果时，应仔细辨别红细胞凝集情况，避免误判。
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ABO血型正、反定型操作规程[目的]保证ABO血型鉴定准确，确保临床输血安全。
[适用范围]XXX医院输血科[职责]具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的ABO血型鉴定（但只对该单份标本负责）。
[相关文件]试剂采购、保存和使用管理程序设备采购、使用管理程序消毒与清洁管理程序标本采集、运输、保存和报废管理程序紧急用血管理程序[相关记录]仪器设备的采购、使用和维护记录仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录试剂采购、使用记录标本交接和报废记录紧急用血记录[实验原理]ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。
存在A凝集原的称为A型，存在B凝集原的称为B型。
而血清中还存在凝集素。
当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。
一般A型血清中含有抗B凝集素，B型血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的红细胞反应（称为正定型），用标准红细胞与被测者血清中的凝集素反应（称为反定型），以确定其ABO血型。
[仪器器械]玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。
[试剂]抗A标准血清、抗B标准血清、A型标准红细胞、B型标准红细胞、O型标准红细胞、生理盐水。
以上试剂均为有合格证件的正品。
[标本收集与处理]1．受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。
2．2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，用生理盐水制成2~5％红细胞盐水悬液备用，制备方法见本节质量控制和注意事项。
3．标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。
[实验方法与步骤]1.ABO血型的正定型（试管法）：⑴、取2支试管，分别标上抗A 和抗B ；⑵、制备待测标本2~5%的红细胞悬液（取1支试管，加入2ml 生理盐水，再加入1滴待测标本红细胞，混匀备用）；⑶、在抗A 管中加入2滴抗A 标准血清，在抗B 管中加入2滴抗B 标准血清；⑷、在抗A 和抗B 管中分别加入1滴已制备好的待测标本2~5%红细胞悬液； ⑸、混匀后，立即对称放入离心机中进行1000r/min 离心1分钟，或室温静置1小时，再轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先肉眼观察有无凝集现象，如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
⑹根据有无凝集现象判定结果如下。
注意凝集强度，此有助于A 、B 亚型、类B 或cisAB 的发现。
⑺凝集强度判断标准4十 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。
3十 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
2十 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。
1十 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。
土 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。
MF 混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。
一 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
2.ABO 血型的反定型（试管法）：⑴、取3支试管，分别标上A 、B 和O ；⑵、在3支试管中分别加入2滴待测标本的血清；⑶、将ABO 标准红细胞轻轻地充分混匀后，在A 管中加入1滴A 型标准红细胞，在B 管中加入1滴B 型标准红细胞，在O 管中加入1滴O 型标准红细胞；⑷、混匀后，对称放入离心机中进行1000r/min 离心1分钟（或3400 r/min 离心15秒）；⑸、取出后，先观察是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），再轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察；⑹根据有无凝集现象判定结果如下。
注意凝集强度，此有助于A 、B 亚型、类B 或ABO 血型 A 型标准红细胞 B 型标准红细胞 O 型标准红细胞A 型 － ＋ －B 型 ＋ － －O 型 ＋ ＋ －AB 型 － － －ABO 血型 抗A 标准血清 抗B 标准血清 A 型 ＋ － B 型 － ＋ O 型 － － AB 型 ＋ ＋⑺凝集强度判断标准（同ABO血型的试管法正定型）[质量控制和注意事项]1、分型标准血清试剂必须为三证齐全的合格产品，质量性能符合要求，且在有效期内使用。
试剂开封后必须贴上注有开封日期和开封人的标签，使用后应及时置于2~8℃专用冰箱中保存，以免细菌污染和变质而影响试验结果。
试剂开封后有效期为一周。
2、商用分型标准红细胞试剂必须为三证齐全的合格产品，质量性能符合要求，且在有效期内使用；自制分型标准红细胞试剂必须以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤 1~3次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原，再制成2~5%的红细胞悬液备用。
试剂开封或制备后必须贴上注有开封或制备日期和开封人或制备人的标签，使用后应及时置于2~8℃专用冰箱中保存，以免细菌污染和变质而影响试验结果。
试剂开封或制备后有效期为一周。
3、生理盐水启用后，有效期为二周。
4、所有试剂在使用时，必须检查是否有浑浊、变色、凝集等变质现象；凡可疑者，必须更换新的试剂进行检测。
若分型标准血清使用时间较长后，最好用已知的ABO标准红细胞检查结果是否与已知的血型相符；若分型标准红细胞使用时间较长后，最好用已知的分型标准血清检查结果是否与已知的血型相符，以防标准血清或红细胞制品污染、变质失效而造成鉴定错误。
5、试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
6、操作方法应按规定进行，一般应先加血清，后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。
7、IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温(20~24℃)内进行试验，37℃可使反应减弱。
8、离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。
用试管法进行ABO血型的正定型时不能测出亚型（如A X），需延长作用时间。
9、在反定型试验中，如果受检者的血清或血浆与O型标准红细胞产生阳性反应，则需要添加自身对照试验。
如果自身对照试验为阳性，表明是自身冷凝集素导致。
如果自身对照试验为阴性，则表明被检者血清或血浆中可能存在ABO系统以外其它系统的抗体干扰，此时需做其它相关试验加以解决上述定型问题。
10、对含有较多自身冷凝集素的受检者，在使用标准血清进行正定型时往往被误定为AB型，遇到此种情况，需用37℃生理盐水洗涤受检者的红细胞2~3次，以去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后再鉴定血型。
11、观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。
对于可疑结果，必须更换所用的试剂，重新检测。
12、对于可能存在不完全抗原的时候，应在各反应中加入凝聚胺试剂，以检验不完全抗原的存在。
13、判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。
14、2~5%红细胞悬液的配制：先用生理盐水洗涤红细胞3次，再根据下表进行红[临床应用用于检验人的ABO血型归属。
[血型鉴定的影响因素及解决方法]准确的血型鉴定是临床安全、有效输血的重要保证之一，但影响血型鉴定结果的因素很多。
如发现ABO正反定型结果不一致，应先重复做1次试验。
重复做试验时，应严格执行操作规程，使用质量合格的试剂，并细心观察和解释试验结果，就可解决明显的问题。
对一些疑难问题必须做如下进一步研究：1、标本①血标本的采集错误、稀释和溶血。
另从受检者采集l份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不合。
标本一般要求离体后尽快实验，最长不能超过3天，每次输血后受血者和供血者的血标本应在2～8℃保存7天。
②患者的药物使用有时也对实验有一定影响，当受血者使用肝素治疗时，应使用硫酸鱼精蛋白对抗使标本凝集；如果受血者使用右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）等治疗，应注意将红细胞洗涤。
③受检者红细胞上抗原位点过少(如亚型)或抗原性减弱(见于白血病或恶性肿瘤)，以及类B或cisAB等。
●如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗—A或抗—B血清做吸收及放散试验，以及用受检者唾液作A、B、H血型物质测定（只对80％HAB分泌型的人有用）。
●如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别：(1) 观察细胞与抗—A及抗—B的凝集强度，与抗—A的反应要比与抗—B的反应强，这种区别用玻片法作试验更为明显；(2) 用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗—B不凝集自身红细胞上的类B抗原；(3) 检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无B物质；(4) 核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。
④受检者血清中蛋白紊乱(高球蛋白血症)，或实验时温度过高，常引起红胞呈缗钱状排列。
如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水l滴。
混和，往往可使缗钱现象消失。
注意不应先加盐水l滴于受检者血清中而后和红细胞做试验，以免使血清中抗体被稀释。
⑤细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。
如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性；被细菌酶激活的T或TK受体；或产生机制不太明了的Tn受体所引起。
多凝集红细胞具有以下特点：(1)能被人和许多家兔的血清凝集；(2)能与大多数成年人的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。
(3)不被脐带血清凝集。
(4)通常不与自身的血清凝集。
(5)如有条件可用外源凝集素加以鉴别。
⑥检者血清中缺乏应有的抗-A及或抗—B抗体，如丙种球蛋白缺乏症，老年人血清中抗体水平大幅度下降等。
如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4℃放置30min，用显微镜检查核实。
⑦血清中有意外抗体，如自身抗—I，常引起干扰。
用A1、A2、B、O红细胞及自身红细胞检查受检者血清。
如果怀疑是抗—I，用O型(或ABO相合的)脐血红细胞检查。
⑧各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。
部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。
将红细胞洗涤数次，配成2~5%生理盐水细胞悬液，用抗—A、抗—B、抗—Al，抗—A十B及抗H做试验可以得到其它有用的信息。
对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。
2、试剂①运输、贮存等条件不适可导致试剂变质失效，造成配血错误。
实验前进行试剂外观、效价等项目质量控制。
②不同抗凝剂制备的标准红细胞质量也不同；另外，红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，易误判为阴性反应。
应依据要求正确配制红细胞浓度。
③分型血清效价太低、亲和力不强，如抗—A血清效价不高，可将A亚型误定为O型、AB型误定为B型。
实验前应进行试剂效价等项目质量控制。
3、冷凝集素在ABO血型鉴定和交叉配血的过程中，冷凝集素是影响ABO血型正反不符和交叉配血不合的常见原因，尤其是在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝集素而导致出现假阳性。