质粒提取试剂盒-说明书-翻译
omga质粒提取试剂盒_说明书_翻译
omgaE.Z.N.A.质粒试剂盒操作规程说明书（译版）1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的2-5ml的LB或YT培养基进行培养。
37℃强力摇动（~300rpm）孵育20-24h。
使用10-20ml培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。
强烈推荐使用endA阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。
此类菌株包括DH5α和JM109。
2. 将1.5-5.0ml细菌菌液室温13,000 g离心3min。
轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。
3. 加入200μl 的溶液Buffer T 1/Rnase A重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。
充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA非常重要。
4. 加入200μl溶液Buffer T 2，倒置、转动试管5-10次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。
室温孵育5min。
不要用力混合，以免使染色体DNA断裂，减低质粒的纯度。
该步反应不要超过5min。
溶液II不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。
5. 加入200μl溶液Buffer T 3，立即倒置试管15-20次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。
冰上孵育5min。
为避免形成局部沉淀，加入溶液III后应立即、充分混匀溶液。
6. 4℃13,000 g离心10分钟。
白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。
7. 小心翼翼的吸取上清液，加入到新的1.5ml离心管（不是试剂盒提供的）中。
加入200ul 用异丙醇稀释的BAC 结合液（缓冲液），颠倒3-5次充分混匀。
BAC 结合液使用前必须用96%-100%的异丙醇稀释，详细的说明见瓶壁或第三页说明书8.加入样本DNA（HiBind DNA MicroElute）到提供的2ml收集管中。
9. 室温8000g离心30s，丢弃收集管，将离心柱放入新的收集管中。
10. 将收集柱放回收集管并加入750ul SPM buffer（用乙醇稀释），室温8000g离心30s，丢弃收集管，将离心柱放入新的收集管中。
QIAGEN Plasmid Kits(德国凯杰质粒提取试剂盒说明书中文翻译)
QIAGEN Plasmid Mini,Midi,and Maxi Kits（说明书中文翻译版）Plasmid Midi Kit(cat.Nos.12143and12145)The kit can be stored at room temperature(15~25℃)for up to2years.使用前的注意事项：（1）将Rnase A solution加入Buffer P1中，混匀，2~8℃储存。
（2）可选步骤：按1:1000的比例将LyseBlue试剂加入到Buffer P1中。
（3）使用前在4℃预冷Buffer P3，检查Buffer P2是否出现SDS沉淀。
（4）需准备好异丙醇和70%酒精。
（5）标志：圆形代表小提试剂盒；三角形代表中提试剂盒；正方形代表大提取试剂盒。
表1推荐LB培养物体积试剂盒高考倍质粒低拷贝质粒小提3mL不推荐中提25mL100mL大提100mL500mL具体操作步骤：1.收取过夜培养的细菌培养物，在4℃条件下6000×g离心15min。
2.（弃去上清液）使用4mL Buffer P1重悬菌体沉淀。
3.加入4mL Buffer P2，颠倒4~6次使彻底混匀，室温（15~25℃）孵育5min。
注：如果使用了LyseBlue试剂，溶液会变蓝。
4.加入4mL预冷过的Buffer P3，颠倒4~6次使彻底混匀，冰上孵育15min。
注：如果使用了LyseBlue试剂，溶液混匀后直至蓝色消失。
5.在4℃条件下≥20000×g（14000×g）离心30min。
6.平衡柱子QIAGEN-tip100：加入4mL Buffer QBT，通过重力流使液体过柱。
7.将第5步的上清液转移至QIAGEN-tip中，使其依靠重力流通过柱中的树脂。
8.使用10mL Buffer QC洗涤QIAGEN-tip，使Buffer QC依靠重力流通过柱中的树脂。
洗涤2次。
质粒提取试剂盒说明书
质粒提取试剂盒说明书质粒提取的质量和得率受多种因素影响，既和质粒本身的性质以及拷贝有关，也和菌液的状态及实验操作有关，因此在质粒提取中的一些实验要点显得就极为重要了。
质粒提取这看似简单的实验，却暗藏杀机，下面我们来看一下在质粒提取过程中那些习以为常的实验操作中的“误会“。
通常我们会认为越多的菌液或是越浓的菌液提取的质粒会越多，但实际实验中结果并非如此。
良好菌液的标准：按1：1000的比例将菌液接种至培养基中，摇菌时间在8-12个小时，不超过16个小时。
菌液均匀悬浮于培养基中，无凝块、无沉淀，菌液的OD600吸光值在0.8-1.0之间，不超过1.2。
在提取质粒后进行凝胶电泳，如果在在超螺旋质粒的下方出现弥散条带，则是由于忘记加入RNaseA或RNaseA消化不充分，不完全降解的RNA与质粒共同被提取出来。
加入RNaseA的两个阶段：在使用试剂盒提取质粒时，菌液重悬时在P1溶液中加入RNaseA提取质粒后，在质粒溶液中加入RNaseA（试剂盒或溶液法）RNaseA的使用方法：RNaseA在质粒中的使用终浓度为20μg/ml经RNaseA孵育的质粒，需要进行纯化去除残留的RNaseA如何判断我们所使用的菌体量是否合适呢？在裂解时经几次颠倒混匀后，裂解液仍然为浑浊状态，说明未被裂解的菌体仍然悬浮在裂解液中，而充分裂解的菌体，溶液于裂解液中，裂解液呈现为澄清，质粒充分释放。
质粒小提试剂盒适合1-5 ml菌体的提取小提中量试剂盒适合5-15 ml菌液的提取中量提取试剂盒适合50-100 ml菌液的提取大量提取试剂盒适合100-200 ml菌液的提取如果我们想要增加提取的菌体量，也要相应提高所加入的裂解液体积。
质粒提取试剂盒说明书
质粒抽提：质粒抽提方法即去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。
实验原理：提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。
详细内容请参考《分子克隆实验指南》。
另外，复旦大学生化与分子生物学实验室一篇文章，提供了质粒提取机理的详细解说。
碱裂解法人们使用碱与SDS裂解法从E. coli（大肠杆菌）中分离制备质粒DNA已有30多年的历史。
将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。
尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏，闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离，这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。
只要OH-处理的强度和时间不要太过，当pH值恢复到中性时，DNA双链就会再次形成。
在裂解过程中，细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物，后者被十二烷基硫酸盐包盖。
当用K+取代Na+时，复合物会从溶液中有效地沉淀下来，离心除去变性剂后，就可以从上清中回收复性的质粒DNA。
在SDS存在的条件下，碱水解是一项非常灵活的技术，它对E. coli的所有菌株都适用，并且其细菌培养物的体积可以从1-500mL 以上。
煮沸法煮沸法是将细菌悬浮于含有Triton X-100和能消化细胞壁的溶菌酶的缓冲液中，然后加热到100℃使其裂解。
加热除了破坏细菌外壁，还有助于解开DNA链的碱基配对，并使蛋白质和染色体DNA 变性。
但是。
闭环质粒DNA链彼此不会分离，这是因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构。
当温度下降后，闭环DNA的碱基又各就各位，形成超螺旋分子，离心除去变性的染色体DNA和蛋白质，就可从上清中回收质粒DNA。
QIAGEN最新试剂盒质粒大提操作步骤(翻译版)
QIAGEN EndoFree Plasmid Maxi KitCatalog numbers 12362 室温下15-25度存放2年。
在开始之前作如下准备1）按照说明把RNase A加到Buffer P1 中，混匀，放到2-8度储存。
选作：按照1:1000的比例把LyseBlue 加到Buffer P12）pre-chill Buffer P3 4°C存放。
3）检查Buffer P2 是否有SDS沉淀物，可以放到37℃短暂温热以便溶解分子沉淀物。
4）准备异丙醇。
5）用试剂盒提供的无内毒素的水中加入40ml的96-100%的酒精。
大量质粒提取过程在LB培养基中种植转化的E.coli菌。
使用100ml（高复制数的质粒）或者250ml（低复制数的质粒）过夜培养。
操作步骤如下1.收获LB培养过夜的细菌，在6000g，4℃条件下离心15min。
2.加入10ml Buffer P1（根据SBI要求加倍，用20ml）重悬细菌。
3. 加10ml Buffer P2（根据SBI要求加倍，用20ml），剧烈晃动离心管4-6次使其彻底混匀，室温放置5min。
如果使用了LyseBlue试剂，溶液应该变成均匀蓝色。
4.在孵育期间，打开针口的密封盖.并把过滤器放到合适的架子上。
5.加入10ml冰浴的Buffer P3（根据SBI要求加倍，用20ml）到此溶菌产物中，剧烈晃动离心管4-6次使其混匀。
如果加入了LyseBlue试剂，混匀试剂直到没有颜色。
6.将溶菌产物倒入针口密封的过滤器中，室温放置10min，不要插入活塞。
打开针口的密封盖，轻轻挤压活塞将溶菌产物过滤到一新的50ml离心管中。
7. 加2.5ml Buffer ER到过滤的溶菌液中，充分混匀10次后冰上孵育30min。
8.将QIAGEN-tip 500的柱子挂在另一离心管上，加入10ml Buffer QBT，让管中溶液通过重力滴下排空。
9.将第7步冰上孵育的溶菌液加入QIAGEN-tip柱子中让其透过树脂慢慢滴下。
GENMED 无内毒素小量质粒抽提试剂盒 产品说明书(中文版)
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS60007.3 v.A GENMED无内毒素小量质粒抽提试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED无内毒素小量质粒抽提试剂是一种旨在通过化学和生物裂解细胞、 沉淀、亲和树脂过滤、萃取来达到脱盐、去内毒素、去蛋白、去杂质小分子的纯化无内毒素质粒DNA的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种质粒/柯斯质粒DNA样品的制备，OD260/280在1.8-2.0之间。
产物可用于各种后续分子生物学操作。
产品即到即用，性能稳定，操作方便迅速，提取效率和纯化程度高。
技术背景内毒素（Endotoxin）是一种脂多糖（Lipopolysaccharides；LPS），革兰氏阴性细菌细胞膜的组成成分。
在质粒纯化过程中，细菌裂解释放出内毒素，伴随着质粒，严重干扰后续真核细胞的转染，尤其对于敏感的细胞株。
GENMED无内毒素小量质粒DNA制备技术综合了酶解、碱裂、煮沸等优势元素，融入了特异亲和树脂充分有效地使细菌中核酶、PCR反应抑制剂失活，并清除内毒素（低达<0.1 EU/微克）以及非DNA 分子，其效率和纯度都出乎其上。
产品内容GENMED混匀液（Reagent A）毫升GENMED裂解液（Reagent B）毫升GENMED平衡液（Reagent C）毫升GENMED去毒液（Reagent D）毫升GENMED去干扰剂（Reagent E）微升GENMED沉淀液（Reagent F）毫升GENMED清理液（Reagent G）毫升GENMED保存液（Reagent H）毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED混匀液（Reagent A）和GENMED去干扰剂（Reagent E）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5和2毫升离心管：用于样品操作的容器微型台式离心机：用于沉淀核酸涡旋震荡仪：用于混匀反应物37℃恒温水槽：用于孵育反应物1．加入毫升含质粒的细菌到毫升离心管（注意：确保细菌量OD600＝ ;如果细菌量不足，影响质粒提取）2．放进微型台式离心机离心秒，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）3．小心抽去上清液4．加入微升GENMED混匀液（Reagent A），涡旋震荡少许，使细菌颗粒混匀5．加入微升GENMED裂解液（Reagent B），轻轻混匀6．加入微升GENMED平衡液（Reagent C），强力涡旋震荡秒7．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）8．小心移取微升上清液到新的毫升离心管，避免絮状物9．同时移取微升GENMED去毒液（Reagent D）到另一个新的毫升离心管（注意：参见注意事项3和4）10．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）11．小心抽去上清液12．加入微升实验步骤的上清液13．涡旋震荡秒14．平放在平式摇荡仪上孵育分钟，速度为RPM15．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）16．小心移取微升上清液到新的毫升离心管，避免黑色小粒17．加入微升GENMED去干扰剂（Reagent E），混匀18．放进℃恒温水槽孵育分钟19．加入微升GENMED沉淀液（Reagent F）20．涡旋震荡秒21．放进微型台式离心机离心分钟，速度为g（例如eppendorf 5415D，RPM）22．小心抽去上清液23．加入微升GENMED清理液（Reagent G）24．放进微型台式离心机离心分钟，速度为0g（例如eppendorf 5415D，RPM）25．小心抽去上清液26．空气中晾干27．加入0微升GENMED保存液（Reagent H）28．放进℃冰箱里备用注意事项1．本产品为20次操作2．本产品采用特殊树脂法3．使用GENMED去毒液（Reagent D）前，充分混匀4．使用1毫升枪头，将枪头尖端部分剪去，用于移取GENMED去毒液（Reagent D）5．细菌量是个重要因素：通常1毫升细菌可获得1－5微克无内毒素质粒6．如果需要制备各种数量的细菌质粒/柯斯质粒，可订购中量和大量规格7．本公司提供GENMED RNA清除试剂盒（GMS20059）和GENMED去内毒素试剂盒（GMS20067）8．本公司提供系列质粒提取试剂产品1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定去内毒素和纯化程度高使用承诺杰美基因秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。
提质粒试剂盒说明书
质粒大提试剂盒说明书DI1120-10（10次）RNaseA（10mg/ml）600μl溶液Ⅰ60ml溶液Ⅱ60ml溶液Ⅲ80ml漂洗液（浓缩液）2×15ml洗脱缓冲液30ml吸附柱10个收集管（50ml）10个说明书1份产品简介：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的特性提取质粒DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白质及细胞中其他有机化合物，一般从20-50ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取200-300μg纯净地高拷贝质粒DNA，提取率达85-90％。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
注意事项：在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1、溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（可将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀置于2-8℃保存。
如果菌液量太大，超过50 ml，会造成RNＡ消化不完全，可先加入500μl RNaseA，提出的质粒中再加入余下的100μl，2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在漂洗液中加入无水乙醇配制成工作液（如向15ml的漂洗液中加入60ml的无水乙醇）。
3、使用前请先检查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出现混浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，待溶液恢复澄清后再使用。
4、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后应立即盖紧盖子。
5、如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心。
操作步骤：1、收集50-100ml过夜培养的菌液11000rpm离心10分钟，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入5ml溶液Ⅰ（请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入5ml P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
ZYMORESEARCH质粒提取试剂盒说明书
ZYMORESEARCH质粒提取试剂盒说明书预期用途
本试剂盒可用于提取咽拭子样本中人上皮细胞、细菌和真菌的DNA。
本试剂盒提供的裂解液能快速有效裂解细胞，裂解产物能够直接用于PCR 扩增，并且灵敏度高，特异性强，省去了繁琐的核酸提取与纯化步骤，实现快速PCR检测。
对于病原微生物检测，流行病学调查、菌群调查及其它一些以口腔微生物为样本的核酸检测都非常适用。
操作步骤
1、待检拭子样本直接置于200IFatlyeL1中，充分搅拌洗脱拭子上的样本，在管壁挤压数次后弃拭子；
2、吹打混匀，95℃孵育5min；
3、孵育后的样本12，000rpm离心2，3min，上清可直接用于PCR扩增，上清如不立即使用，需置于-20℃长期保存。
推荐使用咽拭子DNA快速提取扩增试剂盒（荧光PCR法），货号MKNJGNSWDLAQP008。
注意：
离心后的上清加入PCR反应体系的量不宜超过总体积的5%。
如偏好较小体积的反应体系，可将裂解产物稀释5倍或10倍后用作模板；
样本要求
用专用采样拭子，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将拭子放采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥。
以上标本可立即用于测试，也可放置在-20℃条件下长期保存。
注意事项
2、如样本中扩增反应抑制物较多时，可将裂解后的上清稀释5倍作为模板，进行PCR扩增。
3、实验完毕用1%的次氯酸钠或75%酒精处理工作台和移液器。
质粒小提试剂盒使用说明书
质粒小提试剂盒I简明步骤（PD1211）（详细内容请参考英文说明书）I.实验前准备II.注意事项RNase A: 使用前将提供的所有RNase A瞬时离心后加入Buffer A1, 使用后将Buffer A1/RNase A置于4o C保存。
质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer 和Elution Buffer.转化菌:若为-70o C甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
切勿直接取冻存的菌种进行培养。
DNA Wash Buffer*: 使用前请将8 mL (PD1211-00)或48 mL(PD1211-01)或216 mL (PD1211-02) or 90 mL (PD1211-03) 96-100%乙醇加入DNA Wash Buffer。
Buffer B1: 在低于室温时会沉淀，请于50o C左右水浴加热至沉淀完全溶解，溶液澄清，使用后保证Buffer B1瓶盖旋紧。
在室温下（22-25o C）进行所有离心操作。
III.操作步骤1.接种新鲜的单个菌落到1-5 mL的LB培养基（含适量抗生素），37o C震荡培养14-16小时。
室温下10,000 xg离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
注：残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分，第5步离心后沉淀较松，不能有效吸取上清。
注：本说明书中的操作程序适用于标准LB （Luria Bertani）培养基培养12-16 小时后，OD600（细菌密度）在2.0-3.0之间的菌液。
若采用的是富集培养基，例如TB 或2×YT，请注意保证OD600不超过3.0。
2.加入250 µL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液枪或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。
注：细菌细胞如果没有充分悬浮均匀，将导致菌体裂解不完全，从而降低产量。
质粒大量抽提试剂盒使用说明书( 质粒大量抽提试剂盒使用说明书
宁波保税区西区创业大道7号2C-1,315800, 电话：+86-574-86822306 传真：+86-574-26893101, sales@质粒大量抽提试剂盒使用说明书质粒大量抽提试剂盒使用说明书（（离心法离心法））产品编号 产品名称包装 DNAP002质粒大量抽提试剂盒（离心法）6×包装清单包装清单：：Solution Ⅰ（溶液Ⅰ） 60ml Solution Ⅱ（溶液Ⅱ） 60ml Solution Ⅲ（溶液 Ⅲ） 84ml Wash Solution （冲洗液） 21ml Elution Buffer （洗脱液）9ml Affinity Column （质粒纯化柱）6个 Collection Tube （废液收集管） 6个 Instrution （说明书）1份操作步骤操作步骤：：1. 取40ml 过夜培养菌液，放于Collection Tube 中，11,000－13,000rpm 离心2分钟，离心速度低时应适当延长离心时间。
2. 弃上清，再加入40ml 菌液，重复步骤1。
弃上清，离心1分钟，用吸头吸干多余液体。
3. 加10 ml 含RNase A 的Solution Ⅰ，用吸头冲打沉淀或用振荡器使菌体充分混悬。
4. 加10 ml Solution Ⅱ，上下翻转混合6－10次，使菌体充分裂解，形成清亮溶液。
5. 加14 ml Solution Ⅲ，上下翻转混合6－10次，于4℃静置10分钟，应见大量白色沉淀生成。
6. 于4℃，11,000rpm 离心30分钟。
离心期间，将Affinity Column 放在Collection Tube 中。
7. 将上清倒入准备好的Affinity Column 中，11,000 rpm 离心2分钟。
也可将过柱液重新倒回AffinityColumn 中，11,000 rpm 离心2分钟，以增加回收率。
8. 弃过柱液，加8.4ml Wash Solution 于Affinity Column 中，11,000 rpm 离心2分钟。
Axygenmini-prepare质粒提取试剂盒说明书
Axygenmini-prepare质粒提取试剂盒说明书AxyPrep质粒DNA⼩量试剂盒本试剂盒采⽤改进的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜选择性地吸附DNA的⽅法达到快速纯化质粒DNA的⽬的。
适合于从1-4 ml细菌培养物中提取多⾄20 µg⾼纯的质粒DNA，⽤于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分⼦⽣物学实验。
⼀、试剂盒组成、贮存、稳定性Cat. No. AP-MN-P-4 AP-MN-P-50 AP-MN-P-250制备次数 4 preps 50 preps 250 preps250 制备管 4 502502 ml离⼼管 4 502501.5 ml离⼼管 4 50RNase A 10µl30µl150µlBuffer S1 2 ml 15 ml 75 mlBuffer S2 2 ml 15 ml 75 mlBuffer S3 2.5 ml 21 ml 105 mlBuffer W1 2.8 ml 28 ml 135 mlBuffer W2 concentrate 2.4 ml 24 ml 2×72 mlEluent 1 ml 5 ml 25 ml说明书 1 1 1 RNase A：50 mg/ml，室温可贮存6个⽉，长期贮存于-20°C。
Buffer S1：细菌悬浮液。
加⼊RNase A后，混合均匀，4°C贮存。
Buffer S2：细菌裂解液（含SDS/NaOH），室温密闭贮存。
Buffer S3：中和液，室温密闭贮存。
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：去盐液。
使⽤前，按试剂瓶上指定的体积加⼊⽆⽔⼄醇（可⽤100%⼄醇或95%⼄醇）。
混合均匀，室温密闭贮存。
Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，室温密闭贮存。
⼆、注意事项Buffer S2、Buffer S3和Buffer W1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶⼿套和眼镜，避免沾染⽪肤、眼睛和⾐服，谨防吸⼊⼝⿐。
OMEGA无内毒素质粒中提试剂盒中文说明书
E.Z.N.A. Fastfiler Endo-free Plasmid Maxiprep Protocol(OMEGA无内毒素质粒中提)依据该程序可从30-50ml过夜培养物中纯化100-250ug高拷贝数质粒或10-100ug低拷贝数质粒。
若要提高低拷贝质粒的产量，请第8页“Low Copy-Number Plasmids protocol”操作。
■细菌培养：1. 于200-400的培养瓶中加入30-50 LB培养基/AMP或KAN（50ug/ml）,然后接种含所需质粒的菌种于37℃摇床培养12-16小时；使用过夜培养物（0.3-0.5ml）可以获得最佳的结果。
强烈推荐使用E.coli(endA-)菌株用于常规的质粒提取，如DH5a和JM109。
细菌达到最佳生长条件对获得最高质粒DNA产量至关重要。
从新鲜转化平板或新鲜平板挑取单菌落接种于2-5ml含相应抗生素的初始培养基内，于37℃振荡培养（约300rpm）约8小时。
然后接种到合适体积的含相应抗生素预热好的液体培养基中。
于37℃振荡培养（约300rpm）12-16小时。
使用3-4倍于培养物体积的三角瓶或其它容器并以1/500-1/1000的比例稀释初始培养物到生长培养基。
这样可又获得最佳培养条件。
过夜培养后，OD600达1.5-2.0提示为较好的培养物。
建议每批培养物都测下OD600值可以得到最佳的结果。
稀释细菌培养物（10-20倍）使其分光光度测量值在OD6000.1-0.5范围内呈线形变化，该步也具有重要意义。
我们推荐细菌密度在OD6002.0-3.0之间。
若使用非营养丰富培养基，一定要确保细胞浓度不要超过OD600 3.0。
如果使用甘油冻存的菌种作接种物，则应在含有相应抗生素的琼脂糖平板上划线培养以获取间菌落。
然后按照上面步骤挑取单菌落接种于2-5ml初始培养基内。
■碱性SDS溶液裂解细菌：2. 收集20-50ml培养基至适当的离心管，室温3,500-5,000×g离心10分钟；3. 倒去或吸取培养基并弃去。
质粒提取试剂盒说明书
Low copy-number plasmid used
No DNA eluted.
DNA W ash Buffer Concentrate not dilute d w ith ab so lute eth an ol. Ov er m ixin g o f ce ll lysate upon addition of So lutio n II. Trace con tam inan ts eluted from column increase A 2 6 0. RNase A not added to S olu tion I. Ethanol traces not co m ple tely removed from column following wash steps.
Low Copy-Number Plasmids
Low copy-number plasmids generally give 0.1-1:g DNA per ml overnight culture. For routine screening of recombinant clones, 10-15 ml culture should provide ample material for agarose gel visualization or restriction digest analysis. However, the method can be modified to essentially double the yield if necessary. Start with 15-25 ml bacterial culture, centrifuge for 10 min at 5,000 x g in a 50 ml centrifuge tube. Proceed to Step 3 (Page 8) and double the volumes of Solutions I, II, and Buffer N3. Continue as above using only one HiBind DNA Mini Column II per 15-25 ml culture. There is no need to increase the volumes of Buffer HB and DNA Wash Buffer used. Note: This method is not recommended for high copy number plasmids because above 15 ml culture, the HiBind® DNA Mini Column II quickly becomes saturated. In this situation we recommend processing of multiple samples from the same culture.
质粒提取试剂盒说明书
1使用前，在试剂盒中加入一小管核糖核酸酶到溶液一中。
保存在4°C2向dnawas缓冲液浓缩液中添加60 ml 100%乙醇，并在室温下储存除此之外，还需要一台容量为13000×G的离心机无核酸酶离心管无菌去离子水或te缓冲液纯乙醇操作步骤：（萃取过程在室温下进行）1在10-20ml试管中，将携带所需质粒的大肠杆菌接种于5mllb培养基lb（含50μg/ml 氨苄西林）中，37℃≤0.2培养12-16h，需要注意的是，常规的质粒提取使用的是Enda 阴性的大肠杆菌，如DH5α和JM109。
2取1.5～5ml常温菌液10000×g，离心1分钟，除去上清液。
三。
加入250.0.8l溶液I（含RNase A），用旋涡振荡器摇匀，直至细胞完全悬浮。
（用移液管再消耗）4加入250.0.8l溶液II，轻轻转动离心管4-6次，得到澄清的热解溶液。
最好在室温下孵育2分钟。
剧烈的混合会切断染色体DNA，降低质粒的纯度。
（储存溶液II时应拧紧盖子）5加入350.0.8l溶液III，轻轻倒置并混合几次，直到出现白色絮状沉淀6在室温下以13000×g离心10分钟后，会形成白色沉淀并迅速进入下一步7小心处理上清液，并用2ml离心管转移到干净的吸收柱中。
确保没有沉淀物和细胞碎片被吸入。
在10000×g室温下离心1分钟，直至裂解液完全通过吸收柱8取纯化后的蛋白质，在离心条件下，取剩余蛋白1.500×1.0，进行离心分离。
如果下一步不需要高纯度质粒，如酶消化等筛选方法，这一步可以省略9滤液弃去，用100%乙醇稀释的750.0.8l洗涤缓冲液冲洗吸收柱，在10000×g离心1分钟，滤液丢弃。
注意：浓缩前必须用纯乙醇稀释洗涤液。
参见标签中的方法如果结冰，使用前必须恢复到室温10此步骤可选：加入750.0.8l洗涤缓冲液清洗吸收柱1113000×g吸收柱必须离心2分钟，以确保去除乙醇。
质粒提取试剂盒说明书
E.Z.N.A Plasmid Miniprep Protocol 质粒小规模提取试剂盒Product Number D6942 and D6943,D6944注意：1．使用之前，把试剂盒中的一小管RNA酶加入溶液Ⅰ. 4℃保存2．加60ml 100%乙醇到DNA Wash Buffer Concentrate中.室温保存除试剂盒外还需准备：可达到13000×g的离心机无核酸酶的离心管无菌去离子水或TE缓冲液纯乙醇操作规程：(提取过程在室温下进行)：1.在10-20ml试管中，将携带有所需质粒的E.coli接种到5ml LB培养基LB（含氨苄青霉素50μg/ml），37cº振荡培养12-16h。
需特别指出的是：endA阴性的E.coli菌株用于常规质粒提取，如DH5α和JM109.2. 取1.5~5ml菌液室温10000×g离心1min，去上清3. 加250µl溶液Ⅰ（含RNase A），涡漩振荡器震荡至菌体完全悬浮。
（用移液枪吹打进行重悬浮）4.加入250µl溶液Ⅱ，温和颠倒离心管4~6次，获得澄清的裂解液。
最好室温孵育2min，剧烈混合会使剪切染色体DNA，降低质粒纯度。
(储存溶液Ⅱ应拧紧瓶盖)5.加350µl溶液Ⅲ，温和颠倒数次混合，至出现白色絮状沉淀6.室温13000×g离心10min，紧凑的白色沉淀就会形成，迅速进行到下一个步骤7.特别小心吸取上清，移至洁净的装配好容积2ml离心管的吸收柱中。
要保证没有吸入沉淀和细胞碎片。
室温10000×g离心1min，至裂解物完全通过吸收柱8.弃滤过液，加500µl Buffer HB，10000×g离心1min，清洗吸收柱，除去残余蛋白质保证DNA的纯度以备后续试验使用。
如果接下来的步骤对质粒纯度要求不高，如酶消化法等其它筛选方法，此步可省略9.弃滤过液，再用100%乙醇稀释的750µl Wash Buffer清洗吸收柱，10000×g离心1min，弃过滤液。
质粒小量提取纯化试剂盒 说明书
质粒小量提取纯化试剂盒使用说明书产品简介GBpure Plasmid试剂盒是质粒DNA提取领域中的突破性进展，它有效结合了细胞裂解，杂质去除，及质粒纯化等功能。
无需过柱，不用酚氯仿抽提，直接获得高质量的质粒DNA。
我们独特的试剂系统能确保所提质粒DNA高产量，高质量。
本试剂纯度高，采用人性化设计，可按用户需求灵活制定容量大小。
产品特色●简单:添加GBpure Plasmid使细胞裂解，释放DNA，及杂质去除有效结合起来。
●方便:无需过柱，无需过滤，无需高效液相色谱法，无需超速离心机，无需特殊设备。
●无毒性:无酚、氯仿，无饱和正丁醇，无溴化乙锭，无氯化铯，无盐酸胍。
●快速:一分钟完成菌体沉淀，五分钟完成颗粒细菌碎片，10分钟完成沉淀质粒DNA，从培养细菌到提取质粒DNA只需30分钟。
●高纯度:A260/A280 = 1.7-1.8. 所得质粒DNA无任何抑制剂，可应用于所有分子生物学的操作。
●延展性: 一盒GBpure Plasmid试剂盒可以进行：miniprep, midiprep,或maxiprep;无需购买额外的试剂盒。
●高产量: 您可以从1 (mini), 10 (midi), 100 (maxi) ml的过夜培养基中获得大约5μg, 50 μg, 500 μg的DNA质粒。
●实惠：一盒GBpure Plasmid 售价 RMB 500/ 50 minipreps，即 RMB10/miniprep ，质优价廉。
产品内容与储存条件室温保存。
有效期12个月。
操作方法1.取1 ml过夜培养菌液，装入1.5 ml离心管中，室温12,000 × g离心1 min沉淀菌体，完全弃除上清。
2.加入300 μl Buffer P1，充分混匀震荡菌体沉淀10-15 sec，使其完全分散开，至无絮块存在。
3.加入300 μl Buffer P2，轻轻颠倒离心管3-5次，室温放置1 min，使细菌完全裂解，此时溶液应呈透明。
质粒提取试剂盒说明书
质粒提取试剂盒说明书质粒是能够自主复制的小型环状DNA分子，多存在于细菌及酵母菌等生物中，是基因工程中最常用的运载体，担负着将目的基因转移到宿主细胞中的重要使命。
基因表达载体的构建（也就是目的基因与运载体结合）是基因工程的核心步骤，用作运载体的质粒更是掌上明珠。
我们需要从细菌中分离出质粒以备后用。
如果分离不好的嘛......提取出的目的基因就只能眼巴巴地望着彼岸的受体细胞吹凉风。
知道厉害了吧如何提取质粒呢？视频献上，头脑风暴一下热身之后，看一看质粒提取的具体操作。
分离质粒的方法有很多，但都离不开三个主要步骤。
摇菌培养即培养细菌使质粒扩增1.将鉴定测序正确的克隆菌液涂在LB固体平板（一种培养基，使质粒扩增）。
2.置于37℃恒温培养箱，培养12-17h，待长出菌落。
3.灭菌15ml离心管内加入5ml含抗生素的LB液体培养基，编号标记。
4. 挑取单克隆菌团放置液体培养基，每个培养基放置1个菌落。
5. 37℃，180rpm，振荡培养过夜。
现在，一团团质粒丰富细菌准备就绪任人宰割啦。
分割线收获细菌并裂解21.离心扩增好的菌液，按说明书将菌液重悬，转入1.5ml离心管中。
2.用质粒小量抽提试剂盒，按说明书要求提取质粒。
3.细菌高速离心1min,彻底去除上清。
4.加入250ulRB溶液，振荡器充分悬浮细菌。
5.加入250ulLB溶液。
立即上下颠倒10次，使细菌裂解，室温，放置2min。
6.加入250ulNB溶液。
立即上下颠倒10次，使之充分中和，室温，放置2min。
7.室温，1500rpm，高速离心15min。
8、将吸附柱放入收集管内，离心得到的上清转移至吸附柱，室温，15000rpm，高速离心30s。
EZ-10质粒提取试剂盒说明书
EZ-10柱式质粒小量抽提试剂盒产品编号：B610413 包装规格：50/100 次试剂盒组成组分 50 次 100 次 RNase A Solution I Solution II Solution III Wash Solution Elution Buffer EZ-10 Column 2.0 ml Collection Tube 操作手册2.1mg 14ml 14ml 20ml 12ml 5ml 50 50 1份4.2mg 28ml 28ml 40ml 24ml 10ml 100 1001份a.RNase A 以干粉形式运输。
使用前，加入1ml solution I 到RNase A 中，彻底溶解后将RNase A 溶液全部加入到Solution I 中并混合均匀。
含RNase 的Solution I 如经常使用应保存于4°C ，不经常使用则保存于-20°C 。
b. Solution II 保存过程可能会形成沉淀。
如有沉淀，则将溶液于37ºC 温浴使沉淀溶解。
c.使用前，12ml Wash Solution (B610413，50次)中应加入48ml 96-100%的乙醇，或24ml Wash Solution(B610413，100次)中应加入 96ml 96-100%的乙醇。
如果是其他体积的wash solution ，只需要加入足够的乙醇使得比例为4:1 (无水乙醇:Wash Solution= 4:1)。
d. Elution Buffer 为2.0 mM Tris-HCl ，pH 8.0~8.5。
回收率相当于TE buffer pH 8.0或水的120%。
保存方法除RNase A 外，试剂盒的其他组分可室温保存。
RNase A 应保存于4ºC 。
试剂盒在室温下可稳定保存12 个月。
为长期保存，请将试剂盒置于低温环境中。
原理本试剂盒用于质粒DNA 小量抽提纯化，方法简单高效。
质粒提取试剂盒-说明书-翻译
精品文档。
1欢迎下载 E.Z.N.A.™ 质粒小提试剂盒操作规程（英文版译文）（适用于No. D6942, D6943 & D6944）1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的1-5ml 的LB 培养基进行培养。
37℃强力摇动（~300rpm ）孵育12-16h 。
使用10-20ml 培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。
强烈推荐使用endA 阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。
此类菌株包括DH5α和JM109。
2. 将1.5-5.0ml 细菌室温10,000 x g 离心1min 。
轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。
3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A 重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。
充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA 非常重要。
4. 加入250μl 溶液II ，倒置、转动试管数次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。
可能需要孵育2min 。
不要用力混合，以免使染色体DNA 断裂，减低质粒的纯度。
该步反应不要超过5min 。
溶液II 不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。
5. 加入350μl 溶液III ，立即倒置试管数次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。
为避免形成局部沉淀，加入溶液III 后应立即、充分混匀溶液。
6. 室温≥10,000 x g 离心10分钟。
白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。
7. 小心翼翼．．．．的吸取上清液，加入装配在2ml 收集管中的小量纯化柱I 中。
确保离心沉淀未受扰动，确保没有细胞碎片加入到柱子中。
室温下10,000 x g 离心1分钟，使裂解液完全通过柱子。
8. 丢弃滤过液，重新使用2ml 收集管；加入500μl HB 缓冲液清洗柱子，室温10,000 x g 离心1分钟，使溶液完成通过柱子。
该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除，以保证获得高品质的DNA 以适合于下游的应用。
9. 丢弃滤过液，重新使用2ml 收集管；加入700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液清洗柱子，室温10,000 x g 离心1分钟，使溶液完全通过柱子，丢弃滤过液。
OMEGA小提试剂盒提取质粒步骤(中文翻译版)
质粒提取（小提，mini kit）1、将携带目的质粒的大肠杆菌接种于含10~15ul基础培养基/氨苄西林培养介质的50ml培养瓶中。
2、室温下5000×g离心10min。
3、弃去上清，剩余沉淀物中加入500ul的SolutionⅠ/RNase A，彻底混匀。
4、将混悬液移至新的2ml离心管中，加入500ul SolutionⅡ，轻柔彻底混匀，可得清亮的细菌裂解物，室温下孵育2min（混匀时用力过大，可破碎出染色体DNA，使目的质粒纯度下降）。
5、向4中液体加入250ul预冷的Buffer N3，轻柔、彻底混匀，直到出现白色絮状沉淀，4℃≥12000×g离心10min（可室温，最好4℃）（Buffer应彻底混匀，若混合物粘稠呈棕色或呈球状，应多混匀几次以中和溶液，溶液的彻底中和对于获得好的产出是必要的）。
6、小心吸取并将上清液转移进新的1.5ml离心管1：0.1的比例向上清液中加入ETR Solution 混匀溶液并于冰上孵育10min，孵育过程中颠倒几次以混匀（加入ETR Solution后，细菌裂解物将出现浑浊，但冰上孵育后将变澄清）（勿用2ml离心管收集上清，因为2ml离心管中有太多液体时，ETR Solution将悬浮于溶液中）。
7、将6中液体于42℃孵育5min，溶液将再次变浑。
室温下12000×g离心3min，ETR Solution将于离心管底部形成蓝色层。
8、将上层水相转移入新的2ml离心管中，按1：0.5的比例加入无水乙醇（室温，96~100％），轻柔混匀，室温下孵育1~2min。
9、将8中的溶液取700ul到柱子中，组装收集管，室温下1000×g离心1min，弃去收集管中通过柱子的液体，柱子和收集管重复利用。
10、重复9中步骤，直到收集的细菌裂解物全部用完。
11、将500ul Buffer HB加入柱子中，室温下10000×g离心1min，弃去收集管中废液（目的：将残存的蛋白污染物除去，是获得高质量DNA所必需的）。
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1欢迎下载 E.Z.N.A.™ 质粒小提试剂盒操作规程（英文版译文）
（适用于No. D6942, D6943 & D6944）
1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的1-5ml 的LB 培
养基进行培养。
37℃强力摇动（~300rpm ）孵育12-16h 。
使用10-20ml 培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。
强烈推荐使用endA 阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。
此类菌株包括DH5α和JM109。
2. 将1.5-5.0ml 细菌室温10,000 x g 离心1min 。
轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。
3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A 重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。
充分重悬沉
淀对于获得高质量的DNA 非常重要。
4. 加入250μl 溶液II ，倒置、转动试管数次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。
可能需要孵育2min 。
不要用力混合，以免使染色体DNA 断裂，减低质粒的纯度。
该步反应不要超过5min 。
溶液II 不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。
5. 加入350μl 溶液III ，立即倒置试管数次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。
为避免
形成局部沉淀，加入溶液III 后应立即、充分混匀溶液。
6. 室温≥10,000 x g 离心10分钟。
白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。
7. 小心翼翼．．．．
的吸取上清液，加入装配在2ml 收集管中的小量纯化柱I 中。
确保离心沉淀未受扰动，确保没有细胞碎片加入到柱子中。
室温下10,000 x g 离心1分钟，使裂解液完全通过柱子。
8. 丢弃滤过液，重新使用2ml 收集管；加入500μl HB 缓冲液清洗柱子，室温10,000 x g 离心1分钟，使溶液完成通过柱子。
该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除，以保证获得高品质的DNA 以适合于下游的应用。
9. 丢弃滤过液，重新使用2ml 收集管；加入700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液清
洗柱子，室温10,000 x g 离心1分钟，使溶液完全通过柱子，丢弃滤过液。
注意：DNA 清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释（5倍稀释），如果DNA 清洗液稀
释液经过冷藏，则使用之前必须置于室温。
10. 可选步骤：重复清洗，加入另外的700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液。
11. 将空柱子≥13,000 x g 离心2min ，使柱子的基质干燥。
此步骤为关键操作，不可
遗漏。
12. 将柱子放入干净的1.5ml 微量离心管中。
将30-50μl （取决于终产物的期望浓度）
洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上，使之于室温下静置1-2min 。
≥13,000 x g 离心1min 洗脱DNA 。
可以进行二次洗脱，以收集残存的DNA 。
13. DNA 的产量和质量：分别在波长260nm 和280nm 处测定样品适当稀释液的吸光度。
DNA 的浓度计算如下：
DNA 浓度=A 260×50×（稀释倍数）μg/ml
A 260/A 280的比率可以反映核酸的纯度。
比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。
或者，DNA 的产量（及质量）有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA 样品相比较更好的予以确定。
通常情况下洗脱的大部分DNA 是超螺旋单体形式，但也可能存在串联体形式。
张小强 翻译。