病原性球菌及检验

二、链球菌属

（一）概念

链球菌属为触酶阴性，兼性厌氧，呈圆形或卵圆形的革兰阳性球菌，在液体培养基中生长时易形成长链而表现为沉淀生长（但肺炎链球菌为混浊生长）。

（二）生物学特性

1.形态与染色：革兰染色阳性。菌体呈圆形，直径为0.8～1.0μm，呈链状排列，在液体培养基中易成长链。在脓汁标本中为短链，成双或单个散在。无鞭毛、无芽胞、某些菌株在血清肉汤中可有荚膜。

2.培养特性：本属细菌大多为需氧或兼性厌氧菌，少数微需氧及专性厌氧。营养要求较高，在含有腹水的培养基上生长良好。最适温度为35℃～37℃，最适pH为7.4～7.6，在5%C02环境下生长更好。在血琼脂平板上，经35℃ 18～24h培养后可形成灰白色、圆形、

凸起、直径为0.1～0.75mm细小菌落，菌落周围出现不同溶血环。

3.生化反应：本属细菌触酶试验阴性（与葡萄球菌属鉴别）

4.分类

（1）根据溶血能力分类：利用链球菌在血平板上溶血情况分为三类，

1）甲型（α）溶血性链球菌：又称草绿色链球菌。本菌为条件致病菌。

2）乙型（β）溶血性链球菌：通称溶血性链球菌，透明溶血环。该型细菌致病性最强，常引起人和动物多种疾病。

3）丙型（γ）链球菌：无溶血环。一般无致病性。

（2）根据链球菌细胞壁抗原（即C抗原）分类：即常用Lancefield血清分型法，将链球菌分为A、B、C、D……T等18个群（其中Ｉ和J缺），对人类有致病性的90%属A群，B、C、D、G群链球菌感染较少见。

5.对理化因素的抵抗力：不强。

（三）致病性

A群链球菌：

草绿色链球菌：属条件致病菌，常与亚急性心内膜炎相关。

B群链球菌：是新生儿肺炎、脑膜炎和败血症的病原体。

D群链球菌：引起呼吸道和泌尿道感染。

治疗原则：A群链球菌感染，青霉素G被列为首选。

B群链球菌常采用青霉素G和一种氨基糖苷类合用。

（四）微生物学检验方法与原理

1.标本采集：不同疾病采集不同标本。

2.检验方法及鉴定

（1）直接镜检：革兰染色，镜检。如符合链球菌的形态特征可初报。

（2）直接检测抗原。

（3）分离培养：血液标本，以无菌操作取两份血液各8～10ml，分别注入肉汤培养基，分别置需氧和厌氧环境中增菌，有细菌生长，然后分别接种于两个血平板，置需氧和厌氧环境中培养。脓汁和咽拭标本接种血平板并涂片染色镜检，若形态酷似链球菌，并革兰阳性，可初报。上述的培养物经35℃18～24h培养后，观察菌落特征和溶血情况。链球菌的菌落通常较小，透明或半透明，似针尖大小、凸起，菌落周围可出现α-溶血或β-溶血，也可不出

现溶血。然后取可疑菌落经涂片、染色镜检证实。甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌可产生α-溶血，它们的菌落形态非常相似，应予以区别。猪链球菌在羊血平板上为α溶血，在兔血平板上呈β溶血。

（4）鉴定：见生化反应。

三、肺炎链球菌

（一）概念

肺炎链球菌属链球菌科，链球菌属。

（二）生物学特性

1.形态与染色：革兰阳性，呈矛头状，成双排列，球菌。有荚膜（在人或动物体内易形成），无鞭毛，无芽胞。

2.培养特性：需氧或兼性厌氧。最适的温度为35℃～37℃，最适的pH7.6～8.0。营养要求较高。在血琼脂平板上可形成脐状菌落，周围有草绿色溶血圈。

在液体培养基中培养时间过长，可因产生自溶，培养液可变澄清，管底沉淀。

3.生化反应：菊糖、胆汁溶解试验阳性、0ptochin敏感试验阳性。（与草绿色链球菌的鉴别。）

（三）致病性

致病物质：荚膜。

所致疾病主要有大叶性肺炎、支气管炎。

（四）微生物学检验方法与原理

1.标本采集

2.试验方法及鉴定

（1）直接涂片检查：经革兰染色，镜检见革兰阳性矛尖状双球菌。

（2）分离培养：血液、脑脊液需增菌培养，经葡萄糖硫酸镁肉汤增菌后，肺炎链球菌可呈均匀混浊，而且有绿色荧光。无须增菌培养的脓汁或脑脊液沉渣接种于血琼脂，置5%～10%C02环境中，经35℃ 18～24h培养后观察茵落，并取可疑菌落作进一步鉴定。

（3）鉴定试验

1）胆汁溶解试验：阳性。

2）菊糖发酵试验：阳性。

3）动物试验：小白鼠对肺炎链球菌极为敏感。

4）荚膜肿胀试验：阳性。

5）0ptochin敏感试验：阳性。

6）快速乳胶凝集试验阳性。

四、肠球菌属

（一）概念

肠球菌属是肠道的正常栖居菌。

（二）生物学形状

为革兰阳性，成双或短链状排列的卵圆形球菌，无芽胞，无荚膜，部分肠球菌有稀疏鞭毛。营养要求高，需氧及兼性厌氧，在胆汁七叶苷和含6.5%NaCl培养基中可以生长（此点可与链球菌鉴别）。在血平板上主要表现为γ-和α-溶血。触酶阴性，多数肠球菌能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR）。

与同科链球菌的显著区别在于肠球菌能在高盐（6.5%NaCl）、高碱（pH9.6）、40%胆汁培养基上和10℃～45℃环境下生长，并对许多抗菌药物表现为固有耐药。

目前，肠球菌是革兰阳性菌中仅次于葡萄球菌属的重要医院感染病原菌，其所致感染中最常见的为尿路感染，其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。临床上分离率最高的是粪肠球菌，其次是屎肠球菌。粪肠球菌的某些菌株在马血、兔血平板上出现β溶血。（三）微生物学检查方法与原理

合理采取相应标本，如尿液、脓汁、胆汁、分泌物或血液等，以直接涂片进行初步检查。分离培养后，挑取可疑菌落，进行涂片、染色、镜检、触酶试验、胆汁七叶苷试验和6.5%NaCl 耐受试验，可鉴定到属。如鉴定到种还需进行必要的生化试验。对具有临床意义的肠球菌应进行体外药敏试验，一般要测试对β-内酰胺类尤其是青霉素类（如青霉素、氨苄西林）、万古霉素和氨基糖甙类（如庆大霉素）的敏感性，耐万古霉素肠球菌（VRE）国外检出率较国内高。

（四）治疗原则

治疗肠球菌感染一般采用β-内酰胺类和氨基糖甙类联合治疗。

五、奈瑟菌属

奈瑟菌属为一大群革兰阴性双球菌，无鞭毛，无芽胞，有菌毛。专性需氧，氧化酶阳性。本属主要有9个种。其中对人致病的是脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。

（一）脑膜炎奈瑟菌

1.概念

脑膜炎奈瑟菌简称脑膜炎球菌，是引起流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）的病原体。

2.生物学特性