蚕豆根尖细胞微核实验
蚕豆根尖微核测试技术
7 镜检及微核识别 找到分生组织区细胞分散均匀、膨大、分裂相对多的部位， 再转到高倍镜（物镜40X）下进行观察 微核的识别标准 （1）凡是主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。 （2）小核着色与主核相当或稍浅。 （3）小核形态可以是圆形、椭圆形、不规则形。 每一处理观察5个根尖，每个根尖观察1000个细胞，并计数 其中有微核的细胞数（微核千分率）
蚕豆根尖微核测试技术
实验原理
蚕豆根尖细胞在分裂时染色体的复制过程中常 发生断裂，断裂下来的片段在正常情况下能自行 复位愈合，如果此时受到外界诱变因子的作用， 会阻碍染色体的愈合，于是会出现微核，由于产 生的微核数量与外界诱变因子的强弱成正比，所 以可用微核出现的百分率来评价环境诱变因子对 生物遗传物质影响的程度。
4 “污染指数”判别：此方法可避免因实验条件等因 素带来的微核千分率本底的波动，故较宜适用。 污染指数=样品实测微核千分率平均值/对照组微 核千分率平均值 0-1.5 基本没有污染 1.5-2.0 轻污染 2-3.5中污染 3.5以上重污染
பைடு நூலகம்
结果分析与报告
1 各测试样品微核千分率的计算 2 如果被检测样品不多，可直接用各样品微核千分率平 均值与对照组比较（t检验），从差异的显著性判断 水质污染与否。 3 如果监测的样品较多，可先用方差分析（F检验）看 各采样点所测的微核千分率平均值和对照的差异显 著性。如差异显著，还可进行各采样点微核差异显 著性的多重比较，看被检样品微核千分率平均值差 异显著性的分组情况，以归纳划分这些不同采样点 不同级别的污染程度。
3 根尖细胞恢复培养 处理后的种子用自来水（或蒸馏水）浸洗三次，每次2～3分 钟。洗净后再置入辅有湿脱脂棉中，25℃下再恢复培养 22～24h。 4 固定 将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，用卡诺 氏固定液固定24小时。固定后的根如不及时制片，可换入 70%的乙醇溶液中置4℃冰箱中保存备用。 5 解离：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5分钟，吸 净蒸馏水，加入5mol/L盐酸将幼根浸没，室温下酸解10分 钟，幼根软化即可。 6染色 吸去盐酸，用蒸馏水浸洗幼根三次，每次1～2分钟。截下 1～2mm左右长的根尖，滴加席夫氏试剂（在生物实验可 以和经过酸化的DNA 发生反应，DNA 被染成紫红色，而 不和核仁，细胞质发生反应，因此可以来鉴定DNA的存 在。），染色5～8分钟，加盖玻片，压片观察
环境污染物的蚕豆根尖微核试验
环境污染物的蚕豆根尖微核试验实验内容随着工农业生产的迅速发展，新的化学物质和工业“三废”不断地进入人们的生活环境，它们中有许多可能对遗传物质产生损害并造成致癌、致畸、致突变等遗传毒理效应的环境致突变物，可对人类健康和生存构成严重危害。
微核试验(Themicro nucleu stest, MN T)是以动植物为材料，采用细胞生物学手段，观测其出现的微核率来表示材料受遗传损伤程度的一种检测遗传毒物的方法。
微核是无着丝点的染色体断片，在有丝分裂后期不能向两极移动，所以游离于细胞质中，在间期细胞核形成时，即可在它附近看到一到几个很小的圆形结构，直径大约是细胞直径的 1 ／20 － 1 ／ 5 ，这就是微核（micronucleus ）。
微核是常用的遗传毒理学指标之一，指示染色体或纺锤体的损伤。
由于这种损伤会因细胞受到的外界诱变因子的作用而加剧，而微核产生的数量又可与诱变因子剂量的强弱呈正比，因此可以用微核出现的频率来评价环境诱变因子对生物遗传物质的损伤程度。
蚕豆(Vicia faba)是一种理想的细胞遗传学研究材料。
蚕豆的染色体大，数量少(2n=12),根尖中含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察，而且蚕豆根尖细胞周期中的大部分时间对诱变剂敏感，便于遗传毒性检测实验，因此，早在1959年，放射生物学家已经用蚕豆的根尖细胞来进行X射线的遗传损伤研究。
到了上世纪70年代，蚕豆根尖染色体畸变技术已发展得相当成熟，作为一种检测化学品遗传学毒性的方法为人们所知并被广泛采用。
蚕豆根尖微核试验在1986 年已被中国环保局列为一种环境生物测试的规范方法，它作为一种环境变异的检测手段，在我国不少地区的环保部门和医疗卫生系统中都有广泛的应用。
蚕豆根尖微核试验在对水体污染物、空气污染物、农药、重金属、化妆品、工业化学品等的致突变性检测方面，都得到了较广泛的应用，在此仅以农药污染的蚕豆微核实验为例介绍其相应的实验方法与步骤，学生在具体开展相关环境污染物的蚕豆根尖微核试验时可参考使用。
蚕豆根尖微核技术实验方案
实验方案(蚕豆根尖微核技术)
一、实验题目
蚕豆根尖微核技术检测流仓河污水污染情况
二、实验目的
1、利用植物压片技术和微核实验原理，设计实验方案，研究环境中存在的毒害物；
2、理解环境致突变因子对生物体DNA的损伤
3、掌握环境因子遗传毒性检测的微核实验方法
4、培养初步的科研能力
三、材料仪器与方法
1.1材料仪器
选取蚕豆大小均匀籽粒饱满无虫害100颗，采集于流仓河污水，烧杯，剪刀，培养皿，量筒100ml，，胶头滴管，显微镜，卡诺固定液，5 mol/L盐酸，石炭酸品红溶液，天平（带砝码）
1.2方法
1.2.1污水处理
将采集到的污水稀释100倍、10倍、不稀释，用自来水做对照
1.2.2蚕豆根尖的培养处理
将蚕豆用蒸馏水浸泡一天使其充分吸胀，然后用滤纸浸水放于培养皿中在25℃恒温箱中培养24h。
每12小时换水一次。
待蚕豆初生根长至2cm左右，选取长度一致的蚕豆，分别用蒸馏水，1倍稀释液，10倍，50倍，100倍，分别处理6h，其中蒸馏水作为阴性对照处理。
然后再放于25℃恒温箱恢复培养24h。
卡诺固定液固定24 h；固定好的幼根以蒸馏水浸洗两次，用5 mol/L的盐酸于28℃水解约25 min，至幼根被软化即可；然后用蒸馏水洗净切取0.5cm的根尖，用改良的石炭酸品红溶液染色5~10分钟。
1.2.3制片
用常规压片法制作临时装片。
1.2.4镜检计数
每剂量组选取5个根尖，每个根尖随机镜检1000个细胞，计算微核率MCN‰=观察到微核细胞数/观察细胞总数*1000‰。
实验六蚕豆根尖微核检测技术学时综合性设计性(ppt)
蚕豆根尖微核检测记录表
试验号
镜检日期
片号
第一片
各自观察的细胞 细胞数 微核数
数或微核数
镜检者
第二片
第三片
细胞数 微核数 细胞数 微核数
总计 平均微核千分率
实验六蚕豆根尖微 核检测技术学时综 合性设计性(ppt)
（优选）实验六蚕豆根尖微核 检测技术学时综合性设计性
由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各 样工业废物的排出，使人们需要有一套高度灵敏、技术 简单的测试系统来监视环境的变化。只有真核的测试系 统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传 危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。且 有研究显示以植物进行微核测试与以动物进行的一致率 可达99%以上。目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、 辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及 癌症前期诊断等各方面。
五、实验方法
1．实验材料的培育 蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量高，因而对
诱变因子反应敏感。松滋青皮豆是从不同蚕豆品种中 筛选出来的一种较为敏感的品种。本品种引入后在栽 培繁殖时要注意不要同其它蚕豆品种种在一起，不喷 洒农药、以保持该品种较低的本底微核值。也可用其 它蚕豆品种，但是必须设置对照组。种子成熟后，晒 干贮藏于干燥器内或4℃冰箱内备用。
3． 处理
每一处理选取6-8粒初生根生长良好、根长一致的 种子，放入盛有待测物溶液的培养皿中，浸没根尖。 阳性因子可采用CrO3（1.0和2.5 mol/L）、NaN3 （0.5、1.0和1.5mol/L）或EMS（150和200 mol/L）， 另取一处污水作待检测物质，用自来水作对照，共9 个处理，处理根尖6～24h(处理时间可视实验需要和 被测液浓度而定)。
蚕豆根尖微核试验的应用与发展
癌变·畸变·突变 1999年第11卷第3期 Carcinogenesis Teratogenesis and Mutagenesis Vol11No31999蚕豆根尖微核试验的应用与发展臧 宇 综述 薛开先 审校江苏省肿瘤防治研究所 南京 210009 蚕豆根尖微核试验在1986年已被中国环保局列为一种水环境生物测试的规范方法。
它作为一种环境致突变性的检测手段,在我国不少地区的环保部门和医疗卫生系统中都有广泛的应用。
近十多年来仅国内关于蚕豆根尖微核试验的论文就已达百余篇。
本文在前人工作积累的基础上,对蚕豆根尖微核技术的理论、方法学和应用方面做一个阶段性的综述,希望有助于有关学者和工作人员全面了解本方法以及今后的改进和普及。
1 研究背景蚕豆(V icia f aba)是一种很好的细胞遗传学研究材料。
蚕豆的染色体组型为六对相当大的染色体,而且根尖含有较多的分裂相细胞,非常适合显微观察。
早在1959年,放射生物学家已经用蚕豆的根尖细胞来进行X射线的遗传损伤研究。
到了70年代,蚕豆根尖染色体畸变技术已发展得相当成熟,作为一种检测化学品遗传学毒性的方法为人们所知,并广泛采用。
而蚕豆根尖的微核试验是1982年由Degrassi 和Rizzoni正式介绍的(1),他们指出微核试验与染色体畸变试验同样具有准确、快速、有明显的剂量—效应关系等特点,操作更简便,也更适于大批量样品的检测。
美国国家环保局也肯定了蚕豆根尖细胞学试验在环境致突变性检测中的作用,对许多环境致癌物都作了标准化的试验,建立了庞大的数据库,并建议在全世界范围内推广(2)。
蚕豆根尖细胞微核实验的测试终点是微核出现的频率。
微核是常用的遗传毒理学指标之一,指示染色体或纺锤体的损伤。
由于这种损伤会因细胞受到的外界诱变因子的作用而加剧,而微核产生的数量又可与诱变因子剂量的强弱呈正比,因此可以用微核出现的频率来评价环境诱变因子对生物遗传物质的程度(3)。
实验06 蚕豆根尖微核检测技术
实验六蚕豆根尖微核检测技术一、实验目的⒈了解微核测试原理和毒理遗传学意义。
⒉学习蚕豆根尖的微核测试技术。
二、实验原理微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。
在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/10，染色与主核一样或稍浅。
一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。
三、实验器材和药品松滋青皮蚕豆、显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、1mol／L盐酸、改良苯酚品红染液、NaN3。
四、方法与步骤⑴浸种催芽：择饱满、均匀的种子，洗净后用蒸馏水常规浸种、催芽24～30h，此期至少换水2次；待种子充分吸胀后，移入铺有干净、双层湿纱布的托盘内培养。
⑵用被检测液处理根尖：当初生根长到1～2cm时，选初生根生长良好的蚕豆6～8粒，分别放入蒸馏水（CK）、0.４mmol／L、0.８mmol／L、1.2mmol／L的NaN3中染毒8～12h。
⑶根尖细胞恢复培养：处理后的种子用蒸馏水（自来水）浸洗3次，每次2～3 min；将处理液洗净后，置于湿棉花上恢复22～24h；同时均设蒸馏水处理为空白对照组。
以上温度均为25℃。
⑷根尖细胞固定：将恢复后的种子，从根尖顶端切下1～1.5cm长的幼根，用Carnoys 固定液固定20～24h。
固定后的根如不及时制片，可换入70%的酒精溶液中置4℃冰箱中保存备用。
⑸酸解：用1mol／L盐酸在60±5℃下酸解8min，幼根软化即可。
⑹染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1～2分钟。
最后浸于水中。
制片前取出置载玻片上，截下1～2mm左右长的根尖，滴1-2滴改良苯酚品红染液染色10～15min 后，加上盖玻片，覆以吸水纸常规压片。
利用蚕豆根尖细胞微核技术检测咖啡和茶叶对细胞生长的影响
利用蚕豆根尖细胞微核技术检测咖啡和茶叶对细胞生长的影响一、实验目的1、学习蚕豆根尖的微核测试技术。
2、探究咖啡对蚕豆根尖生长的影响。
3、探究茶叶对蚕豆微核的影响。
二、实验原理微核（micronuclei）试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。
无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。
用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。
微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。
若采用核型稳定的细胞,确立统一的操作协议,进行实验室间的合作建立数据库,应用探针技术的微核试验很可能被纳入遗传毒理学试验。
蚕豆(Vicia faba)是一种理想的细胞遗传学研究材料。
蚕豆的染色体大，数量少(2n=12),根尖中含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察，而且蚕豆根尖细胞周期中的大部分时间对诱变剂敏感，便于遗传毒性检测实验。
咖啡问世以来受到世界各地人们的追捧,不论是老人还是年轻人。
众所周知咖啡有提神的功效，有助于防止放射线伤害，而且咖啡会起到预防肝癌的作用但是咖啡还有一些副作用，如：经常喝咖啡会使人上瘾，饮用过多的咖啡人麻痹瘫痪等。
茶叶在中国有着悠久的历史，如今也受到世界各地人们的青睐。
喝茶对人体有很大的益处，如：茶叶中的茶多酚可与重金属结合产生沉淀，使身体中的一些有害物质迅速排出体外，达到解毒的效果。
三、实验仪器、试剂、材料3.1主要实验仪器盖玻片、恒温水浴锅、恒温培养室（25℃）、冰箱、培养皿、棉花、纱布、计数器、光学显微镜、烧杯等。
3.2主要实验试剂卡纳氏固定液：三份纯酒精与一份冰醋酸混合制成、70%乙醇、0.1mol/L盐酸、改良苯酚品红染液。
3.3实验材料褐皮蚕豆种子、速冲咖啡、茶叶。
实验四 蚕豆根尖微核监测技术
实验四蚕豆根尖微核监测技术（VMT）一、实验目的学习如何利用高等植物间期体细胞遗传检测系统以监测环境中的致突变物。
二、原理在细胞分裂早期，若受到有害理化因子的攻击，使染色体发生断裂，产生染色体片段。
在这些片段中，有些可能重新愈合恢复正常，随细胞分裂进入子细胞，有些则由于缺乏着丝点，不能移向细胞的极部而变成圆球体，像卫星一样分布在主核的周围，这便是微核，由于染色体片段的大小和数量不一，所以微核的大小和数量也不相同。
而蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量多，因而对诱发物的反应敏感，通过显微镜下的观察和计数，便可监测环境污染。
三、器材与试剂（一）显微镜、温箱、恒温水浴箱、冰箱、手揿计数器、解剖盘、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、试剂瓶、烧杯等显微镜压片实验用具。
（二）试剂1.5N HCl、45%醋酸、卡诺氏液（无水乙醇3份加冰醋酸1份配成，固定根尖时随用随备）、Schiff试剂、SO洗涤液。
2四、操作步骤1、蚕豆浸种催芽（1）浸种：将当年或前一年的松滋青皮豆种子按需要量放入盛有有自来水的烧杯中，臵25℃温箱内，浸泡20~30小时，此期间至少换水2次，换用的水最好事先臵于25℃温箱中预温。
（2）催芽：待种子吸胀后，用纱布松松包裹臵解剖盘内，保持温度，在25℃的温箱中催芽12~24小时。
待种子初生根露出2~3mm时，再选取发芽良好的种子，放入铺有薄层温脱脂棉的解剖盘内，仍臵入25℃的温箱中继续催芽，注意保护湿度。
再经24~36h，种子大部分初生根长至2~3cm，根毛发育良好，这时就可用来作为监测水源样品或药物溶液突变效应之间。
2、被监测液处理根尖（1）每一处理选取6~8粒初生根尖生长良好，根长一致的种子，放入盛有被测液的培养皿中，被测液浸泡住根尖即可，用自来水处理作对照，方法相同。
（2）处理时间4~6h。
3、根尖细胞恢复培养：（1）将处理的种子，用自来水浸洗8次，每次2~3min。
（2）洗净后的种子再放入新铺好湿脱脂棉的解剖盘内，按前述培养条件使根尖细胞恢复22~24h。
实验六蚕豆根尖微核检测技术学时综合性设计性
一、实验目的 1．了解染色体畸变的各种类型、微核测试的原理和 毒理遗传学在实际生活与工作中的应用范围及意义 2．学习蚕豆根尖的微核测试技术
二、实验原理
微核简称(MCN)，是真核生物细胞中的一种异常结构， 往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。在细胞间 期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主 核1／3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核 一样。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断 片产生的，但有些实验也证明整条的染色体或多条染色 体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被 两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。已经证实微 核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关， 这一点和染色体畸变的情况一样。所以可用简易的间期 微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。
五、实验方法
1．实验材料的培育 蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量高，因而对
诱变因子反应敏感。松滋青皮豆是从不同蚕豆品种中 筛选出来的一种较为敏感的品种。本品种引入后在栽 培繁殖时要注意不要同其它蚕豆品种种在一起，不喷 洒农药、以保持该品种较低的本底微核值。也可用其 它蚕豆品种，但是必须设置对照组。种子成熟后，晒 干贮藏于干燥器内或4℃冰箱内备用。
6．酸解：
从70％乙醇中取出固定好的根尖→流水冲 洗３min→吸水纸吸干→放入盛有适量1 mol/L HCl，60±0.5℃水浴保温的青霉素瓶中→解离 10min。
7．染色 改良石炭酸品红染色：
解离后材料水洗3min并吸干，挑取1个根 尖的乳白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴 加1～2滴染液，染色10～15min，压片。
3． 处理
每一处理选取6-8粒初生根生长良好、根长一致的 种子，放入盛有待测物溶液的培养皿中，浸没根尖。 阳性因子可采用CrO3（1.0和2.5 mol/L）、NaN3 （0.5、1.0和1.5mol/L）或EMS（150和200 mol/L）， 另取一处污水作待检测物质，用自来水作对照，共9 个处理，处理根尖6～24h(处理时间可视实验需要和 被测液浓度而定)。
利用蚕豆根尖细胞的微核试验进行安全毒理评价
利用蚕豆根尖细胞的微核试验进行安全毒理评价利用蚕豆根尖细胞的微核试验进行安全毒理评价摘要当致畸性化学物质作用于细胞周期G期和S期时～可以诱发染色体畸变～作用于G12[1]期～诱发染色单体畸变。
染色体畸变后在显微镜下可观察到微核。
用洗发水、洗面奶、洗衣粉处理蚕豆根尖～并根据微核出现率与对照组进行了t检验。
结果表明:三种毒液均会诱发微核效应～其中洗发水、洗面奶基本无污染～洗衣粉属轻度污染。
关键词蚕豆根尖微核效应安全评价微核是染色体畸变的一种表现形式，为有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体片段，在分裂末期未能进入主核，便在细胞质中形成了一个或多个圆形或杏仁状结构。
微核游离于主核之外，大小在主核的1/3以下。
其折光率与细胞化学反应性质和主核一样，也具有合成DNA的能力。
许多理化因素，如辐射、化学药剂等作用于分裂细胞会诱发染色体畸变，形成微核。
通过测定微核率，可应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂、环境检测的安全评价及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。
.尤其是各种化学产品与日俱增,研究和探索与人民生产和生活密切相关的化学产品对人类健康的影响和潜在危害性[2] 有重要的意义。
1材料与方法1.1材料蚕豆宿舍同学使用的洗发水、洗面奶和洗衣粉自来水卡诺氏I液 Giemsa染色 1mol/L的HCl1.2方法1.2.1蚕豆种子的吸涨和发芽取20粒蚕豆种子，用自来水于22—23?下浸种24h。
种子吸涨后，保持湿度和温度催芽2天。
1.2.2毒液处理各取10粒种子，分别用自来水和三种毒液分别培养种子1天后，用蒸馏水将根浸洗，1洗净后再将其置于培养皿中保持温度培养24h。
1.2.3Giemsa染色和压片剪取上述种子根尖约1cm，用卡诺氏I液固定数小时。
用蒸馏水浸洗两次，吸干后加入1mol/L的HCl将幼根于60?下酸解10—15min，使幼根软化。
倒去HCl，吸干水再加Giemsa[3] —15min。
蚕豆根尖微核检测技术
蚕豆根尖微核检测技术实验名称: 方便面面饼液对蚕豆根尖微核率的影响专业年级: 2010级级生物科学成员: 尹忠围安树珺谢林芝刘伟指导教师:实验时间: 2013年4 月一、摘要用蚕豆根尖细胞微核技术检测不同种类方便面面饼液微核的诱变效果。
设置了阴性对照:自来水处理组，实验组:康师傅、统一、老坛，麻老表四组饼液分别处理蚕豆根尖，阳性对照:用0.02g/L的醋酸铅溶液处理。
发现方便面面饼液在诱导微核产生方面影响明显，醋酸铅溶液具有诱导微核产生的作用。
关键字:蚕豆根尖，方便面面饼，微核千分率，污染指数二、实验背景和目的随着现代社会的发展，越来越多的化学物质运用到人们的日常生活之中，如种类繁多的食品添加剂。
而其中有些物质具有较强的危害，如致畸，致癌，致突变等。
为了检测已存在或潜在的危害，各种检测技术应运而生。
微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。
无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。
用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。
微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。
我们采用蚕豆作为实验材料，采用植物微核技术来检测方便面面饼中添加剂对人体是否产生危害。
方便面是日常生活中经常接触到的食品，其市场占据快餐食品的大壁江山，在超市中油炸方便面与非油炸方便面占到快餐食品的60%到70%。
另一方面，在各媒体的报道中，经常出现有关方便面的食用危害，而且很有争议，所以这也是我们进行本实验的一个原因。
三、实验原理微核是间期细胞中在细胞核之外存在的一个或多个圆形或杏仁状结构，大小在主核的1/3以下，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。
20世纪70年代初，Matter和Schmid等首先用动物骨髓细胞微核率来测定怀疑具有诱变活力的化合物，并称之为微核。
利用蚕豆根尖细胞的微核实验进行安全毒理评价
利用蚕豆根尖细胞的微核试验进行安全毒理评价摘要当致畸性化学物质作用于细胞周期G1期和S期时，可以诱发染色体畸变，作用于G2期，诱发染色单体畸变。
染色体畸变后在显微镜下可观察到微核。
[1]用洗发水、洗面奶、洗衣粉处理蚕豆根尖，并根据微核出现率与对照组进行了t检验。
结果表明：三种毒液均会诱发微核效应，其中洗发水、洗面奶基本无污染，洗衣粉属轻度污染。
关键词蚕豆根尖微核效应安全评价微核是染色体畸变的一种表现形式，为有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体片段，在分裂末期未能进入主核，便在细胞质中形成了一个或多个圆形或杏仁状结构。
微核游离于主核之外，大小在主核的1/3以下。
其折光率与细胞化学反应性质和主核一样，也具有合成DNA 的能力。
许多理化因素，如辐射、化学药剂等作用于分裂细胞会诱发染色体畸变，形成微核。
通过测定微核率，可应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、食品添加剂、环境检测的安全评价及染色体遗传疾病和癌症前期诊断等各个方面。
.尤其是各种化学产品与日俱增,研究和探索与人民生产和生活密切相关的化学产品对人类健康的影响和潜在危害性有重要的意义。
[2]1材料与方法1.1材料蚕豆宿舍同学使用的洗发水、洗面奶和洗衣粉自来水卡诺氏I液Giemsa染色1mol/L的HCl1.2方法1.2.1蚕豆种子的吸涨和发芽取20粒蚕豆种子，用自来水于22—23℃下浸种24h。
种子吸涨后，保持湿度和温度催芽2天。
1.2.2毒液处理各取10粒种子，分别用自来水和三种毒液分别培养种子1天后，用蒸馏水将根浸洗，洗净后再将其置于培养皿中保持温度培养24h。
1.2.3Giemsa染色和压片剪取上述种子根尖约1cm，用卡诺氏I液固定数小时。
用蒸馏水浸洗两次，吸干后加入1mol/L的HCl将幼根于60℃下酸解10—15min，使幼根软化。
倒去HCl，吸干水再加Giemsa染液染色10—15min。
[3]1.2.4微核（micronuclei,MN.）的统计选择根尖分生组织区平铺均匀的细胞，在油镜下直接观察计数。
蚕豆的根尖实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 观察蚕豆根尖的结构；2. 学习并掌握蚕豆根尖的制片技术；3. 探讨不同处理对蚕豆根尖细胞的影响。
二、实验原理蚕豆根尖是植物学研究的重要材料，其结构简单，易于观察。
根尖包括根冠、分生区、伸长区和成熟区。
本实验通过观察蚕豆根尖的结构，了解不同处理对根尖细胞的影响，从而为后续研究提供依据。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜蚕豆、酒精、盐酸、醋酸洋红染液、载玻片、盖玻片、镊子、剪刀、解剖镜、显微镜等。
2. 实验试剂：95%酒精、15%盐酸、醋酸洋红染液。
四、实验步骤1. 取新鲜蚕豆，用剪刀剪去根尖，放入装有95%酒精的试管中浸泡30分钟，以固定细胞。
2. 将浸泡好的蚕豆根尖放入装有15%盐酸的试管中，在室温下处理30分钟，以解离细胞。
3. 将解离好的蚕豆根尖取出，用蒸馏水清洗3次，去除多余盐酸。
4. 将清洗干净的蚕豆根尖放入装有醋酸洋红染液的试管中，染色5-10分钟。
5. 将染色的蚕豆根尖取出，用蒸馏水清洗3次，去除多余染液。
6. 将清洗干净的蚕豆根尖放在载玻片上，用镊子轻轻压扁，盖上盖玻片。
7. 在显微镜下观察蚕豆根尖的结构，记录不同处理对根尖细胞的影响。
五、实验结果与分析1. 根尖结构观察（1）根冠：位于根尖的最前端，细胞排列紧密，具有保护作用。
（2）分生区：位于根冠之后，细胞较小，排列紧密，细胞核较大，具有强烈的分裂能力。
（3）伸长区：位于分生区之后，细胞停止分裂，开始迅速伸长，是根伸长最快的地方。
（4）成熟区：位于伸长区之后，细胞停止伸长，分化形成导管和根毛，是根吸收水分和无机盐的主要部位。
2. 不同处理对根尖细胞的影响（1）空白对照组：蚕豆根尖细胞结构正常，无异常现象。
（2）酒精处理组：蚕豆根尖细胞结构出现变形，部分细胞核变大，染色体凝聚。
（3）盐酸处理组：蚕豆根尖细胞结构出现严重变形，部分细胞核破碎，染色体断裂。
（4）醋酸洋红染液处理组：蚕豆根尖细胞结构正常，染色体染色均匀。
蚕豆根尖细胞微核实验
蚕豆根尖细胞微核实验蚕豆根尖细胞微核技术检测洗衣粉的毒性姓名：马丽同组者：李哲指导教师：郝雪峰（太原师范学院生物系112班）摘要微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。
在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/20，染色与主核一样或稍浅。
一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。
[1] Abstract Micronucleus (MCN, micronucleus) is eukaryotic cells by various physical and chemical factors caused by chromosome aberration, and in a form of interphase cells. In interphase cells micronucleus assumes the circular or elliptic, free from the main nuclear, nuclear 1/3 ~ 1/20 size should be in the main, dyeing and the main nuclear as or slightly shallow. Generally considered microkernel byacentric chromosome fragment or lagging chromosomes, in the late division could not enter the nucleus, formed the main nuclear nuclear block. When the cells into the next phase split between, they condense into main small nuclear nuclear, namely the microkernel.[1]关键词蚕豆根尖微核洗衣粉染色体畸变千分率Keyword Broad bean root tipMicronucleus Washingpowder Chromosomalaberration Permillage引言掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。
7,8,9综合实验蚕豆根尖微核检测技术
实验目的
1.了解微核检测的原理和毒理遗传学 2.学习蚕豆根尖微核检测技术
实验原理
微核（micronucleus，MCN）：
是真核生物细胞内遗传物质的一种异常结构
微核率（ MCN ‰）与作用因子的剂量或累积
效应呈正相关
污染指数
实验材料
蚕豆根尖
实验步骤
1、浸种催芽：将实验用蚕豆按需要量放入盛有自来水的杯中，浸 泡24h，此间至少换水两次。种子吸胀后，25℃催芽，置于铺 有湿润滤纸的培养皿中，经36—48h，大部分初生根长至1— 2cm。 2、用被检测溶液处理蚕豆根尖：每一处理选取3-5粒初生根生长 良好的已萌发种子，放入盛有被测的培养皿中，被测液浸没根 尖即可。阳性检测因子可采用CrO3、NaN3、重铬酸钾、EDTA为加 强阳性效果可适当加大溶度，如1.0—2.5mol/L CrO3和0.5— 1.5mol/L NaN3、溶液。另外可取一污水作被检液之一，用自来 水（或蒸馏水）处理作对照。处理根尖12—24h，此时间也可 视试验要求和被检液溶度而定。
实验结果
若进行污水检测，根据污染指数鉴定出你所测水样的污染程 度，也可以计算被检化学药剂的污染指数。 污染指数（PI)=样品实测MCN ‰平均值/对照组（标准水） MCN ‰平均值 污染指数在0.50—1.50区间基本没 有污染； 1.51—2.00区间为轻度污染； 2.01—3.50区间为中度污染； 3.51以上为重度污染。
实验步骤
5、酸解：用蒸馏水浸洗固定好的幼根两次，每次5min，吸净蒸馏 水，加mol/L盐酸将幼根浸没，室温下解离10min至根尖软化。
6、染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1—2min。最后 浸于水中，制片前取出置于载玻片上，截下1—2mm长的根尖，滴 一滴石炭酸品红，染色10min，加一盖玻片，压片观察。
[小学]蚕豆根尖微核试验
![[小学]蚕豆根尖微核试验](https://img.taocdn.com/s3/m/c158301b81c758f5f71f677b.png)
[小学]蚕豆根尖微核试验学生设计性实验论文毒物对蚕豆根尖细胞的微核诱变效应姓名雷旭红学号2013131203专业生物科学班级 132相关实验课程名称细胞生物学实验,指导教师郝雪峰实验学期 2014-2015 学年第二学期太原师范学院教务处编印洗衣粉、洗衣露诱发蚕豆根尖细胞微核实验研究摘要掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。
根据微核诱导的原理，利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗衣粉的毒性状况给出客观评价。
结果表明:洗衣粉会诱导微核的产生，说明洗衣粉、洗衣露在超过一定浓度内对生物细胞是有毒的。
Abstract :Broad bean root tip cells micronucleus general method detection technology to master. According micronucleus induction principle, the use of nuclear civia toxicity testing technology gives an objective assessment of the situation detergent. The results showed that: detergent will produce micronuclei induction, indicating that exceed a certain concentration of detergent in a biological cell is toxic关键词蚕豆根尖细胞洗衣粉洗发露微核诱导作用损伤Key words : Civia detergent rinse micronuclei induced damage引言人类在发展经济的同时，对自然生活资源的肆意了开发和对环境的无偿利用，已造成了全球生态破坏、资源浪费和短缺、环境污染等重大问题。
为了探明环境污染物对生物机体是否有蓄积毒作用，必须从环境的一致性着手。
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吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1～2分钟。最后浸于水中。制片前取出置载玻片上，截下1～2mm左右长的根尖，滴1-2滴改良苯酚品红染液染色20min，之后方可压片观察。
1.3.8 压片观察
对各种不同处理的根尖分生组织进行常规压片，每个处理各取3个根尖压片。在高倍镜下观察压片根尖分生区细胞分散良好的区域，并统计不少于1000个细胞中的微核数，然后再统计算出每个根尖的MCN‰。[3]
(3) small nuclear shape can be round, irregular, etc. [3]
1. 材料与方法
1.1实验材料
蚕豆种子、洗衣粉、显微镜、镊子、培养皿、剪刀、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、盐酸酒精解离液、改良苯酚品红染液等。
1.2 毒液配制
选取所测洗衣粉，按平时所用比例与水混合均匀。
微核试验是一种以染色体断裂及纺缍丝损伤等为测试终点的植物微核监测方法，是监测致突变性污染的一种经济快速方法。随着工农业生产的迅速发展,新的化学物质和工业“三废”不断地进入人们的生活环境,它们中有许多可能对遗传物质产生损害并造成“致癌、致畸、致突变”等遗传毒理效应的环境致突变物,可对人类健康和生存构成严重危害.[6]通过实验表明，洗衣粉也具有一定的致癌性。
处理后的种子用蒸馏水（自来水）浸洗3次，每次2～3 min；将处理液洗净后，置于干净培养皿恢复22～24h；同时均设蒸馏水处理为空白对照组。以上各步操作温度均在常温下进行。
1.3.5 根尖细胞固定
将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm左右长的幼根，用卡诺氏液固定10～12 h。
1.3.6 酸解
用蒸馏水浸洗固定好的幼根3次，每次5min，吸净蒸馏水，加入盐酸酒精解离液60℃下酸解6～8min，幼根软化即可。
(1) all the main nuclear size under a third, separated from the main nuclear small nuclear;
(2) nuclear quite a small nuclear staining with the Lord or slightly shallow;
5.参考文献
[1] 陈光荣，金波，李明等.蚕豆根尖微核技术.见：环境监测技术规范第四册生物（水环境部分）。国家环保局，1986,75～78.
[2] 陈光荣、金波、李明等.污染指数在微核技术监测水质污染中的应用.中国环境科学，1986，6（2）：60～63.
[3] 陈光荣、金波、李明等.蚕豆叶尖细胞威吓测定（MCNT）及其监测大气污染的研究.中国环境科学，1988，6（2）：3～8.
（1）凡主核大小1/3以下，与主核分离的小核；
（2）小核的着色与主核相当或稍浅；
（3）小核形态可为圆形，不规则等。[2]
ForewordGrasp the broad bean root tip cells micronucleus test technique of general method. And use the broad bean root tip cell micronucleus test on the shampoo's toxic condition objective evaluation is given, and shows broad bean root tip cells MCN is sensitive to stress, broad bean root tip micro nuclear technology can be used in the safety monitoring of toiletries.
一
4.71（3.94，4.22，5.97）
2.38
中污染
二
5.45（4.81，4.95，6.59）
2.75
中污染
三
5.11（4.46，4.89，5.98）
2.58
中污染
结论：各样品MCN‰差异不大，但都和对照组相比差异较显著，表明洗衣粉存在一定致突变性，且对人体有危害，但不是很大。
3. 讨论
从以上的实验结果及分析可看到，洗衣粉使蚕豆根尖细胞产生微核。
[4] 陈光荣、金波、李明等.蚕豆细胞微核技术监测农业土壤污染的研究.环境科学，1988，13（2）：74～77.
[5] 王永兴等.应用蚕豆根尖细胞微核技术监测太湖水质的研究.中国环境科学，1997，17（3）：252.
[6]陈瑞娇、李均祥.《韶关学院学报（自然科学）》，2006年09期。
[7]张江丽、王淑敏等。《环境与健康杂志》，2009年09期。
实验证明，我们的洗漱用品具有一定的毒性，作用于蚕豆根尖后引起染色体畸变，由此可推断对人体也可能致癌、致畸、致突变，提醒我们选择安全的洗漱用品，减少使用含有害化学物质的日常生活用品。
4. 结语
蚕豆根尖微核试验技术属于植物遗传检测系统,微核试验是利用环境污染因子诱变细胞染色体畸变产生微核而建立起来的一种技术,也是近年来环境生物监测领域的重要进展之一。[7]它作为一种环境致突变性的检测手段，在我国不少地区的环保部门和医疗卫生系统中都有广泛的应用。[8]
AbstractMicronucleus (MCN, micronucleus) is eukaryotic cells by various physical and chemical factors caused by chromosome aberration, and in a form of interphase cells. In interphase cells micronucleus assumes the circular or elliptic, free from the main nuclear, nuclear 1/3 ~ 1/20 size should be in the main, dyeing and the main nuclear as or slightly shallow. Generally considered microkernel by acentric chromosome fragment or lagging chromosomes, in the late division could not enter the nucleus, formed the main nuclear nuclear block. When the cells into the next phase split between, they condense into main small nuclear nuclear, namely the microkernel. [1]
蚕豆是一种很好的细胞遗传学研究材料。它的染色体为六对相当大的染色体，而且根尖含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察。目前，蚕豆根尖微核技术在环境致突变性检测/监测方面已经形成了一套完整的体系。它的可靠性和灵敏性较高，且本底较低，这对于一种致突变性检测方法是十分重要的。此外，它的检测物谱较广。目前多数学者认为，在镜检细胞微核时，应按下列标准计数微核：
1.3实验方法
1.3.1 浸种
择饱满、均匀的20粒种子，洗净后用蒸馏水常规浸种24h，此期至少换水2次；待种子充分吸胀后，移入干净的培养皿内培养。
1.3.2 催芽
种子吸胀后，保持湿度，在室温下催芽2天。
1.3.3 被检测液处理根尖
各取10粒，分别用蒸馏水（自来水）和毒液培养种子1.5天。
1.3.4 根尖细胞恢复培养
Bean is a kind of very good genetics research materials. Its six for considerable chromosomes, and root tip contains more split phase cells, very suitable for microscopic observation. At present, the broad bean root tip micro nuclear technology in environment respectively detection/monitoring aspects have formed a set of complete system. Its reliability and high sensitivity and low background, it is very important for a detection method respectively. In addition, it widely test spectrum. At present most of scholars believe that, in the microscopic cell micronucleus, microkernel should according to the following standard count:
蚕豆根尖细胞微核技术检测洗衣粉的毒性
姓名：马丽同组者：李哲指导教师：郝雪峰
（太原师范学院 生物系112班）
摘 要微核（micronucleus,MCN）是核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/20，染色与主核一样或稍浅。一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。[1]
2.0～3.5中污染
3.5以上重污染
2.2结果
在对照组和实验组中均可见到一定数量的微核，也发现少量有丝分裂期微核，各种染色体畸变等。根据镜检统计结果，对3个实验组玻片以及对照组（蒸馏水）共计4个样本的MCN‰进行统计（表2）。