最新分析方法验证

中间精密度
实验方案同重复性，由不同的实验人员用不同的
仪器测定，并将结果与重复性试验结果一起进行评价。 重现性 国家药品标准采用的分析方法，应进行重现性试验，
如通过不同实验室检验获得重现性结果。
分析方法验证方案及可接受标准
精密度 可接受标准
待测定成分含量 100% 10% 重复性（RSD%） 1 1.5 中间精密度（RSD%） 2 3
专属性
专属性系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）存在下 ，采用的分析方法能正确测定被测物的能力。鉴别反应、杂质检查
和含量测定方法，均应考察其专属性。
检测限 检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。
定量限
定量限系指试样中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果 应符合准确度和精密度要求。对微量或痕量药物分析、定量测定药
—
— — — — —
分析方法验证方案及可接受标准
精密度
精密度包括重复性、中间精密度和重现性 重复性 在规定范围内，取同一浓度（相当于 100% 浓度水平）
的供试品，用至少6 份样品的结果进行评价；或设计 3种不同浓度（
通常是 80% 、100% 和 120% ），每种浓度分别制备 3 份供试品溶液进行 测定，用9份样品的测定结果进行评价。
药品质量标准分析方法验证
刘同欣
ICH指导原则相关要求 中国药典2015年版四部通则相关要求
分析方法验证方案及可接受标准
ICH指导原则相关要求
Type of analytical – procedure ASSAY
IDENTIFICA TION TESTING FOR IMPURITIES
其是后几步反应的中间体）、立体异构体、粗品、重结晶母液等作 为测试品进行系统适用性研究，考察产品中各杂质峰及主成分峰相
互间的分离度是否符合要求，从而验证分析方法对工艺杂质的分离
能力。 同时通过强制降解试验来考察降解杂质。
分析方法验证方案及可接受标准
专属性
对于制剂，根据原料药的化学特性，结合制剂的处方工艺和储 存条件等选用合适的强制降解试验来验证分析方法的专属性。
2015年版药典四部指导原则相关要求
项目 内容 准确度 精密度 重复性 + + + 鉴别 定量 + 杂质测定 限度 含量测定及 溶出量测定 + 校正因子 +
中间精密度
专属性② 检测限 定量限 线性 范围 耐用性
-①
+ +
+
+ -③ + + + +
+ + +
+
+ + + +
+
+ + + + +
2015年版药典四部指导原则相关要求
注释：
① 已有重现性验证，不需要验证中间精密度。 ②如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。
③视具体情况予以验证。
2015年版药典四部指导原则相关要求
准确度
准确度系指采用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程 度，一般用回收率（%）表示。准确度应在规定的范围测定。
原料药采用对照品进行测定，或用本方法所得结果与已知准确
变化。杂质检查可接受标准：系统适用性试验符合要求；各条件下 的杂质的数量和含量应基本一致，杂质含量的绝ຫໍສະໝຸດ Baidu值在±0.1％以内
。含量测定可接受标准：系统适用性试验符合要求；平行配制 2份供
试品溶液，每个条件下测定的6个含量结果的RSD应不大于2.0% 。
分析方法验证方案及可接受标准
溶液稳定性
供试品溶液室温放置 24 小时，分别于 0 、1 、2 、4 、6 、8 、12和 24小时分别进样。
物杂质和降解产物时，应确定方法的定量限。
2015年版药典四部指导原则相关要求
线性
线性系指在设计的范围内，测定响应值与试样中被测物浓度成 比例关系的程度。
范围
范围系指分析方法能达到一定精密度、准确度和线性要求时的 高低限浓度。
耐用性
耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承 受程度。
分析方法验证方案及可接受标准
+
-
+
-（3） + +
+
+ -
+
+
Range
-
+
-
+
ICH指导原则相关要求
注释： “-” signifie sthat this characterristics is not normally evaluated
“+” signifie sthat this characterristics is normally evaluated （1） in cases where reproducibility has been performed, intermediate precision is not needed （ 2 ） lack of specificity of one analytical procedure could be compensated by other supporting analitical procedure(s) （3） may be needed in some cases
样品的测定结果进行评价。
分析方法验证方案及可接受标准
准确度 可接受标准
待测定成分含量 100% 10% 回收率限度（%） 98～101 95～102 RSD（%） 2.0 —
1%
0.1% 0.01% 10μg/g（ppm） 1μg/kg 10μg/kg(ppb)
92～105
90～108 85～110 80～115 75～120 70～125
定，计算公式 ：检测限 =10×响应值标准偏差/标准曲线斜率
分析方法验证方案及可接受标准
线性
应在规定的范围内测定线性关系。可用同一对照品贮备液经精 密稀释，或分别精密称取对照品，制备一系列对照品溶液的方法进
行测定，至少制备5份不同浓度的对照品溶液。以测得的响应信号对
被测物的浓度作图，用最小二乘法进行线性回归。 对于含量测定，线性相关系数不低于0.999，Y轴截距应在100%
度的另一种方法测定的结果进行比较。制剂可在处方量空白辅料中 ，加入已知量被测物对照品进行测定。如不能得到制剂辅料的全部
组分，可向待测制剂中加入已知量被测物对照品进行测定。
2015年版药典四部指导原则相关要求
精密度
精密度系指在规定的条件下，同一份均匀供试品，经多次取样 测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差和相
准确度
方案（以化药制剂为例） 在规定范围内，取同一浓度（相当于 100% 浓度水平）的供试品
，用至少6份样品的结果进行评价；或设计3种不同浓度（通常是80%
、100%和120%），对于要测定含量均匀度的项目，浓度通常是70%、 100% 和130% ），每种浓度分别制备 3 份供试品溶液进行测定，用9 份
进行酸、碱、高温、光、氧化等强制降解试验时，降解程度要
适度，对于敏感条件，通常要求降解10%左右，一般不超过20%。如 样品在某些条件下很稳定，则无必要过度提高降解条件的剧烈程度
。重点考察空白溶剂和空白辅料有没有干扰，各峰之间的分离情况
（通常要求主峰与相邻杂质峰的分离度不小1.5，特定杂质峰与相邻 峰的分离度不小于1.5），峰纯度和物料平衡（95% ～ 105%）。
，则应为下限的 -20% 至上限的 +20% ；杂质测定，范围应根据初步实
际测定数据，拟定为规定限度的±20% 。
分析方法验证方案及可接受标准
耐用性
以HPLC法为例，分别考察流动相比例变化±5％、流动相pH值 变化±0.2、柱温变化±5℃、检测波长变化±5nm、流速相对值变化
±20％以及采用3根不同品牌的色谱柱进行测定时，仪器色谱行为的
相应值得2.0% ；
对于杂质，线性相关系数不低于0.995。
分析方法验证方案及可接受标准
范围
范围系指分析方法能达到一定精密度、准确度和线性要求时的 高低限浓度。
原料药和制剂含量测定，范围一般为测定浓度的 80% ～120%; 制
剂含量均匀度检查，范围一般为测定浓度的70%～130%；溶出度或释 放度中溶出量的测定，范围一般为限度的±30%，如规定了限度范围
有关物质检查可接受标准：主成分峰面积的 RSD 应不大于 2.0%
，杂质含量的绝对值在±0.1％以内，并不得出现新的大于报告限度 的杂质。
含量测定可接受标准：主成分峰面积的 RSD 应不大于 2.0%，不
得出现规律性的降低或升高趋势。
感谢大家的参与！
Thank you！
分析方法验证方案及可接受标准
定量限
直观法 用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地定量测定的最低 浓度或量。
信噪比法 一般以信噪比为10:1时相应的浓度或注入仪器的量确定
定量限。进样6次，主峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%，峰面 积的相对标准差应不大于5.0%。
基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法 该方法通常适用于光谱测
characterristics Accuracy Precision Repeatability Interm.Precision -
quantitat +
limit -
dissolution content/potency +
+ +
-
+ +（1）
Specificity（2）
Detection Limit Quantitation Limit Linearity
1%
0.1% 0.01% 10μg/g（ppm） 1μg/kg 10μg/kg(ppb)
2
3 4 6 8 15
4
6 8 11 16 32
分析方法验证方案及可接受标准
专属性
鉴别 鉴别试验要考察专属性。
含量测定
验证空白和杂质对主成分测定有没有干扰。 有关物质
对于原料药，可根据其合成工艺，采用各步反应的中间体（尤
对标准偏差表示。包括重复性、中间精密度和重现性。
重复性：在相同条件下，有同一个分析人员测定所得结果的精 密度称为重复性；
中间精密度：在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不
同设备测定结果之间的精密度，称为中间精密度； 重现性：在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度
，称为重现性。
2015年版药典四部指导原则相关要求
分析方法验证方案及可接受标准
检测限
直观法 用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓 度或量。
信噪比法 一般以信噪比为3:1或2:1时相应的浓度或注入仪器的量
确定检测限。 基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法 该方法通常适用于光谱测
定，计算公式 ：检测限 =3.3 ×响应值标准偏差/标准曲线斜率