病原性球菌及检验
主管检验技师考试临床医学检验微生物检验讲义第13章病原性球菌及检验
病原性球菌及检验● 考点葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、奈瑟菌属生物学性状微生物学检查法临床意义（致病性、所致疾病）【内容讲解】普及共性，单记个性生物学性状形态与结构：革兰染色性，菌体形态，大小，排列状态，特殊结构。
培养特性：对气体需求，营养要求，最适pH值，最适温度，在培养基中的生长现象。
生化反应：特殊生化。
抗原：分类：致病性致病物质所致疾病微生物学检查：针对生物学性状和致病性。
一、葡萄球菌属一群革兰阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状而得名。
（一）生物学特性1.形态与结构G+，球形，0.5～1.5μm，呈葡萄串状成堆排列（在脓汁、肉浸液培养物中，可见单个，成对或短链排列），无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜。
2.培养特性需氧或兼性厌氧，营养要求不高，最适pH为7.4，最适温度为35～37℃。
普皿：圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落，直径为2～3mm。
可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。
血琼脂平板：几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素。
液体培养基：生长迅速呈均匀混浊状。
3.生化反应触酶试验（+）；多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气；分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶（多数致病性葡萄球菌）。
4.抗原（1）蛋白抗原：为完全抗原，有种属特异性，无型特异性。
存在于葡萄球菌的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白（SPA）。
（2）多糖抗原：是半抗原，具有型特异性，有三种：①A型多糖抗原；②B型多糖抗原；③C型多糖抗原。
5.分类（1）《伯杰系统细菌学手册》（2）古典分类法6.抵抗力对理化因素抵抗力强，耐热，耐干燥，耐高盐。
是抵抗力最强的无芽胞细菌。
（二）临床意义葡萄球菌感染的特点是感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成。
金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是引起临床感染最常见的葡萄球菌。
（1）金黄色葡萄球菌致病物质：血浆凝固酶；葡萄球菌溶血素；杀白细胞素；肠毒素；表皮溶解毒素；毒性休克综合征毒素。
医学微生物实验实验四病原性球菌
相关研究和应用前景
研究方向
• 球菌的耐药性研究 • 球菌的毒力机制研究
应用前景
• 新型抗菌药物的开发 • 快速检测方法的改进
实验的意义和价值
促进健康
通过研究病原性球菌，能够更好地了解和应对 与之相关的疾病，促进人们的健康。
拓展科学知识
通过实验，可以进一步了解微生物领域的知识， 为科学研究的发展做出贡献。
3 柯氏试验
通过培养基的反应性来鉴别链球菌。
2 大肠杆菌鉴别试验
利用培养基鉴别肺炎球菌。
病原性球菌的检测方法
1
涂片法
将样品涂在玻璃片上，使用显微镜观察病原性球菌的形态特征。
2
H2 S产生试验
利用培养基观察球菌对H2S的产生情况。
3
SIM管法
通过尿素和铁盐培养基观察球菌的反应。
病原性球菌实验结果分析
形态观察
观察菌落的形态特征，如颜色、 形状和质地。
病原性球菌的特征和疾病
球菌种类 金黄色葡萄球菌 肺炎球菌 链球菌
特征 黄色菌落，产生金黄色素 多形态，革兰阴性 成链状排列
相关疾病 皮肤感染、食物中毒等 肺炎、脑膜炎等 咽炎、扁桃体炎等
病原性球菌的实验判断
1 甘露醇耐性试验
用甘露醇培养基判断金黄色葡萄球菌。
医学微生物实验实验四病 原性球菌
这个介绍病原性球菌的医学微生物实验将带您了解球菌的分类和特征，病原 性球菌对人类健康的影响，以及与常见球菌相关的疾病。
病原性球菌的分离与鉴定
样本采集
收集可能含有病原性球菌的样 本，如血液、尿液或分泌物。
培养与分离
将样本在含有适宜培养基的培 养皿中培养，分离出病原性球 菌。
病原性球菌的检验
病原性球菌的检验一、葡萄球菌属Staphylococcus⏹广泛存在于自然界，多数是不致病的腐物寄生菌。
⏹致病性葡萄球菌可引起化脓性炎症、败血症、食物中毒等。
分类与分型1）金黄色葡萄球菌(S. aureus)：多数致病。
（2）表皮葡萄球菌(S. epidermidis)：偶可致病。
（3）腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)：不致病。
（4）致病性菌株能产生黄色或柠檬色素。
（5）多数金黄色葡萄球菌可被相应噬菌体裂解，表皮葡萄球菌不敏感。
金黄色葡萄球菌的致病性⏹用噬菌体可将金葡萄菌分为4群23个型。
⏹肠毒素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金葡萄菌引起，Ⅱ群菌对抗生素产生耐药性的速度比Ⅰ和Ⅳ群缓慢很多。
⏹造成医院感染严重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和81型菌株。
⏹引起疱疹性和剥脱性皮炎的菌株经常是Ⅱ群71型。
金黄色葡萄球菌的流行病学⏹作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。
因而，食品受其污染的机会很多。
金黄色葡萄球菌及其检验⏹革兰氏阳性球状，排列呈葡萄串状。
无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，个别形成荚膜。
致病性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌）菌体较小、约0.5~1um., 普通0.4~1.2um。
培养及生化特性1.在普通培养基上生长良好（需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃、pH7.4 ，对营养要求不高，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。
），在麦康凯琼脂平板不生长。
2. 血平板上生长更佳，致病菌株β溶血3. 产生金黄色色素4. 高度耐盐: 可在7.5~15%NaCl肉汤中生长。
5. 分解葡、乳、麦、蔗糖，产酸不产气，触酶阳性，致病菌株能分解甘露醇。
6. 金黄色葡萄球菌能产生的毒素和酶（致病因素P149）1）溶血毒素2）杀白细胞素3）血浆凝固酶：区分葡萄球菌是否具有致病性的重要标志。
4）脱氧核糖核酸酶：5）肠毒素6）溶纤维蛋白酶7）透明质酸酶抗原性1. 多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁，借此可分群。
2017年初级检验技师《微生物检验》讲义第13章病原性球菌及检验
病原性球菌及检验一、葡萄球菌属（1）分类.......................了解（2）临床意义...................熟悉（3）生物学特性.................熟练掌握（4）微生物学检验...............熟练掌握（一）生物学特1.形态与结构本属细菌革兰染色阳性，呈圆球形，直径0.5～1.5μm，不规则排列，形似葡萄串状，在脓汁或液体培养基中，可呈单个、成对或短链排列。
无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜。
2.培养特性需氧或兼性厌氧，营养要求不高。
最适pH为7.4，最适温度为35～37℃。
在普通琼脂平板上经37℃24～48h培养，可形成圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐、不透明菌落，直径为2～3mm。
可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。
葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶素。
在液体培养基中生长迅速、呈均匀混浊状。
3.生化反应本属菌触酶试验阳性，多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气。
致病性葡萄球菌一般能分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。
4.抗原葡萄球菌的抗原包括蛋白抗原和多糖抗原。
（1）蛋白抗原：为完全抗原，有种属特异性。
存在于葡萄球菌的表面，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白（SPA）。
（2）多糖抗原：是半抗原，具有型特异性。
协同凝集试验5.分类（1）《伯杰系统细菌学手册》（1986）据DNA及表型特征等将葡萄球菌分为19个种。
继之，各国学者又从人和动物中检出数种凝固酶阴性葡萄球菌新种，共27种。
（2）古典分类法：根据其产生色素的不同分为金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌。
1965年，葡萄球菌国际分类委员会将葡萄球菌分为凝固酶阳性与凝固酶阴性葡萄球菌（CNS），凝固酶阳性葡萄球菌主要为金黄色葡萄球菌。
CNS常包括表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌。
6.抵抗力对理化因素抵抗力强，耐热，耐干燥，耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。
（二）致病性1.侵袭性疾病⑴皮肤及软组织感染，如毛囊炎、疖、痈等；⑵全身性感染，如败血症、脓毒血症、骨髓炎、心内膜炎、脑膜炎等；⑶呼吸道感染，如支气管肺炎、肺炎、脓胸等；⑷医院内感染。
微生物实验设计-病原性球菌的鉴定
医学微生物学实验设计姓名：***学号：**********班级：10级临床十一班病原性球菌的鉴定姚淑宝（石河子大学医学院石河子832000）摘要：球菌是细菌中的一大类，其中对人类有致病性的球菌包括分属葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属和奈瑟菌属的一些细菌。
本次实验设计以掌握病原性球菌的形态和培养特性，熟悉病原性球菌的分离和鉴定程序为目的。
对脓汁中的葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌进行鉴别。
一、鉴定思想本次鉴定试验，先将脓汁标本直接镜检，再分离培养，观察镜下菌体的形态特征以及形成菌落的形态特征确定待测菌的菌属。
然后，对可疑菌落纯培养，通过不同生化反应对同一菌属中的不同细菌进行区别。
（具体见图1-1）分离纯化葡萄球菌属奈瑟菌属血浆凝固酶试验胆汁溶菌试验麦芽糖发酵试验二、鉴定方法（一）直接镜检将脓汁标本涂片进行革兰染色，然后在显微镜下观察细菌菌体的形态、排列、染色性并作出初步诊断。
葡萄球菌属：革兰染色阳性，球形，无芽胞、无鞭毛，呈葡萄串状排列。
链球菌属：革兰染色阳性，球形或椭圆形，无芽胞、无鞭毛，呈链状或成双排列。
肺炎链球菌具有荚膜双球的典型形态。
奈瑟菌属：革兰染色阴性，无芽胞、无鞭毛，常成双排列。
脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌大多于中性粒细胞内外分布。
通过直接镜检可以确定脓汁标本中细菌的菌属。
在确定菌属的基础下再对脓汁标本中的细菌分离纯化，然后挑取可以菌落通过再次涂片染色镜检、致病物质检查、生化反应、血清学鉴定等方法进行菌属内的区别。
（二）分离纯化用分区划线法将脓汁中的细菌接种在血琼脂平板培养基或巧克力色培养基上并在5%二氧化碳、37℃的条件下培养18~48小时。
观察菌落的形态。
葡萄球菌属：在血平板上形成圆形凸起、表面光滑、润湿、边缘整齐、不透明的菌落。
形成金黄色、白色和柠檬色脂溶性色素，多数金黄色葡萄球菌菌落周围有β溶血现象。
链球菌属：在血平板上形成灰白色、圆形凸起、半透明或不半透明的细小菌落。
微生物检验学 实验七 病原性球菌的检验
A群溶血性链球菌 S
-
无乳链球菌
R
+
肺炎链球菌和草绿色链球菌的鉴别
菌种
镜下形态
菌落形态
Optochin
肺炎链球菌
矛头状、成对、有荚膜
稍大、扁平、湿润、脐 状
S
草绿色链球菌
圆形、成链、无荚膜
较小、凸起、稍干、圆 形
R
【注意事项】
触酶试验中3％H2O2溶液要新鲜配制，并且不宜用 血琼脂平板上生长的菌落。 凝固酶试验通常用玻片法为筛选试验、如遇凝固酶 试验结果不典型可以用试管法鉴定。 观察胆汁-七叶苷试验结果时，要求至少1/2斜面变 黑才能判断为阳性。
【实验方法】 1、染色镜检 2、分离培养 3、生化反应 葡萄球菌属
触酶试验 凝固酶试验 新生霉素敏感试验
4
链球菌属和肠球菌属
触酶试验 链球菌属
杆菌肽敏感试验 CAMP试验 Optochin敏感试验 肠球菌属 胆汁-七叶苷试验 65g/L NaCl耐受生长试验
胆汁七 生化反应
CAMP试验
主要性状
菌落色素 溶血 血浆凝固酶 触酶 甘露醇发酵 新生霉素
3种葡萄球菌的生化反应结果
金黄色葡萄球菌
金黄色 ＋（β溶血）
＋ ＋ ＋ S
表皮葡萄球菌
白色 － － ＋ － S
腐生葡萄球菌
白色或柠檬色 － － ＋ － R
链球菌属和肠球菌属
A群溶血性链球菌和无乳链球菌的鉴别
菌种
杆菌肽
CAMP
10
实验7 病原性球菌的检验
临床微生物学及检验
医学检验学院 病原生物学教研室
【实验目的】
1.掌握葡萄球菌属、链球菌属和肠球菌属的 菌落形态、染色特点和基本生化反应。
实验四病原性球菌的检验
1、标本采集：脓液
2、检验程序：
脓液
↓
↓
直接涂片
分离培养
革兰染色镜检 （操作）（血琼脂平板）
↓
↓ 37℃ 18～24h
初报 挑取可疑菌落（性状、色素、溶血）
↓
鉴定试验及药敏试验
↓
↓
↓
↓
革兰染色镜检 生化反应鉴定 其他鉴定 药敏试验
↓
↓
↓
↓
↓37℃ 18～24h
报告
三、葡萄球菌属生物化学反应：
（一）触酶试验（操作）
规定时间内出现清晰凝集者为阳性，不出现凝集 者为阴性。
主要用于风湿热的辅助诊断：
风湿热患者ASO大多在250单位；
活动性风湿热患者ASO一般≥400单位。
『实验报告』
绘出化脓性球菌镜下形态图。 记录脓液标本的分离培养与鉴定程序。
实验四 病原性球菌的检验
病原性球菌，又称化脓性球菌，根据革 兰染色性的不同，分为两类： G＋球菌： 葡萄球菌、链球菌、肺炎链 球菌等。 G- 球菌： 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌 等。
『目的要求』
掌握：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜 炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的形态及染色特点；葡 萄球菌、链球菌的菌落特点及链球菌在血琼脂 平板上的溶血性；血浆凝固酶试验、触酶试验 的试验方法、结果及意义。
四、抗链球菌溶血素“O”的测定（乳胶法，示教）
1、原理：ASO高滴度的血清被适量溶血素“O”中 和后，失去了正常水平量的抗体，多余的抗“O” 抗体与ASO乳胶试剂反应，出现肉眼可见的，清 晰均匀的凝集颗粒（ASO乳胶试剂系羧化聚苯乙 烯乳胶与溶血素“O”共价交联的产物）。
2、方法：（略）3、结Fra bibliotek及意义：1、原理：
第十三章 病原性球菌及检验
第十三章病原性球菌及检验一、A11、与淋病奈瑟菌无关的性状是（）。
A、革兰阴性肾形双球菌B、营养要求高C、初次分离需5%～10%CO2D、普通培养基上即可生长E、氧化酶试验阳性2、甲氧西林金黄色葡萄球菌是（）。
A、MRSAB、MRSEC、MRSD、MRCNSE、SPA3、抗链“O”试验可以辅助诊断（）。
A、结核病B、肺炎C、流脑D、百日咳E、急性肾小球肾炎4、有关细菌学检验的描述选项中错误的是（）。
A、原则上所有标本均应作病原分离培养B、脑膜炎奈瑟菌初次培养需用巧克力培养基C、结核杆菌需2～6周才长成菌落D、葡萄球菌分离培养的阳性率一般比直接涂片镜检的阳性率为低E、布氏杆菌初次培养时需5%～10%的CO25、下列何种细菌为革兰阴性球菌（）。
A、乙型溶血性链球菌B、肺炎链球菌C、铜绿假单胞菌D、脑膜炎奈瑟菌E、肺炎克雷伯菌6、有关肺炎链球菌不正确的描述（）。
A、革兰阳性双球菌B、有自溶现象C、对optochin敏感D、均对青霉素敏感E、可引起脑膜炎7、肺炎链球菌在血平板上生长，菌落周围的颜色是（）。
A、红色B、褐色C、绿色D、黑色E、金黄色8、卡他布兰汉菌在形态方面与下列哪种细菌相似（）。
A、流感嗜血杆菌B、淋病奈瑟菌C、军团菌D、放线菌E、支原体9、脑膜炎球菌侵入机体繁殖后，因自溶或死亡而释放内毒素，内毒素的主要作用是引起（）。
A、菌血症B、血小板解聚C、血液白细胞减少D、细菌素产生E、血管坏死和血栓形成，周围血管出血10、某患者餐后数小时出现头晕、恶心、腹痛、呕吐等症状。
呕吐物接种到血液琼脂平皿培养，出现完全溶血环，金黄色菌落。
培养滤液幼猫腹腔注射4小时后出现呕吐，此病可诊断为（）。
A、金黄色葡萄球菌引起的食物中毒B、产气荚膜梭菌引起的食物中毒C、肠沙门菌引起的食物中毒D、肉毒梭菌引起的食物中毒E、鼠伤寒沙门菌引起的食物中毒11、甲型溶血性链球菌生长时，菌落周围常出现溶血环，此现象称为（）。
A、α溶血B、β溶血C、γ溶血D、δ溶血E、ε溶血12、脑膜炎奈瑟菌属于（）。
病原性球菌及检验
病原性球菌及检验球菌种类很多，根据革兰氏染色的不同，分为G-、 G+两类球菌。
G+有：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌和微球菌。
G-有：脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、卡他布兰汉氏菌等。
对人体致病的球菌称病原性球菌，因能引起机体化脓性炎症，故又称为化脓性球菌。
常见的有葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌。
一、葡萄球菌属(一)形态与染色葡萄球菌呈不规则堆集排列，形似葡萄串状，也可见单个、成对或短链排列。
为G+性球菌，直径0.5-1.5um，（致病性葡萄球菌菌体较非致病性葡萄球菌菌体小）无芽胞，无鞭毛、无荚膜；无动力。
(二)分类 1965年按血浆凝固酶分为：血浆凝固酶阴性葡萄球菌，血浆凝固酶阳性葡萄球菌。
1.血浆凝固酶阴性葡萄球菌包括：表皮、腐生葡萄球菌。
2.血浆凝固酶阳性葡萄球菌包括：金黄色、中间型、家畜葡萄球菌。
(三)抗原本菌水解后，用沉淀法可获两种抗原即蛋白抗原和多糖抗原。
1.蛋白抗原：是一种表面抗原，为完全抗原；有种特异性，无型特异性。
存在葡萄球菌细胞壁的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白。
2.多糖抗原：是半抗原，存在于细胞壁上，是金黄色葡萄球菌的重要抗原。
有型特异性，分A、B、C三型。
(四)标本接种1.脓汁、尿道分泌物、脑脊液沉淀物，通常直接接种在血琼脂上，经37℃24-48h培养，可见直径2-3mm，产生不同色素的菌落。
2.粪便、呕吐物应接种卵黄高盐、高盐甘露醇琼脂平板上，经37℃24-48h培养可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。
3.疑为败血症者，抽取静脉血5ml，注入50ml葡萄糖肉汤培养基中。
(五)培养特性需氧或兼性厌氧，对营养要求不高。
在20%CO2环境中，有利于毒力产生。
最适温度37℃，最适PH7.4。
DNA中G+C含量：30-39%。
1.在普通琼脂平板上，经37℃、24-48h培养，可形成圆形，凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽、不透明、脂溶性色素的菌落，直径一般为1-2mm，但大者也有4-5 mm的菌落。
病原性球菌及检验
二、链球菌属（一）概念链球菌属为触酶阴性，兼性厌氧，呈圆形或卵圆形的革兰阳性球菌，在液体培养基中生长时易形成长链而表现为沉淀生长（但肺炎链球菌为混浊生长）。
（二）生物学特性1.形态与染色：革兰染色阳性。
菌体呈圆形，直径为0.8～1.0μm，呈链状排列，在液体培养基中易成长链。
在脓汁标本中为短链，成双或单个散在。
无鞭毛、无芽胞、某些菌株在血清肉汤中可有荚膜。
2.培养特性：本属细菌大多为需氧或兼性厌氧菌，少数微需氧及专性厌氧。
营养要求较高，在含有腹水的培养基上生长良好。
最适温度为35℃～37℃，最适pH为7.4～7.6，在5%C02环境下生长更好。
在血琼脂平板上，经35℃ 18～24h培养后可形成灰白色、圆形、凸起、直径为0.1～0.75mm细小菌落，菌落周围出现不同溶血环。
3.生化反应：本属细菌触酶试验阴性（与葡萄球菌属鉴别）4.分类（1）根据溶血能力分类：利用链球菌在血平板上溶血情况分为三类，1）甲型（α）溶血性链球菌：又称草绿色链球菌。
本菌为条件致病菌。
2）乙型（β）溶血性链球菌：通称溶血性链球菌，透明溶血环。
该型细菌致病性最强，常引起人和动物多种疾病。
3）丙型（γ）链球菌：无溶血环。
一般无致病性。
（2）根据链球菌细胞壁抗原（即C抗原）分类：即常用Lancefield血清分型法，将链球菌分为A、B、C、D……T等18个群（其中Ｉ和J缺），对人类有致病性的90%属A群，B、C、D、G群链球菌感染较少见。
5.对理化因素的抵抗力：不强。
（三）致病性A群链球菌：草绿色链球菌：属条件致病菌，常与亚急性心内膜炎相关。
B群链球菌：是新生儿肺炎、脑膜炎和败血症的病原体。
D群链球菌：引起呼吸道和泌尿道感染。
治疗原则：A群链球菌感染，青霉素G被列为首选。
B群链球菌常采用青霉素G和一种氨基糖苷类合用。
（四）微生物学检验方法与原理1.标本采集：不同疾病采集不同标本。
2.检验方法及鉴定（1）直接镜检：革兰染色，镜检。
如符合链球菌的形态特征可初报。
微生物检验学之病原性球菌及检验
病原性球菌及检验一、葡萄球菌属（一）生物学特性1.形态与结构本属菌革兰染色阳性，呈圆球形，直径0.5～1.5μm，不规则成堆排列，形似葡萄串状，在脓汁、肉浸液培养物中，可见单个，成对或短链排列。
无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜。
2.培养特性需氧或兼性厌氧，营养要求不高，通常在肉浸液及肉浸液琼脂或加入血液的培养基上生长良好。
最适pH为7.4，最适温度为35～37℃。
在普通琼脂平板上经35℃24～48h培养，可形成圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落，直径为2～3mm。
可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。
在血琼脂平板上，几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素。
在液体培养基（普通肉浸液）中生长迅速呈均匀混浊状。
3.生化反应本属菌触酶试验阳性，对糖的发酵反应不规则，多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气。
多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。
4.抗原葡萄球菌水解后，用沉淀法可获得两种抗原，即蛋白抗原和多糖抗原。
（1）蛋白抗原：为完全抗原，有种属特异性，无型特异性。
存在于葡萄球菌的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白。
（2）多糖抗原：是半抗原，具有型特异性，有三种：①A型多糖抗原；②B型多糖抗原；③C型多糖抗原。
5.分类（1）《伯杰系统细菌学手册》（1986）据DNA相关性表型特征等将葡萄球菌分为19个种。
继之，各国学者又相继从人和动物中检出数种凝固酶阴性葡萄球菌新种，共27种。
（2）古典分类法：根据其在固体培养基上产生的不同色素分为金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌。
1965年，国际葡萄球菌和微球菌分类委员会将葡萄球菌分为凝固酶阳性葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）。
CNS常包括表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌。
凝固酶阳性葡萄球菌包括金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌和家畜葡萄球菌。
6.抵抗力对理化因素抵抗力强，耐热、耐干燥、耐高盐，是抵抗力最强的无芽胞细菌。
病原性球菌的检验
触酶试验 血浆凝固酶试验
(1)触酶试验
方法：用接种环挑取细菌，置于洁净载玻 片上，滴加3％H2O2溶液1～2滴，观察结 果。
结果判断、解释和报告：于半分钟内产生 大量气泡，为触酶试验阳性，而不产生气 泡者为阴性。
(2)血浆凝固酶试验
方法：取未稀释的新鲜人血浆和生理盐水各1滴 分别滴于载玻片上，挑取待检葡萄球菌菌落少许， 分别与生理盐水和血浆混合，立即观察结果。此 法用于测定结合型凝固酶。
球菌检验
成都医学院 临床微生物学教研室
【目 的】
1．掌握常见病原性球菌的分离培养与鉴定 方法。
2．熟悉葡萄球菌、链球菌的菌落特点、 菌体形态及染色性。
【器 材】
接种环、培养箱、酒精灯、载玻片、显微镜 等
【试 剂】
1．培养基 普通琼脂平板（1个/人） 2．试剂 革兰染液、3％H2O2、人血浆、生
理盐水
【标 本】
金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄 球菌
草绿色链球菌
【方 法】
第一次
1．标本涂片染色镜检 观察三种葡萄球菌 的镜下形态、染色性。
2．接种与培养 接种三种葡萄球菌于普通 琼脂平板上；37℃ 18~24h
第二次
3.菌落形态观察 4.菌落涂片染色
细菌检验表格整理(球菌、肠杆菌、弧菌)
肠外无菌部位——增菌——BAP；
混有其他污染菌——MAC、EMB——抑制其他革兰阳性菌及少数革兰阴性菌；
粪便标本——BAP、MAC、SS；
鉴定：
（科间鉴别）氧化酶、O/F实验
（属间鉴别）
KIA：分解葡——产酸/产酸产气；
分解乳糖——鉴别致病菌与非致病菌
MIU：U——大肠阴性为黄、变形阳性为红；
MAC：发酵乳糖产酸，形成较大黏液型、红色菌落；
在科玛嘉定位显色培养基呈绿色菌落
BAP、MAC培养基分离培养——挑选可疑菌落；
属间鉴别：
MIU（- - +）I除了产酸克雷伯菌，都为阴
KIA（发酵葡萄糖/发酵乳糖）
志贺菌属
4个血清群：A、B、C、D群
致病与侵袭力、内毒素、外毒素有关；
引起人类细菌性痢疾即菌痢，粪口传播；
生化：
发酵葡萄糖（产酸或产酸产气）、触酶+、氧化酶-、硝酸盐还原+；
抗原构造：
主要包括菌体O抗原（脂多糖）、鞭毛H抗原（蛋白质）、表面抗原（多糖）；
O抗原与H抗原是肠杆菌科血清型分群和分型的依据
抵抗力：
不强，高温即可被杀死
标本采集：
只有肠外感染标本做直接镜检（除血液）；
肠道感染标本（粪便、脓血、粘液）；
分类
（1）肠杆菌科：
革兰阴性杆菌，多为肠道的正常菌群；
（2）KIA：克氏双糖铁培养基，为肠杆菌科细菌常用的鉴别培养基
（3）迁徙现象：普通变形杆菌和奇异变形杆菌的大多数菌种在普通琼脂平板上生长时可蔓延成波纹状，布满整个培养基表面
形态：
革兰阴性杆状或球杆状，无芽孢，多有鞭毛，能运动，致病性的菌株多有菌毛；兼性厌氧，营养要求不高，在BAP和MAC上生长良好；
初级检验士考试(微生物学检验)练习题第十三章病原性球菌及检验
第十三章病原性球菌及检验一、A11、不符合脑膜炎球菌送检标本要求的是A、采集标本注意无菌操作B、采集标本立即送检C、采集标本一般在使用抗菌药物之前D、根据该病原菌主要存在部位取材E、标本送检过程中要保持低温和干燥2、对低温敏感的细菌是A、肺炎链球菌B、脑膜炎奈瑟菌C、脆弱类杆菌D、伤寒沙门菌E、布鲁菌3、淋病奈瑟菌的主要传播途径是A、呼吸道传播B、消化道传播C、创伤伤口感染D、性接触传播E、节肢动物叮咬4、关于金黄色葡萄球菌，下列哪种说法是错误的A、耐盐性强B、在血平板上形成完全透明的溶血环C、引起局部化脓性感染时病变比较局限D、不易产生耐药性，抵抗力强E、革兰阳性菌5、下列哪项不是金黄色葡萄球菌的特点A、血浆凝固酶试验阳性B、产生溶血素C、分解甘露醇D、产生耐热核酸酶E、胆汁溶解试验阳性6、葡萄球菌致急性胃肠炎的致病因素是A、杀白细胞素B、溶血毒素C、肠毒素D、血浆凝固酶E、红疹毒素7、以下叙述正确的是（）。
A、淋病奈瑟菌感染主要由呼吸道传播B、淋病奈瑟菌为革兰阳性球菌C、人是淋病奈瑟菌唯一宿主D、淋病奈瑟菌不产生β－内酰胺酶E、淋病奈瑟菌有毒株无菌毛8、化脓性炎症，其脓汁黏稠、病灶局限，这是由于病菌产生了A、玻璃质酸酶B、血浆凝固酶C、耐热核酸酶D、链道酶E、葡激酶9、分离培养淋病奈瑟菌时，不能采用的方法是A、标本要立即送检B、标本要保湿保暖C、在含5%～10%CO2的环境中培养D、接种于预温的巧克力色血平板上E、厌氧环境培养10、用于监测血浆凝固酶的细菌为A、肺炎链球菌B、表皮葡萄球菌C、甲型溶血性链球菌D、乙型溶血性链球菌E、金黄色葡萄球菌11、下列哪种细菌感染一般不侵入血流A、葡萄球菌B、淋球菌C、脑膜炎球菌D、伤寒杆菌E、链球菌12、经验治疗链球菌引起的感染，应首选A、红霉素B、链霉素C、青霉素D、克林霉素E、多黏菌素13、脑膜炎奈瑟菌在人体的定植部位一般为A、肠道黏膜B、口腔黏膜C、皮肤表面D、鼻咽部E、脑膜14、肺炎链球菌的主要致病物质是A、透明质酸酶B、溶血毒素C、普通菌毛D、荚膜E、外毒素15、关于乙型溶血型链球菌，下列哪项是错误的A、是链球菌属中致病力最强的B、感染容易扩散C、可引起超敏反应性疾病D、产生多种外毒素，故可用类毒素预防E、对青霉素敏感二、A21、某一脓标本，涂片革兰染色镜检：革兰阳性球菌，直径1μm左右，呈单个、成对或短链排列；血琼脂平板分离培养：菌落表面光滑湿润，圆形，边缘整齐，黄色，凸起，直径1～1.5mm，菌落周围有完全透明的溶血环；菌落涂片革兰染色镜检：革兰阳性球菌，呈单个、双、短链和葡萄串状排列，以葡萄串状排列为主；生化试验：触酶阳性，血浆凝固酶（试管法）阳性，发酵葡萄糖产酸，发酵甘露醇产酸，对新生霉素敏感。
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二、链球菌属（一）概念链球菌属为触酶阴性，兼性厌氧，呈圆形或卵圆形的革兰阳性球菌，在液体培养基中生长时易形成长链而表现为沉淀生长（但肺炎链球菌为混浊生长）。
（二）生物学特性1.形态与染色：革兰染色阳性。
菌体呈圆形，直径为0.8～1.0μm，呈链状排列，在液体培养基中易成长链。
在脓汁标本中为短链，成双或单个散在。
无鞭毛、无芽胞、某些菌株在血清肉汤中可有荚膜。
2.培养特性：本属细菌大多为需氧或兼性厌氧菌，少数微需氧及专性厌氧。
营养要求较高，在含有腹水的培养基上生长良好。
最适温度为35℃～37℃，最适pH为7.4～7.6，在5%C02环境下生长更好。
在血琼脂平板上，经35℃ 18～24h培养后可形成灰白色、圆形、凸起、直径为0.1～0.75mm细小菌落，菌落周围出现不同溶血环。
3.生化反应：本属细菌触酶试验阴性（与葡萄球菌属鉴别）4.分类（1）根据溶血能力分类：利用链球菌在血平板上溶血情况分为三类，1）甲型（α）溶血性链球菌：又称草绿色链球菌。
本菌为条件致病菌。
2）乙型（β）溶血性链球菌：通称溶血性链球菌，透明溶血环。
该型细菌致病性最强，常引起人和动物多种疾病。
3）丙型（γ）链球菌：无溶血环。
一般无致病性。
（2）根据链球菌细胞壁抗原（即C抗原）分类：即常用Lancefield血清分型法，将链球菌分为A、B、C、D……T等18个群（其中Ｉ和J缺），对人类有致病性的90%属A群，B、C、D、G群链球菌感染较少见。
5.对理化因素的抵抗力：不强。
（三）致病性A群链球菌：草绿色链球菌：属条件致病菌，常与亚急性心内膜炎相关。
B群链球菌：是新生儿肺炎、脑膜炎和败血症的病原体。
D群链球菌：引起呼吸道和泌尿道感染。
治疗原则：A群链球菌感染，青霉素G被列为首选。
B群链球菌常采用青霉素G和一种氨基糖苷类合用。
（四）微生物学检验方法与原理1.标本采集：不同疾病采集不同标本。
2.检验方法及鉴定（1）直接镜检：革兰染色，镜检。
如符合链球菌的形态特征可初报。
（2）直接检测抗原。
（3）分离培养：血液标本，以无菌操作取两份血液各8～10ml，分别注入肉汤培养基，分别置需氧和厌氧环境中增菌，有细菌生长，然后分别接种于两个血平板，置需氧和厌氧环境中培养。
脓汁和咽拭标本接种血平板并涂片染色镜检，若形态酷似链球菌，并革兰阳性，可初报。
上述的培养物经35℃18～24h培养后，观察菌落特征和溶血情况。
链球菌的菌落通常较小，透明或半透明，似针尖大小、凸起，菌落周围可出现α-溶血或β-溶血，也可不出现溶血。
然后取可疑菌落经涂片、染色镜检证实。
甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌可产生α-溶血，它们的菌落形态非常相似，应予以区别。
猪链球菌在羊血平板上为α溶血，在兔血平板上呈β溶血。
（4）鉴定：见生化反应。
三、肺炎链球菌（一）概念肺炎链球菌属链球菌科，链球菌属。
（二）生物学特性1.形态与染色：革兰阳性，呈矛头状，成双排列，球菌。
有荚膜（在人或动物体内易形成），无鞭毛，无芽胞。
2.培养特性：需氧或兼性厌氧。
最适的温度为35℃～37℃，最适的pH7.6～8.0。
营养要求较高。
在血琼脂平板上可形成脐状菌落，周围有草绿色溶血圈。
在液体培养基中培养时间过长，可因产生自溶，培养液可变澄清，管底沉淀。
3.生化反应：菊糖、胆汁溶解试验阳性、0ptochin敏感试验阳性。
（与草绿色链球菌的鉴别。
）（三）致病性致病物质：荚膜。
所致疾病主要有大叶性肺炎、支气管炎。
（四）微生物学检验方法与原理1.标本采集2.试验方法及鉴定（1）直接涂片检查：经革兰染色，镜检见革兰阳性矛尖状双球菌。
（2）分离培养：血液、脑脊液需增菌培养，经葡萄糖硫酸镁肉汤增菌后，肺炎链球菌可呈均匀混浊，而且有绿色荧光。
无须增菌培养的脓汁或脑脊液沉渣接种于血琼脂，置5%～10%C02环境中，经35℃ 18～24h培养后观察茵落，并取可疑菌落作进一步鉴定。
（3）鉴定试验1）胆汁溶解试验：阳性。
2）菊糖发酵试验：阳性。
3）动物试验：小白鼠对肺炎链球菌极为敏感。
4）荚膜肿胀试验：阳性。
5）0ptochin敏感试验：阳性。
6）快速乳胶凝集试验阳性。
四、肠球菌属（一）概念肠球菌属是肠道的正常栖居菌。
（二）生物学形状为革兰阳性，成双或短链状排列的卵圆形球菌，无芽胞，无荚膜，部分肠球菌有稀疏鞭毛。
营养要求高，需氧及兼性厌氧，在胆汁七叶苷和含6.5%NaCl培养基中可以生长（此点可与链球菌鉴别）。
在血平板上主要表现为γ-和α-溶血。
触酶阴性，多数肠球菌能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR）。
与同科链球菌的显著区别在于肠球菌能在高盐（6.5%NaCl）、高碱（pH9.6）、40%胆汁培养基上和10℃～45℃环境下生长，并对许多抗菌药物表现为固有耐药。
目前，肠球菌是革兰阳性菌中仅次于葡萄球菌属的重要医院感染病原菌，其所致感染中最常见的为尿路感染，其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。
临床上分离率最高的是粪肠球菌，其次是屎肠球菌。
粪肠球菌的某些菌株在马血、兔血平板上出现β溶血。
（三）微生物学检查方法与原理合理采取相应标本，如尿液、脓汁、胆汁、分泌物或血液等，以直接涂片进行初步检查。
分离培养后，挑取可疑菌落，进行涂片、染色、镜检、触酶试验、胆汁七叶苷试验和6.5%NaCl 耐受试验，可鉴定到属。
如鉴定到种还需进行必要的生化试验。
对具有临床意义的肠球菌应进行体外药敏试验，一般要测试对β-内酰胺类尤其是青霉素类（如青霉素、氨苄西林）、万古霉素和氨基糖甙类（如庆大霉素）的敏感性，耐万古霉素肠球菌（VRE）国外检出率较国内高。
（四）治疗原则治疗肠球菌感染一般采用β-内酰胺类和氨基糖甙类联合治疗。
五、奈瑟菌属奈瑟菌属为一大群革兰阴性双球菌，无鞭毛，无芽胞，有菌毛。
专性需氧，氧化酶阳性。
本属主要有9个种。
其中对人致病的是脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。
（一）脑膜炎奈瑟菌1.概念脑膜炎奈瑟菌简称脑膜炎球菌，是引起流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）的病原体。
2.生物学特性（1）形态与染色：为革兰阴性双球菌，菌体呈肾形，成对排列，坦面相对，菌体直径0.6～1.5μm，在患者的脑脊液中位于中性粒细胞内。
（2）培养特性：营养要求高，属苛养菌，必须在含有血清或含有多种氨基酸，无机盐等物质的培养基上生长良好。
（3）生化反应：绝大多数菌株能分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气（因淋病奈瑟菌不分解麦芽糖，借此与之鉴别），触酶试验阳性，氧化酶试验阳性。
（4）抗原及分型：主要有四种抗原：荚膜多糖群特异性抗原、外膜蛋白型特异性抗原、脂多糖抗原及核蛋白抗原。
根据群特异性荚膜多糖抗原不同，采用凝集反应和琼脂扩散试验可将本菌分为A、B、C、D、X、Y、Z、1916、29E和W135等。
目前，对人致病的主要是A群。
偶见8群、C群及1916群引起散发病例。
3.临床意义致病物质：菌毛，荚膜，内毒素。
所致疾病：脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎的病原菌。
主要表现发热，皮肤瘀斑，脑膜刺激症状。
存在于携带者或病人的鼻咽部，借飞沫经空气传播，冬末春初为流行高峰。
4.微生物学检验（1）标本采集：血液；瘀斑渗出液；脑脊液；鼻咽分泌物。
因本菌能产生自溶酶，易自溶，故采集的标本不宜置冰箱，应立即送检。
（2）检验方法及鉴定：1）直接涂片检查：取脑脊液离心后沉淀物涂片或刺破瘀斑血印片，干燥固定后革兰染色。
若发现中性粒细胞内（或胞外）革兰阴性双球菌，呈肾形成对排列，可初报。
2）分离培养：将标本葡萄糖肉汤增菌培养液直接接种于血琼脂平板、巧克力琼脂或EPV琼脂，置5%～10%C02环境中，35℃培养18～24h后可见圆形、灰褐色、湿润、光滑、边缘整齐、直径1～2mm的小菌落，经涂片证实为草兰阴性双球菌，并进一步根据相应的生化反应等试验予以鉴定。
3）鉴定：①细菌染色形态；②氧化酶试验阳性；③触酶试验阳性；④分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气；⑤荚膜多糖抗原直接凝集试验。
5.治疗原则：青霉素G为首选，三代头孢对脑膜炎奈瑟菌也具有很强的抗菌活性。
青霉素过敏的病人可考虑选用三代头孢或氯霉素。
（二）淋病奈瑟菌1.概念：淋病奈瑟菌简称淋球菌，是淋病的病原体，人类是其唯一的天然宿主和传染源。
2.生物学特性（1）形态与染色：本菌的形态与脑膜炎奈瑟菌很相似。
在脓汁标本中，此菌通常位于中性粒细胞内，而在慢性淋病时常位于细胞外。
从患者体内新分离的菌株可有荚膜和菌毛，经人工培养后，呈卵圆形或球形，排列不规则。
无芽胞和鞭毛。
（2）培养特性：营养要求较高，须在含有血液、血清或多种氨基酸和无机盐类物质的培养基上生长良好。
国内常用血液琼脂、巧克力琼脂、EPV琼脂等培养基。
初次分离时，须置5%～10%C02条件下才能生长。
（3）生化反应：可发酵葡萄糖、产酸，但不酵解麦芽糖（常借此与脑膜炎奈瑟菌相鉴别）。
氧化酶和触酶试验均阳性。
主要有三种抗原：菌毛蛋白抗原、脂多糖抗原和外膜蛋白抗原。
对外界抵抗力极低。
3.微生物学检验（1）标本采集：脓性分泌物，尿道拭子，宫颈口分泌物，结膜分泌物，血液。
（2）检验方法及鉴定：1）直接涂片检查：收集标本后立即涂片、革兰染色。
镜检时见中性粒细胞内数对革兰阴性双球菌，可初报。
2）分离培养：细菌培养仍是目前世界卫生组织推荐的筛选淋病患者的唯一方法。
所采集的标本应及时接种含有两种以上抗生素（万古霉素和多粘菌素等）的营养培养基（EPV）上。
淋球菌对培养基的营养要求很高，且对冷、热、干燥和消毒剂抵抗力低，故采样后须立即接种于预温的选择性培养基和非选择性培养基中，如巧克力平板，置于含5%～10%的二氧化碳环境中，35℃培养48h。
取小而透明似水滴状、无色素易乳化菌进一步鉴定。
3）鉴定：取可疑菌落进行涂片，革兰染色镜检，若见革兰阴性双球形，①生化反应：氧化酶阳性，仅分解葡萄糖产酸；②免疫学方法：荧光抗体染色法、协同凝集试验；③核酸探针杂交法。
氧化酶试验阳性，可初判，并进行相关的生化反应，如仅发酵葡萄糖而不发酵麦芽糖与蔗糖，以及30%H2O2试验阳性可与脑膜炎奈瑟菌等相鉴别。
4.临床意义：淋病奈瑟菌是常见的性传播疾病淋病的病原菌，主要通过性接触直接侵袭感染泌尿生殖道，口咽部及肛门直肠的黏膜。
如单纯性淋病、盆腔炎、淋菌型结膜炎。
5.治疗原则：一般为三代头孢菌素，氟喹诺酮类、壮观霉素可作为替代药物。
本章练习题：淋病奈瑟菌与脑膜炎奈瑟菌用哪项实验鉴别A.葡萄糖发酵试验B.麦芽糖发酵试验C.氧化酶试验D.触酶试验正确答案：BSPA是A.肠杆菌科的细菌的抗原B.葡萄球菌细胞壁的蛋白成分C.沙门菌的表面抗原D.核蛋白抗原E.链球菌属表面抗原正确答案：B鉴别肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌可用A.外斐试验B.肥大试验C.乳糖发酵试验D.菊糖分解试验E.血浆凝固酶试验正确答案：D耐甲氧西林的表皮葡萄球菌为A.MRSAB.MRSEC.MRSOD.MRNSE.SPA正确答案：BB群链球菌不引起下列哪种疾病A.败血症B.肺炎C.脑膜炎D.咽喉炎E.风湿热正确答案：E淋病奈瑟菌的重要致病因素是A.菌毛C.荚膜D.内毒素E.以上都是正确答案：A引起剥脱性皮炎的细菌是A.肺炎球菌B.链球菌C.金黄色葡萄球菌D.脑膜炎奈瑟菌E.肠球菌正确答案：C一位老年患者因外伤住院治疗，插导尿管一周后出现尿路感染。