酪氨酸解氨酶(TAL)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
分光光度法测定蛋白酶酶活
分光光度法测定蛋白酶酶活1适用范围本方法适用于中性蛋白酶、酸性蛋白酶酶活得测定。
2测定原理蛋白酶在一定得温度与pＨ条件下，水解酪素（酪蛋白)底物，产生含有酚基得氨基酸（如:酪氨酸、色氨酸等),在碱性条件下，将福林试剂（Ｆolｉn）还原,生产钼蓝与钨蓝,用分光光度计于波长68０nm下测定溶液吸光度.酶活力与吸光度成正比，由此可以计算产品得酶活力。
酶活单位得定义:每１mL粗酶液，在一定温度与pＨ值条件下,10min水解酪素产生１μｇ酪氨酸为一个酶活力单位，以(u/mL)表示。
3仪器与设备3.1分析天平：精度为0、000１ｇ。
3.2紫外分光光度计.3.3恒温水浴锅:精度±０、2℃。
3.4ＰH计:精度为0、01PH单位.4试剂与溶液除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂与蒸馏水。
4.1福林（Foliｎ）试剂市售分析纯福林试剂。
4.2福林使用溶液一份福林试剂与两份水混合，摇匀。
4.3碳酸钠溶液（42、4g/L）称取无水碳酸钠(Nａ2ＣＯ3）42、4g，用水溶解并定容至１000mｌ。
4.4三氯乙酸ｃ(ＣCl３COOH）=0、4ｍｏl/L称取三氯乙酸65、4g，用水溶解并定容至１000 mL。
4.5氢氧化钠溶液c(NａOH）=０、5mol/L称取氢氧化钠片剂20、0g，加水900ml并搅拌溶解，待溶液到室温后加水定容至10００ml,摇匀。
4.6盐酸溶液c（HCL)=1 mol/L及０、１ mol/L1 ｍol／L ＨCL:取90mL浓盐酸溶解于蒸馏水中,定容至１000ｍL.0、1 mｏl/ＬHCL:取9mL浓盐酸溶解于蒸馏水中,定容至1０00mL。
4.7缓冲溶液4.7.1磷酸缓冲液(pＨ=７、5,适用于中性蛋白酶)称取磷酸氢二钠(Nａ２HPO4•12H2O）6、02g与磷酸二氢钠（NaH2PO４•1２H2O)0、５g，加水溶解并定容至１０00mL。
4.7.2乳酸缓冲液（pH＝３、0,适用于酸性蛋白酶）甲液：称取乳酸(8０％～90％）10、6g，加水溶解并定容至1000 mL。
分光光度法测定蛋白酶酶活
分光光度法测定蛋白酶酶活1适用范围本方法适用于中性蛋白酶、酸性蛋白酶酶活的测定。
2测定原理蛋白酶在一定的温度与pH条件下，水解酪素（酪蛋白）底物，产生含有酚基的氨基酸（如：酪氨酸、色氨酸等），在碱性条件下，将福林试剂（Folin）还原，生产钼蓝和钨蓝，用分光光度计于波长680nm下测定溶液吸光度。
酶活力与吸光度成正比，由此可以计算产品的酶活力。
酶活单位的定义：每1mL粗酶液，在一定温度和pH值条件下，10min水解酪素产生1μg酪氨酸为一个酶活力单位，以（u/mL）表示。
3仪器和设备3.1分析天平：精度为0.0001g。
3.2紫外分光光度计。
3.3恒温水浴锅：精度±0.2℃。
3.4PH计：精度为0.01PH单位。
4试剂和溶液除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和蒸馏水。
4.1福林（Folin）试剂市售分析纯福林试剂。
4.2福林使用溶液一份福林试剂与两份水混合，摇匀。
4.3碳酸钠溶液（42.4g/L）称取无水碳酸钠（Na2CO3）42.4g，用水溶解并定容至1000ml。
4.4三氯乙酸c（CCl3COOH）=0.4mol/L称取三氯乙酸65.4g，用水溶解并定容至1000 mL。
4.5氢氧化钠溶液c（NaOH）=0.5mol/L称取氢氧化钠片剂20.0g，加水900ml并搅拌溶解，待溶液到室温后加水定容至1000ml，摇匀。
4.6盐酸溶液c（HCL）＝1 mol/L及0.1 mol/L1 mol/L HCL:取90mL浓盐酸溶解于蒸馏水中，定容至1000mL。
0.1 mol/L HCL：取9mL浓盐酸溶解于蒸馏水中，定容至1000mL。
4.7缓冲溶液4.7.1磷酸缓冲液（pH＝7.5，适用于中性蛋白酶）称取磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O）6.02g和磷酸二氢钠（NaH2PO4•12H2O）0.5g，加水溶解并定容至1000mL。
4.7.2乳酸缓冲液（pH＝3.0，适用于酸性蛋白酶）甲液：称取乳酸（80％～90％）10.6g，加水溶解并定容至1000 mL。
紫外分光光度法测蛋白酶酶活
2013/05/13紫外分光光度法测蛋白酶酶活1、原理蛋白酶在一定的温度与pH条件下，水解酪素底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并使未水解的酪素沉淀除去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定。
根据吸光度计算其酶活力。
酶活单位的定义：每1mL粗酶液，在一定温度和pH值条件下，1min水解酪素产生1ug酪氨酸为一个酶活力单位，以（u/mL）表示。
2、试剂和溶液三氯乙酸、氢氧化钠、盐酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、乳酸、乳酸钠、硼酸钠（硼砂）均为分析纯，酪素、酪氨酸为生化试剂。
2.1 三氯乙酸c（CCL3·COOH）=0.4mol/L称取三氯乙酸65.4g，用水溶解并定容至1000 mL。
2.2 氢氧化钠溶液c（NaOH）=0.5mol/L按GB601配制。
2.3 盐酸溶液c（HCL）＝1 mol/L及0.1 mol/L1 mol/L HＣＬ:取90mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。
0.1 mol/L HＣＬ：取9mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。
2.4 缓冲溶液a、磷酸缓冲液（pH＝7.5）适用于中性蛋白酶称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）6.02g和磷酸二氢钠（NaH2PO4·12H2O）0.5g，加水溶解并定容至1000mL。
b、乳酸缓冲液（pH＝3.0）适用于酸性蛋白酶甲液称取乳酸（80％～90％）10.6g，加水溶解并定容至1000 mL。
乙液称取乳酸钠（70％）16g，加水溶解并定容至1000 mL。
使用溶液取甲液8 mL，加乙液1 mL，混匀，稀释一倍，即成0.05moi/L乳酸缓冲溶液。
c、硼酸缓冲溶液（pH＝10.5）适用于碱性蛋白酶甲液称取硼酸钠（硼砂）19.08g，加水溶解并定容至1000 mL。
乙液称取氢氧化钠4.0g，加水溶解并定容至1000 mL。
使用溶液取甲液500 mL、乙液400 mL混匀，用水稀释至1000mL。
分光光度法测定蛋白酶酶活知识讲解
分光光度法测定蛋白酶酶活分光光度法测定蛋白酶酶活1适用范围本方法适用于中性蛋白酶、酸性蛋白酶酶活的测定。
2测定原理蛋白酶在一定的温度与pH条件下，水解酪素（酪蛋白）底物，产生含有酚基的氨基酸（如：酪氨酸、色氨酸等），在碱性条件下，将福林试剂（Folin）还原，生产钼蓝和钨蓝，用分光光度计于波长680nm下测定溶液吸光度。
酶活力与吸光度成正比，由此可以计算产品的酶活力。
酶活单位的定义：每1mL粗酶液，在一定温度和pH值条件下，10min水解酪素产生1μg酪氨酸为一个酶活力单位，以（u/mL）表示。
3仪器和设备3.1分析天平：精度为0.0001g。
3.2紫外分光光度计。
3.3恒温水浴锅：精度±0.2℃。
3.4PH计：精度为0.01PH单位。
4试剂和溶液除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和蒸馏水。
4.1福林（Folin）试剂市售分析纯福林试剂。
4.2福林使用溶液一份福林试剂与两份水混合，摇匀。
4.3碳酸钠溶液（42.4g/L）称取无水碳酸钠（Na2CO3）42.4g，用水溶解并定容至1000ml。
4.4三氯乙酸c（CCl3COOH）=0.4mol/L称取三氯乙酸65.4g，用水溶解并定容至1000 mL。
4.5氢氧化钠溶液c（NaOH）=0.5mol/L称取氢氧化钠片剂20.0g，加水900ml并搅拌溶解，待溶液到室温后加水定容至1000ml，摇匀。
4.6盐酸溶液c（HCL）＝1 mol/L及0.1 mol/L1 mol/L HCL:取90mL浓盐酸溶解于蒸馏水中，定容至1000mL。
0.1 mol/L HCL：取9mL浓盐酸溶解于蒸馏水中，定容至1000mL。
4.7缓冲溶液4.7.1磷酸缓冲液（pH＝7.5，适用于中性蛋白酶）称取磷酸氢二钠（Na2HPO4•12H2O）6.02g和磷酸二氢钠（NaH2PO4•12H2O）0.5g，加水溶解并定容至1000mL。
4.7.2乳酸缓冲液（pH＝3.0，适用于酸性蛋白酶）甲液：称取乳酸（80％～90％）10.6g，加水溶解并定容至1000 mL。
生化试剂SOP标准操作程序（魅力）
⽣化试剂SOP标准操作程序（魅⼒）ALT/GPT 丙氨酸氨基转移酶试剂盒临床意义：本试剂盒适⽤于体外临床检验，⽤于测定⼈⾎清中丙氨酸氨基转移酶的活⼒。
临床上，有许多疾病会导致⾎清中丙氨酸氨基转移酶活⼒增⾼。
如肝胆类疾病：包括传染性肝炎、肝癌、肝硬变活动期、中毒性肝炎、脂肪肝、胆管炎；⼼⾎管疾病：包括⼼肌梗塞、⼼肌炎、脑出⾎等。
⼀些药物和毒物也可以引起ALT活性升⾼：如氯丙嗪、异烟肼、奎宁、酒精、铅、汞、有机磷等。
因此，⾎清丙氨酸氨基转移酶活⼒的测定可⽤于这些致病的诊断和监测，特别是⽤于肝胆类疾病的诊断和肝功能检测⽅法原理：上海科华⽣物⼯程股份有限公司的丙氨酸氨基转移酶试剂盒以IFCC1（国际临床化学委员会）推荐法为基础设计，采⽤两步法测定：丙氨酸氨基转移酶L-丙氨酸+ α-酮戊⼆酸-----------------------→丙酮酸+ L-⾕氨酸乳酸脱氢酶丙酮酸+ β-NADH + H+---------------→L-乳酸+ H2O + NAD+底物L-丙氨酸和α-酮戊⼆酸在丙氨酸氨基转移酶催化下,⽣成丙酮酸和L-⾕氨酸.其中丙酮酸在乳酸脱氢酶的催化下,⽣成了L-乳酸,并同时引起了β-NADH的氧化,使波长340nm处的吸光度下降.在⼀定底物浓度范围内,β-NADH的氧化所引起的340nm处吸光度的下降速率与⾎清中丙氨酸氨基转移酶活⼒成正⽐。
样本：病⼈准备：应空腹取⾎。
样本类型：新鲜⽆溶⾎现象的⾎清或EDTA抗凝⾎浆。
最少样品量：0.2ml。
样本稳定性：⾎清中的ALT在2～8℃可稳定7天，不推荐使⽤冰冻保存的样本2。
仪器与试剂:仪器：魅⼒1800⽣化分析仪试剂：上海科华⽣物⼯程股份有限公司的丙氨酸氨基转移酶试剂盒试剂准备：丙氨酸氨基转移酶试剂盒为即开即⽤的液体双剂型，⽆需特殊准备。
试验⽤试管的直径在12～16mm。
试剂组份：参见试剂盒内说明书。
注意事项：1.此试剂为体外诊断⽤。
2.试剂有毒，不要⼊⼝，吞下有害，如误服（包括内部接触）应⽴即寻求医疗保护。
谷氨酸合成酶(GOGAT)活性检测试剂盒说明书__紫外分光光度法UPLC-MS-4450
谷氨酸合成酶（GOGAT）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号：UPLC-MS-4450规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体60mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×2支4℃保存试剂三粉剂×2支4℃保存试剂四粉剂×2支-20℃保存溶液的配制：1、工作液的配制：取试剂二、试剂三、试剂四各一支加入30mL试剂一中溶解，现用现配，可分装后-20℃保存，避免反复冻融。
产品说明：GOGAT主要存在于原核生物、酵母菌及高等植物非绿色组织的前质体中，和谷氨酰胺合成酶（GS）共同构成GS/GOGAT循环，参与氨同化的调控。
GOGAT以NADH为电子供体，催化谷氨酰胺的氨基转移到α-酮戊二酸形成两分子的谷氨酸，NADH在340nm 吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
10000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
紫外分光光度法测定单宁含量检测试剂盒说明书
单宁含量检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号：BC1390规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体75mL×2瓶2-8℃保存试剂一粉剂×1瓶常温保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、标准品：10mg 单宁酸。
临用前加入1.175mL 提取液溶解为5000nmol/mL 的标准液，2-8℃保存两周。
产品说明：单宁又称植物多酚，是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。
单宁可作为潜在的生物标记物；与蛋白质结合的能力又称为收敛性或涩性。
其收敛性是多种生理活性的基础，如止血、抗肿瘤、抗衰老等生理活性，也是影响产品口感的因素之一。
根据光谱特性，单宁在275nm 下有较强的紫外吸收，通过利用活性炭能够特异吸附单宁的性质来检测单宁含量。
技术指标：最低检出限：0.385nmol/mL 线性范围：0.39-18nmol/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、30-50目筛、蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）将样本烘干至恒重，粉碎，过30-50目筛之后，称取约0.1g ，加入2mL 提取液（封口膜封口防止液体溅出），于70℃水浴，准确提取30min ，期间可摇晃数次。
12000rpm，25℃，离心10min ，取上清，用提取液定容至2mL ，待测。
二、测定步骤1.紫外分光光度计预热30min ，波长调至275nm ，提取液调零。
Beijing Solarbio Science &Technology Co.,LtdTel:400-968-6088Fax:************2.标准液的稀释：将标准液用提取液稀释为25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125nmol/mL标准溶液。
第三章 木质素chapter 3 lignin
可合成500万亿ｔ木质素。
按热焓 enthalpy 容量计算，生物学上产生能量 40% 储存 在木质素中store in lignin，来源丰富、价格低廉的可再生植 物资源regenerated plant resource。 工业木质素industrial lignin：主要来源于造纸制浆蒸煮废水
2000～3000，木质素磺酸盐lignosulfonate一般为
20000～50000）
3.1 植物细胞壁的木质素化作用 lignification of plant cell wall
（3）碱木质素alkali lignin因分子上缺乏 be short of the hydrophilic and hydrophobic groups 亲油亲水性均较理 想的官能团，在有机相和水相中的溶解度 solubility均不高，溶于碱性介质； （4） 组成不稳定unstable，使产品性能波 动大。；
ห้องสมุดไป่ตู้
3.1 植物细胞壁的木质素化作用 lignification of plant cell wall
3.1.1 木质素（ lignin）资源
一、木质素资源lignin resource
地球上资源丰富的天然聚合物nature polymer，在植物中的 存在量仅次于纤维素second to cellulose。全球陆生植物每年
Formation of resonance-stabilized phenoxy radicals by the enzymic dehydrogenation of coniferyl alcohol. 松柏醇被过氧化酶和H2O2hydrogen peroxide 的脱氢dehydrogenation作用 p80
酪氨酸酶活性抑制实验方案报告
酪氨酸酶活性抑制实验方案报告1．1 材料：酪氨酸酶（或用马铃薯制备）、L-酪氨酸、熊果苷、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠恒温仪、紫外分光光度计、离心机。
1.2 试剂配制1)磷酸钠缓冲液(1/15 mol／L，pH=6．8)精确称取1.000 g磷酸二氢钠，1.186 g磷酸氢二钠，加入少量去离子水溶解后，定容至500 mL，4℃冰箱保存备用。
2)L-酪氨酸溶液(7.5 mmol/L)精确称取L_酪氨酸0.272 g，先加入数滴浓盐酸，加去离子水约50 mL，微热完全溶解后，用氢氧化钠溶液调pH至7左右，加去离子水定容至200mL。
3)受试液精确称取受试样品0.1g，分别溶于20 mL去离子水，得到5 mg/mL的待测液，再对倍稀释到2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125 mg/mL。
4)阳性对照(+CK)精确称取0.1 g熊果苷粉末，溶于20mL的去离子水中，得到5 mg/mL的阳性对照母液，再对倍稀释到2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125mg/mL。
5) 酪氨酸酶液的制备以新鲜完好的马铃薯制取酪氨酸酶液。
具体操作为：将马铃薯洗净，于4℃预冷4h左右。
去皮，切成约1.0 cm3丁状，于-20℃冷冻过夜。
称重，按1：1( W:V )的比例加入4℃ 预冷的磷酸钠缓冲液，用组织捣碎机制成匀浆，3层纱布过滤，滤液于4000 r/min离心10 min，上清液即为所得的酪氨酸酶粗酶液，4℃保存，2 h内用完。
1.3 检测方法总反应体系为5mL。
具体设计见表l。
在此体系中，受试液，包括阳性对照熊果苷的终浓度(mg/mL)梯度为0.03l25、0.062 5、0.125，0.25、0.5。
实验时，向试管中依次加入磷酸盐缓冲液、不同浓度梯度的受试液(包括阳性对照)、酶液，于30℃水浴10 min。
然后加入底物L-酪氨酸，立即开始计时。
测定反应20 min时475 nm波长下的吸光值。
谷氨酰胺酶(GLS) 活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
谷氨酰胺酶(GLS)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1450规格：50T/24S产品内容：提取液：液体70mL×1瓶，4℃保存；使用前37℃预热。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入10mL提取液溶解。
试剂二A：液体1mL×1支，4℃保存。
试剂二B：液体4mL×1瓶，4℃保存；临用前将试剂二A倒入试剂二B中混匀（A:B=1：4比例），或者根据样本所需，按照体积比试剂二A：试剂二B=1:4现配现用。
试剂三：液体5mL×1瓶，常温保存。
标准品：液体1mL×1支，10µmol/mL氮标准液，4℃保存；使用前37℃预热。
产品说明：GLS（EC3.5.1.2）主要存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和氨，在氮素代谢中具有重要调控作用，尤其是调节游离氨含量和尿素代谢。
本试剂盒利用靛酚蓝比色法测定GLS催化谷氨酰胺生成的氨来计算其酶活性。
试验需自备仪器和用品：台式离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和双蒸水。
操作步骤：一、粗酶液提取：1.组织：按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5-10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液），冰上匀浆后于4℃，12000g离心15min，取上清置于冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500-1000：1的比例（建议500万个细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）；然后4℃，12000g离心15min，取上清置于冰上待测。
二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至630nm，蒸馏水调零。
2、将标准溶液用提取液稀释32倍得0.3125μmol/mL的标准溶液。
3、样品测定（在EP管中加入下列试剂）试剂名称（µL）测定管对照管标准管空白管样品8080--提取液-320-400试剂一320---混匀，37℃水浴1小时--标准液--400-试剂二80808080试剂三60606060蒸馏水460460460460混匀，室温放置30min，630nm处读取吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管，计算ΔA=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空白管。
紫外分光光度法测蛋白酶酶活[详解]
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紫外分光光度法测蛋白酶酶活1、原理蛋白酶在一定的温度与pH条件下，水解酪素底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并使未水解的酪素沉淀除去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定。
根据吸光度计算其酶活力。
酶活单位的定义：每1mL粗酶液，在一定温度和pH值条件下，1min水解酪素产生1ug酪氨酸为一个酶活力单位，以（u/mL）表示。
2、试剂和溶液2.1 三氯乙酸c（CCL3·COOH）=0.4mol/L称取三氯乙酸65.4g，用水溶解并定容至1000 mL。
2.2 氢氧化钠溶液c（NaOH）=0.5mol/L按GB601配制。
2.3 盐酸溶液c（HCL）＝1 mol/L及0.1 mol/L1 mol/L HＣＬ:取90mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。
0.1 mol/L HＣＬ：取9mL浓盐酸溶解于去离子水中，定容至1000mL。
2.4 缓冲溶液a、磷酸缓冲液（pH＝7.5）适用于中性蛋白酶称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）6.02g和磷酸二氢钠（NaH2PO4·12H2O）0.5g，加水溶解并定容至1000mL。
b、乳酸缓冲液（pH＝3.0）适用于酸性蛋白酶甲液称取乳酸（80％～90％）10.6g，加水溶解并定容至1000 mL。
乙液称取乳酸钠（70％）16g，加水溶解并定容至1000 mL。
使用溶液取甲液8 mL，加乙液1 mL，混匀，稀释一倍，即成0.05moi/L乳酸缓冲溶液。
c、硼酸缓冲溶液（pH＝10.5）适用于碱性蛋白酶甲液称取硼酸钠（硼砂）19.08g，加水溶解并定容至1000 mL。
乙液称取氢氧化钠4.0g，加水溶解并定容至1000 mL。
使用溶液取甲液500 mL、乙液400 mL混匀，用水稀释至1000mL。
上述各种缓冲溶液，均须用pH计校正。
2.5 10g/L酪素溶液称取酪素1.000g，精确至0.001g，用少量0.5mol/L氢氧化钠溶液（若酸性蛋白酶则用浓乳酸2～3滴）湿润后，加入适量的各种适宜pH的缓冲溶液约80 mL，在沸水浴中边加热边搅拌，直到完全溶解，冷却后，转入100 mL容量瓶中，用适宜的ｐH缓冲溶液稀释至刻度。
碱性蛋白酶(AKP)活性测定试剂盒说明书
碱性蛋白酶（AKP）活性测定试剂盒说明书碱性蛋白酶（Alkaline protease, AKP）活性测定试剂盒说明书微量法100T/48S注意：正式测定之前选择23个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：AKP是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类，属于丝氨酸蛋白酶。
此外，该酶还能够水解酯键、酰胺键，具有转酯及转肽的功能。
该酶是主要工业用酶之一，广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。
测定原理：在碱性条件下，AKP水解酪蛋白生成酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝；钨蓝在680nm有特征吸收峰，测定680nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。
自备仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、0.5 mL EP管和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加5mL蒸馏水溶解。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入10mL试剂一，沸水浴中磁力搅拌溶解。
（可在烧杯上盖一层保鲜膜，注意观察，避免水分全部蒸发，一般加热1530分钟，该试剂为过饱和试剂，充分混匀后仍出现颗粒物不溶物不影响使用）。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加20mL蒸馏水溶解。
试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存。
标准品：液体1mL×1支，0.25μmol/mL标准酪氨酸溶液，4℃保存。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。
2. 血清或培养液：直接测定。
3. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
转氨酶测定实验报告原理
一、实验背景转氨酶（Transaminase）是一类催化氨基酸与酮酸之间氨基转移反应的酶类，广泛存在于生物体内。
在人体中，转氨酶主要存在于肝脏、心肌、骨骼肌等组织中，其中以肝脏中的活性最高。
转氨酶在氨基酸的合成与分解、蛋白质代谢、能量代谢等过程中发挥着重要作用。
血清转氨酶水平是反映肝细胞损伤程度的重要指标，对于肝脏疾病的诊断和监测具有重要意义。
二、实验原理1. 转氨酶活性测定方法目前，测定转氨酶活性的方法主要有紫外分光光度法、化学比色法等。
本实验采用紫外分光光度法测定血清谷丙转氨酶（SGPT）活性。
2. 实验原理（1）谷丙转氨酶（SGPT）催化丙氨酸（Ala）与α-酮戊二酸（α-KG）之间的氨基转移反应，生成谷氨酸（Glu）和丙酮酸（Pyruvate）。
Ala + α-KG → Glu + Pyruvate（2）生成的丙酮酸在酸性条件下与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）反应，生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙（2，4-DNP-Pyruvate）。
Pyruvate + 2，4-DNPH → 2，4-DNP-Pyruvate（3）丙酮酸2，4-二硝基苯腙在碱性条件下呈棕色，可通过紫外分光光度法测定其吸光度，从而计算出谷丙转氨酶的活性。
三、实验步骤1. 准备工作（1）配制丙氨酸-α-酮戊二酸底物溶液：将一定量的丙氨酸和α-酮戊二酸溶解于缓冲溶液中，配制成一定浓度的底物溶液。
（2）配制2，4-二硝基苯肼溶液：将2，4-二硝基苯肼溶解于一定浓度的盐酸溶液中，配制成一定浓度的溶液。
（3）配制碱性溶液：将氢氧化钠溶解于去离子水中，配制成一定浓度的碱性溶液。
2. 样品处理（1）取一定量的血清样品，加入适量去离子水，混匀。
（2）取一定量的血清样品，加入适量的丙氨酸-α-酮戊二酸底物溶液，混匀。
（3）将混合液置于37℃水浴中保温一定时间。
3. 反应终止取一定量的混合液，加入适量的2，4-二硝基苯肼溶液，混匀。
4. 测定吸光度在特定波长下，测定混合液的吸光度。
酪氨酸酶抑制剂筛选
记录每分钟
含底物缓冲液+
不同浓度的抑制剂
+ 酶液
的OD值
30度水浴10min
对酪氨酸酶单酚酶（二酚酶）影响
以OD值—时间作图
曲线的切线反向延长与X轴相交点 即为—延滞时间 若均相交于一点—抑制剂对延滞 时间没有影响 若不交于一点—抑制剂对延滞时 间有影响 曲线1为无抑制剂的对照组 曲线2—7抑制剂浓度由低到高 切线斜率即为酶活
酪氨酸酶抑制性实验
酪氨酸酶
底物
酪氨酸酶
产物（++++++）多
底物
抑制剂
产物 （++）少或无
EC是各种酶的编号 可在The Comprehensive Enzyme Information System（BRENDA）数据库 中找到对应的酶信息
Enzyme-Ligand Interactions
酶信息
实验原理
酪氨酸酶催化的反应为：
475nm
酶活的定义
1.酪氨酸酶的酶活定义: 以每分钟催化生成1umol多 巴色素的酶量为一个活力单位。 通过测定酶催化反 应体系OD475随时间的增长曲线, 从曲线斜率即可得 到酶活=106kv/ε (k斜率 v体积l ε消光系数) 酶比活=106 kv/εm(k斜率,v体积L,ε消光系数,m酶质量 mg ) 2.剩余酶活％=Kt/K ×100 ％ 3.抑制酶活％ （被抑制的活力）=（K-Kt)/K ×100 ％ Kt=有抑制剂的曲线的斜率 K=没有抑制剂的曲线的斜率
酶活的推导
1.Beer定律A=kbc，公式A=kbc kbc εc 我们测得的动力学曲线斜率△A/t= ε△c/t= ε△M/tV △M/t=△A V /tε △M/t = kv/ε
分光光度法测定蛋白酶酶活
分光光度法测定蛋白酶酶活1适用范围本方法适用于中性蛋白酶、酸性蛋白酶酶活得测定。
2测定原理蛋白酶在一定得温度与pH条件下,水解酪素(酪蛋白)底物,产生含有酚基得氨基酸(如:酪氨酸、色氨酸等),在碱性条件下,将福林试剂(Ｆolin)还原,生产钼蓝与钨蓝,用分光光度计于波长680nm下测定溶液吸光度。
酶活力与吸光度成正比,由此可以计算产品得酶活力。
酶活单位得定义:每１mL粗酶液,在一定温度与ｐH值条件下,10min水解酪素产生1μg酪氨酸为一个酶活力单位,以(u／ｍL)表示。
3仪器与设备3.1分析天平:精度为0。
0０01g。
3.2紫外分光光度计。
3.3恒温水浴锅:精度±0。
2℃。
3.4PＨ计:精度为0.0１PＨ单位。
4试剂与溶液除非另有说明,在分析中仅使用分析纯试剂与蒸馏水。
4.1福林(Foｌin)试剂市售分析纯福林试剂、4.2福林使用溶液一份福林试剂与两份水混合,摇匀。
4.3碳酸钠溶液(42、4ｇ／L)称取无水碳酸钠(Na2CＯ3)4２.4ｇ,用水溶解并定容至1０0０ml。
4.4三氯乙酸c(ＣCl3COOH)=0、4mｏｌ/Ｌ称取三氯乙酸６５、4g,用水溶解并定容至１000 mL、4.5氢氧化钠溶液ｃ(NaOH)＝0.5ｍol／L称取氢氧化钠片剂２0。
0g,加水90０ml并搅拌溶解,待溶液到室温后加水定容至1000ml,摇匀。
4.6盐酸溶液c(HCL)=1 mol/L及0。
１mol/L1 ｍol/L HＣL:取９０mL浓盐酸溶解于蒸馏水中,定容至1000mＬ。
０、1 ｍol/Ｌ HCL:取9mL浓盐酸溶解于蒸馏水中,定容至100０ｍＬ、4.7缓冲溶液4.7.1磷酸缓冲液(pH＝７。
5,适用于中性蛋白酶)称取磷酸氢二钠(Na２ＨPO4•12Ｈ2Ｏ)6、02ｇ与磷酸二氢钠(NaＨ2ＰO4•1２Ｈ2O)0、5ｇ,加水溶解并定容至1000mL。
4.7.2乳酸缓冲液(ｐH=3。
0,适用于酸性蛋白酶)甲液:称取乳酸(80％～９0％)10、6g,加水溶解并定容至1000 ｍL。
肌酸激酶(CK)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法
肌酸激酶（CK）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC1140规格：50T/48S产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1瓶，-20℃避光保存，临用前加10mL蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；试剂二：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入0.5mL蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；试剂三：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入1mL蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；试剂四：粉剂×2支，-20℃避光保存，临用前加入0.65mL蒸馏水溶解；用不完的分装后-20℃保存，禁止反复冻融；试剂五：液体15mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：C肌酸激酶（Creatine Kinase，CK）(EC2.7.3.2)也成为肌酸磷酸激酶，主要存在于心脏、肌肉以及脑等组织中，能可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应，是一个与细胞能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶。
CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH，导致340nm光吸收值增加，以此来表示CK酶活。
自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、恒温水浴锅和蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取1.组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
2.血清样本：直接测定。
3.细胞样本：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液）加入提取液，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，10000g离心10min，取上清待测。
酪氨酸酶的提取及其酶促反应动力学研究
酪氨酸酶的提取及其酶促反应动力学研究一、实验目的1.认识生物体中酶的存在和催化作用，了解生物体系中在酶促反应的特点，认识一些生物化学过程的特殊性。
2.掌握生物活性物质的提取和保存方法，了解研究催化反应特别是生物化学体系中催化过程的基本思想和方法。
二、实验原理酶（enzyme）是由生物细胞合成的、对特定底物（substrate）起高效催化作用的蛋白质，是生物催化剂。
生物体内所有的化学反应几乎都是在酶的催化作用下进行的。
只要有生命活动的地方就有酶的作用，生命不能离开酶的存在。
在酶的催化下，机体内物质的新陈代谢有条不紊地进行着；同时又在许多因素的影响下，酶对代谢发挥着巧妙的调节作用。
生物体的许多疾病与酶的异常密切相关；许多药物也可通过对酶的作用来达到治疗的目的。
随着酶学研究的深入，必将对人类社会产生深远影响和作出巨大贡献。
酶的化学本质是蛋白质。
结构上，同样具有一、二、三级结构，有些酶还具有四级结构。
分子的化学组成上，有单纯酶和结合酶之分。
单纯酶分子是仅由蛋白质构成的酶，不含其他物质，如脲酶、活化蛋白酶、淀粉酶、核糖核酸酶等等。
结合酶分子是由蛋白质分子和非蛋白质部分组成，前者称为酶蛋白（apoenzyme），后者称辅助因子（cofactor）。
辅助因子是金属离子或有机小分子。
酶蛋白与辅助因子结合形成的复合物称全酶（holoenzyme），酶蛋白和辅助因子各自独立存在时，均无催化活性，只有全酶才有催化活性。
在酶促反应中酶蛋白决定着反应的专一性和效率，而辅助因子则决定着反应的种类和性质。
辅助因子按其与酶蛋白结合的紧密程度和作用特点，一般分为辅酶（coenzyme）和辅基（prosthetic group）。
辅酶是指辅助因子与酶蛋白结合松弛，没有固定的组成比，往往可用透析或超滤法除去，在反应中作为底物接受质子或基团后离开酶蛋白，参加另一酶促反应并将所携带的质子或基团转移出去，或者相反。
而辅基是指与酶蛋白结合比较紧密，与酶蛋白有一定的组成比，不能通过透析或超滤法除去，在反应中辅基不能离开酶蛋白。
酪氨酸酶活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
酪氨酸酶活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC4050规格：50T/48S产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×3瓶，4℃保存。
临用前每瓶加入15mL提取液充分溶解待用。
现配现用。
产品说明：酪氨酸酶（tyrosinase：EC1.14.18.1）是一种单酚单加氧酶，是具有双功能的含铜糖蛋白，广泛存在于植物、酵母和动物组织中。
酪氨酸酶是生物体合成黑色素的关键酶，也是引起果蔬酶促褐变的主要因素，同时也对昆虫的免疫及生长有重要影响酪氨酸酶催化L-多巴生成多巴色素，其在475nm下有特征吸收峰，进而测定出酪氨酸酶的活性。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理：（1）组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。
12000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
（2）细胞或微生物样品的制备：先收集细胞或微生物样品到离心管内，弃上清，按照每500万细胞或微生物加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）。
12000g，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
（3）血清（浆）：直接检测。
二、测定步骤：（1）分光光度计预热30min，波长调至475nm。
蒸馏水调零。
（2）加样表：在1mL玻璃比色皿中分别加入试剂名称（μL）测定管试剂一900样品100充分混匀后立即测定10s时在475nm下的吸光度，记为A1，之后迅速将其放入37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴或培养箱中3min。
然后迅速拿出擦净后测定190s时的吸光度，记为A2。
计算ΔA=A2-A1。
三、酪氨酸酶活力计算：1、按蛋白浓度计算：单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化生成1nmol多巴色素的酶量定义为一个酶活性单位。
酶活性检测——精选推荐
酶活性检测④分光光度法利⽤底物和产物光吸收性质的不同，可直接测定反应混合物中底物的减少量或产物的增加量。
⼏乎所有的氧化还原酶都使⽤该法测定。
如还原型辅酶Ⅰ(NADH2)和辅酶Ⅱ(NADPH2)在340nm有吸收，⽽NAD和NADP在该波长下⽆吸收，脱氢酶类可⽤该法测定。
该法测定迅速简便，⾃动扫描分光光度计的使⽤对酶活⼒的快速准确的测定提供的极⼤的⽅便。
酶在⾷品加⼯中的作⽤就像⼀把双刃剑，我们要趋利避害。
酶的积极作⽤我们要加强，在⾷品加⼯过程中添加酶制剂，使其作⽤充分发挥;消极作⽤我们要尽量避免，可以通过加热等⽅法将酶灭活，消除其不利影响。
为了将酶更好地应⽤于⾷品加⼯，研究酶的性质是⼗分必要的。
⽽紫外-可见分光光度法是研究酶性质的重要⽅法之⼀。
下⾯我们来介绍⽤-可见分光光度计测定酶活的具体⽅法。
紫外-可见分光光度法测定酶活：1. β⼀半乳糖苷酶β⼀半乳糖苷酶，⼜称乳糖酶(Lactase)。
能⽔解乳糖来降低乳制品的乳糖含量，从⽽提⾼乳制品的可消化性，⽤于低乳糖⽜奶和⾮结晶型浓缩⽜奶的⽣产及奶酪风味的改变，同时还可⽤于⽣产低聚半乳糖。
【酶活测定】以ONPG为底物测定β-半乳糖苷酶活⼒。
【酶活定义】以ONPG为底物，37℃保温酶解，每分钟释放lµmol/L邻硝基酚的酶量，定义为1个酶活⼒单位。
2. 超氧化物歧化酶超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，简称SOD)是⼀种⼗分重要的⽣物体防⽌氧化损伤的酶类，是⽣物体内超氧阴离⼦清除剂，保护细胞免受损伤。
SOD⼴泛存在于各类⽣物体内，所有好氧微⽣物细胞中都含有SOD。
⾃1969年Mccord等⼈⾸次发现了SOD ⽣物活性后，医学界对其医疗作⽤做了许多研究，证明它具有抗衰⽼、抗肿瘤、抗辐射、抗缺⾎、提⾼⼈体免疫⼒等作⽤，被专家称为21世纪最有前途的药⽤酶。
欧美国家已开始将其应⽤于医疗、⾷品、保健、化妆品等领域。
【酶活测定】在25℃4.5ml 50mmol/L pH8.3的K2HPO4- KH2PO4缓冲液中加⼊待测SOD样液，再加⼊10ul 50mmol/L的连苯三酚，迅速摇匀，倒⼈光径lcm 的⽐⾊杯，在325nm波长下每隔30s测⼀次A值。
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酪氨酸解氨酶（TAL）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC4060
规格：50T/48S
产品内容：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存。
临用前每瓶加入5mL双蒸水和20μL浓HCl充分溶解待用。
现配现用。
产品说明：
酪氨酸解氨酶（TAL）广泛存在于植物和微生物中，是苯丙氨酸次生代谢途径的关键酶之一。
TAL能够跃过肉桂酸-4-羟基化酶（C4H）直接将酪氨酸转化为香豆酸，香豆酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。
TAL能够分解酪氨酸产生香豆酸，其在310nm下有吸收峰，根据吸光度的变化率可计算出TAL活性。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰、浓盐酸和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理：
（1）组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。
12000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
（2）细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照每500万细胞或细菌加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）。
12000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤：
（1）紫外分光光度计预热30min，波长调至310nm。
蒸馏水调零。
（2）加样表：在1mL石英比色皿中分别加入
试剂名称（μL）测定管
试剂一700
试剂二200
样品100
充分混匀后立即测定10s时在310nm下的吸光度，记为A1，之后迅速将其放入37℃水浴或37℃培养箱中3min。
然后迅速拿出擦净后测定190s时的吸光度，记为A2。
计算ΔA=A2-A1。
三、TAL活力计算：
1、按蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟在310nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活性单位。
TAL（U/mg prot）=ΔA÷0.01×V反总÷(V样×Cpr)÷T=333×ΔA÷Cpr。
2、按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟在310nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活性单位。
TAL（U/g鲜重）=ΔA÷0.01×V反总÷(W÷V提取×V样)÷T=333×ΔA÷W。
3、按细胞或细菌个数计算：
单位的定义：每104个细胞或细菌在反应体系中每分钟在310nm下吸光度变化0.01定义为一个酶活性单位TAL（U/104cell）=ΔA÷0.01×V反总÷(500÷V提取×V样)÷T=0.667×ΔA。
V反总：反应总体积，1mL；V样：加入的样品体积，0.1mL；
Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；
V提取：提取液体积，1mL；500：500万个细胞；
T：反应时间，3min。
注意事项：
1、当ΔA大于0.2或者A1大于1.5时，建议将样品用蒸馏水稀释后测量；ΔA过小时，建议增加酶促反应时间
（5min或10min）或增加加入的样品体积来测定。