琼脂糖凝胶电泳 配方与步骤
琼脂糖凝胶电泳 配方与步骤
�RNA琼脂糖凝胶电泳：配制：1.0.5M EDTA（pH=8.0）：100ml：称取18.61g Na2EDTA·2H2O（分子量372.24），加80ml ddH2O剧烈搅拌，用NaOH调节PH值至8.0（约需2g NaOH）.高压灭菌，室温保存。
2.50×TAE loading buffer:（Tris acetate-EDTA buffer）电泳缓冲液组分：2M Tris-乙酸；100mM EDTA（pH=8.0）500mL:称121.1g Trisbase（分子量121.14），加800ml ddH2O溶解，加57.1ml乙酸和50ml0.5M EDTA溶液（pH=8.0），搅拌，ddH2O定容至500mL.室温保存。
3.1×TAE loading buffer:取20ml50×TAE，ddH2O定容至1L.室温保存。
4.100×Sybergreen：500ul：取495ul1×TAE于1.5ml离心管，加入5ul Sybergreen原液混匀，4℃锡纸避光保存。
注意：Sybergreen原液需稀释10000倍；6×DNA loading buffer上样缓冲液需稀释六倍，最终稀释倍数应不小于1×。
步骤：1.制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml，我们用30ml):称0.3g琼脂糖置于100ml锥形瓶中，加入30ml1×TAE，瓶口倒扣小烧杯。
微波炉加热煮沸3次，至琼脂糖全部融化，摇匀，即成1.0%琼脂糖凝胶液。
2.胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并放好梳子.将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止.3.加样:样品制备：（10ul体系/样品槽）于0.25ml离心管中样品RNA（最后加）:2ul/3ul/5ul6×DNA loading buffer:10/6=1.7ul100×Sybergreen：0.1ulDEPC水：至10ul(注意:加样前要先记下加样的顺序).分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个枪头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.4.电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.5.电泳完毕后,取出凝胶,利用科212凝胶成像系统,在紫外灯（trans UV）下观察拍照保存.DNA存在则显示出红色荧光条带.RNA完美提出应该是三条带：28，18,5.8。
琼脂糖凝胶电泳步骤
琼脂糖凝胶电泳步骤实验前准备及注意事项：将所要用到的制胶锥形瓶、胶槽、梳齿等物品清理干净，如有残胶，需将残胶尽量去除。
注意：所有用来跑核酸胶的物品，只要接触过核酸染料，一定要专门放置，专物专用，不要再将污染过的物品随意放置，以免污染其他物品。
接触过核酸染料的手套不要再碰非污染区的物品。
制胶和拿取核酸胶时佩戴一次性PE手套，再操作其他地方时将一次性手套丢弃。
实验步骤：1.按每100ml 1×TAE/TBE缓冲液中加入1g琼脂糖（1%的胶，根据核酸大小选择制胶的浓度，一般情况用1%-2%的胶）的比例，称取琼脂糖，加入专门制琼脂糖凝胶的250ml-500ml的锥形瓶中。
2.按比例量取适量的1×TAE/TBE缓冲液，加入到锥形瓶中的琼脂糖一起，适当摇晃锥形瓶初步混匀。
3.将混合液放入微波炉中，用中高火加热，加热总时间可根据制胶总量调整，一般40ml左右的胶量加热90s左右。
如果制胶量大，记得每加热1min左右将瓶从微波炉中取出，轻轻晃匀后，再继续加热，以免局部过热导致胶溢出。
注意：取出加热后的瓶时，记得垫上纸，防止烫手！4.待胶加热好，完全溶解后，稍晾凉至45-55℃左右（以基本不太烫手为宜）按照1:10000的比例加入核酸染料（如100ml胶加10ul染料），迅速摇匀。
5.将胶槽和梳齿准备好，梳齿可以预先插好，将上一步摇匀的胶倒入胶槽中，一般厚度以60mm左右为宜，具体要根据梳齿的厚度以及样品量来定。
6.待胶变白，基本表示胶已凝好，此时可以将梳齿拔出，一定要竖着往上拔梳齿，不要摇晃，以免样品孔被破坏。
7.在电泳槽中倒入1×TAE/TBE缓冲液，将制好的胶放入缓冲液，以缓冲液没过样品孔为宜。
8.点样：根据样品孔的大小决定上样量，每一排样品孔至少有一个孔用来点DNA Marker。
（上样前确定每个样品和Marker里都已经加了Loading buffer，Loading buffer 的终浓度为1×）9.确定样品孔的方向，核酸带负电，样品孔要在负极，通电后在胶孔中向正极移动。
琼脂糖凝胶电泳步骤
琼脂糖凝胶电泳一、步骤：1、制胶(1%)：将加入30ml 1×TAE缓冲液和0.6g琼脂糖的三角瓶在微波炉加热至沸腾，摇匀至无颗粒。
2、倒胶：先插梳子，再倒胶。
胶冷却至60℃左右(不烫手)加染料后（胶-GelRed:1ml-1ul或30ml胶+3ulGelRed）缓缓倒入电泳槽(先胶布封口，放好梳子)，待胶凝固后取出梳子。
3、加样：1µl RNA + 2µl loading buffer混匀。
（点样孔置负极端即黑对黑，红对红）。
4、电泳：稳压条件下120V电泳，待溴酚蓝移动至接近胶前沿(约1cm)时停止电泳(约25min)。
5、观察结果：紫外分析仪上254nm观察，DNA存在处显亮绿色荧光条带，观察酶切后与未酶切质粒的DNA带位置，拍照。
二、注意事项：1、凝胶制备过程中，溶解的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。
倒入板中的凝胶应避免出现气泡，影响电泳结果。
2、巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。
高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。
3、电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
4、如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象。
5、变性的DNA样品可能导致条带模糊和缺失，也可能出现不规则的DNA条带迁移。
在上样前不要对DNA样品加热，用20mM NaCl缓冲液稀释可以防止DNA变性。
6、太多的DNA上样量可能导致DNA带型模糊，而太小的DNA上样量则导致带信号弱甚至缺失。
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳
操作流程及步骤：
医大所学与医学院教受有所不同，以医大步骤作为整理。
1.配置电泳液:990ml水+10ml TAE。
2.根据基因组片段大小，配置相应浓度的琼脂糖凝胶。
0.9g琼脂糖+60ml 电泳液加
入带盖的广口瓶中。
3.配好胶放入微波炉中3min30s.。
取出最好凉至65℃，加入EB或者ＥＢ替代物。
4.取电泳槽内的有机玻璃内槽洗干净，晾干，放入制胶玻璃板形成模子。
将内槽置
于水平位置，并在固定位置放好梳子。
将琼脂糖凝胶液小心地倒入内槽玻璃板上，
使胶液缓慢展开，直到整个玻璃板表面形成均匀胶层。
室温下静置直至凝胶完全
凝固
5.垂直轻拔梳子，将凝胶及内槽放入电泳槽中，电泳缓冲液至没过胶板为止。
6.第一和最后一孔上maker，按照样品顺序依次上样10ul/孔，倒数第二孔加水对照，
倒数第三孔加公司提供阳性对照物[1]。
7.盖好盖子，插上变压器，打开开关，开始电泳。
8.电泳时间15-20min。
9.当跑到第二个虚线处停止。
10.扫膜看条带分析结果[2]。
心得体会及注意事项：
1、上样同蛋白电泳上样，持枪入孔可以用左手辅助持枪，防止手抖。
手
持稳、看清楚、慢入孔、全推出。
2、合格膜应加水孔没有条带，阳性参照必须出现条带，样品组，只出
下面一条带为纯合鼠，出两条带为杂合鼠，只出上面一条带为纯野生型。
电泳琼脂糖凝胶的配制
电泳琼脂糖凝胶的配制
配制电泳琼脂糖凝胶的步骤如下：
1. 准备所需材料，包括琼脂糖粉、缓冲液、电解质溶液、蒸馏水等。
2. 根据实验的需要，根据琼脂糖的浓度选择适当比例的琼脂糖粉，一般浓度为0.8-2%。
3. 将所需缓冲液加入容器中，根据实验需要选择适当的缓冲液，例如Tris缓冲液、磷酸缓冲液等。
4. 在缓冲液中加入适量的琼脂糖粉，搅拌均匀，可以使用磁力搅拌器。
5. 根据实验需要，在琼脂糖溶液中添加适量的电解质溶液，例如SDS、尿素等，用于改变凝胶的性质。
6. 使用蒸馏水将溶液补充至所需体积，同时搅拌均匀，确保溶液中无颗粒。
7. 将准备好的琼脂糖溶液加热至70-80摄氏度，使其完全溶解。
8. 静置琼脂糖溶液至室温，或者加入适量冷却剂，如冰块，以加快冷却过程。
9. 将准备好的琼脂糖溶液倒入凝胶模板中，避免气泡的产生。
10. 等待凝胶完全固化，通常需要约30分钟至1小时。
11. 凝胶固化后，根据实验需要在凝胶上形成孔洞，以供电泳样品加入。
以上是电泳琼脂糖凝胶的简要配制步骤，具体的实验条件和步骤可以根据实验的要求进行调整。
琼脂糖凝胶电泳检测实验报告
琼脂糖凝胶电泳检测实验报告一、实验目的本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳检测方法，对DNA分子进行分离和检测，掌握琼脂糖凝胶电泳技术的操作步骤和原理，并了解其在生物学领域中的应用。
二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离DNA分子的方法。
其原理是利用电场作用力将DNA分子从样品中移动到凝胶中，并根据DNA分子大小不同，在凝胶中形成不同迁移距离的带状图案。
根据带状图案可以得到DNA片段大小及其相对含量。
三、实验步骤1.制备琼脂糖凝胶：将1g琼脂糖加入100ml TAE缓冲液中，加热搅拌至溶解，冷却至60℃左右时倒入模具中，待冷却成固体后取出。
2.制备DNA样品：将待检测DNA样品加入适量TAE缓冲液中，使其浓度为50ng/ul。
3.装载样品：取出制备好的琼脂糖凝胶，将其置于电泳槽中，加入适量TAE缓冲液，然后将DNA样品注入琼脂糖凝胶孔中。
4.进行电泳：将电泳槽盖好，接通电源，设定电压和时间，进行电泳。
5.染色和成像：取出琼脂糖凝胶，进行染色处理，然后用成像仪拍摄带状图案。
四、实验结果通过琼脂糖凝胶电泳检测方法，成功分离出待检测DNA样品中的DNA分子，并形成了带状图案。
根据带状图案可以看出不同大小的DNA片段在凝胶中形成了不同迁移距离的带状图案。
五、实验分析1.影响DNA迁移距离的因素：DNA片段大小、琼脂糖浓度、电场强度等因素都会影响DNA分子在凝胶中的迁移距离。
一般来说，较小的DNA片段在相同条件下迁移距离较大。
2.应用领域：琼脂糖凝胶电泳技术广泛应用于生物学领域中对DNA分子的检测和分析。
例如，可以用于分析DNA序列、检测基因突变等。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了琼脂糖凝胶电泳技术的操作步骤和原理，并了解了其在生物学领域中的应用。
同时，我们也发现琼脂糖凝胶电泳技术具有操作简单、成本低廉、结果可靠等优点，是一种常用的DNA分子检测方法。
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤琼脂糖凝胶电泳是一种常用的蛋白质和核酸分析方法。
本文将介绍琼脂糖凝胶电泳的具体操作步骤，帮助读者更好地理解和掌握这一实验技术。
材料准备1.琼脂糖凝胶：根据需要选择合适的琼脂糖凝胶，通常有0.8%、1%和1.5%等不同浓度的琼脂糖凝胶可供选择。
2.海藻酸缓冲液：配制1×TAE缓冲液，将适量的氨基乙酸和琼脂糖溶解在去离子水中，并调整pH值至7.5。
样品制备1.样品处理：将待分析的蛋白质或核酸样品按照实验要求进行处理，例如进行裂解、消化等。
2.加载缓冲液：将样品与适量的样品加载缓冲液混合均匀，通常加载缓冲液中含有甘氨酸、溴酚蓝等成分，有利于负载样品。
凝胶制备1.琼脂糖溶液的制备：将适量的琼脂糖粉末加入到海藻酸缓冲液中，用力搅拌使其充分溶解。
2.加入染色剂：在溶解的琼脂糖溶液中加入适量的染色剂，如溴酚蓝，以便观察凝胶的迁移情况和样品带。
3.准备载玻片：在凝胶电泳槽的两侧放置两块玻璃板，用胶条固定，形成一个长方形的凝胶槽。
4.倒制凝胶：将制备好的琼脂糖溶液倒入凝胶槽中，并用打孔器在凝胶上打孔，用来加载样品。
电泳过程1.样品加载：将经过处理的样品加载到凝胶孔洞中，注意不要溢出或漏掉。
2.正常电泳：将凝胶槽放入电泳槽中，使凝胶完全浸泡在TAE缓冲液中，注意缓冲液的量要覆盖凝胶槽。
3.开启电源：将凝胶槽连接到电源上，并设定合适的电流和电压，开始电泳过程。
4.电泳时间：根据实验需要设定合适的电泳时间，通常为30分钟到数小时不等。
5.关闭电源：在电泳结束后，关闭电源，取出凝胶槽。
凝胶染色和成像1.染色凝胶：将电泳结束的凝胶浸泡在适量的染色液中，常用的染色剂有共染剂、Coomassie蓝等。
2.染色时间：根据染色剂的要求和实验需要，将凝胶浸泡在染色液中一定时间，以达到理想的染色效果。
3.洗涤凝胶：将染色液倒掉，用去离子水洗涤凝胶，去除多余的染色剂。
4.成像和分析：将凝胶放入凝胶成像系统中进行成像，根据需要可进行图像分析和数据提取。
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是一种凝胶电泳方法，用于生物化学、分子生物学、遗传学和临床化学，以分离琼脂糖基质中的大分子混合群，例如DNA、RNA 或蛋白质。
琼脂糖是从海藻中提取的天然线性聚合物，当在缓冲液中加热并冷却时，通过氢键形成凝胶基质。
它们是分离中、大型核酸最常用的介质，分离范围广。
琼脂糖凝胶电泳实验常用以DNA 切胶回收，DNA 分离和用于佐证DNA 是否重组、质粒等是否切开。
今天我们就来聊聊琼脂糖凝胶电泳实验的一些小技巧小细节。
第一步：胶液的制备称取0.4g 琼脂糖，置于200ml 锥形瓶中，加入50ml 0.5×TBE 稀释缓冲液，放入微波炉里加热，直到琼脂糖全部熔化，取出摇匀，此为0.8%琼脂糖凝胶液。
总液体量不宜超过锥瓶的50%容量。
否则会溢出来的。
毛博就吃过这个亏。
还要擦洗微波炉。
加热过程中要不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。
加热时应盖上封口膜，以减少水份蒸发。
第二步：胶板的制备倒胶时的温度不可太低，否则凝固不均匀。
东一块西一块的。
果冻做出来就不好看啦。
速度也不可太快，否则容易出现气泡。
果冻做出来里面都是气泡。
怎么吃呀？待胶完全凝固后拨出梳子，注意不要损伤梳底部的凝胶。
第三步：加样注意上样时要小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。
果冻下面被戳个窟窿，还怎么吃呀？第四步：电泳加完样后，合上电泳槽盖，立即接通电源。
控制电压保持在60-80V，电流在40mA 以上。
当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2cm 时，停止电泳。
第五步：染色未加EB 的胶板在电泳完毕后移入0.5μg/ml 的EB 溶液中，室温下染色20-25 分钟。
第六步：观察和拍照在波长为254nm 的长波长紫外灯下观察染色后的或已加有EB的电泳胶板。
DNA 存在处显示出肉眼可辨的桔红色荧光条带。
紫光灯下观察时应戴上防护眼镜或有机玻璃面罩，以免损伤眼睛。
除这些细节之外，还有一些注意事项：1. 酶切时所加的DNA 溶液体积不能太大，否则DNA 溶液中其他成分会干扰酶反应。
琼脂糖凝胶电泳 实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告琼脂糖凝胶电泳实验报告引言：琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和分析生物大分子的方法。
它基于琼脂糖凝胶的孔隙大小，通过电场作用下分离样品中的不同分子。
本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳技术，分离并分析DNA样品中的不同片段。
实验材料与方法：1. 实验材料：-琼脂糖凝胶：用于制备凝胶基质，提供分离分子的孔隙。
-缓冲液：用于维持凝胶的pH值和离子浓度稳定。
-DNA样品：包含待分离的DNA片段，可通过PCR扩增获得。
2. 实验步骤：（1）制备琼脂糖凝胶：将适量琼脂糖加入缓冲液中，加热搅拌至溶解，待冷却至大约60℃时，倒入凝胶模具中，插入梳子，待凝胶完全固化后，取出梳子。
（2）样品处理：将待分离的DNA样品与DNA加载缓冲液混合，加热至95℃，使DNA变性，然后迅速冷却至室温。
（3）电泳分离：将凝胶模具放入电泳槽中，加入足够的缓冲液，将DNA样品加入凝胶孔中，连接电源，施加适当电压，进行电泳分离。
结果与讨论：经过电泳分离后，我们观察到琼脂糖凝胶上出现了一系列DNA条带。
这些条带的迁移距离与DNA片段的大小成反比，即较小的片段迁移距离较远，较大的片段迁移距离较短。
实验结果的解释可以通过琼脂糖凝胶电泳的原理来理解。
琼脂糖凝胶的孔隙大小决定了不同大小的DNA片段在凝胶中的迁移速度。
较小的DNA片段能够更容易通过凝胶孔隙，因此迁移距离较远；而较大的DNA片段则受到凝胶孔隙的限制，迁移距离较短。
通过对DNA条带的大小和形状进行分析，我们可以获得关于DNA样品的重要信息。
例如，我们可以确定样品中是否存在特定的DNA片段，或者在PCR扩增中是否成功地放大了目标片段。
总结：琼脂糖凝胶电泳是一种简单而有效的生物大分子分离和分析方法。
通过电泳分离DNA样品，我们可以快速获得关于样品中DNA片段的信息。
这种技术在分子生物学、遗传学等领域有着广泛的应用，对于研究和诊断基因相关的疾病具有重要意义。
在今后的研究中，我们可以进一步探索琼脂糖凝胶电泳的应用，并结合其他分析技术，提高实验的准确性和灵敏度。
DNA琼脂糖凝胶电泳实验原理及超详细步骤
DNA琼脂糖凝胶电泳实验原理及超详细步骤实验原理：琼脂糖凝胶电泳是利用DNA分子的电荷和大小差异来分离DNA分子的一种方法。
DNA分子在电场作用下，会向阳极移动，移动速度与DNA分子的大小呈反比。
琼脂糖凝胶是一种聚合物，可以形成一种网络结构，在凝胶中进行电泳分离。
DNA分子在凝胶孔隙中相互碰撞，分子大小不同的DNA分子会在不同的速度下向阳极移动，从而实现了DNA分子的分离。
实验步骤：1.实验前的准备：a.制备琼脂糖凝胶：取一定量的琼脂糖粉末加入缓冲液中，加热溶解后冷却至大约50℃左右，倒入琼脂糖凝胶板中，插入梳子，待凝固。
b.缓冲液的制备：根据需要准备TAE缓冲液或TBE缓冲液。
2.DNA样品制备：a.将待测DNA样品加入试管中，用适当的缓冲液稀释样品。
b.使用嵌入剂将DNA样品加入琼脂糖凝胶中，通常将样品加入凝胶中的槽道。
3.凝胶电泳操作：a.将琼脂糖凝胶板放入电泳槽中，加入足够的缓冲液，使凝胶完全浸泡在缓冲液中。
b.将阴极和阳极电极连接到电泳槽中。
c.将样品和一些DNA分子大小标准物质分别加入凝胶中，用以测量DNA的大小。
d.打开电源，设定电流和电压，并进行电泳分离。
4.凝胶染色和成像：a.完成电泳分离后，关闭电源，取出琼脂糖凝胶板。
b.将琼脂糖凝胶板放入DNA染色剂中，染色一段时间后，取出凝胶板。
c.在紫外灯下观察琼脂糖凝胶板，可以看到DNA分子的条带。
5.数据分析：a.使用图像分析软件或标尺对琼脂糖凝胶板上的DNA条带进行测量，得到DNA分子的大小。
b.根据标准物质的条带大小，将待测DNA分子的大小与标准物质进行对比，计算DNA分子的大小。
c.根据DNA条带的强度和大小，可以估算DNA的浓度。
需要注意的是，具体的实验步骤可能因实验设备和试剂的不同而有所差异，所以在进行实验之前最好仔细阅读实验操作手册，并参考实验室老师或资深研究人员的指导。
简述琼脂糖凝胶电泳的基本过程
简述琼脂糖凝胶电泳的基本过程
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生物分子分离和分析技术。
其基本过程如下：
1. 制备琼脂糖凝胶：将琼脂糖粉溶解在缓冲液中，加热并搅拌使其溶解，然后待其冷却凝胶化。
凝胶化的时间和温度可以根据需要来调节，一般凝胶化时间为30-60分钟。
2. 电泳槽的装置：凝胶凝胶化后，将其放入电泳槽中，槽中注入足够的缓冲液，使凝胶完全浸泡其中，确保电泳过程中缓冲液的循环。
3. 样品制备：将要分析的待分离生物分子样品进行处理，通常会进行核酸或蛋白质的提取、纯化和浓缩等步骤，得到待分析的样品。
4. 样品加载：在经过处理的样品中加入适量的载体，使样品具有一定的密度，然后将样品加载到凝胶孔中。
通常在一个凝胶中加载多个样品以实现多项分离。
5. 电泳：将电泳槽连接到电源上，通常使用直流电。
电场的作用下，待分离的生物分子带上电荷，沿着电场方向迁移，根据它们的大小和形状的不同，迁移速率也会有所不同。
较小的分子会迁移得更快，而较大的分子则迁移速度较慢。
6. 分析结果：电泳进行一段时间后，关闭电源，取出凝胶进行染色或其他相关检测分析。
染色后，在紫外线照射下可以观察
到凝胶上待分离生物分子的条带，根据条带的位置和大小可以进行分析和定量。
琼脂糖凝胶电泳具有操作简单、分辨效果好等优点，广泛应用于核酸和蛋白质的分离、纯化和分析等领域。
琼脂糖凝胶电泳的基本过程
琼脂糖凝胶电泳的基本过程
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离与检测方法，其基本过程如下：
1. 准备琼脂糖凝胶：将适量的琼脂糖加入缓冲液中，加热溶解后冷却至适合凝胶形成的温度，通常为室温或4℃。
2. 注射样品：将待检测的样品（通常是蛋白质混合物）与一定量的加载缓冲液混合，并用微量注射器将样品缓慢地注射到琼脂糖凝胶的加载孔中。
3. 开始电泳：将装有琼脂糖凝胶的电泳槽中注入足够的电泳缓冲液，确保琼脂糖凝胶完全被液体覆盖。
然后将电泳槽连接到电源上，设定适当的电压和时间，开始电泳。
4. 蛋白质分离：在电场的作用下，由于蛋白质的不同特性（如分子大小、电荷等），蛋白质会在琼脂糖凝胶中以不同的速度移动。
较小的蛋白质会更快地移动，较大的蛋白质会移动得更慢。
5. 染色和可视化：电泳结束后，可以通过染色等方法对琼脂糖凝胶中的蛋白质进行标记，常见的染色方法有银染色、草酸染色、共蛋白染色等。
然后使用适当的设备（如紫外线透射仪）对染色后的凝胶进行图像记录和分析。
6. 分析结果：根据不同蛋白质在凝胶中的迁移距离和密度，可以对样品中的蛋
白质进行定性和定量分析，从而了解样品中蛋白质的组成和相对含量。
3%琼脂糖凝胶的配制
3%琼脂糖凝胶的配制
琼脂糖凝胶是生命科学中常用的一种凝胶，能够用于电泳、色谱、免疫印迹等实验中。
下面介绍一下3%琼脂糖凝胶的配制方法：材料：
- 琼脂糖（海藻酸钠） 3g
- TAE缓冲液 100mL
- 蒸馏水
步骤：
1. 在100mL的TAE缓冲液中加入3g的琼脂糖，搅拌至溶解。
2. 将溶液加热至沸腾，持续加热1-2分钟。
3. 关闭火源，让溶液冷却至约60°C左右。
4. 将溶液倒入凝胶模具中，注意不要产生气泡。
5. 将凝胶模具放置于室温下静置，凝胶定型。
6. 凝胶定型后，可以将凝胶取出，用TAE缓冲液或PBS缓冲液进行清洗。
7. 凝胶清洗后即可用于实验中。
注意事项：
1. 请务必使用蒸馏水进行琼脂糖凝胶的配制。
2. 在加热琼脂糖溶液时，要注意不要加热时间过长，以免影响凝胶质量。
3. 在倒入凝胶模具时，要慢慢倒入，避免产生气泡。
4. 凝胶定型后，要小心取出凝胶，以免损坏凝胶结构。
5. 凝胶清洗时，要使用缓冲液轻柔地清洗，不要使用力过大。
DNA琼脂糖凝胶电泳原理
DNA琼脂糖凝胶电泳原理DNA琼脂糖凝胶电泳利用琼脂糖作为基质，形成一种网状结构的凝胶。
琼脂糖凝胶由琼脂糖粉溶于缓冲液中，并在高温下混合，形成一种凝胶液。
凝胶液在室温下冷却，变成凝胶。
DNA分子可以通过凝胶中的孔隙移动，该移动速度取决于DNA分子的大小。
步骤1：制备琼脂糖凝胶a.准备琼脂糖溶液：按照实验要求，加水将琼脂糖粉溶解。
b.加入缓冲液：将缓冲液加入琼脂糖溶液中，混合均匀。
c.煮沸琼脂糖溶液：将混合好的溶液放入显影槽，使用微波炉或煮沸水浴，使其煮沸几分钟，直到完全溶解。
d.冷却凝固：将煮沸后的溶液静置至室温，等待凝胶冷却凝固。
步骤2：样品处理a.增强样品蛋白酶降解：将待分析的DNA样品加入增强样品液中，在适当的温度下进行酶解反应，以去除样品中的蛋白质。
b.加载缓冲液：将待处理的DNA样品与加载缓冲液混合，以改变DNA样品的密度，使其易于加载到凝胶槽中。
步骤3：电泳分离a.加载样品：使用微量吸管，将样品小心地加载到凝胶槽中的样品孔中。
b.开始电泳：将电泳槽连接到电源，并使用适当的电压（通常为100-200V）进行电泳分离。
c.时间控制：视实验需要，可以根据时间控制电泳进行特定的DNA片段分离。
通常，较短的DNA片段会迁移得更快。
d.显影染色：电泳完成后，将凝胶从槽中取出，用染色剂处理。
不同的染料可用于可见或荧光检测。
步骤4：结果分析a.观察凝胶：将处理后的凝胶在紫外线照射下照明，可以看到DNA分子在凝胶中的迁移情况。
不同大小的DNA片段将形成明显的条带。
b.分析条带：通过比较样品条带与已知DNA分子大小的条带，可以确定样品中的DNA片段大小。
c.数据解读：根据DNA片段的大小和浓度，可绘制电泳分离图谱，进一步分析样品中的DNA分子。
总结：DNA琼脂糖凝胶电泳是一种基于DNA分子在凝胶中电荷移动的技术。
它可用于分离和分析DNA样品中不同大小的DNA分子。
经过凝胶电泳分离和染色后，可以通过观察条带和数据分析，对样品中的DNA分子进行进一步研究。
琼脂糖凝胶电泳配方与步骤(精)
� RNA 琼脂糖凝胶电泳:配制:1. 0.5M EDTA(pH=8.0 :100ml :称取 18.61g Na 2EDTA ·2H 2O (分子量 372.24 ,加 80ml ddH 2O 剧烈搅拌, 用 NaOH 调节 PH 值至 8.0(约需 2g NaOH . 高压灭菌,室温保存。
2. 50×TAEloading buffer:(Tris acetate-EDTA buffer 电泳缓冲液组分:2MTris-乙酸;100mM EDTA(pH=8.0500mL:称 121.1g Trisbase(分子量 121.14 ,加 800ml ddH 2O 溶解,加 57.1ml 乙酸和 50ml 0.5M EDTA 溶液(pH=8.0 ,搅拌, ddH 2O 定容至 500mL . 室温保存。
3. 1×TAEloading buffer:取 20ml 50×TAE, ddH 2O 定容至 1L. 室温保存。
4. 100×Sybergreen :500ul :取 495ul 1×TAE于 1.5ml 离心管,加入 5ul Sybergreen 原液混匀,4℃锡纸避光保存。
注意:Sybergreen 原液需稀释 10000倍;6×DNAloading buffer 上样缓冲液需稀释六倍,最终稀释倍数应不小于 1×。
步骤:1. 制备 1%琼脂糖凝胶 (大胶用 70ml, 小胶用 50ml ,我们用 30ml:称 0.3g 琼脂糖置于 100ml 锥形瓶中,加入 30ml 1×TAE ,瓶口倒扣小烧杯。
微波炉加热煮沸 3次,至琼脂糖全部融化,摇匀,即成 1.0%琼脂糖凝胶液。
2. 胶板制备 :取电泳槽内的有机玻璃内槽 (制胶槽洗干净 , 晾干 , 放入制胶玻璃板 . 取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好 , 形成模子 . 将内槽置于水平位置 , 并放好梳子 .将冷却到 65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上 , 使胶液缓慢展开 , 直到整个玻璃板表面形成均匀胶层 . 室温下静置直至凝胶完全凝固 , 垂直轻拔梳子 , 取下胶带 , 将凝胶及内槽放入电泳槽中 . 添加 1×TAE 电泳缓冲液至没过胶板为止 . 3. 加样 :样品制备:(10ul 体系 /样品槽于 0.25ml 离心管中样品 RNA (最后加 :2ul /3ul/5ul6×DNA loading buffer:10/6=1.7ul100×Sybergreen :0.1ulDEPC 水:至 10ul(注意 :加样前要先记下加样的顺序 . 分别将样品加入胶板的样品小槽内 , 每加完一个样品 , 应更换一个枪头 , 以防污染 , 加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面 .4. 电泳 :加样后的凝胶板立即通电进行电泳 , 电压 60-100V , 样品由负极 (黑色向正极(红色方向移动 . 电压升高 , 琼脂糖凝胶的有效分离范围降低 . 当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约 1cm 处时 , 停止电泳 .5. 电泳完毕后 , 取出凝胶 , 利用科 212凝胶成像系统 , 在紫外灯(trans UV 下观察拍照保存 .DNA 存在则显示出红色荧光条带 . RNA 完美提出应该是三条带:28, 18, 5.8。
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤如下：1.制备1%琼脂糖凝胶（大胶用70ml,小胶用50ml）:称取0.7 g（0.5 g）琼脂糖置于锥形瓶中，加入70 ml（50ml）1 XTAE,瓶口倒扣小烧杯•微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化，摇匀，即成1.0%琼脂糖凝胶液•2.胶板制备：取电泳槽内的有机玻璃内槽（制胶槽）洗干净，晾干，放入制胶玻璃板• 取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好，形成模子•将内槽置于水平位置，并在固定位置放好梳子.将冷却到65 °C左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开，直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固，垂直轻拔梳子，取下胶带，将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1 XTAE电泳缓冲液至没过胶板为止.3.加样:在点样板或parafilm上混合DNA样品和上样缓冲液，上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于1X.用10 ul微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内，每加完一个样品，应更换一个加样头，以防污染，加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.（注意:加样前要先记下加样的顺序）.4.电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳，电压60-100V,样品由负极（黑色）向正极（红色）方向移动.电压升高，琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时，停止电泳.（5）电泳完毕后,取出凝胶,用含有0.5 ug/ml的溴化乙锭1 XTAE溶液染色约20 min,再用清水漂洗10 min.（6）观察照相：在紫外灯下观察，DNA存在则显示出红色荧光条带，采用凝胶成像系统拍照保存实验原理闭合环状质粒、线性质粒和开环质粒DNA由于构形不同，在加溴化乙锭的琼脂糖凝胶电泳上呈现不同的迁移率，因而在紫外灯下观察，能区别闭合环状质粒DNA （cccDNA ）、线性质粒DNA （L-DNA ）和开环质粒DNA （ocDNA ）。
实验材料和试剂（一）实验样品质粒pUC118（二）试剂1.1 DNA/Hi ndHI分子量标准2 •溴酚蓝指示剂点样缓冲液0.2% 溴酚蓝50% 蔗糖3. 1mg/ml溴化乙锭溶液4 .电泳缓冲液（TAE ）40 mmol/L Tris-乙酸1 mol/L EDTA（配制方法：24.2 克Tris 碱，5.71ml 冰乙酸，10ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）, 定容至5000ml5. 0.7%琼脂糖凝胶（配制方法：称取琼脂糖0.35克加入50ml TAE电泳缓冲液）（三）仪器微量移液器电泳仪水平电泳槽透射紫外观察仪实验步骤1•选择合适的水平式电泳槽，调节电泳槽平面至水平。
琼脂糖凝胶电泳SOP
琼脂糖电泳操作PROTOCOL一、材料、试剂和器材1、DNA样品。
2、琼脂糖。
3、5×TBE缓冲液：使用时十倍稀释。
4、溴化乙锭（EB）储备液：10mg/ml水溶液。
5、上样缓冲液。
6、DNA分子量标准。
7、电泳槽、电泳仪、紫外检测仪、微量加样枪。
二、操作步骤1、琼脂糖凝胶液配制称取1克琼脂糖，置于干净的三角瓶中，加入100ml 0.5×TBE缓冲液，在微波炉中加热1min，使之彻底融化。
之后，加入3 µlEB储备液混合（终浓度0.5pmg/ml），即制成1％的琼脂糖溶液。
此为示例，琼脂糖浓度应根据实际要求配置。
2、凝胶板的制备将电泳装置所配备的塑料胶托盘放置在胶槽中，注意托盘的放置位置。
水平地放在桌面上。
在胶模的标有黑色条带的一端放上样品梳。
将上述琼脂糖溶液放在室温下，待温度下降至60℃时，倒在凝胶板模具上，室温放置0.5小时左右。
待琼脂糖彻底凝固后，轻轻拔出样品梳。
3、加样将凝胶连同塑料托盘一起放置到电泳槽中，加入0.5×TBE缓冲液，使缓冲液淹过凝胶表面约1mm。
用微量加样品吸取0.5-1 µg DNA样品，按一定（上样缓液：DNA样品＝1：10）的比例（体积/体积）加入上样缓冲液。
混合后吸取10－20ul小心地加到凝胶板上的加样孔中。
按同样的方法在附近的加样孔中加入已知分子量的标准DNA，作为参照。
4、电泳与观察加样的一端接负极，另一端接正极。
以适当电压电泳0.5－1小时。
当指示剂泳动到距凝胶前沿约1厘米的位置时，停止电泳。
带上手套将凝胶板出，置于紫外分析仪下观察和照相。
安全注意：试验中使用的溴化乙锭（EB）为强致癌剂！试验中所有的物品，包括烧杯、胶、手套都不要带到他处！。
1%琼脂糖凝胶的配制
1%琼脂糖凝胶的配制
琼脂糖凝胶是一种由琼脂糖和其他添加剂组成的凝胶，常用于生物学实验中的凝胶电泳等分离技术。
1%琼脂糖凝胶是一种较为常见的浓度，其配制方法如下：
材料与仪器：
- 琼脂糖
- 缓冲液（如TAE或TBE缓冲液）
- 水
- 量筒
- 烧杯
- 搅拌棒
- 电泳槽
- 电泳电源
步骤：
1. 将所需琼脂糖称量并加入烧杯中。
按照1%的浓度，需加入1克琼脂糖。
2. 加入所需缓冲液并充分搅拌，在室温下静置15分钟左右，让琼脂糖充分溶解。
3. 将溶液加热至沸腾，持续搅拌，直至琼脂糖完全溶解。
4. 将溶液冷却至约50℃左右，再加入适量的水调节体积，使其达到所需体积。
一般来说，配制1%琼脂糖凝胶时，需要配制100毫升。
5. 充分搅拌使溶液均匀，然后倒入电泳槽中。
在溶液凝固前，用搅拌棒将表面的气泡排除。
6. 等待凝胶完全固化，即可进行凝胶电泳实验。
注意事项：
1. 在配制过程中，应注意卫生和安全。
避免口吐琼脂糖溶液，避免溶液溅入眼睛等敏感部位。
2. 在加热过程中，应注意溶液是否沸腾过于激烈，避免烫伤或将溶液溅出烧杯。
3. 在调节体积时，应注意准确测量加水量，避免导致浓度错误。
4. 在倒入电泳槽前，应确保凝胶槽干净，避免杂质或细菌污染。
总结：
1%琼脂糖凝胶是一种常见的实验用品，其配制方法简单易行。
在配制过程中，应注意卫生和安全，避免误操作导致事故。
配制完成后，应确保凝胶槽干净，避免影响实验结果。
琼脂糖凝胶电泳详细过程和步骤
琼脂糖凝胶电泳详细过程和步骤
以下是琼脂糖凝胶电泳的详细过程和步骤：
1.准备琼脂糖凝胶：将适当的琼脂糖加入缓冲液中，加热溶解并冷却至适宜的温度，然后倒入凝胶平台或者凝胶胶层中，让其凝胶。
2. 准备电泳缓冲液：根据实验需要选择相应的电泳缓冲液配制好，常用的电泳缓冲液是Tris-缓冲液和磷酸缓冲液。
3.电泳槽和电极的准备：将凝胶放入电泳槽中，将一端连接正电极，另一端连接负电极。
4.样品处理：将样品进行必要的预处理，如加标记、提取纯化等。
5.加载样品：在凝胶上开孔，将处理好的样品加入孔中。
可以使用特殊样品孔或者组合孔的方法进行多重样品的分析。
6.电泳运行：打开电源，设定合适的电压和电流，开始电泳运行。
运行时间根据分离需求，一般为几十分钟到数小时不等。
7. 染色和观察：电泳结束后，将凝胶从电泳槽中取出，进行染色。
常用的染色剂有EtBr（溴化乙锭）、SYBR Green等。
染色后，用紫外线透射或者数字成像系统观察和记录分离结果。
8.分析结果和解释：根据分离结果，分析样品中目标分子的迁移率和相对浓度，进而得到生物分子的分子量、电荷性质等信息。
需要注意的是，琼脂糖凝胶电泳的具体步骤可能会根据分析对象和具体实验要求的不同而有所变化。
总之，琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生物分析技术，通过电场作用和凝胶基质的筛分作用，实现生物分子的分离和测定。
通过合理设计实验步骤，可以获得准确的分析结果，并为后续的研究提供基础数据。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
�RNA琼脂糖凝胶电泳：
配制：
1.0.5M EDTA（pH=8.0）：
100ml：称取18.61g Na2EDTA·2H2O（分子量372.24），加80ml ddH2O剧烈搅拌，
用NaOH调节PH值至8.0（约需2g NaOH）.高压灭菌，室温保存。
2.50×TAE loading buffer:（Tris acetate-EDTA buffer）电泳缓冲液
组分：2M Tris-乙酸；100mM EDTA（pH=8.0）
500mL:称121.1g Trisbase（分子量121.14），加800ml ddH2O溶解，加57.1ml
乙酸和50ml0.5M EDTA溶液（pH=8.0），搅拌，ddH2O定容至500mL.室温保存。
3.1×TAE loading buffer:
取20ml50×TAE，ddH2O定容至1L.室温保存。
4.100×Sybergreen：
500ul：取495ul1×TAE于1.5ml离心管，加入5ul Sybergreen原液混匀，4℃锡纸
避光保存。
注意：Sybergreen原液需稀释10000倍；
6×DNA loading buffer上样缓冲液需稀释六倍，最终稀释倍数应不小于1×。
步骤：
1.制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml，我们用30ml):
称0.3g琼脂糖置于100ml锥形瓶中，加入30ml1×TAE，瓶口倒扣小烧杯。
微波炉加热煮沸3次，至琼脂糖全部融化，摇匀，即成1.0%琼脂糖凝胶液。
2.胶板制备:
取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并放好梳子.
将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止.
3.加样:
样品制备：（10ul体系/样品槽）于0.25ml离心管中
样品RNA（最后加）:2ul/3ul/5ul
6×DNA loading buffer:10/6=1.7ul
100×Sybergreen：0.1ul
DEPC水：至10ul
(注意:加样前要先记下加样的顺序).分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个枪头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.
4.电泳:
加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.
5.电泳完毕后,取出凝胶,利用科212凝胶成像系统,在紫外灯（trans UV）下观察拍照
保存.DNA存在则显示出红色荧光条带.RNA完美提出应该是三条带：28，18,5.8。
28和18比较亮,而且28是18亮度的2倍,5.8基本很模糊，可有可无。