白细胞蛋白提取方法

白细胞分离技术汇总

白细胞分离技术汇总白细胞分离技术是现代医学和生命科学领域中重要的研究技术之一，它可以从复杂的生物样本中分离出单一类型的白细胞群体，为后续研究提供优质的样本。

本文将汇总介绍几种常见的白细胞分离技术，包括离心法、梯度离心法、磁珠分离法和流式细胞术。

1. 离心法离心法是最常用的白细胞分离技术之一。

它基于细胞的不同密度和大小，通过离心的作用将白细胞与其他细胞分离开来。

操作步骤如下：1) 收集待分离白细胞的生物样本。

2) 将样本置于离心管中，以适当的离心速度和时间进行离心。

3) 分离后的上清液中富含白细胞，可进一步提取进行后续的研究。

离心法的优点是简单易行，但存在分离效果受离心参数影响大、离心误差较大等缺点。

2. 梯度离心法梯度离心法是一种基于细胞密度差异分离白细胞的方法。

通过在离心管中制备一定浓度的梯度液，使不同密度的细胞在不同位置聚集。

操作步骤如下：1) 准备梯度溶液，常用的是Ficoll-Paque和Percoll。

2) 将生物样本缓慢均匀地加在梯度液上方。

3) 以适当的离心速度和时间进行离心。

4) 离心后，白细胞会沉淀在梯度层中，可通过移液管等工具将其取出。

梯度离心法分离效果较好，分离的白细胞纯度较高，但操作稍复杂。

3. 磁珠分离法磁珠分离法是基于特定抗体磁珠对靶细胞的识别和捕获效应实现白细胞的分离。

操作步骤如下：1) 引入含有特定抗体的磁珠。

2) 与待分离白细胞混合，使抗体与目标白细胞结合。

3) 使用磁力装置将磁珠结合的细胞沉降至管壁，去除其他细胞。

4) 去除磁力场，洗涤和释放细胞，分离出纯净的白细胞。

磁珠分离法具有高选择性和高纯度的优点，但需使用特定抗体磁珠，因此成本较高。

4. 流式细胞术流式细胞术结合了光学、电子和计算机技术，可对细胞进行精确地检测和分离。

操作步骤如下：1) 准备包含目标细胞的单细胞悬浮液。

2) 将细胞悬浮液通过流式细胞仪，仪器通过激光照射和细胞特异性抗体标记进行细胞检测。

3) 检测到目标细胞后，通过电信号将目标细胞单独分离收集。

蛋白质提取的方法和原理

蛋白质提取的方法和原理蛋白质提取是生物化学研究中一项非常重要的工作，它是通过化学或物理方法将目标蛋白质从混合物中提取出来，并获得纯度较高的蛋白样品。

蛋白质提取的方法和原理可以根据不同的需求和样本特点而有所区别，下面我将从样品处理、细胞破碎、蛋白质分离、纯化等方面详细介绍蛋白质提取的常用方法和原理。

一、样品处理样品的类型有很多，包括动物组织、细胞、血液等，每种样品的提取方法都有一定差异。

一般来说，细胞或组织样本在提取之前需要冷冻保存，并进行快速破碎以避免蛋白质降解。

对于血液样本，需要血样离心分离血浆或红细胞，再进行提取。

二、细胞破碎细胞破碎是蛋白质提取的关键步骤，目的是破坏细胞膜和细胞器，并释放蛋白质。

常见的细胞破碎方法有机械破碎、超声波破碎和化学法。

1. 机械破碎机械破碎是最常用的细胞破碎方法之一，可以通过碾磨、研磨、切割等方式破坏细胞。

例如，将样品置于液氮中冷冻后，使用研钵和研杵进行研磨，将细胞研磨成粉末状。

2. 超声波破碎超声波破碎是利用高频高能量的超声波震荡来破碎细胞，通常是在冷冻样品和显微量水中进行。

超声波的震荡可以高效破坏细胞和细胞器，并释放蛋白质。

3. 化学法化学法通常是通过加入化学试剂来破坏细胞。

例如，使用洗涤剂（如SDS、Triton X-100）可以溶解细胞膜，释放细胞内的蛋白质。

三、蛋白质分离蛋白质提取后，需要对蛋白质进行分离，去除杂质和其他成分。

1. 离心离心是最常用的蛋白质分离方法之一，通过不同速度的离心来分离蛋白质。

一般来说，较重的细胞碎片、细胞器和沉淀物会沉积在离心管的底部，而较轻的蛋白质上清液则在上方。

2. 电泳电泳是利用电场将带电蛋白质分离的技术。

常见的电泳方法有SDS-PAGE和凝胶过滤层析等。

SDS-PAGE可以根据蛋白质的大小和电荷来分离，凝胶过滤层析则可以根据蛋白质的分子量和渗透性进行分离。

四、蛋白质纯化蛋白质分离后，还需要进行纯化以获得较高纯度的蛋白样品。

蛋白质提取常用试剂及操作方法

蛋白质提取常用试剂及操作方法一、原料选择和前处理（一）原料的选择早年为了研究的方便，尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。

但至目前经常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小，如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料，因而对提取要求更复杂一些。

原料的选择主要依据实验目的定。

从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰富及成本低的原料。

尽量要新鲜原料。

但有时这几方面不同时具备。

含量丰富但来源困难，或含量来源均理想，但分离纯化操作繁琐，反而不如含量略低些易于获得纯品者。

一般要注意种属的关系，如鲣的心肌细胞色素C 较马的易结晶，马的血红蛋白较牛的易结晶。

要事前调查制备的难易情况。

若利用蛋白质的活性，对原料的种属应几乎无影响。

如利用胰蛋白酶水解蛋白质的活性，用猪或牛胰脏均可。

但若研究蛋白质自身的性质及结构时，原料的来源种属必须一定。

研究由于病态引起的特殊蛋白质（本斯.琼斯氏蛋白、贫血血红蛋白）时，不但使用种属一定的原料，而且要取自同一个体的原料。

可能时尽量用全年均可采到的原料。

对动物生理状态间的差异（如饥饿时脂肪和糖类相对减少），采收期及产地等因素也要注意。

（二）前处理1.细胞的破碎材料选定通常要进行处理。

要剔除结缔组织及脂肪组织。

如不能立即进行实验，则应冷冻保存。

除了提取及胞细外成分，对细胞内及多细胞生物组织中的蛋白质的分离提取均须先将细胞破碎，使其充分释放到溶液中。

不同生物体或同一生物体不同的组织，其细胞破坏难易不一，使用方法也不完全相同。

如动物胰、肝、脑组织一般较柔软，作普通匀浆器磨研即可，肌肉及心组织较韧，需预先绞碎再制成匀桨。

⑴机械方法主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。

常用器械有：①高速组织捣碎机（转速可达10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于动物内脏组织的破碎；②玻璃匀浆器（用两个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎），适用于少量材料，也可用不锈钢或硬质塑料等，两面间隔只有十分之几毫米，对细胞破碎程度较高速捣碎机高，机械切力对分子破坏较小。

分子生物学实验中常用的蛋白质提取方法

分子生物学实验中常用的蛋白质提取方法蛋白质提取是分子生物学研究中的一个重要步骤，通过提取出目标蛋白质可以进行进一步的分析和研究。

在实验室中，常用的蛋白质提取方法有多种，本文将介绍几种常见且有效的蛋白质提取方法。

一、细胞裂解法细胞裂解是最基本且重要的蛋白质提取步骤，它将细胞破裂，使内部蛋白质释放到裂解液中。

细胞裂解方法有多种，如机械破碎、超声波破碎和冻融破碎等。

其中，机械破碎是最常用的方法之一，它利用高速旋转的研钵或研磨珠对样品进行机械破碎，快速破裂细胞。

二、溶液裂解法溶液裂解法是一种温和的提取方法，适用于含有脆弱或难以裂解的细胞。

该方法通过将细胞置于含有细胞膜破坏剂的缓冲溶液中，使细胞膜破裂释放蛋白质。

常用的溶液裂解剂有洗涤剂（如SDS、Triton X-100等）和脂质体（如Tween 20）等。

三、超声波法超声波法是一种物理破碎的蛋白质提取方法。

它利用高频超声波的振荡作用，产生机械特效，使细胞破裂释放蛋白质。

超声波法可以实现非接触式破碎，不会污染样品，且对细胞结构的损伤较小，适用于多种细胞类型的蛋白质提取。

四、离心法离心法是一种通过差速离心来分离细胞碎片、细胞核或其他蛋白质复合物的方法。

通过调整离心速度和时间，可以使不同大小和密度的颗粒分层沉淀，从而实现蛋白质的分离和提取。

五、柱层析法柱层析法是一种高效的蛋白质提取方法，通过将样品溶液通过填充有特定亲和剂或离子交换基质的柱子，实现目标蛋白质的选择性吸附和洗脱。

柱层析法具有选择性强、分离效果好的特点，适用于高纯度蛋白质的提取。

六、电泳法电泳法是一种通过电场作用将蛋白质分离和提取的方法。

常见的电泳法有聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、SDS-PAGE等。

通过将样品经过电泳分离，可以将目标蛋白质从其他蛋白质分子中分离出来，实现蛋白质提取的目的。

总结：以上是分子生物学实验中常用的蛋白质提取方法。

根据实验需要和样品特点的不同，选择合适的提取方法对于蛋白质研究的成功至关重要。

蛋白提取实验步骤

蛋白提取实验步骤:1、细胞总蛋白提取A对于悬浮细胞：离心收集细胞，每106细胞加250 Ul RlPA （在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂），振荡。

如果需要提高蛋白浓度，可以适当减少细胞总蛋白提取试剂体积。

B对于贴壁细胞：a用TBS冲洗细胞2-3次。

最后一次彻底吸干残留液。

b加入适当体积的RIPA （使用前数分内加入蛋白酶抑制剂）于培养板、瓶内3-5分钟。

期间反复晃动培养板、瓶，使试剂与细胞充分接触。

c、用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到1.5ml离心管中。

C冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。

D 12000g离心5min,收集上清，即为总蛋白溶液。

2、组织蛋白提取：A组织块用冷TBS洗涤2-3次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。

加入10倍组织体积本试剂（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）冰上彻底匀浆。

如果需要提高蛋白浓度，可以适量减少该试剂体积。

B将匀浆液转移至1.5ml离心管中，振荡。

冰浴30min,期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。

C 12000g离心5min,收集上清，即为总蛋白溶液。

1、组织尽可能新鲜，若不能及时提蛋白，组织标本应保存在-80 C 冰箱，并避免反复冻融。

2、全程必须在冰上进行，避免蛋白降解。

3、蛋白酶抑制剂在水溶液中不稳定，需在RIPA使用前数分钟加入蛋白酶抑制剂。

4、裂解过程中如有溶液粘稠现象可用移液器（200 μ l ）反复吹打，或再加入适量裂解液以保证充分裂解。

5、总蛋白溶液不稳定（蛋白酶依旧有活性）可在-80 C短时间保存，建议立即加入蛋白上样缓冲液变性后与-20 C保存，避免反复精品佳作，安心下载，放心使用冻融。

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蛋白提取方法及注意事项

组织蛋白提取材料准备：组织、冰块、称、超声匀浆器、试剂各种试剂比例：PMSF：Lysis Buffer = 1:1001、将组织称重，减去EP管重量2、每100mg组织加入1mL(1mg ,10ul)试剂，冰上裂解半小时3、匀浆（注意低温操作），开20秒，关2秒，共打20次，每次用水冲洗，擦干，超声完后放冰上4、将匀浆液移至1.5mL预冷离心管5、离心，12000转，4℃，30分钟6、取上清至新的预冷的EP管7、BCA定量8、放入—80℃线粒体蛋白提取材料准备（放冰盒中）：线粒体试剂、EP管、EP管中的组织、枪头、PBS1、用冷PBS清洗细胞2次，洗后吸干上清2、加入A200uL，放冰上10分钟3、匀浆30-40次，每次用清水清洗匀浆器头4、离心500rpm，4℃，5分钟5、将上清移至离心管6、离心1100rpm，4℃，20分钟7、沉淀中加入200uLB，混匀8、离心1100rpm，4℃，20分钟9、弃上清10、加入80-150uL裂解液，放冰上20分钟，每隔5分钟高速震荡15秒，11、得线粒体蛋白12、定量后放-80℃冰箱。

细胞总蛋白提取材料准备：试剂（—20℃）、细胞培养板、EP管（已标记）均放置于冰盒中操作，以防止蛋白降解。

1、吸掉培基2、加入PBS，约1ml/孔左右，用手晃匀3、约5min后倒去PBS，并用枪将PBS尽量吸尽4、加入试剂，摇床振荡10分钟，再置冰上10分钟。

培养器皿面积（cm2）培养液量（ml）细胞量裂解液（ul）96 孔培养板0.32 0.1 10524孔培养板 2 1.0 5×10512孔培养板 4.5 2.0 1066孔培养板9.6 2.5 2.5×106803.5 cm 培养皿8 3.0 2×1066 cm 培养皿21 5.0 5.2×10632010 cm 培养皿55 10.0 13.7×10680025cm2培养瓶25 5.0 5×10675cm2培养瓶75 15～30 2×1075、用黄色枪头将各孔中cell刮下，保证孔底部分都要刮到，根据分组将细胞悬液吸入各个EP管中。

蛋白提取实验步骤

蛋白提取实验步骤：1、细胞总蛋白提取A、对于悬浮细胞: 离心收集细胞，每106细胞加250 ul RIPA （在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂），振荡。

如果需要提高蛋白浓度，可以适当减少细胞总蛋白提取试剂体积。

B、对于贴壁细胞:a、用TBS冲洗细胞2-3次。

最后一次彻底吸干残留液。

b、加入适当体积的 RIPA（使用前数分内加入蛋白酶抑制剂）于培养板、瓶内3-5分钟。

期间反复晃动培养板、瓶，使试剂与细胞充分接触。

c、用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到1.5ml离心管中。

C、冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。

D、12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。

2、组织蛋白提取：A、组织块用冷TBS洗涤2-3次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。

加入10倍组织体积本试剂（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）冰上彻底匀浆。

如果需要提高蛋白浓度，可以适量减少该试剂体积。

B、将匀浆液转移至1.5ml离心管中，振荡。

冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。

C、12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。

1、组织尽可能新鲜，若不能及时提蛋白，组织标本应保存在-80℃冰箱，并避免反复冻融。

2、全程必须在冰上进行，避免蛋白降解。

3、蛋白酶抑制剂在水溶液中不稳定，需在RIPA使用前数分钟加入蛋白酶抑制剂。

1 / 24、裂解过程中如有溶液粘稠现象可用移液器（200μl）反复吹打，或再加入适量裂解液以保证充分裂解。

5、总蛋白溶液不稳定（蛋白酶依旧有活性）可在-80℃短时间保存，建议立即加入蛋白上样缓冲液变性后与-20℃保存，避免反复冻融。

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蛋白提取方法及注意事项

组织蛋白提取材料准备：组织、冰块、称、超声匀浆器、试剂各种试剂比例：PMSF：Lysis Buffer = 1:1001、将组织称重，减去EP管重量2、每100mg组织加入1mL(1mg ,10ul)试剂，冰上裂解半小时3、匀浆（注意低温操作），开20秒，关2秒，共打20次，每次用水冲洗，擦干，超声完后放冰上4、将匀浆液移至1.5mL预冷离心管5、离心，12000转，4℃，30分钟6、取上清至新的预冷的EP管7、BCA定量8、放入—80℃线粒体蛋白提取材料准备（放冰盒中）：线粒体试剂、EP管、EP管中的组织、枪头、PBS1、用冷PBS清洗细胞2次，洗后吸干上清2、加入A200uL，放冰上10分钟3、匀浆30-40次，每次用清水清洗匀浆器头4、离心500rpm，4℃，5分钟5、将上清移至离心管6、离心1100rpm，4℃，20分钟7、沉淀中加入200uLB，混匀8、离心1100rpm，4℃，20分钟9、弃上清10、加入80-150uL裂解液，放冰上20分钟，每隔5分钟高速震荡15秒，11、得线粒体蛋白12、定量后放-80℃冰箱。

细胞总蛋白提取材料准备：试剂（—20℃）、细胞培养板、EP管（已标记）均放置于冰盒中操作，以防止蛋白降解。

1、吸掉培基2、加入PBS，约1ml/孔左右，用手晃匀3、约5min后倒去PBS，并用枪将PBS尽量吸尽4、加入试剂，摇床振荡10分钟，再置冰上10分钟。

培养器皿面积（cm2）培养液量（ml）细胞量裂解液（ul）96 孔培养板0.32 0.1 10524孔培养板 2 1.0 5×10512孔培养板 4.5 2.0 1066孔培养板9.6 2.5 2.5×106803.5 cm 培养皿8 3.0 2×1066 cm 培养皿21 5.0 5.2×10632010 cm 培养皿55 10.0 13.7×10680025cm2培养瓶25 5.0 5×10675cm2培养瓶75 15～30 2×1075、用黄色枪头将各孔中cell刮下，保证孔底部分都要刮到，根据分组将细胞悬液吸入各个EP管中。

wb蛋白提取步骤

wb蛋白提取步骤WB蛋白提取步骤一、引言WB（Western Blot）蛋白提取是一种常用的蛋白质分析方法，通过将样品中的蛋白质分离、定量和检测，可以研究蛋白质的表达水平、功能和相互作用等。

本文将介绍WB蛋白提取的步骤及操作要点。

二、样品准备1. 收集样品：根据研究目的，选择合适的样品进行提取。

样品可以是细胞、组织、血清、培养基等。

2. 样品处理：对于细胞和组织样品，可先用PBS缓冲液洗涤去除残留的培养基或组织液。

对于血清样品，可离心去除悬浮的细胞或血小板。

三、蛋白提取1. 细胞裂解：将细胞沉淀离心后，加入细胞裂解液，使细胞膜破裂释放蛋白质。

可以选择不同的细胞裂解液，如RIPA缓冲液、NP-40缓冲液等。

2. 组织裂解：将组织样品切碎后，加入组织裂解液，将组织细胞破碎并释放蛋白质。

组织裂解液可以选择RIPA缓冲液、Tris-HCl缓冲液等。

3. 蛋白质提取：将裂解液离心，收集上清液，即为蛋白提取物。

可以通过BCA方法或Lowry方法等测定蛋白质的浓度。

四、蛋白质分离与检测1. SDS-PAGE凝胶电泳：将蛋白样品加热变性，然后加载到凝胶孔中，施加电场使蛋白质在凝胶中进行分离。

常用的凝胶浓度为8%~15%。

2. 转膜：将凝胶中的蛋白质转移到膜上，常用的转膜方法有湿式转膜和半干式转膜。

常用的膜材料有PVDF膜和NC膜。

3. 阻断与孵育：将转膜后的膜放入阻断液中进行孵育，阻断非特异性结合位点，避免假阳性结果的产生。

4. 一抗和二抗孵育：将目标蛋白特异性抗体（一抗）孵育于膜上，然后孵育与一抗结合的二抗，二抗中带有标记物，例如辣根过氧化物酶（HRP）等。

5. 显色与成像：使用化学发光法或染色法，使膜上特定蛋白质形成显色带，然后使用成像系统进行成像和分析。

五、结果分析通过观察显色带的位置和强度，可以初步判断蛋白质的表达水平。

根据需要可以进行定量分析，使用专业软件测量带的强度，并与内参蛋白进行比较分析。

六、注意事项1. 样品保存：样品提取后应及时保存，避免蛋白质降解。

细胞蛋白提取的方法

细胞蛋白提取的方法
细胞蛋白提取是一种从细胞中分离出蛋白质的重要实验操作。

常用的细胞蛋白提取方法有以下几种：
1. 碱裂解法：将细胞用碱性溶液（如Tris-HCl）破碎，破坏细胞膜结构释放细胞内的蛋白质。

2. 高渗透法：通过增加高盐浓度或高甘油浓度的溶液来破坏细胞膜，使蛋白质释放到溶液中。

3. 离心法：将细胞用生理盐水或缓冲液洗涤后，利用离心的力将细胞沉淀下来，然后用溶液溶解细胞膜并释放蛋白质。

4. 超声法：利用超声波的机械作用力破碎细胞，将蛋白质释放到溶液中。

5. 高压法：利用高压力将细胞膜破裂，释放蛋白质。

6. 化学法：使用化学试剂破坏细胞膜结构，如氯仿、酚酸等。

7. 冻融法：通过冻结和解冻的循环操作破坏细胞膜，释放蛋白质。

以上方法根据实验需要和研究对象的不同，可以选择适合的一种或多种方法进行细胞蛋白提取。

细胞蛋白提取步骤

细胞蛋白提取步骤
细胞蛋白提取是为了获取细胞中的可溶性蛋白质，以进行后续的分析和研究。

以下是一般的细胞蛋白提取步骤：
1. 细胞采集：选择需要提取蛋白的细胞种类，并通过离心等方法将细胞收集。

2. 细胞裂解：将细胞使用裂解缓冲液裂解，以释放细胞内的蛋白质。

常见的裂解缓冲液包括RIPA缓冲液、NP-40缓冲液等。

3. 超声处理：将细胞裂解液进行超声处理，以进一步破碎细胞结构，释放蛋白质。

超声处理可以通过超声波清洗机或超声波细胞破碎仪进行。

4. 离心：将超声处理后的细胞裂解液进行离心，以去除细胞碎片和其他杂质。

5. 收集上清液：将离心后的上清液转移至新的离心管中，作为细胞蛋白提取的样品。

6. 蛋白含量测定：使用蛋白含量测定方法（如BCA、Lowry 等）测定提取的蛋白质浓度，以便后续实验设计的参考。

细胞蛋白提取步骤可能因实验目的或细胞种类的不同而有所差异。

在进行细胞蛋白提取之前，可以参考相关文献或实验方案，选择适合自己研究的步骤和试剂。

蛋白的提取方法

蛋白的提取方法
蛋白质的提取方法根据不同的样品类型和应用需求而有所差异。

以下是几种常见的蛋白质提取方法：
1. 细胞裂解法：
- 使用裂解缓冲液（如RIPA缓冲液）将细胞破裂，释放蛋白质。

- 添加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，以防止蛋白质降解。

- 在低温和高速离心的条件下，去除细胞碎片和细胞核等杂质。

2. 组织研磨法：
- 使用液氮或组织研磨器将组织研磨成细碎的粉末。

- 使用裂解缓冲液将组织样品裂解。

- 离心去除细胞碎片等杂质。

3. 离体器官提取法：
- 使用适当的缓冲液冲洗和清洗离体器官，去除表面的污物和杂质。

- 使用裂解缓冲液将离体器官切割或粉碎成细小的样品。

- 离心去除细胞碎片等杂质。

4. 血浆/血清提取法：
- 收集新鲜血液，并使用抗凝剂进行处理，如EDTA或肝素。

- 采用离心法将血液离心，分离血浆/血清。

- 血浆/血清中的蛋白质可通过沉淀、凝胶过滤或其他方法进一步提取和纯化。

5. 特定蛋白提取法：
- 根据需要，可以使用特定的提取方法来富集特定蛋白质。

如免疫沉淀、亲和层析、电泳分离等。

在蛋白质提取过程中，常常需要注意样品的保存温度、缓冲液的配制、抑制剂的添加等细节，以确保蛋白质的稳定和完整性。

同时，不同应用领域可能需要不同的提取方法和蛋白质纯化步骤，因此建议根据具体实验目的和样品类型进行选择和优化。

如果有需要，可以咨询专业的生物化学或分子生物学实验室以获得更准确和具体的方法和建议。

细胞蛋白提取

细胞或组织总蛋白提取与浓度测定（BCA法）实验步骤细胞或组织总蛋白提取与浓度测定1 细胞总蛋白提取（冰上防止蛋白裂解）1）吸去培养皿中的培养基，加入1 ml预冷PBS缓冲液洗3次。

2）加入适量含1×蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液（10 cm培养皿中一般加入500 μl,六孔板一般100微）。

3）冰上裂解15-30 min，将裂解后的细胞用细胞刮子刮下，吸入1.5ml离心管中。

（这个裂解时间的长短有没有影响不清楚，本人之前刮细胞太慢，常常最后一个刮完后第一个已经裂解了好久，可能都要一个小时了，应该问题不大）4）在4℃条件下，12,000 rpm离心15 min，收集上清，即为细胞总蛋白。

2 小鼠组织总蛋白提取1）取小鼠组织约50-200 mg，加入500 µl预冷的含1×蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液。

2）将小鼠组织剪碎，并用组织匀浆器匀浆。

3）冰上静置30 min。

4）在4℃条件下，12,000 rpm离心30 min。

收集上清，即为组织总蛋白。

3 蛋白浓度测定（BCA法）利用北京普利莱的BCA蛋白定量试剂盒（P1511）进行蛋白浓度测定，具体操作步骤如下：1）将BCA蛋白定量试剂盒中的BCA Reagent和Cu Reagent按照50:1的比例配制成BCA工作液。

2）将4 mg/ml的BSA溶液倍比稀释，配置成浓度为4、2、1、0.5、0.25及0.125 mg/ml的BSA溶液作为蛋白标准品。

3）在96孔板中每孔加入100 µl BCA工作液，再加入5 µl蛋白样品或标准品，每个蛋白样品需设两个平行孔，充分混匀，注意尽量避免出现气泡，37℃孵育30 min。

（这个时间说明书写的可室温俩小时，我在37度也放过很久，吃完饭回来就去测）以BCA溶液作为空白对照，使用酶标仪测定595nm处的吸光度值。

通过酶标仪自带软件拟合曲线并计算每个样品的蛋白浓度。

提取红细胞,白细胞方式

提取红细胞,白细胞方式全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：提取红细胞、白细胞是目前医学领域非常重要的一项技术，它不仅可以帮助医生诊断疾病、监测患者健康状况，还可以在一些特殊情况下拯救生命。

红细胞和白细胞是人体血液中的两种重要成分，它们的提取需要经过一系列精密的操作和技术手段才能得到纯净有效的样本。

本文将介绍提取红细胞、白细胞的常见方法和技术流程。

一、红细胞的提取方式红细胞是血液中最主要的细胞成分，它们携带氧气和二氧化碳，维持身体的正常代谢功能。

提取红细胞对于治疗贫血、输血等治疗手段至关重要。

以下是几种常见的提取红细胞的方式：1. 自体输血：自体输血是指将患者自身的血液提取出来，经过处理后再输回体内。

这样可以避免异体输血可能带来的免疫排斥反应，减少感染的风险。

自体输血主要适用于手术前准备、贫血患者等情况。

2. 血库输血：血库输血是指将经过筛查、检测的供血者的血液提取后存储在血库中，根据需要输血给患者。

这种方式适用于紧急情况、重症患者等情况。

3. 分离红细胞：通过离心、过滤等方法将红细胞与其他成分分离开来，得到纯净的红细胞样本。

这种方式主要用于实验室研究、临床诊断等需要特定样本的情况。

白细胞是血液中的免疫细胞，主要起到抵抗病原微生物、清除异物、维持免疫平衡等功能。

提取白细胞不仅可以帮助诊断感染、炎症等疾病，还可以用于免疫治疗等方面。

以下是几种常见的提取白细胞的方式：1. 血液细胞计数：通过血液细胞计数仪等设备对血液样本中的白细胞进行计数和分类。

这种方式适用于常规血常规检测、疾病诊断等情况。

3. 白细胞产品制备：通过离心、负选择、阳选择等技术将白细胞提取、富集、分离，制备成白细胞产品。

这种方式适用于治疗器官移植排异反应、免疫调节等领域。

红细胞和白细胞的提取方式各有特点，根据具体的实际需求和目的选择合适的方法非常重要。

提取红细胞、白细胞的技术不断创新和进步，为医学研究和临床治疗带来更多的可能性。

希望未来可以有更多的技术手段和方法应用于红细胞、白细胞的提取和应用中，为医学发展和患者服务带来更多的益处。

一种白细胞提取物及其制备方法与应用[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710884647.9(22)申请日 2017.09.26(71)申请人上海蕙禾生物科技事务所地址 201100 上海市崇明区横沙乡富民支路58号D1-9062室(上海横泰经济开发区)(72)发明人徐荻　(74)专利代理机构上海华工专利事务所(普通合伙) 31104代理人缪利明(51)Int.Cl.A61K 8/98(2006.01)A61K 8/64(2006.01)A61K 8/67(2006.01)A61K 8/73(2006.01)A61K 8/92(2006.01)A61Q 19/08(2006.01)A61Q 19/00(2006.01)(54)发明名称一种白细胞提取物及其制备方法与应用(57)摘要本发明公开了一种白细胞提取物的制备方法，直接以新生儿脐带血为原料，经人淋巴细胞分离液密度梯度离心得到PBMC细胞，并通过脐带血中分离的脐带血浆扩增培养，然后离心分离得到上清液，超滤后得到白细胞提取物。

该方法无需牛血清，不含异种动物蛋白，不含刺激因子，对人体应用的安全性好。

本发明的方法制备的白细胞提取物，含有丰富的天然人细胞因子，其中bFGF达到60pg/ml以上，且产率高，生产成本低。

本发明还提供上述白细胞提取物在活化、修复细胞功效的化妆品中的应用。

上述白细胞提取物添加至化妆品中，可与化妆品配方中的其它组分发挥协同作用，协同提高细胞线粒体功能，提供细胞代谢的全面营养素，显著提高白细胞提取物的活化细胞功能。

权利要求书2页说明书11页附图3页CN 108567719 A 2018.09.25C N 108567719A1.一种白细胞提取物的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：(1)、新生儿脐带血经人淋巴细胞分离液密度梯度离心分离，得到上层的脐带血浆和下层的白膜层，所述脐带血浆经过灭活后，得到灭活的脐带血浆，备用；(2)、从所述白膜层分离出PBMC细胞，接种到无血清培养基，然后添加所述灭活的脐带血浆对PBMC细胞进行扩增，最后离心分离，收集上清液；(3)、步骤(2)的上清液经超滤，收集截留液，即为白细胞提取物。

一种白细胞提取物及其制备方法与应用[发明专利]

(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201510085332.9(22)申请日 2015.02.15A61K 8/98(2006.01)A61K 8/64(2006.01)A61Q 19/00(2006.01)A61Q 19/02(2006.01)A61Q 19/08(2006.01)(71)申请人广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司地址510000 广东省广州市国际生物岛螺旋四路一号生产区第五层502单元(72)发明人陈海佳王一飞葛啸虎应杰罗二梅(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司 11227代理人赵青朵(54)发明名称一种白细胞提取物及其制备方法与应用(57)摘要本发明涉及活性物质提取技术领域，尤其涉及一种白细胞提取物及其制备方法与应用。

本发明提供的白细胞提取物中，包括2.5μg/mL ～7μg/mL 的核苷酸和0.3mg/mL ～1.5mg/mL 的蛋白质。

该白细胞提取物能够起到促进表皮细胞融合和增殖的作用，因此将本发明提供的白细胞提取物应用于美容护肤产品中可起到美白、去皱、抗衰老的作用。

本发明提供的白细胞提取的制备方法通过将血液中分离到的白细胞进行扩增培养，与现有技术相比，同等体积的血液采用本发明提供的方法可获得85倍～100倍量的核苷酸，且可提取到大量的细胞因子，减少了传统方法中对血液的需求量。

(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页说明书6页附图1页(10)申请公布号CN 104622777 A (43)申请公布日2015.05.20C N 104622777A1.一种白细胞提取物，其特征在于，包括2.5μg/mL～7μg/mL的核苷酸和0.3mg/ mL～1.5mg/mL的蛋白质。

2.根据权利要求1所述的白细胞提取物，其特征在于，所述蛋白质包括白介素2、白介素4、γ干扰素和肿瘤坏死因子。

3.根据权利要求2所述的白细胞提取物，其特征在于，所述白介素2、白介素4、γ干扰素和肿瘤坏死因子的质量比为：8～10:1～3:2～5:0.5～1。

细胞蛋白质的提取

细胞蛋白质的提取
蛋白质的提取
操作流程及步骤：
准备：要裂解的细胞、1.5mlEP管、裂解液、PBS溶液
步骤：
1、备好要用的细胞，以6孔板为例。

2、将细胞培养液弃去[1]。

3、用PBS洗2-3次[2]。

4、用枪吸干净PBS液体[3]。

5、配制裂解液RIPA：PI=100:1，根据细胞密度决定加裂解液的量[4-5]。

6、迅速用刮刀刮孔板中细胞使刮下细胞聚集为一处[6]。

7、用枪吸到对应编号的EP管中，反复吸净[7]。

8、离心[8]。

9、用超声破壁仪进一步破碎，破碎三次每次间隔10min[9]。

10、离心取上清液。

11、-80℃保存。

心得体会及注意事项：
1、倒掉或吸出都可，不同分组之间操作要换枪头。

2、操作轻柔，避免底部细胞被冲洗掉，延碧、缓慢。

3、PBS吸不干净影响最后测蛋白质浓度。

4、PI为蛋白酶抑制剂。

5、提前用显微镜看细胞密度，根据密度高、中、低分别决定裂解液的量15ul、20ul、25ul。

6、刮刀用前用PBS洗。

7、EP管根据每孔细胞标识进行对应编号，尽量打到EP管底部。

8、用小离心机,目的是使细胞都到达EP管底部便于下一步操作。

9、用前用PBS水洗超声仪头，洗净后用滤纸吸净残留PBS，超声每次2s 操作4次。

从细胞提取蛋白

从细胞提取蛋白果子导读说搞就搞，我们周二，周四的两个实验专栏已经能够平稳运行了。

开设专栏不是简单的事！•首先，需要作者有深厚的实验功底，涉猎一定要广，掌握的技能至少支撑50周的帖子。

•其次，这些技能必须得是立体的，有效的。

立体是说，这些技能都是作者自己完成过的，不是纸上看来的。

有效是说，这些技能曾经帮助作者拿过基金，发过高质量文章，是能够实战的。

就这两点，广度和配合上自成体系的深度，已经没有多少人能够达到要求，幸运的是，我身边就有两个，一个是高师姐，一个是豆子，更加幸运的是，他们俩原意总结自己的经验，分享给大家，而且通过与读者的互动，我们也会得到反馈，不断升级改善。

此外，对于有一些时不时说风凉话的朋友，我们团队还有一招石沉大海，十分高效。

我从不回复，即使回复也是客客气气。

这样，对方会感受到我大海般的胸襟和宁静，而他自己也只能看一会小石子泛起的涟漪，最终归于平静。

以下是今天的正文大家好，我是豆子，每周星期二，与你相约。

最近也不知道每天在做什么，就是感觉一刻都闲不下来，每天都是匆匆忙忙的，所以大家还是要安排好时间，别把所有的事情都赶在一起。

上周二，我们讲了如何提取组织蛋白这周我们来完成细胞的蛋白提取。

提取细胞蛋白的几种方法，以六孔板为例：1.裂解液裂解•1 倒掉培养液。

•2 每孔加2ml预冷的PBS。

平放轻轻摇动1min洗涤细胞，然后弃去洗液。

重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。

将PBS 弃掉后把孔板置于冰上。

•3 按1ml裂解液加10 μl cocktail（Roche），摇匀置于冰上。

有同学也在用PMSF（苯甲酰磺酰氟），•PMSF相对是比较便宜的，能够抑制丝氨酸蛋白酶，因为它能进入丝氨酸蛋白酶催化中心，并与催化中心的丝氨酸反应，将丝氨酸的羟基取代，生成苯甲酰磺酰丝氨酸和HF。

•但是PMSF会严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。

PMSF即便水解之后也很有毒性。