清华大学生物医学测试中心样品登记表双光子显微镜
双光子显微成像原理及近期应用案例
双光子显微成像原理及近期应用案例双光子显微成像是一种高分辨率的成像技术，它利用两个光子的共同作用实现对生物样本的成像。
该技术在生命科学、医学和材料科学等领域有着广泛的应用。
本文将介绍双光子显微成像的原理，并探讨其在近期的应用案例。
双光子显微成像的原理是基于非线性光学效应。
在传统的荧光显微镜中，利用单光子的激发来激发和探测样品中的荧光信号。
然而，单光子的能量较高，容易导致样品的光化学损伤和细胞的光毒性作用。
而双光子显微成像则采用两个光子的准同步非共线激发，以降低光毒性并增加分辨率。
双光子显微成像的工作原理是通过使用超短脉冲激光来激发样品中的荧光物质。
这种超短脉冲激光具有高能量浓度和高峰值功率，可以实现光穿透较深的样品，如活体组织。
当两个光子同时到达荧光物质并被吸收后，它们的能量叠加，使得荧光物质处于激发态，进而发出荧光信号。
通过检测和记录这些荧光信号，可以获取样品的高分辨率图像。
在生命科学领域，双光子显微成像因其高分辨率和非侵入性的优势而得到广泛应用。
例如，研究者可以利用双光子显微成像技术观察细胞内的亚细胞器、蛋白质分子和细胞结构的变化。
双光子显微成像还可以用于监测神经元活动和细胞信号传导等重要生理过程。
通过对这些生物学过程的观察和研究，我们可以更好地理解生命的本质和疾病的发生机制。
近年来，双光子显微成像在医学诊断和治疗方面也取得了重要进展。
例如，在皮肤科领域，双光子显微成像可以非侵入性地观察皮肤水分含量、胶原蛋白分布和血管结构等，从而帮助医生诊断和治疗各种皮肤病。
另外，双光子显微成像还可以用于术前虚拟操作和手术引导等方面，提高手术的准确性和成功率。
例如，在眼科手术中，医生可以利用双光子显微成像技术精确地观察眼底血管和细胞变化，从而为患者提供更好的治疗方案。
除了生命科学和医学领域，双光子显微成像还在材料科学、纳米技术和能源研究等领域得到广泛应用。
例如，研究者可以利用双光子显微成像技术观察材料中的晶格结构、电子云变化和界面反应等，为新材料的设计和合成提供重要的参考。
新课程高中生物实验设备详细目录
新课程高中生物实验设备详细目录为了满足新课程高中生物教学的需求，特制定本实验设备详细目录，以供参考。
一、显微镜1. 光学显微镜- 奥林巴斯CKX41- 尼康Eclipse E200- 徕卡DM40002. 荧光显微镜- 奥林巴斯FV1000- 尼康TechnoScan二、生物实验通用设备1. 解剖器械- 解剖刀、镊子、剪刀、解剖针等2. 培养皿、试剂盒- 不同规格的培养皿- PCR试剂盒、生物素化酶标记试剂盒等3. 离心机- 湘仪TGL-16M- 贝克曼JA20004. 漩涡混合器- 德国IKA- 海尔MJ-255. 低温冰箱- 海尔BCD-219- 西门子KG22V2106. 酶标仪- 德国BMG- 美国Thermo三、生物实验专用设备1. 生物反应器- 发酵罐、细胞培养箱2. 生物传感器- 光电式传感器、离子传感器3. 色谱仪- 气相色谱仪、液相色谱仪4. PCR仪- 基因扩增仪、定量PCR仪四、实验消耗品1. 生物试剂- DNA酶、RNA酶、蛋白酶等- 各种生物缓冲液2. 染色剂- 乙酰胺染色剂、结晶紫染色剂等3. 培养基- Luria-Bertani培养基、M9培养基等4. 滤纸、滤膜- 0.22μm、0.45μm滤膜5. 一次性手套、实验服- 医用级一次性手套- 防静电实验服五、实验教学辅助设备1. 投影仪- 索尼VPL-DX120- 松下PT-VW3302. 电子白板- 三星SMART交互式电子白板- 联想智能电子白板3. 实验教学软件- 生物学实验教学系统- 虚拟生物实验室本目录仅供参考，实际购买时请以厂家和产品为准。
如有疑问，请随时与我们联系。
双光子显微成像系统的应用及开放管理模式探索
双光子显微成像系统的应用及开放管理模式探索
冯婉倩
【期刊名称】《科学咨询》
【年(卷),期】2024()3
【摘要】双光子显微镜(Two-photonlaserscanningmicroscope,TPLSM)能够在组织和活体实验动物上实现超快速深层多色同步荧光成像及同步红外空间高精度光刺激,可用于生物分子、细胞器或离子等生物物质的定性、定量、定时和定位分布检测,具有配件昂贵、操作复杂、维护难度大的特点。
随着各高校科研平台开放共享范围的扩大,大型仪器已经成为科研工作的基础和保障。
本文以超快速双光子活体成像系统为例,通过分析仪器的结构与功能、技术要求以及维护监管,为高效使用平台贵重仪器和创新科学管理模式提供了思路。
【总页数】4页(P37-40)
【作者】冯婉倩
【作者单位】温州医科大学科研实验中心
【正文语种】中文
【中图分类】G63
【相关文献】
1.双光子共焦荧光显微系统成像分析及实验研究
2.双光子显微成像系统群延迟色散的测量和补偿
3.双光子荧光探针及其显微成像在创伤抢救护理中的运用——评
《双光子荧光探针及其显微成像》4.离轴抛物镜扫描中继系统提升双光子显微成像视场5.基于双光子激发荧光和二次谐波原理的显微成像技术在皮肤科中的应用
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
清华学校开放检测设备
清华学校开放检测设备显微镜仪器名称仪器型号仪器规格仪器领用人仪器存放地点仪器使用价格原子力显微镜MAC.Picoscan AFM6/AFM30崔福斋，蔡强科技楼2113室Contact Mode100元/小时，MACMode150元/小时，针尖消耗另算，STM暂不开放三维显微系统KH-1000 KH-1000主机张欣西主楼80元/小时原子力扫描探针显微镜SPA-300HV石墨原子级图像杨海涛纳米楼313 200元/小时激光共聚焦显微镜FV500 2048X2048公衍道、苏祖琦生命科学楼二层312200元/小时扫描探针显微镜DI-3100 0.4UM-90UM徐曼琼、华心103-105 150元/小时扫描探针显微镜SPI4000/SPA300HV真空1.33*10-5Pa王晓慧逸夫楼2207 230元/小时，特殊要求价格面议。
原子力显微镜SPM-9500J3 125微米化学馆114 200元/小时双光子共聚焦显微镜FV1000MPE488，633，405nm黄蕾C119 150元/小时激光共聚焦显微镜LSM710 60X,100X物镜黄蕾医学楼C119 100元/小时激光共聚焦显微镜leica TCS SP5 小于400nm黄蕾褚华硕医学楼A318 100元/小时。
物理光学仪器（一）仪器名称仪器型号仪器规格仪器领用人仪器存放地点仪器使用价格光谱式椭偏仪SOPRAGES5 波长210nm-900nm卢狄克纳米楼超净间100－150元/小时台阶仪AMBIOSXP-1 分辨率纵向1.5A 卢狄克纳米楼超净100－150元/小时（或20地点间元/点）直线扫描光学相干CT机测量系统*薛平，高松，孙仙理科楼3102 60元/小时圆二色光谱仪J-715-150L 280W 罗雪春200--250元/小时紫外、可见、近红外分仪器名称仪器型号仪器规格仪器领用人仪器存放地点仪器使用价格紫外可见分光光度计3000 50/60HZ 常智杰，王银银生物系新馆4层50-100元/小时紫外分光光度计Helios-y 190－1100nm2nm 麻英，张连庆化学馆300 25元/样品紫外可见分光光度计1901 波长:190nm～900 邢志理科楼4206室50元/样紫外可见分光光度计2100S 波长范围900-190 周云、张四纯理科楼4206 30-40元/小时扫描式电子显微镜仪器名称仪器型号仪器规格仪器领用人仪器存放地点仪器使用价格扫描电子显微镜JSM－35CF 30KV/6nm 张国昌，丁伟材料楼107室150元-200元/小时热场发射扫描电镜LEO-1530分辨率20kv 扫描史锴清华大学立斋200-280元/小时高温疲劳机附扫描电镜SEM 10KN+/-25mm 徐曼琼、华心逸夫科技楼3412100元-150元/小时场发射扫描电子显微镜JSM-6301F 30万倍王宇、王秀凤、凌勇理科楼2113电镜：140元/小时，能谱：180元/小时扫描电镜JSM-6460LV 30KV/分辨率3nm刘兴涛，苗伟逸夫科技楼1131房间电镜75/小时,能谱100/小时数字化扫描电镜KYKY-2800放大15-250000倍方华军、岳瑞锋、杨莉器件室2-310 100元/小时扫描电镜TS5136XM 3.5NM-4NM50万倍刘伟，蒋佳科技楼2603 70～100元超高分辨扫描电镜Sirion200最高分辨率1.5nm张丽娜、褚卫国纳米楼电镜室200－400元/小时扫描电镜JSM7401 25-1000000倍骞伟中、张强电镜室200～300元/小时，特殊条件面议场发射环境扫描电镜QUANTA 200FEG30KV时<2nm 杨文言、郭炎精仪系馆4506 200元/小时～400元/小时高分辨场发射扫描电镜S-5500 0.4纳米/30KV 闫允杰主楼11区123 基本机时费600元/小时场发射扫描电镜S-4500 1.5纳米/30KV 闫允杰主楼11区124 基本机时费200元/小时点环境扫描电子显微镜Quanta200 3nmdpi 余世实医学楼C119 每小时100元扫描式电子显微镜S-450型30KV 6nm 武庆兰科技楼I-1136 50-80元/小时扫描电子显微镜CSM-950 * 杨文言，马晓华9003大楼451080(形貌）+20（能谱）+20（图象）扫描电子显微镜KYKY2000 * 赵梅娟,朱永法理科楼4112 60元/小时场发射扫描电子显微镜JSM-6301F 分辨率1.5nm 闫允杰主楼11区一楼西段200－260元/小时电子万能试验机仪器名称仪器型号仪器规格仪器领用人仪器存放地点仪器使用价格微机控制万能试验机W DW-100 100KN 吴新如，付朝华逸夫科技楼3104 40元/小时微机控制万能试验机W DW-100 100KN 吴新如，付朝华逸夫科技楼3104 40元/小时微机控制万能试验机W DW-100 100KN 吴新如，付朝华逸夫科技楼3104 40元/小时微机控制万能试验机W DW-100 100KN 吴新如，付朝华逸夫科技楼3104 40元/小时电子万能实验机WDW3020 20KN 胡德贵、蒋小林逸夫科技楼1515 30元/小时电子万能试验机AGS-10KNG 10KN 胡德贵逸夫科技楼1510 50元/小时万能材料试验机ZWICKZ005 5KN 付朝华逸夫科技楼3107 90元/小时电子万能试验机CSS-2220 200KN 吴新如、蒋小林逸夫科技楼3106 40元/小时电子万能试验机CSS-2220 200KN 蒋小林、吴新如逸夫科技楼3106 40元/小时电子万能试验机WDW-100 100KN 吴新如，付朝华逸夫科技楼3104 40元/小时电子万能试验机WDW-100 100KN 吴新如，付朝华，罗辉逸夫科技楼3104 40元/小时电子万能试验机GT-T5-2000 500kg 郭宝华，李松化学馆416室20元/样电子万能实验机CSS-2210 100KN 蒋小林、吴新如逸夫科技楼3106 40元/小时电子万能实验机CSS-2210 100KN 蒋小林、吴新如逸夫科技楼3106 40元/小时电子万能实验机CSS-2210 100KN 蒋小林、吴新如逸夫科技楼3106 40元/小时电子万能试验机WDW-50 5000KG 张欣西主楼80元/小时电子万能试验机DSS-25T 25T 精度1% 付朝华技术科学楼115 60元/小时X射线衍射仪仪器名称仪器型号仪器规格仪器领用人仪器存放地点仪器使用价格高分辨X射线衍射仪D8 2.2KW 陶琨科技楼1149室100--120元/小时多晶X射线衍射仪D8ADVANCE垂直测角器王如骥，尉京志理科楼411880元/小时，高温样品100元/测温点X射线单晶衍射仪B RUKER P4 MO靶3KW 王如骥，尉理科楼4118 1000元/样品人京志转靶X射线衍射仪D/max/RB 12KV/转靶刘兴涛，苗伟逸夫科技楼1147室120元/小时晶体分析仪D/max-2500/PC18KW精度0.02 杨海涛纳米中心313 60元/个或200元/小时高功率X射线衍射仪D/max-2550 18KW40KV450MA苗伟、刘兴涛科技楼1144 150元/小时大功率单晶衍射仪R-Axis—Spider18KW60KV300MA苗伟、刘兴涛科技楼1144 200元/小时X射线衍射仪D/MAX-ⅢA * 陶琨，刘心涛科学技术大楼1123#84-100元/小时X射线衍射仪12KW转靶* 陶琨，刘兴涛科技楼1147# 110-120元/小时石英棱镜光谱仪仪器名称仪器型号仪器规格仪器领用人仪器存放地点仪器使用价格傅立叶光-色谱仪GC-FTIR 光频10000-370杨锐明、常东武热能系系210-250元/小时富里埃红外光谱分析仪AV360 7400-375CM-1阴金香，林天舒化学馆一层红外室20-50元/样品显微共焦拉曼光谱仪RM1000 显微尺寸：1um陈凤恩，郁鉴源理科楼4214室100-150拉曼光谱仪RM1000 514.5nm和325nm杨海涛纳米楼313 100－150元/小时傅立叶变换红外光谱Spectrum One 0.5nm 周云、张四纯化学馆201 50元/小时傅立叶红外光谱仪NEXUS型范围7400-350cm李继定、赵新生工物馆441 60元/小时等离子体发射光谱仪Prodigy 焦距80mm 周云、张四纯化学馆201 50～80元/样等离子发射光谱仪IRIS 165-1000NM 蒲丽梅楼51550元/样，（元素少于5）傅立叶变换红外光谱仪Nicolet5700 分辨率:0.4cm-1 陈琳、王楠楠化学馆323室透射：50元/样；ATR：60元/样等离子体发射光谱仪Vista-MPX CCD检测器王辉理科楼4220房间15－100元/元素等离子体发射光谱仪IRIS Intrepid II CID检测器邢志15-100元/元素人地点傅立叶变换红外光谱仪Nicolet6700FTIR6700SPE,15X 杨睿化学馆405150元/时或35－50元/样（校内常规）色谱-红外光谱分析仪PE-SYSTEM2000 10000-370cm 梁瑜工物馆202A色红联用:300元/样,普通样品:80元/小时,原位测试:120元/小时付丽叶变换红外光谱仪560型分辨0.35cm↑-1 杨睿，汪昆华化学馆405 常规20-30元,90-130元/样品等离子体光谱仪IRIS.Adr 波段175-800n辛仁轩,王建晨,刘秉仁核研院811 40-80元/样富立叶红外拉曼光谱仪Spectrum Gx 10000-400CM 孙素琴周群生命科学楼1-40FTIR 80元/小时,Raman 100元/小时透射式电子显微镜仪器名称仪器型号仪器规格仪器领用人仪器存放地点仪器使用价格透射电镜JEM2010 200KV/150万倍胡玲、温倩平房加工屋220～250元/小时透射电子显微镜T ecnaiTF20点分辨率0.24nm张丽娜、褚卫国纳米楼电镜室300－800元/小时透射电子显微镜B型120KV 余世实C119 每小时100元场发射球差校正电镜Titan80-30OT分辨率≤0.1nm程志英，于荣东主楼11-131合作研究1000元/小时；委托测试2000元/小时透射电子显微镜H-800 * 赵梅娟理科楼4120TEM 100元/小时,EDAX 150元/小时透射式电子显微镜CM120-Biotwin 37万倍蒋五龄生物系馆一楼150-80元/小时场发射透射电镜JEM-2010F 分辨率0.25nm 程志英主楼11区一楼西段420-520元/小时透射式电子显微镜JEM-200CX 分辨率0.35nm 陈锡花主楼11区一楼西段100-150元/小时热分析系统仪器名称仪器型号仪器规格仪器领用人仪器存放地点仪器使用价格热重及差热分析仪STA409 C/3/F量程:500-5000uv杨锐明热能系系馆213 150-180元/小时人热分析系统TGA2050 高温－1000度王晓工刘艳林科技楼1129 50-150元/小时热分析系统TGA/SDTA851 Lf1600、0.005度梁瑜工物馆201B 50元/小时超高温热分析仪SETARAMTGA92室温-2400℃席小庆科技楼2208 80-150元/小时热分析仪microDSCⅢ检测限:0.12-2uW罗雪春生命科学楼321房间每个样品基本费用40元加5元/小时光散射仪仪器名称仪器型号仪器规格仪器领用人仪器存放地点仪器使用价格动态光散仪99-D50 50-60HZ 高峰生命科学馆结构生物学面议。
LSM780双光子激光共聚焦显微镜技术参数
1.设备名称双光子荧光寿命成像激光共聚焦扫描显微镜2.数量1套3.设备用途说明4.工作条件电源220V±10%，50HZ室温：20~25℃其他：防尘，除湿，抗震动工作台：牢固，稳定，防震5.规格、技术要求及参数5.1 双光子飞秒激光器部分5.1.1Ar激光：458nm、488nm、514nm，25mW5.1.2HeNe激光：543nm，1mW5.1.3HeNe激光：633nm，5mW5.1.4405激光：405nm，30mW5.1.5*红外飞秒脉冲激光器，波长范围:680-1080nm, 包含负色散补偿功能5.1.6根据标本的情况利用飞秒激光器的双光子可观看800微米深度样品数据。
5.1.7*稳定的可见光AOTF，同时控制激光各波长的激光强度，8通道，切换时间<5微秒。
AOTF对激光强度的控制连续可调（0~100%），步进0.1%）。
5.1.8每支激光器通过独立的光纤连接到扫描器部分，光纤即插即用，无需校准。
5.1.9光纤末端具有可对激光进行聚焦的集光镜，电动调节。
5.1.10具有8个激光光路接口和红外飞秒激光器直接耦合端口。
5.2扫描器15.2.1扫描器（含检测器）与显微镜直接连接于显微镜端口（非光纤连接），一体化设计，一体化像差及色差校正。
5.2.2*整个光路的光学设计适用波长范围为360nm～1000nm全光谱范围。
5.2.3每个荧光检测器具有独立的10级可调数码增益。
5.2.4有可调大小的针孔，调节范围为连续调节，免维护。
5.2.5*光栅分光方式，并且具有减少信号损失的循环光路设计。
5.2.6各荧光检测通道均不采用发射光滤光片，荧光信号经光栅分光后可直接到达检测器。
5.2.7*共聚焦成像通道：具备34个荧光检测通道，可以同时采集10个荧光通道和1个透射光通道图像，10种荧光染料可同时分离成像，1个透射光通道（明场DIC效果）5.2.8*扫描器（含检测器）必须内置高灵敏度GaAsP spectral 检测器，而且该仪器能够整合FCS技术，使影像品質(S/N ratio)信噪比有2X提升，具有检测微弱的单分子荧光的功能。
双光子激光扫描荧光显微镜及其应用
表 1 几种常见荧光分子的单光子 、双光子 和三光子的吸收截面 3 [5 ]
荧光分子
δ1 (λ/ nm) / 10 - 16cm2
ηδ2 (700nm)
/ 10 - 50cm4·s / 光子
ηδ3 (700nm) / 10 - 83cm6·s2/ 光子2
DAPI free
113 (345nm)
Dansy1
TWO PHOTON LASER SCANNING FL UORESCENCE MICROSCOPY AND ITS APPL ICATIONS
CHEN De2Qiang XIA An2Dong WAN G Ke2Yi HUAN G Wen2Hao
( Depart ment of Precision M achi nery and Inst rument ation , U niversity of Science and Technology of Chi na , Hef ei 230026)
图 1 单 、双光子激发过程示意图
图 2 单 、双光子激发所形成的荧光形貌 (样品为罗丹明 B 的水溶液. 上为单光子激发 ,下为双光子激发)
3 材料的吸收截面 δ
吸收截面 δ是双光子激发现象的重要参数 , 它 的大小反映了分子吸收双光子的本领. 对单光子激 发中的吸收截面 δ已有较为准确的文献记载 , 而对 双光子乃至多光子吸收截面 δ,目前尚缺乏全面 、准 确的记载. 因此 ,对常用的荧光分子多光子吸收截面 δ和光谱的进一步研究 , 将有助于多光子激发共焦 激光扫描荧光显微镜的进一步广泛应用.
·232 ·
2 双光子激发原理简介
在激光照射下 ,基态荧光分子或原子吸收一个 光子后成为激发态 ,随后又弛豫到某一基态 ,同时以 光子形式释放能量而发出荧光. 这一过程就是通常 的单光子激发情况. 1931 年 ,Maria G ppert - Mayer 预言一个分子或原子可以在同一个量子过程中 ,同 时吸收两个光子而成激发态 ,这种情况就是双光子 激发过程[2 ] . 1961 年 , Kaiser 等在 CaF2 ∶Eu2 + 晶体 中首次观察到了这种双光子激发现象[3 ] . 图 1 简单 地描述了这种双光子激发的过程. 比如在单光子激 发情形 ,NADH 酶在 350nm 的光激发下产生 450nm 的荧光 ,而在双光子激发情形 , NADH 酶则需同时 吸收两个 700nm 的光子才能产生 450nm 的荧光. 这 就是说 ,双光子技术可以使我们无需使用紫外光源
双光子显微镜用途
双光子显微镜用途双光子显微镜（Two-photon microscope）是一种高分辨率的显微镜技术，它利用两个低能量的光子同时激发样本，从而获得三维立体的高清图像。
与传统显微镜技术相比，双光子显微镜具有较大的穿透深度、较低的背景荧光和较少的细胞损伤等优点，因而被广泛应用于生物医学研究领域。
双光子显微镜的原理是利用两个相当低频率的激光束同时通过透镜，进入样品。
当两个低频激光束在样品中的焦点交汇时，只有同时处于两束光子对应波长的区域才会被激发发光，使得仅激发样品焦点位置的荧光信号形成。
这种二次非线性光学过程产生的双光子荧光信号，则可以在样品内深层结构进行高分辨率成像。
另一方面，双光子激发荧光信号仅在焦点内产生，减少了有机染料等光毒性物质对生物样品的损伤。
双光子显微镜的应用范围非常广泛，以下是一些主要的用途：1. 细胞和组织成像：双光子显微镜可以在活体细胞和组织上进行高分辨率的成像，观察细胞内的分子和结构。
它可以提供细胞和组织的立体结构、形态、空间分布和细胞动力学等相关信息，对于研究细胞的表面、核内结构和细胞器的功能有重要意义。
2. 神经活动成像：双光子显微镜可以通过染色剂或染料与生物标记物相互作用，对神经元的形态、连接和电生理活动进行实时观察。
科研人员可以利用这一技术来研究神经元的空间分布、突触传递、突触结构和神经网络的功能等。
3. 癌症研究：双光子显微镜可以观察和追踪肿瘤细胞在活体内的扩张和转移过程。
通过染色剂或荧光标记物，可以定量测量肿瘤细胞或器官中的生化分子表达。
同时，双光子显微镜还可以用于药物研发和评估，以及肿瘤病理过程的研究。
4. 免疫学研究：双光子显微镜可以观察和监测免疫细胞在活体内的迁移和活动过程。
例如，它可以用来研究免疫细胞与细菌、病毒、寄生虫等病原体的相互作用，以及固定免疫细胞和移行免疫细胞之间的相互作用。
5. 皮肤研究：双光子显微镜可以在活体皮肤上观察细胞和组织的生理和病理过程，如麻风病、荨麻疹、红斑狼疮等。
LSM780双光子激光共聚焦显微镜技术参数
LSM780双光子激光共聚焦显微镜技术参数LSM780双光子激光共聚焦显微镜是一种基于双光子荧光共聚焦显微镜技术的高性能显微镜，具有高分辨率、深入组织的成像能力，能够提供关于三维结构和功能的细胞和组织的详细信息。
下面将详细介绍LSM780双光子激光共聚焦显微镜的技术参数。
1. 激光系统：LSM780双光子激光共聚焦显微镜通常配备两个紫外激光器，能够提供两个不同波长的激光，通常为800nm和1040nm。
这些激光器可以分别或同时使用，以适应不同的样品和实验需求。
2.激光功率：LSM780双光子激光共聚焦显微镜的激光功率通常在几十至上百毫瓦之间。
激光功率的选择取决于样品的特性和实验需求，功率越高，进一步成像的深度越大，但也会增加样品的破坏风险。
3.探测系统：LSM780双光子激光共聚焦显微镜的探测系统包括一个探测单元、一个光学滤光片轮和一个光电倍增管（PMT）。
探测单元通常包含两个探测器，可用于收集荧光信号和二次非线性光学信号，以获得不同的成像信息。
4.透射探测：LSM780双光子激光共聚焦显微镜还可配备透射探测系统，用于监测透过样品的激光强度，以实现更精确的深度控制和真实的三维成像。
5.XY扫描系统：LSM780双光子激光共聚焦显微镜的扫描系统通过使用高速扫描镜和电子扫描控制器来实现XY扫描，以获取二维图像。
扫描速度和分辨率可以通过调整激光功率和扫描模式进行优化。
6.Z轴扫描系统：LSM780双光子激光共聚焦显微镜的Z轴扫描系统通常由一个压电陶瓷驱动器和一个扫描镜组成，可以实现在样品的Z轴方向上进行成像，从而获得三维图像。
7. 图像处理软件：LSM780双光子激光共聚焦显微镜通常使用配套的图像处理软件，如Zeiss ZEN软件，用于图像采集、分析和处理。
该软件提供了多种功能，包括多通道成像、3D成像和图像重建等。
总之，LSM780双光子激光共聚焦显微镜具有先进的激光系统、灵活的样品探测系统、高速和高精度的扫描系统以及强大的图像处理软件等技术参数，为研究者提供了一种高分辨率、高亮度和无损伤成像的显微技术工具。
双光子显微镜技术作者细胞生物组刘洋完整请见双光子
双光子显微镜技术作者：细胞生物组刘洋 完整ppt 请见附件双光子显微镜问世于上世纪 90年代，是结合了激光共聚焦显微镜和双光子激发技术的 产物。
目前，双光子显微术以其大穿深、低光毒性、低光漂白等优点而被广泛应用于活体和活细胞/组织的成像观察。
本报告将对双光子显微镜发明的背景、实现方式、技术特点、应 用领域及发展趋势进行简要介绍。
一、双光子显微镜发明的背景光学显微镜的发展历史是一段不断提高分辨率的历史。
在传统宽场( Widefieldmicroscope, WF )光学显微镜中，来自标本不同纵深的光线都可以投射到同一焦平面上(视 网膜或感光元件在此)，导致被接收的光线 90%是来自焦平面外的杂散光，因此宽场显微镜的成像是整个标本的重叠像， 没有纵向分辨能力。
对标本内部细节的表现很差，严重影响了分辨率。
宽场显微镜成像焦平而为了消除杂散光的干扰，Malv in Min sky 于1957年提出了一种利用狭小针孔(Pi nhole )滤除焦平面外杂散光的设想，并由 G. J. Brakenhoff 于1978年借助激光最终实现，这就是激 光共聚焦显微镜( Laser sca nning con focal microscope, con focal )。
Analysis gn 阳監 TMMU焦平而物镜巫叠像标本成像屏性物医学分析测谟中心TTJMU与宽场显微镜不同的是， 激光共聚焦显微镜在成像侧的焦点位置设置了一个针孔， 只允许来自另一个焦点的荧光通过，而来自其他焦平面的杂散光则被屏蔽。
通过焦点的荧光被感光元件（光电倍增管、 CCD 或CMOS ）接收，形成一个点的荧光强度信号。
为了解决二维 成像问题，激发光通过一组高速摆动的振镜，在标本上进行X-Y 方向扫描，来自扫描区域内各点的信号最后通过计算机重新合成为一张图片。
1985Wijnaendts Van Resandt1959Malvin Minsky1978G. J Brakenhoff检測器由于有效滤除了杂散光，激光共聚焦显微镜的分辨率相比宽场显微镜有了本质上的提高（横向200nm,纵向400nm）,拥有了对样本的特定焦平面进行精细成像的能力（称为光学切片或细胞CT），解决了标本内部细节的问题。
LSM780双光子激光共聚焦显微镜技术参数
524 有可调大小的针孔，调节范围为连续调节，免维护。
设备名称双光子荧光寿命成像激光共聚焦扫描显微镜电源 220V+10%, 50HZ室温：20'25“C貝他：防尘，除湿，抗鳶动工作台：牢固•稳定，防夜Ax 激光：458nui 、488nm. 514nm» 25mW2. 数量3. 设备用途说明4. 工作条件5. 规格、技术要求及参数5.1 双光子飞秒激光器部分5JJ 5」・2 HeNe 激光：543nm, ImW5」・3 HeNe 激光：633nm, 5mW5」4405 激光：405nm, 30mW 5.L5 •红外飞秒脉冲激光器，波长范围：680・1080nm,包含负色散补偿功能5」・6 根据标本的情况利用飞秒激光器的双光子可观看800微米深度样品数据。
5丄7 去稳定的可见光AOTF,同时控制激光各波长的激光强度，8通道，切换时间＜5微秒。
AOTF 对激光强度的控制连续可调（0-100%）,步进0・1%）°5」・8 毎支激光器通过独立的光纤连接到扫描器部分，光纤即插即用，无需校准。
5」・9 光纤末端具有可对激光进行聚焦的集光镜，电动调节。
5」」0 具有8个激光光路接口和红外飞秒激光器直接耦合端口。
5・2扫描器521 扫描器（含检测器〉与显微镜直接连接于显微镜端口（非光纤连接人一体化设ih 一体化像差及色差校正。
5・2・2 壳整个光路的光学设计适用波长范围为360nm-1000nm 全光谱范围。
523 每个荧光检测器具有独立的10级可调数码增益。
同时满足下列速度指标:8幅/秒（512x512像素，16位〉，250幅/秒（512x16像素，16位） 多重扫描功能，可以在扫描过程中以线和幅方式切换光路配程。
53显微镜525去光栅分光方式，并且具有减少信号损失的循环光路设计。
526 各荧光检测通道均不采用发射光滤光片，荧光信号经光栅分光后可直接到达检527 •共聚焦成像通道：具备34个荧光检测通道，可以同时采集10个荧光通道和1个透射光通道图像，10种荧光染料可同时分离成像，1个透射光通道（明场DIC 效果〉5・2・8 协扫描器（含检测器）必须内置高灵敏度GaAsPspectial 检测器,而且该仪器能够整合FCS 技术，使影像品B （S/N ratio ）信噪比有2X 提升，具有检测微弱的单分子荧光的功能•529一个可用于明场和DIC 观察的透射光检测通道。
实验仪器登记表
4.10X,目镜,支持22 –25mm视域,或其他倍数目镜双目观察筒
5.12V 100W卤素灯透射光照明
6.冷CCD
细胞遗传工作站
1.许多细胞遗传图像应用软件与显微镜、摄像头组成的细胞遗传图像分析系统
2.应用软件Karyotyping—染色体组型软件FISH—荧光原位杂交软件MFISH—多彩色荧光原位杂交软件CGH-比软基因组杂交软件
操作规范
请详细阅读说明书
教学应用
染色体分析
备注
实验仪器登记表
仪器名称
荧光显微镜
＋细胞遗传工作站
产地
德国（Leica）
采购日期
2006.7
价格
$51,000
型号
DM2500
CW4000图像系统
主要用途
染色体分析、FISH、
细胞荧光实验
存放地点
226
保管人ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
李锦燕
主要性能
及参数
显微镜
1.可配平场消色差,平场半复消色差或平场复消色差物镜
2.可配明场,暗场,相衬,荧光,偏光,微分干涉功能
双光子显微镜原理
双光子显微镜原理双光子显微镜（Two-photon microscopy，TPM）是一种高分辨率、非侵入性的生物成像技术，被广泛应用于生命科学研究中。
它通过使用荧光标记的活体样品来获取图像，同时具有较深的组织穿透深度和较低的光毒性。
双光子显微镜基于双光子激发过程，它的原理与普通激光共聚焦显微镜（laser-scanning confocal microscopy，LSCM）有很大的不同。
在普通激光显微镜中，使用高能量光子来激发组织中的荧光标记，但这可能会引起细胞热损伤和光毒性。
而在双光子显微镜中，使用两个低能量光子同时激发样品中的荧光染料。
这两个光子的能量之和等于荧光染料分子能级间的能量差。
将两个光子同时聚焦于一个空间点上，光子的能量将被累加起来，从而激发荧光染料分子。
这种激发方式被称为双光子共振激发，只有在光子密度很高的情况下才会发生，因此只在焦点处发生激发，大量的光子不会散射到周围组织中。
这样就能够实现较深的确定性成像和较低的光毒性。
双光子显微镜的主要组成部分包括一个脉冲激光器、物镜、光学透镜和探测器。
脉冲激光器产生高能量脉冲激光，现在一般使用飞秒激光器。
这种激光器的输出光束非常稳定，能够提供高能量、窄脉冲和短脉冲宽度，以确保足够高的光子密度。
光束经过空间滤波后，由强度分束器将光束分为两个通道，一个用于成像，一个用于参考。
在成像通道中，光经过一个扫描镜扫描到样本，然后通过一个物镜成像到探测器上。
在参考通道中，光束通过一个参考物镜成像到探测器，用于校正样品的吸收和散射。
探测器可以是单光子计数器或光电倍增管。
在成像过程中，当荧光标记的分子受到双光子激发后，会发射荧光波长的光子。
这些光子被探测器捕获并转换为电信号，然后通过数据采集和图像处理系统得到最终的图像。
其次，双光子显微镜具有较低的光毒性。
由于激发光密度较低，光子与生物组织的相互作用减少，减少了光诱导损伤。
另外，双光子显微镜具有高空间和时间分辨率。
样品登记表透射电镜和扫描电镜-清华大学生物医学测试中心
清华大学生物医学测试中心样品登记表（环境扫描电镜）
提示： 1 环境扫描电镜室位于医学楼C117室，电话62789415-172/220。
预约网址：
2 送交的样品，须保证无磁性，无辐射，对于电镜仪器没有污染及损伤。
3 冷冻干燥处理的样品需详细写明样品的种类、性质，固定的日期及固定液浓度，
具有传染性和传染性质不明的样品，拒不接收。
4 若取消预约实验，请提前24小时通知，否则收取预约实验费用的100%。
5 为了提高仪器的使用效率，建议充分使用预约机时，可根据实际情况提前10-15
分钟到实验室制样。
6环境扫描模式不能观察带石油的各种样品，带水污泥，带水石灰及其他易污染机器的样品。
其他样品，可以在预约前及时联系技术员咨询，以免耽误实验。
清华大学生物医学测试中心样品登记表（透射电镜）
客户签字：日期：年月日。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
品
信
息
样品来源：□活组织□固定组织□石蜡切片□冰冻切片□固定细胞
□其他：______________
荧光染料：
激发波长：□405nm□458nm□488nm□514nm□543nm□635nm□690-1040nm
发射波长：
物镜倍率的选择：
□5X□10X□20X□40X□60X(O)□10X(W)□20X(W)□40X(W)□60X(W)
清华大学生物医学测试中心样品登记表（双光子显微镜）
用
户
信息Βιβλιοθήκη 单位（院系）：课题组名称：
使用人：实验室电话：经费负责人（导师）：
Email：手机：
（第一次做实验必填）导师是否同意该学生所有实验费用都由本课题组承担：
□同意□仅负责此次实验费用□负责承担期限：________—________
经费负责人签字：
项目执行人：检测仪器类型：
备注：
温馨提示：第一次实验送交此表格时，需要经费负责人签字。由于近期送样测试较多，实验安排以先来后到为序，如果工作量大安排不过来敬请老师同学们谅解。
用户签字：日期：年月日
服
务
项
目
□双光子荧光成像□单光子多重标记荧光成像
□荧光光谱扫描成像与光谱拆分□三维断层扫描成像
□三维图像表面重建与手动切割□FRAP&FRET成像
□手动测量与荧光强度数据分析□其他：____________________
平台
填
写
实验开始时间：实验结束时间：
应收检测费用：
样品送检日期：结果提交日期：