丹参总酚酸纯化工艺研究
丹参酚酸水提取工艺的研究
７８２
天然产物研究与开发
将上述提取液按１．２．１的分析方法处理，得实 验结果，如图１。
将上述提取液按１．２．１的分析方法处理，得实 验结果，如图２。 由图２可见煎煮溶液的体积控制在药材质量的 １６倍即可达到有效成分的充分溶出。 １．２．２．３煎煮次数的影响 称取已粉碎好的丹参颗粒１０ ｇ，每次加入１６０ ｍＬ水溶液煎煮３０ ｍｉｎ，考察煎煮次数对于丹参酚酸
ａｃｉｄ．Ｆｏｏｄ
ｏｆ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ
Ｈｅｒｂａｌ协垮（中草药），Ｊ９９７，２８：６５８．６２０
Ｚｃ（蓝宗城），ｅｔ
ｃｏｎｔｅｎｔ
Ｏ／／麟融（粮油食品科技），１９９８，５：３２－３３
ｅ】【一
Ｌｕ ＤＹ（吕东阳），Ｚｈａｎｇ ＤＬ（张大雷），Ｌａｎ ａ／．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ０ｆ ｃａｐｓｕｌｅ
品。
将上述供试品按１．２．１的分析方法处理，得实 验结果，如图４。
图４不同醇沉工艺的紫外吸收谱图 Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ Ｆｉｇ．４
由图可见，随着醇沉醇浓度的升高，丹参酚酸的
倍数（Ｔｉｍｅｓ） 在２８１ ｎｍ处的吸光度
Ｔａｔ ２８１ ｎｍ
ｔＯ
ｍｅｔｈｏｄ
ｉｓ
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ｋｅｅｐ
ｔｈｅ
ｓｏａｋｉｎｇ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ
１６ ｔｉｍｅｓ
Ｓａ／ｖ／ａ ｍ／／ｔ／ｏｒｒｈ／ｚａ Ｂｇｅ ａｎｄ
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ｔｉｍｅ．Ａｆｔｅｒ
ｂｅｅｎ ｓｏａｋｅｄ ｆｏｒ ｆｏｕｒ ｔｉｍｅｓ，ｉｔ ｉｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｔｏｔａｌｌｙ．Ｗｅ ａｌｓｏ ｓｔｕｄｉｅｄ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｍｅｔｈｏｄ ｐｒｅｃｉｐｉｔｅｄ ｂｙ ａｌｃｏｈｏｌ，ａｎｄ
丹参的提取纯化实验报告
一、实验目的1. 学习丹参药材的提取和纯化方法。
2. 掌握薄层色谱法、高效液相色谱法等分离纯化技术。
3. 提高对丹参药材中主要活性成分的认识。
二、实验原理丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）为唇形科植物，其根茎入药，具有活血化瘀、通络止痛、清心除烦等功效。
丹参中含有多种活性成分，如丹参酮、丹酚酸等。
本实验采用乙醇提取法提取丹参中的有效成分，利用薄层色谱法进行初步分离，再通过高效液相色谱法进行纯化。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：丹参药材（干燥）、乙醇、正己烷、硅胶、薄层板、高效液相色谱仪等。
2. 仪器：电子天平、回流提取器、旋转蒸发仪、薄层色谱仪、高效液相色谱仪等。
四、实验方法1. 丹参提取（1）称取干燥丹参药材10g，置于回流提取器中；（2）加入50mL 95%乙醇，回流提取1h；（3）冷却，过滤，收集滤液；（4）将滤液旋转蒸发至近干，用正己烷溶解，备用。
2. 薄层色谱分离（1）制备薄层板：将硅胶均匀涂布在玻璃板上，晾干；（2）点样：将提取液点于薄层板上，晾干；（3）展开：将薄层板置于展开缸中，加入正己烷，展开至溶剂前沿；（4）显色：将薄层板取出，晾干，喷以10%FeCl3乙醇溶液，显色。
3. 高效液相色谱纯化（1）制备样品：将薄层色谱分离得到的化合物溶解于甲醇中，制成一定浓度的样品溶液；（2）色谱条件：色谱柱：C18柱；流动相：甲醇-水（体积比80:20）；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm；（3）进样：将样品溶液进样，记录色谱图。
五、实验结果与分析1. 薄层色谱分离结果通过薄层色谱分离，观察到丹参药材中存在多个斑点，说明丹参中含有多种活性成分。
2. 高效液相色谱纯化结果通过高效液相色谱纯化，成功分离出丹参中的主要活性成分，如丹参酮IIA、丹参酮IIB等。
六、实验结论1. 本实验采用乙醇提取法成功提取了丹参中的有效成分；2. 通过薄层色谱法对丹参中的活性成分进行了初步分离；3. 高效液相色谱法进一步纯化了丹参中的主要活性成分。
丹参总酚酸提取物磷脂复合物制备工艺研究
Ｔｈ ｅ ｆ ｏｒ ｍａ ｔ ｉ ｏｎ ｏｆ Ｓａ ｌ ｖ ｉ ａ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｐ ｈｅ ｎ ｏｌ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄｓ ｃ ｏｍ ｐｌ ｅ ｘ ｗｉ ｔ ｈ ｐ ｈｏ ｓ ｐｈ ｏｌ ｉ ｐ ｉ ｄ ｉ ｓ ｇｒ ｅ ａ ｔ ｌ ｙ ｉ ｎｆ ｌ ｕｅ ｎｃ ｅ ｄ ｂｙ ｔ ｈｅ ｓ ｏｌ ｖｅ ｎｔ ，ｃ ｏｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏｎ ａ ｎｄ ｔ ｅ ｍ ｐｅ ｒ ａ ｔ ｕｒ ｅ；ｔ ｈｅ ｏ ｐｔ ｉ ｍｉ ｚ ｅ ｄ ｐｒ ｅ ｐａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｓ ｆ ｅ ａ ｓ ｉ ｂ ｌ ｅ ａ ｎｄ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ．
Ｓ ｈ ｉ Ｙａ ｊ ｕ ｎ Ｗａ ｎ ｇ Ｈｕ ｉ Ｄｅ ｎ ｇ Ｈｕ ｉ ｅ ｔ ａ ｌ
ＡＢＳ ＴＲＡ ＣＴ Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ：Ｔｏ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｔ ｈ ｅ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｕ ｍ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｓ ａ ｌ ｖ ｉ ａ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｐ ｈ ｅ ｎ ｏ ｌ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ｃ ｏ ｍｐ ｌ ｅ ｘ
丹参总酚酸类成分的提取纯化工艺和质量研究_张秋燕
水平 1 2 3
表 1 丹参水溶性成份提取工艺影响因素水平考察
A 溶剂种类
B 溶剂用量/倍
C 提取时间/h
纯水
6
1
0.1 mol·L-1 盐酸
8
1.5
0.05 mol·L-1 盐酸
10
2
D 提取次数/次 1 2 3
No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 均值 1 均值 2 均值 3 极差
所用溶剂 1 1 1 2 2 2 3 3 3
362.105 168.659 254.221 193.446
表 2 丹参水溶性成分提取工艺结果直观分析
溶剂用量
提取时间
1
1
2
2
3
3
1
2
2
3
3
1
1
3
2
1
3
2
211.039
228.120
293.112
322.579
280.8349
提取次数 1 2 3 3 1 2 2 3 1
8
F 临界值 4.460 4.460 4.460 4.460
至 300 mL 超 声 ，配 成 水 溶 液 。
选 择 处 理 好 的 大 孔 吸 附 树脂 4 000
3 000 A
B
HPD100，HPD450， HPD600 ， 3 500
2 500
HPD700，HP70，HP2MGL，SP700， SP825，X -5，S -8，D4020，H103， AB -8 适 量 ， 用 纯 水 冲 洗 并 抽
关键词：丹酚酸 柱色谱 高效液相色谱 指纹图谱 doi: 10.11842/wst.2013.02.029 中图分类号：R284 文献标识码：A
丹酚酸的提取工艺
丹酚酸的提取工艺摘要：在丹参的这味中药中丹酚酸是主要的作用成分，它在抵抗动脉粥样硬化以及心肌细胞的保护等等一系列的人体疾病中具有很大的药用价值。
中药丹参中水溶性的物质提取的标准是以原儿茶醛或丹参素为主，不足的是这两种物质的含量在药材中含量较少的含量，但在丹酚酸中的主要作用物质则是丹酚酸 B。
根据丹酚酸 B的含量来讨论丹酚酸的提取工艺，以探讨最合适的工业化的方案。
关键词：丹酚酸：提取工艺；实验一、仪器与试剂1、仪器此次实验中主要用到的实验仪器有电子分析天平、天平、电子天平、离心沉淀机、旋转蒸发仪、柱温箱、实验型喷雾干燥机、泵、紫外检测器、高效液相色谱柱、超声波清洗器、pHS-25型 pH计。
2、药品与试剂此次实验主要用到的药材是干燥的丹参药材系唇形科植物根和根茎，试剂主要是乙醇、甲醇、乙腈、甲酸、D101 大孔吸附树脂、盐酸、FeCl3、丹酚酸 B对照品。
二、丹酚酸提取的工艺流程1、设计合理的实验采用均匀的选择实验因素的方法，首先我们要选择3个影响醇的提取的主要的因素：这三个因素分别是乙醇的浓度（用A来表示）、提取醇是我们花费的时间（用B来表示）、提取醇是温度的大小（用C来表示），这三个因素作为我们判断的一个原因，然后我们需要选择9个不同的乙醇的浓度，还需要选择3个不同的提取花费的时间和提取时的温度也要选择3个不同的温度、每个不同的因素，实验的时候要做3次接下来就是实验过程。
2、制备基础的实验溶液首先我们需要取100g丹参药材加入圆底烧瓶中，圆底烧瓶我们需要3000ml的，接下来下面的按表 1实验中的排好的顺序和不同的条件进行做实验，我们需要在一个保持不变温的水浴锅中加热，就会混合均匀，就会有需要的东西从药材中蒸发出来，趁着刚加热后需要进行抽干过滤这个操作，留下滤渣，然后我们需要把它再次放入圆底烧瓶，在加热，趁热的时候把他抽干过滤，这就是我们进行的第2次从药材中提取乙醇，我们抽干过滤后，会有剩下的一些溶液，需要把这两次剩下溶液倒在一块。
一种简便的丹参丹酚酸提取工艺
一种简便的丹参丹酚酸提取工艺水塔（）老醋生物科学车建途小珺于雷丕馥中才摘要：丹参中药材取自唇形科植物丹参的根，在中医临床上，丹参主要用来治疗冠心病、脑血栓、肝炎及肝硬化等。
该药长期的临床应用背景及在治疗疾病方面的明显效果，引起了国外学者对其水溶性酚类化合物的重视。
丹酚酸B是丹参水溶性成分中最主要的活性物质，其含量较高，占丹参药材的2%-8% 。
丹酚酸B的活性很强，对脂质过氧化引起的细胞膜损伤有明显的保护作用，还具有抗血小板聚集并对血栓形成的作用。
因此，丹酚酸B的提取技术的研究受到了医药界的关注。
本实验简化了丹参中丹酚酸B的提取方法，以简单低成本的提取方法得到丹酚酸B纯度较高的干粉。
实验原料和仪器1. 主要原料：丹参饮片。
本次实验使用的丹参为：中江丹参（药材批发市场）岭野生丹参（网上药店）2. 其它材料或试剂：去离子水，乙醇，10%盐酸，乙酸乙酯3. 实验仪器：电炉，水浴锅，冷凝管，真空泵，低温高速离心机，旋转蒸发仪，冷冻干燥器，以及烧杯等常用玻璃仪器。
基本提取工艺流程图提取工艺具体操作步骤1. 取丹参饮片，加10-12倍量的30%-40%的乙醇溶液，浸泡1-2小时，煮沸回流提取1.5-2小时，过滤，滤渣加8-10倍量的相同浓度乙醇溶液，煮沸回流提取1.5-2小时，过滤，将两次提取液合并。
2. 将上述提取液55℃以下浓缩至1-1.5倍量，用10%的盐酸酸化至pH为2.5-3，抽滤或离心去掉悬浮颗粒不溶物。
3. 滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，50℃以下减压浓缩回收乙酸乙酯。
4. 将浓缩后的浸膏（干粉）溶于1.5倍量去离子水中，继续浓缩至干，重复两次，即可去除产品中残留乙酸乙酯。
浓缩液取出经真空冷冻干燥，既得丹酚酸总提物。
提取物质量控制指标提取物功效成分检测方法HPLC法测定丹酚酸A、丹酚酸B、迷迭香酸、丹参素钠1.色谱条件色谱柱：Agilent Zorbax C18;流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水(30:10:1:59)；流速：1.0ml/mL；检测波长：286nm；进样量：20μL2.对照品溶液制备精密称取丹酚酸B对照品，用水溶解，并稀释成浓度为0.20mg/mL的溶液，作为对照品溶液。
丹参总酚酸提取工艺的优化
团独家 拥有 自主 知识产 权 的主导 品种 之一 ，具有 活 血 化瘀 、通脉 舒 络功能 ，用 于瘀 血 闭阻所致 的胸 痹 及 中风 、冠 心 病 、心 绞 痛 ，心 肌 梗 死 等 症 。２ ０ ０５ 年 获 得 国 家 发 明 专 利 （ 利 号 Ｚ Ｄ １ ３ １． ） 专 Ｉ２ ５３２ １ 。 ２０ ０ ６年 人选 “ 三 届 百 姓 放 心药 品 ” 十 大 中药 注 第
度 ，摇 匀 。在 ５ ０ ｎ 处 ，测 定 吸 光 度 。 以丹 酚 酸 ０ ｍ Ｂ计 ，按 线性 回归 方程计 算 。
收 稿 日期 ：２ ｏ — １一 ２ Ｏ９ Ｏ ６
作者简介 ：王小平 （ ９６一） １７ ，女 ，陕西宝鸡人 ，主管 中药师 ，讲师 ，博士 ，从事 中草药化学成分分析及新药研究 。
入 液相 色谱仪 ，记 录峰 面积 。
２ ４ 总 酚 酸 的 含 量 测 定 ．
流 动相所 用 甲醇 为色谱 醇 ，其他 试剂 如 ：乙醇 等 均为 分 析纯 ；丹 参 来 自山 东 丹参 Ｇ Ｐ基 地 ；丹 Ａ 酚酸 Ｂ （ １ ５ ２— ０ ８ ７ 由 中国药 品生物 制 品检 １１６ ２ ００ ） 定 所提 供 。
３ ２Leabharlann 第 ２期 王小平 ，等 ：丹参 总酚酸提取工艺 的优 化
Ｏ
２ ５ 正 交试验 结果分析 ．
表 方 差 分 析 表 ５ 嘟
２ ２ ２ ２
２ ５ １ 丹酚酸 Ｂ正交试验结果分析 （ ． ． 见表 ２及表 ３ ）
表 ２ 正 交试 验 结 果
詈 詈
由实验 结果 表 ４及方 差分 析结 果表 ５可 知 ，最 佳水 平 为 Ａ Ｂ ｃ咖 因 素 的 由 主 到 次顺 序依 次 为 ，各 ｃ，Ｂ，Ａ，其 中提取 时 间 、提 取次 数对 提 取结 果有 显著 影 响 ，溶 媒用 量无 显 著影 响 。故最终 的提取工 艺为 Ａ。 。 即 ６倍 量 ２ ％ 乙醇 ，提 取 ３次 ，每次 ＢＣ ０
丹参中丹酚酸B的提取工艺研究_张昀
g ,置 50 m L 量瓶中 ,加水溶解并加至刻度 ,进样测 定 ,计算。 2. 2 水提法的考察 [3 ] 2. 2. 1 影响水提法的因素水平的选择: 选择加水量 ( A)、浸泡时间 ( B)、提取时间 ( C)和提取次数 ( D) 4 个因素 ,见表 1。
表 1 水提法的因素水平 Table 1 Factors and levels of water extracting method
试验号
A
B
CD1源自1111
2
1
2
2
2
3
1
3
3
3
4
2
1
2
3
5
2
2
3
1
6
2
3
1
2
7
3
1
3
2
8
3
2
1
3
9
3
3
2
1
丹酚酸 B /% 1. 56 3. 11 3. 34 4. 63 3. 93 4. 89 4. 66 4. 75 4. 13
2. 3 超声提取法的考察 [ 4] 2. 3. 1 影响超声提取法的因素水平的选择: 选择加 水量 ( A)、浸泡时间 ( B)、超声时间 ( C)和超声次数 ( D) 4个因素 ,见表 3。
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 38卷第 8期 2007年 8月
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2. 9 加样回收率试验: 精密称取批号 J00263的利 腹丸约 3. 0 g ,平行操作 6份 ,精密加入 0. 2 mg /m L 丹参酮Ⅱ A 对照品 4 m L,制备供试品溶液 ,进样测 定 ,计算得回收率为 100. 1% , RSD为 0. 35% 。 2. 10 样品测定: 取本品共 5批 ,每批平行 2份 ,制备 供试品溶液 ,进样测定 ,记录峰面积 ,按外标法计算 , 结果见表 1。 3 讨论
药用植物丹参中丹酚酸B的提取工艺优化研究
药用植物丹参中丹酚酸B的提取工艺优化研究王甫成【摘要】[ Objective ] The research aimed to establish an efficient and economic extraction process of salvianolic acid B. [ Method ]By means of orthogonal experiment, the main influencial factors in the extraction process were analyzed to determine influencical degree and the best level. [ Result ] The best conditions of salvianolic acid B extraction was as follows:crush medicinal materials into coarse particles without soaking and put 20％ethanol in reflux with 100 ℃. [ Conclus ion] The method was efficient with a good reproducibility.%[目的]建立一种高效、经济的丹酚酸B 的提取工艺,[方法]对提取过程中涉及的主要影响因素采用正交试验方法进行分析,确定各自的影响程度和最佳水平.[结果]丹酚酸B的最佳醇提条件为:将药材粉碎成粗颗粒,投料,不经浸泡,用浓度20%乙醇于100℃回流提取.[结论]该方法提取效率高,重现性较好.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2011(039)015【总页数】2页(P8931-8932)【关键词】丹酚酸B;提取工艺;正交试验【作者】王甫成【作者单位】山东中医药大学,山东济南,205355;亳州职业技术学院,安徽亳州,236800【正文语种】中文【中图分类】S567.5+3丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根、茎，为常用中药，性微寒，味苦，归心、肝经，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦等功效［1］。
丹参酚酸的工艺路线
丹参酚酸的工艺路线丹参酚酸，是一种具有广泛药理活性的天然化合物，被广泛应用于中医领域。
本文将介绍丹参酚酸的工艺路线，包括丹参酚酸的提取、纯化和应用等方面。
一、丹参酚酸的提取丹参酚酸是从丹参中提取得到的，丹参是一种常见的中药材，具有活血化瘀、消肿止痛等功效。
丹参酚酸是丹参中的一种主要有效成分，具有抗氧化、抗炎、抗血小板聚集等多种生物活性。
丹参酚酸的提取一般采用水提法，即将切碎的丹参材料加入适量的水中，经过浸泡、煮沸等步骤，将丹参酚酸溶解在水中。
然后，通过离心、过滤等操作，将提取液中的杂质去除，得到含有丹参酚酸的提取液。
二、丹参酚酸的纯化提取液中含有丹参酚酸等多种成分，需要进行纯化才能获得纯度较高的丹参酚酸。
目前常用的纯化方法有结晶法和色谱法。
结晶法是将提取液中的丹参酚酸溶液进行浓缩，使其达到过饱和状态，然后通过降温或添加溶剂等方式，使丹参酚酸结晶出来。
通过反复结晶和过滤，可以获得较纯的丹参酚酸。
色谱法是利用丹参酚酸在特定条件下与其他成分之间的差异性，通过色谱柱进行分离纯化。
常用的色谱方法有薄层色谱、高效液相色谱等。
三、丹参酚酸的应用丹参酚酸具有多种药理活性，被广泛应用于医药领域。
丹参酚酸可以用于治疗心脑血管疾病，如冠心病、脑梗塞等。
它可以通过抑制血小板聚集、改善血液流变学参数等途径，起到保护心脑血管的作用。
丹参酚酸还具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。
它可以抑制炎症反应、减轻氧化应激、抑制肿瘤细胞的增殖等。
因此，在炎症性疾病、氧化应激性疾病以及肿瘤等方面具有广阔的应用前景。
四、丹参酚酸的药物开发丹参酚酸作为一种天然产物，具有较好的安全性和药效。
近年来，丹参酚酸及其衍生物的药物开发受到了广泛关注。
一方面，科研人员通过对丹参酚酸结构的修饰和优化，开发出更具活性和选择性的新药物。
另一方面，丹参酚酸可以与其他药物进行联合应用，发挥协同作用，提高治疗效果。
总结：丹参酚酸的工艺路线包括提取、纯化和应用等方面。
滇丹参中丹酚酸B提取及纯化工艺研究
滇丹参中丹酚酸B提取及纯化工艺研究目的：优选滇丹参提取及絮凝沉降法纯化丹酚酸B的最佳工艺。
方法：以滇丹参主要成分丹酚酸B含量为评价指标，采用正交试验优选提取及纯化的最佳条件。
结果：滇丹参的最佳提取条件为8倍量水，煎煮2次，每次1 h；采用ZTC11+1为絮凝沉降剂，药液浓度在1 g/5 mL，絮凝剂的用量是B∶A=4∶2，搅拌速度为100 r/min时，得到的精制液中丹酚酸B含量最高。
结论：使用絮凝澄清的方法精制水提液，用量少，污染小，丹酚酸B的含量损失较少。
标签：滇丹参；丹酚酸B；ZTC1+1型絮凝剂滇丹参为唇形科鼠尾草属植物云南鼠尾草（salvia yunnanensis C.H.Wright）的干燥根及根茎，味微苦，性微寒。
具有调经、活血、散瘀、镇静止痛之功，用于月经不调、风湿痹痛、子宫出血、吐血等症［1］。
现代药理作用研究表明，滇丹参具有增加冠状动脉血流量，防止血栓形成，抑制血小板聚集，降低血黏度，消除自由基，改善血管内皮功能，抑制血管损伤后的内膜增生等功能，在防治冠心病及防治血管成形术后血管再狭窄中均有重要作用［2］。
滇丹参主要含有脂溶性的丹参酮及水溶性的酚酸类成分，水溶性成分中丹酚酸B的含量较高，为3分子丹酚素与1分子咖啡酸缩合而成。
丹酚酸B活性强，具有强烈的清除自由基和抗氧化作用。
本文以丹酚酸B的含量为评价指标，对滇丹参的提取工艺及絮凝澄清纯化工艺进行研究。
1 仪器与试药1.1 仪器Waters e2695型高效液相色谱仪（美国）；FB124型电子分析天平（上海舜字恒平科学仪器有限公司）；SK250HP型超声提取器（上海科学仪器有限公司）。
1.2 试药丹酚酸B对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111562-200302）；滇丹参（购于云南绿生药业有限公司）；ZTC1+1天然澄清剂（购于天津正天成澄清技术有限公司）；乙腈、甲醇为色谱纯；水为去离子水；其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果2.1 丹酚酸B含量测定2.1.1 对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品适量，加75%甲醇制成每1 mL含0.192 mg的溶液，即得。
丹参总酚酸类成分的提取纯化工艺和质量研究
丹参总酚酸类成分的提取纯化工艺和质量研究
张秋燕;张盈颖;崔翰明
【期刊名称】《世界科学技术-中医药现代化》
【年(卷),期】2013(015)002
【摘要】目的:提取纯化丹参中水溶性酚酸类有效成分,并对其进行质量分析.方法:以HPLC检测丹酚酸B的含量,采用单因素和正交试验优化丹参的提取工艺;采用大孔吸附树脂法纯化丹参水溶性成分,并对丹参及其提取物的水溶性成分进行HPLC 指纹图谱研究,制定相应质量标准.结果:丹参总酚酸提取物中主要水溶性成分丹酚酸B的提取转移率达85%,提取纯化物中含丹酚酸B>65%,其他丹酚酸12%;相应HPLC指纹图谱分析方法可有效分析和鉴别主要水溶性成分的特征峰.结论:该方法能够快速高效分离纯化丹参水溶性成分,得到较高纯度的丹参总酚酸;HPLC指纹图谱分析方法的精密度、重复性良好.
【总页数】6页(P299-304)
【作者】张秋燕;张盈颖;崔翰明
【作者单位】中国中医科学院广安门医院,北京,100053;中国中医科学院广安门医院,北京,100053;中国中医科学院广安门医院,北京,100053
【正文语种】中文
【中图分类】R284
【相关文献】
1.丹参酚酸类成分生物合成途径研究进展 [J], 韩立敏
2.SFE-CO2萃取滇丹参中总丹参酮成分工艺研究 [J], 卫强;梁晓原
3.HPLC-MSn法筛选丹参中丹酚酸类成分的SPE预处理工艺 [J], 裴渭静;郑晓晖;赵新锋;赵文明
4.丹参、红花不同提取工艺对酚酸类化学成分的影响 [J], 王小平;刘峰;韩翠;马存德
5.云南丹参酚酸类成分水醇法制备工艺的初步研究 [J], 郭莹;梁晓原;念维林
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丹参中丹酚酸B纯化工艺研究
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丹参总酚酸纯化工艺研究摘要：目的：优化并确定丹参总酚酸大孔树脂纯化的最佳工艺。
方法：以丹参酚酸B含量为考察指标，对大孔树脂纯化工艺参数进行了考察。
结果：研究确定大孔吸附树脂最佳工艺条件为：选用AB-8树脂，以10倍药材量，30%乙醇作为洗脱溶媒，洗脱速度以1mL/min为宜，丹参样品上样浓度为0.5g生药/mL，吸附流速以1mL/min，最大上柱体积为60mL为宜。
结论：大孔树脂吸附法是丹参总酚酸纯化工艺的有效方法。
关键词：丹参；丹参总酚酸；大孔树脂引言丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bunge的干燥根茎，其有效成分包括水溶性成分和脂溶性成分[1]。
丹参是活血化瘀的常用中药，广泛应用于治疗心血管疾病的中药复方中。
水溶性丹参酚酸类是丹参的主要有效部位之一,具有抗肝纤维化、抗动脉粥样硬化和改善记忆功能障碍等作用[2]，是治疗冠心病的主要有效成分[3-4]，其中丹酚酸B约70%。
丹参水溶性成分的提取方法多采用水提醇沉法, 此方法溶剂消耗大，有效成分有明显损失。
本研究采用分离效果较好的大孔树脂分离技术，对丹参总酚酸进行纯化研究。
1 材料与方法1.1材料与仪器对照品丹参酚酸B，中国药品生物制品检定所提供；丹参购于江西省樟树中药材市场；AB-8，D101， NKA-9型大孔吸附树脂；Agilent 1200型液相色谱仪，VWD检测器，含在线真空脱气机、四元梯度泵、柱温箱；色谱数据的采集与处理由Agilent 化学工作站完成；超声波清洗仪；电子天平（十万分之一）；甲醇为分析纯和色谱纯两种，乙醇；甲酸；水为重蒸馏水等。
1.2 色谱条件与系统适应性试验采用HPLC法测定样品中丹参酚酸B的含量。
取丹参酚酸B对照品适量，精密称定，加流动相制成1mL含丹参酚酸B149.76µg的对照品溶液，分别精密吸取2、4、6、8、12、16、20µL，注入色谱仪，按照以下方法测定：色谱柱：迪马DiamonsiLTM(钻石)C18（5 m，250×4.6mm）；流动相：甲醇－乙腈-0.4%甲酸（37∶7∶56）；检测波长：285nm；柱温：30℃；流速：1.0mL/min。
以对照品的浓度（µg/ml，X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线。
得到丹参酚酸B线性方程为：y=1443.8x-4.3685(r=0.9997)，线性范围为0.3744～3.744μg。
该方法线性关系良好，回收率为99.89%。
2 纯化工艺研究2.1纯化方法的比较据文献[5]报道，醇沉法是中药水提取液常用的精制方法，但其对化学成分影响较大，近年来，随着大孔树脂吸附法的兴起，取代传统醇沉法的研究越来越多。
为了确定较好的精制方法，本研究对这两种方法进行了比较，结果见表1。
（1）醇沉法取丹参提取样品液（1g生药材·mL-1）800mL，均分为8份，每份100mL，每份相当于100g生药，加乙醇至含醇量分别为50%、60%、70%、80%，每一浓度平行各做2份。
冷藏过夜，抽滤，滤液定容到500mL，精密吸取5mL至100mL量瓶中，用水稀释至刻度，测定浸膏得率，并用HPLC法测定丹酚酸B的含量。
（2）大孔树脂吸附法取丹参提取样品液（1g生药材·mL-1）200mL，均分为2份，每份100mL，每份相当于100g生药，分别离心（4000r/min，15min），倒出上清液，加适量的水返溶沉淀部分，离心，合并两次离心液，上AB-8型大孔吸附树脂柱（生药量：树脂量=2：1）。
待药液流尽后，加入蒸馏水洗到Molish反应为阴性，再用30%的乙醇洗脱有效成分。
将洗脱液浓缩，定容至500 mL，精密吸取5 mL至100mL量瓶中，用水稀释至刻度，测定浸膏得率，并用HPLC法测定丹酚酸B的含量。
表1 不同的精制方法的比较研究精制方法浸膏得率（%）转移率（%）纯度（%）平均（%）大孔树脂4.30 77.50 39.2239.40 4.36 79.42 39.5980%醇沉12.36 64.89 11.4211.2712.03 61.42 11.1170%醇沉22.88 61.89 5.895.91 22.93 62.50 5.9360%醇沉30.88 83.73 5.905.89 30.11 81.31 5.8850%醇沉38.95 89.92 5.025.01 38.45 88.36 5.00醇沉法浸膏得率明显高于大孔树脂吸附法，且提取物中丹酚酸B的含量较低，不符合除杂精制的要求。
大孔树脂吸附法对丹酚酸B保留率和醇沉法没有很大的差异，但提取物中丹酚酸B的含量将近40%，达到了实验精制的要求，故选用大孔树脂吸附法纯化精制丹参水溶性成分。
2.2大孔树脂纯化工艺参数考察与优化2.2.1大孔树脂的预处理与再生预处理：将大孔树脂用95%乙醇浸泡24小时，再用95%乙醇洗至与水(1：2)混合不产生浑浊，用水漂洗除去杂质并洗至无醇味，以水湿法装柱，用大量的蒸馏水冲洗后备用。
强化再生：使用过的树脂先用95%乙醇洗至流出液无色，用水洗至无醇味，再加入高于树脂层10CM的3%-5%盐酸溶液浸泡2-4小时，然后进行淋洗通柱继用3-4倍树脂体积同浓度的盐酸溶液通柱,然后用净水洗至接近中性；再用3%-5%的氢氧化钠溶液浸泡4小时。
最后淋洗通柱,用同浓度的3-4倍树脂体积的氢氧化钠溶液通柱，最后用净水清洗至pH值为中性,备用。
2.2.2 树脂筛选将0.5g生药/mL(丹酚酸B的浓度为10.88mg/mL)样品液分别通过3种不同型号的已预处理好的树脂柱，进行动态吸附。
用三氯化铁试剂检查流出液，待反应呈阳性时，停止上样，记录上柱量，计算总酚酸吸附量。
树脂柱用水洗脱至洗脱液近无色，再用95%乙醇洗脱至洗脱液无色，测定洗脱液中丹酚酸B含量，将乙醇洗脱液蒸干，称重，计算回收率。
结果见表2。
表2 树脂筛选结果树脂型号树脂用量（g）上样体积(mL)浸膏总量(mg)丹酚酸B含量(mg)吸附量酚酸B回收率(%)醇洗物酚酸B含量(%)药材计(g/g)指标成分计(mg/g)AB-8 14.9 27 639.75 264.17 0.91 19.72 89.93 41.29 D101 15.0 22 532.50 208.48 0.73 15.96 87.10 39.15 NKA-9 15.0 15 157.75 20.24 0.50 10.88 12.40 12.83 注：吸附量为单位干树脂吸附的总量，单位g/g或mg/g。
下同。
由表2可知，在筛选的3种不同极性的大孔树脂中，用弱极性的AB-8树脂分离纯化丹参酚酸B的效能明显优于其它2种树脂，故选用AB-8树脂纯化丹参水溶性成分丹参酚酸。
2.2.3 上样浓度的确定将不同浓度样品液分别通过AB-8树脂柱(20g干树脂)进行动态吸附。
用三氯化铁试剂检查流出液，待反应呈阳性时，停止上样，记录上柱量，计算总酚酸吸附量。
结果见表3。
从表3可知，上样浓度以0.5g生药/mL（丹酚酸B的浓度为10.88mg/mL）为宜。
表3 上样浓度确定上样浓度(g/mL) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0吸附量以药材计(g/g)0.83 0.84 0.86 0.92 0.95 0.87 0.77 0.76 0.72 0.652.2.4 吸附流速确定将浓度为0.5g生药/mL的样品液通过AB-8树脂柱(20g干树脂)，分别以1、2和3mL/min 的流速进行动态吸附。
用三氯化铁试剂检查流出液，待反应呈阳性时，停止上样，记录上柱量，计算总酚酸吸附量。
结果见表4。
从表4可知，吸附流速以1mL/min为宜。
表4 吸附流速确定吸附流速(mL/min) 1 2 3吸附量以药材计(g/g) 0.93 0.80 0.682.2.5 泄漏曲线考察按上述所确定的吸附条件，取样品液通过AB-8树脂柱（36g干树脂），进行动态吸附，弃去前10mL流出液后开始分段收集。
每10mL收集1份，共收集11份。
每份流出液精密吸取1mL，加蒸馏水稀释至50mL，测定丹酚酸B的含量。
结果见表5。
据此绘制泄漏曲线(图1)。
表5 泄漏曲线考察结果流份(序号) 体积(mL) 丹酚酸B的浓度(mg/mL)1 20 0.0392 30 0.0113 40 0.0164 50 0.0605 60 0.3236 70 1.6687 80 2.9718 90 4.0139 100 5.78010 110 7.07511 120 7.165图1 泄漏曲线从测定结果和泄漏曲线可知，第5份丹酚酸B浓度开始急剧增大，说明此时丹酚酸开始泄漏，故确定样品液最大上柱体积为60mL，计算丹酚酸B最大吸附量为18.65mg/g，相当于0.83g生药材/g干树脂。
2.2.6 洗脱溶媒的选择按上述所确定的吸附条件，取样品液(0.5g生药/mL)30mL上AB-8大孔树脂柱(30g干树脂)，依次用蒸馏水200mL，10%乙醇、20%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇和95%乙醇各100 mL梯度洗脱，蒸馏水洗脱液收集50mL4份，10%乙醇、20%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇洗脱液分别收集50mL4份。
测定丹酚酸B含量，以瓶号和丹酚酸B含量为坐标绘制洗脱曲线，见图2。
1-4号水洗脱液5-8号10%乙醇洗脱液 9-12号20%乙醇洗脱液 13-16号30%乙醇洗脱液17-20号50%乙醇洗脱液 21-24号70%乙醇洗脱液 25-28号95%乙醇洗脱液图2 丹酚酸B大孔树脂吸附梯度洗脱曲线图梯度洗脱曲线显示：丹酚酸B主要集中在30%乙醇以前的洗脱液中，其中10%，20%和30%的洗脱液中丹酚酸B总量占全部醇洗脱的88.7%，而三者当中30%乙醇洗脱的解吸速度最快，故选用30%乙醇作为洗脱溶媒。
2.2.7 洗脱流速确定按上述所确定的吸附条件进行动态吸附后，AB-8大孔树脂柱(30g干树脂)先分别用水洗脱至洗脱液近无色，再以50%乙醇为洗脱剂，分别以1、2和3mg/mL的流速进行洗脱。
分别测定乙醇洗脱物中丹酚酸B含量。
结果见表6。
从表6可知，洗脱流速以1mL/min为宜。
表6 洗脱流速的比较洗脱流速（mL/min）洗脱剂用量(mL)浸膏得率(mg)丹酚酸B含量(mg)丹酚酸B含量(%)1 300 620 255.43 41.202 545 644 239.77 37.233 700 690 235.01 34.062.2.8 洗脱曲线考察按上述所确定的吸附和洗脱条件，取样品液50mL(0.5g生药/mL)进行上柱(30g干树脂)、吸附和洗脱，分段收集洗脱液。
收集水洗脱液2份，每份为125mL，30%乙醇洗脱液13份，每份25mL，共收集15份。