1_血清免疫球蛋白IgG提取1
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硫酸铵中含有氮，会干扰蛋白质的测定，且溶液的缓 冲能力差，故多用于大量蛋白的粗提。若要获得纯化 的免疫球蛋白，必须经过凝胶过滤、离子交换层析和 亲和层析进一步提纯
八、思考题
透析缓冲液与洗涤液有什么不同?
愈低。过高也易引起其他杂蛋白共沉。
温度：一般可在室温下进行，某些对热特别敏感的酶，
则宜低温。
脱盐：透析时间较长，常在低温下进行，并加入防腐剂
避免变性或微生物的污染。
饱和硫酸铵溶液的滴加方式：逐滴，搅拌 盐析后放置时间、离心操作的速度、时间 透析袋的使用
七、方法学评价
硫酸铵水中溶解度高，受温度影响小，不易使蛋白质 变性，操作简单，为盐析中常用的中性盐
室温静置30min, 4℃离心， 4000rpm,10min
上清液（β球蛋白）
沉淀为γ球蛋白
Leabharlann Baidu
沉淀溶于1mL生理盐水 移入透析袋，充分透析，
紫外分光光度计测定蛋白含量
五、结果判断
分别测OD280和OD260处的光密度值，按照公式计算 蛋白质浓度（mg/ml）= 1.45OD280—0.74 OD260
1mL血清＋1mL生理盐水 滴加饱和硫酸铵溶液2mL
四、
室温静置30min, 4℃离心，4000rpm,10min
操 作 步
弃去上清液（含清蛋白）
沉淀溶于1mL生理盐水, 滴加饱和硫酸铵溶液0.5mL
室温静置30min, 4℃离心， 4000rpm,10min
骤
弃去上清液（α、β球蛋白）
沉淀溶于1mL生理盐水, 滴加饱和硫酸铵溶液0.5mL
IgG正常参考值 ：8．00～16．00g／L 1. 效价可用免疫双扩散试验判断； 2. 特异性则可通过双扩、免疫电泳或交叉凝集试验进行考察； 3. 浓度也 可通过免疫浊度法等检测。
六、注意事项
盐的饱和度：影响盐析的重要因素，不同蛋白质的盐
析 要求盐的饱和度不同
pH值：在等电点时，蛋白质溶解度最小越易沉淀析出。 蛋白质浓度：越大越易沉淀，使用盐的饱和度的极限
盐析法纯化血清中IgG类抗体
实验目的
掌握盐析法提取血清免疫球蛋白IgG抗体的原理 熟悉血清IgG提取纯化操作过程和方法
二、实验原理
蛋白质在不同浓度的盐溶液中相对溶解度不同，它在一 定浓度的中性盐溶液中易于沉淀，而其他蛋白质组分在 此时不易沉淀，通过离心可将两者分离。
透析法脱盐:
透析是将含有小分子杂质 的蛋白质溶液装在半透膜 （玻璃纸、火绵纸等）制 的透析袋里放在透析缓冲 液中进行，可不断更换缓 冲液，直至杂质被除去
八、思考题
透析缓冲液与洗涤液有什么不同?
愈低。过高也易引起其他杂蛋白共沉。
温度：一般可在室温下进行，某些对热特别敏感的酶，
则宜低温。
脱盐：透析时间较长，常在低温下进行，并加入防腐剂
避免变性或微生物的污染。
饱和硫酸铵溶液的滴加方式：逐滴，搅拌 盐析后放置时间、离心操作的速度、时间 透析袋的使用
七、方法学评价
硫酸铵水中溶解度高，受温度影响小，不易使蛋白质 变性，操作简单，为盐析中常用的中性盐
室温静置30min, 4℃离心， 4000rpm,10min
上清液（β球蛋白）
沉淀为γ球蛋白
Leabharlann Baidu
沉淀溶于1mL生理盐水 移入透析袋，充分透析，
紫外分光光度计测定蛋白含量
五、结果判断
分别测OD280和OD260处的光密度值，按照公式计算 蛋白质浓度（mg/ml）= 1.45OD280—0.74 OD260
1mL血清＋1mL生理盐水 滴加饱和硫酸铵溶液2mL
四、
室温静置30min, 4℃离心，4000rpm,10min
操 作 步
弃去上清液（含清蛋白）
沉淀溶于1mL生理盐水, 滴加饱和硫酸铵溶液0.5mL
室温静置30min, 4℃离心， 4000rpm,10min
骤
弃去上清液（α、β球蛋白）
沉淀溶于1mL生理盐水, 滴加饱和硫酸铵溶液0.5mL
IgG正常参考值 ：8．00～16．00g／L 1. 效价可用免疫双扩散试验判断； 2. 特异性则可通过双扩、免疫电泳或交叉凝集试验进行考察； 3. 浓度也 可通过免疫浊度法等检测。
六、注意事项
盐的饱和度：影响盐析的重要因素，不同蛋白质的盐
析 要求盐的饱和度不同
pH值：在等电点时，蛋白质溶解度最小越易沉淀析出。 蛋白质浓度：越大越易沉淀，使用盐的饱和度的极限
盐析法纯化血清中IgG类抗体
实验目的
掌握盐析法提取血清免疫球蛋白IgG抗体的原理 熟悉血清IgG提取纯化操作过程和方法
二、实验原理
蛋白质在不同浓度的盐溶液中相对溶解度不同，它在一 定浓度的中性盐溶液中易于沉淀，而其他蛋白质组分在 此时不易沉淀，通过离心可将两者分离。
透析法脱盐:
透析是将含有小分子杂质 的蛋白质溶液装在半透膜 （玻璃纸、火绵纸等）制 的透析袋里放在透析缓冲 液中进行，可不断更换缓 冲液，直至杂质被除去