第一章细胞培养设施与基本条件
细胞培养实验室建设基本要求
细胞培养实验室建设基本要求.txt
细胞培养实验室建设基本要求
细胞培养实验室是进行细胞培养研究和实验的重要场所，为确
保实验的准确性和顺利进行，以下是细胞培养实验室建设的基本要求：
1. 设备和设施：
- 实验室应具备适当的面积和布局，确保实验操作的顺利进行。
- 实验室内应配置细胞培养箱、恒温培养箱、显微镜等必要的
设备。
- 实验室内应具备合适的洗手设施，并配备必要的实验室安全
设备。
2. 环境控制：
- 实验室应具备良好的通风系统，确保空气流通和污染物的排除。
- 实验室内的温度、湿度和光照条件应适宜，以满足细胞培养
的要求。
- 实验室内应设置适当的防护措施，避免细菌和真菌的污染。
3. 材料和试剂：
- 实验室应配备高质量的细胞培养耗材，如培养基、培养皿、
培养液等。
- 实验室应储备必要的实验试剂，如抗生素、细胞凋亡试剂等，并确保其保存和使用符合规范。
4. 实验操作：
- 实验室应建立严格的实验操作规范，包括细胞培养的标准操
作流程。
- 实验人员应接受相应的培训，熟悉和掌握细胞培养实验的技
术要求。
- 实验操作过程中应注意卫生和安全，遵守实验室操作规程。
细胞培养实验室建设的基本要求对于确保实验结果的准确性和
可靠性非常重要。
建立符合标准的实验室能够为科研工作提供良好
的支持，确保实验顺利进行。
细胞培养基本条件
细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。
5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。
细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。
干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。
1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。
不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。
其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。
但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。
已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
碳水化合物碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。
主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
第一篇设施与基本条件
植物细胞工程实验室的常用仪器设备
1．光照培养箱 光照培养箱用于少量植物材料的培养。可采 用全自动调温、调湿、控光的人工气候箱来 进行植物组织培养和试管苗快繁。
2．人工气候室 人工气候室能模拟自然界的各种气象条件，按 照实验要求精确控制室内的温度、湿度、光照 以及CO2等指标，复现各种气候环境。它是在 种子发芽、植物培养、组培、植保等领域应用 广泛的实验设备，对温度、湿度、光照、CO2 进行编程控制，24 h或任意设定周期循环
10． 10．移液管和吸管 11． 11．离心管 12． 12．移液器 一般有电动移液器、微量移液器和多通道 可调式微量移液器三种。 13． 13．天平
动物细胞工程实验室的常用仪器设备
1．培养箱 需要有能控制温度的培养箱，如恒温培养 箱及CO2培养箱，均要具有较高的灵敏度。 2．显微操作仪 显微操作仪是进行细胞核移植、染色体操作、 显微注射、胚胎切割等动物细胞工程实验的 必备仪器
293 mm的两种类型。Zeiss滤器有抽滤(负压) 和加压(正压)式两种。 2)玻璃漏斗式滤器 玻璃漏斗式滤器将滤板与玻 璃漏斗烧结合成一体，根据滤板的孔径可分为 G1～G6几种规格。 3)微孔滤膜滤器 分可换膜式滤器和一次性滤器 两大类
9．离心机 培养细胞经常需要离心分离细胞、调整 细胞密度、洗涤、收集细胞等。进行一 般的细胞培养工作只需一台低速离心机 即可。培养细胞的离心速度一般要求1 000 r／分即可。
5．冰箱 细胞培养室必须配备普通冰箱或冷藏箱， 最好还有一台低温冰箱(-20℃)。 6．压力蒸汽消毒器 直接或问接与细胞接触的物品均须消毒 灭菌处理。外热源直接加热和内热源侵 入式(电)加热压力蒸汽消毒器
7．细胞计数板和电子细胞计数仪 1)细胞计数板，也称血细胞计数板，可进 行培养细胞计数和活性细胞的观察。 2)电子细胞计数仪，可自动计数细胞悬液 中的细胞数，省时、省力，尤其适用于 进行细胞生长曲线的实验。
细胞培养室的设置、设备和准备工作 PPT课件
2. 高温湿热灭菌:压力蒸汽灭菌是最常用的高温湿热灭菌 方法。对生物材料有良好的穿透力，能造成蛋白质变性凝 固而使微生物死亡。布类、物、璃器皿、属器皿、胶和某 些培养液都可以用这方法灭菌。 不同压力蒸汽所达到的温度不同，不同消毒物品所需的有 效消毒压力和时间不同。从压力蒸汽消毒器中取出消毒好 的物品（不包括液体），应立即放到60-70℃烤箱内烘干， 再贮存备用，否则，潮湿的包装物品表面容易为微生物污 染。煮沸消毒也是常用的湿热消毒方法，它具有条件简单、 使用方便等特点。
滤 器
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储藏区
储存区要求是取放物品方便。主要存放各类冰箱﹑ 干燥箱﹑液氮罐﹑ 无菌培养液﹑培养瓶等，此环境也 需要清洁﹑无尘。
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清洗和消毒灭菌区
清洗和消毒灭菌区应与其他区域分开，主要进行 所有细胞培养器皿的清洗﹑ 准备﹑ 消毒及三蒸水制 备等工作。
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1.1.2 细胞培养实验室的设备
常用的基本设备 较高级的特殊设备
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二、包装
对细胞培养用品进行消毒前，要进行严密 包装，以便于消毒和贮存。常用的包装材料： 牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、较大培养皿 等，近几年用铝箔包装，非常方便，适用。培 养皿、注射器、金属器械等用牛皮纸包装后再 装入饭盒内，较大的器皿可以进行局部包扎。
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三、消毒和灭菌
微生物污染是造成细胞培养失败的 主要原因。
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培养用品的清洗
一、清洗 离体条件下，有害物质直接同细胞接 触，细胞对任何有害物质十分敏感，极少 残留物都可以对细胞产生毒副作用。因此 ，新的或重新使用的器皿都必须认真清洗 ，达到不含任何残留物的要求。
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（一）玻璃器皿的清洗 一般经过浸泡、刷洗、 浸酸、和清洗四个步骤。
实验1 细胞工程实验条件与设施
实验一细胞工程实验条件与设施（参观、讲解）一、实验目的通过参观，认识细胞培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途与实验体系的相关内容，了解实验室温度、湿度、洁净度等几个主要指标，并且学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。
二、实验原理实验用具的清洁、消毒和灭菌是组织培养成功的关键所在，是培养物免受污染的前提。
为了保证培养物不受污染，第一关就是要对各种器皿进行清洗和消毒，使它们保持无菌状态，做这些工作同样有一套科学的方法和需要熟练的技巧，了解其无菌操作相关仪器的结构及主要用途和性能是十分必要的，总体上的了解有利于保障以后各实验的顺利进行。
三、实验室基本结构在进行组织与细胞培养工作之前，首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解，以便因地制宜地利用现有房屋，或新建、改建实验室。
实验室的大小取决于工作的目的和规模。
以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产，影响效率。
在设计实验室时，应按组织与细胞培养程序来没计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。
细胞培养是在严格无菌的条件下进行的，要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制的培养条件。
（一）平面图设计原则一般原则是保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。
标准组织与细胞培养室包括:洗涤室（区）、制备室（区）、灭菌室（区）、储放室（区）、操作室（区）、培养室（区）、观察室（区）、药品室（区）等部分，可以根据自己的实际条件进行合并。
细胞培养包括培养基的配制、接种前处理、无菌操作、培养物的生长与观察等一系列环节和步骤，因此实验室的排列设计一般以实验的自然流程为序（如图示）。
动植物细胞培养平面结构图（二）实验室基本组成1、准备室用于进行培养器皿的清洗、培养基的配制、培养物质的准备和消毒以及供应物品的保存等。
包含灭菌室和存放常用的化学试剂如无机盐类、有机物类、植物生长调节剂、诱变剂等。
准备室应通风、采光良好。
室内应有下列设备和各种用具：（1）基本设施：即实验室建造有水槽和盛物台、物品准备台、警铃及消防设备、储柜或储架。
细胞培养基本条件
1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。
5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。
细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。
干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。
1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。
不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。
其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。
但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。
已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
碳水化合物碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。
主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
细胞培养设施和基本条件
细胞培养设施和基本条件1、试验室设计: 细胞培育是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必需保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响.细胞培育室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁、空气清爽,干燥和无烟尘.细胞培育工作包括:工作液配制、无菌操作(采样)、温育、无菌处理,细胞和用品贮存等.细胞培育室的设计实施原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培育于一室,而洗刷消毒在另一室.2、常用设施及设备:(1)超净工作台:也称净化工作台,分为侧流式、直流式和外流式三大类.(2)无菌操作间:一般由更衣间、缓部间和操作间三部分组成.操作间放置净化工作台及二氧化碳培育箱、离心机、倒置显微镜等.缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消毒好的无菌物品等.(3)操作间:一般培育箱、离心机、水浴锅、定时钟、一般天平及日常分析处理物品.(4)洗刷消毒间:烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器及酸缸等.(5)分析间:显微镜、计算机及打印机等.3、培育器皿:细胞培育以玻璃器皿为主,常预备最需是使用最的三倍.器皿应选择透亮度好、无毒、中性硬度玻璃制品.常用的玻璃器皿有下面几种.(1)液体储存瓶:用于储存各种配制好的培育液、血清等液体,常以500ml、250ml、100ml生理盐水瓶或血浆瓶代替.(2)培育瓶:依据培育细胞种类要求不同培育瓶的形态各异,用于细胞传代培育的细胞要求瓶壁厚簿匀称,便于细胞贴壁生长和观看,瓶口要大小全都,口径一般不小于1cm,允许吸管伸入瓶内任何部位,规格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml等几种.用于外周血培育的常用10ml一般圆瓶.两种培育瓶均要求选用优质玻璃制成.(3)培育皿:用于开放式培育及其它用途.分直径30mm、60mm、120mm等几种.(4)吸管:常用的有长吸管和短吸管两类,长吸管也称刻度吸管.其改良后管上部有球型刻度称改良吸管,刻度吸管用于移动液体.常用1ml和10ml两种.短吸管也叫滴管,分弯头和直头两种.(5)离心管:离心管是细胞培育中使用最广泛的器皿,依据用途不同形态各样,常用于细胞培育的离心管有大腹式尖底离心管和一般尖底离心管两类.前者分别为50ml、30ml、15ml;后者则多为10ml和5ml.(6)其它:如三角烧瓶、烧杯、量筒、漏斗、注射器等.。
细胞培养基本知识技术
物质溶解其中。 • 4．大气的CO2溶解 （二）纯化水制备应注意事项： • 在准备室选择一处洁净、无尘、清静的地方放置纯
化水的装置。 • 所得的纯化水贮备在专用的干净玻璃瓶内，最好用
硼砂硅玻璃瓶内，标记上制备的日期。
• CO2培养箱是培养细胞的专用设备. • CO2培养箱培养细胞必须满足细胞生长的
三个条件. • 稳定的温度. • 大于95%的相对湿度. • 稳定的CO2浓度 • 三气培养箱是从CO2培养箱基础上发展出来
的新品种,它可同时控制O2浓度.
注意事项
• 1 用螺旋口瓶培养细胞时需将瓶盖微松，以保证 通气。但瓶口过松，易污染。
倒置显微镜
工作原理
一般情况下,人眼只能在光波的波长(颜色)和振幅(亮 度)发生变化时,才能看到被检测物体.但生活状态下的细胞 都呈无色透明,光线通过这些物体时波长和振幅并不发生 变化，因此用普通显微镜无法看清活细胞的形态和结构。 相差显微镜是利用细胞内各结构密度的不同而对光产生折 射率有差异的原理，即光波在折射率大的物体中比在折射 率小的物体中前进的距离较短，此距离叫光程差，由于光 程差引起光的相位变化称为相位差或相差。使用相差显微 镜可使肉眼不能分辨的相位差变为可分辨的振幅差（即明 暗差），使无色透明的物体在镜下反差显著、影像清晰。
（三）纯化水的常用制备方法
• 1.去离子法和石英双重玻璃蒸馏器法结合
• 水中含有溶解或不溶解的矿物盐、油脂及酸类， 以及O2,CO2,H2S,Cl2等。这些物质通过离子交换 树脂除去。
• 采用阳离子树脂或阴离子树脂处理。常使用强酸 性阳离子交换树脂和强碱基性阴离子交换树脂， 将水流通过离子交换柱即得纯净的去离子水。
细胞培养基本条件
细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。
5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。
细胞培养基种类与基本成分,细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。
干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。
1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。
不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。
其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。
但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。
已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
碳水化合物碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。
主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
细胞培养的基本条件
细胞培养的基本条件答：细胞培养的基本条件是：1.合适的细胞培养基培养基是维持体外细胞生存和生长的溶液，分为天然培养基和合成培养基。
现在实验室一般都用的是合成培养基，合成培养基现已有DMEM,1640，IMDM,L15等，不同的细胞来使用不同种类的培养基，比如贴壁细胞大多都可以用DMEM来培养，悬浮细胞则大多用1640培养。
2.血清的品质人工合成的培养基只能维持细胞生存，要想细胞生长和繁殖，还需补充优质血清来增加养分。
血清是培养基里最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及营养成分。
3.无菌无毒的细胞培养环境培养环境无菌无毒是保证培养细胞生存的首要条件。
人体内有强大的免疫系统和解毒器官，所以当有毒物质侵入体内时，免疫系统和肝脏等器官可以对他们进行抵抗和清除。
但是细胞在体外培养就失去了抵抗能力，一旦被污染细胞就会死亡，所以保持无菌无毒的环境是体外培养细胞最基本的条件。
4.恒定的细胞生长温度要维持细胞增殖和生长，要有合适的温度。
目前大部分实验室培养的细胞主要都是人、大鼠、小鼠、猪等哺乳动物的细胞，一般的细胞培养温度都是在37℃左右，在这种温度下细胞才可以生长和正常代谢。
温度偏高时，高于39℃或者更高会对细胞造成损伤甚至是死亡；温度偏低时，不低于0℃虽然会影响细胞代谢和生长状态，但是不会使细胞死亡，恢复温度后大部分细胞都可以恢复生长特性。
极少数实验室有昆虫细胞比如SF9、hi-five等需要在28℃的环境培养，具体培养温度一定要关注细胞库及相应说明书信息。
5.合适的气体环境合适的气体环境也是细胞生存的条件之一，所需要的气体有O₂和CO₂。
O₂产生能量使细胞生长增殖和合成各种所需成分，CO₂是细胞代谢物也是细胞所需要的成分，它的主要作用是维持培养基的pH。
大部分培养基都是把细胞放置于95%的空气和5%的CO₂的混合气体中，但L15培养基作为单独设计的培养体系，需要直接在100%空气条件下培养细胞，若通入5%二氧化碳则会导致培养基pH偏酸性从而使细胞状态变差或者死亡。
细胞培养@2 组织培养设施和基本条件
冰箱，细胞冷冻存储器 (液氮容器或低温冰箱)
常用培养器皿：培养瓶，培养皿，多孔培养板，吸管， 加样器
其它用品：离心管，冻存管，酸缸，烧杯，注射器， 量筒等
培养设备
超净工作台
(clean bench)
利用鼓风机驱动空气通过
高效滤器除去空气中的尘
埃颗粒，使空气得到净化。 净化空气以微流方式徐徐 通过工作台面，使工作台 内构成无菌环境。
力超过0.04兆帕，需再旋转螺杆，放出一部分气体后再调节。
整个调节过程要细心、缓慢。 若CO2不经减压直接进入箱内，可冲破培养箱的CO2调节装置（电磁阀）
学生正在进行细胞观察
常用培养器皿
玻璃培养器皿为主，一次性培养器皿为辅。
玻璃器皿 玻璃瓶、培养瓶、培养皿、移液管和吸管、离心 管、其它 塑料器皿 培养瓶、培养皿、多孔培养板、移液管、离心管、 注射器、其它
超净工作台结构和模式图
生物安全柜
保持台面 整洁！！
♀பைடு நூலகம்
物品在工作台中部洁净区围成新月状， 酒精灯位于中央。
东西要顺手
左手上是左手取的东西： --吸管、培养瓶、试管架、废液缸等； 右手上是右手操作物品： --dhanks、培养基、胰酶以及瓶塞等
渐少空气震动
操作步骤
严禁存放不必要的物品，以保持洁净气流流型不变；
常用培养器皿
培养器皿 底面积(cm2) 加液量(ml) 可获细胞量
96孔培养板
24孔培养板 12孔培养板 6孔培养板
0.32
2 4.5 9.6
0.1
1.0 2.0 2.5
105
5×105 106 2.5×105
4孔培养板
3.5 cm培养皿 6 cm培养皿 9 cm培养皿 10 cm培养皿 25cm塑料培养瓶 75cm塑料培养瓶 25cm玻璃培养瓶
细胞培养基本条件
细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基就是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养与促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长与繁殖的生存环境。
2、优质血清目前,大多数合成培养基都需要添加血清。
血清就是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境与培养环境就是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物与有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染,或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。
5、合适的气体环境气体就是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气与二氧化碳。
细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基与天然培养基（目前使用的培养基绝大部分就是合成培养基）,按其物质状态分为干粉培养基与液体培养基两类。
干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。
1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸就是组成蛋白质的基本单位。
不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。
其中谷氨酰胺就是细胞合成核酸与蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。
因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。
但就是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20C冰箱中保存，在使用前加入培养液内。
已含谷氨酰胺的培养液在 4C冰箱中储存2周以上时,还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
碳水化合物碳水化合物就是细胞生长主要能量来源，其中有的就是合成蛋白质与核酸的成分。
细胞培养基本条件
细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。
5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。
细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。
干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。
1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。
不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。
其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。
但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。
已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
碳水化合物碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。
主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
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◆ 温度：一般控制在25±2ºC ◆ 光照：第一光章细强胞培、养设光施与质基本、条件光照时间
清洗室: 制备室： 灭菌室： 接种室： 培养室： 鉴定室： 驯化移栽室：
第一章细胞培养设施与基本条件
第一章细胞培养设施与基本条件
第一章细胞培养设施与基本条件
细胞工程实验室它必须满足三个基 本的需要，即：
•培养室内的无菌操作要点
①紫外灯无人时就要打开； ②进无菌室要穿无菌服、戴帽子和口罩； ③每周清洗消毒一次； ④所用物品要以外科手术方式严格消毒； ⑤室内台面要要保持洁净； ⑥所用物品要一次性准备好； ⑦瓶口要用酒精火焰消毒； ⑧尽量减少出入。
第一章细胞培养设施与基本条件
实验室设计
从总体上来分，实验室主要分为两类：
实验准备室； 无菌操作室； 控制培养室。
第一章细胞培养设施与基本条件
A、准备室
细胞和组织培养所需器具的洗涤、干燥和保
存；培养基的配制、分装和灭菌；化学试剂的
配制；重蒸馏水的生产等。一般建在通风和光
线充足的地方（在向阳面），地面防滑，墙壁
防潮。
消毒和实验前的准备两间房源自实验后污物处理和清洗第一章细胞培养设施与基本条件
基本实验室：
准备室 接种室
培养室
辅助实验室： 细胞学实验室
摄影室及暗室
生化分析室
第一章细胞培养设施与基本条件
我系细胞工程实验所涉及的实验室现状
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第一章细胞培养设施与基本条件
课后作业
细胞工程实验室与一般实验室的结 构区别是什么？请同学们参观完我系 现有细胞工程实验室后，从细胞工程 实验室结构设置方面对我系现有细胞 工程实验室的改建工作提出可行性的 建议或意见？
还用来储藏什么？
要求：取放方便。还有什么要求？
第一章细胞培养设施与基本条件
2.清洗和消毒灭菌室 清洁和消毒灭菌室应与其他区域分
开，主要进行所有实验动物材料的处 理、细胞培养器皿的清洗、准备、消 毒及三蒸水制备等工作。
应满足哪些要求？
第一章细胞培养设施与基本条件
3．制备室 在该区主要进行培养液及有关培
第一章细胞培养设施与基本条件
第二节 常用仪器与设备
第一章细胞培养设施与基本条件
一、动物与植物细胞工程实验室通用的 仪器设备
1.培养器皿： 培养瓶、培养皿、多孔培养板
2.盛装器皿： 3.计量器皿：
第一章细胞培养设施与基本条件
第一章细胞培养设施与基本条件
第一章细胞培养设施与基本条件
4.超净工作台（净化台）
缓冲间 接种间
第一章细胞培养设施与基本条件
C、培养室
离体细胞、组织等生长发育的场所，应为培养物 创造适宜的生长条件。
①培养室的位置最好设在阴面，阳光不能直接 照射的地方，防止室内温度增高。
②天花板的高度不要超过2.5米，以保证紫外灯 的有效杀菌效应，
③门一般用拉门，以防止空气流动。 ④天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角，要 镶瓷砖或涂油漆，这样设计，一是便于清洗和消 毒，另外也不易在第墙一章角细胞培堆养设积施与灰基本尘条件。
c 无菌操作室:专用于无菌操作。
第一章细胞培养设施与基本条件
5.培养与观察室 本区对无菌的要求虽不比无菌区严格，
但仍需清洁无尘，因此也应设置在干扰 少而非来往穿行的区域。孵育可在孵箱 或可控制温度的温室中进行，后者费用 高，一般实验室多采用孵箱进行工作。
第一章细胞培养设施与基本条件
二、 植物细胞培养室的设置
准备室内的常用设备
①水槽两处：实验后的清洗及清洁液浸后的清洗。 ②盛清洁液的陶瓷缸或玻璃缸。 ③清洗后器皿的凉干架和贮存柜。 ④高温干燥消毒箱和高压蒸汽消毒锅。 ⑤消毒后器皿的凉干架和贮存柜。 ⑥重蒸水装置。 ⑦电炉 ⑧工作台 ⑨污物桶
第一章细胞培养设施与基本条件
B、无菌操作室 密封、防尘、防菌的工作空间。无 菌操作室并非无菌，但应该保持清 洁。 作用：接种，培养物的转移和原生 质体的游离培养操作之用。
一、 动物细胞工程实验室的设置
动物细胞工程实验室要求严格保持 无菌环境，避免微生物及其他有害因 素的影响。
应能进行六方面的工作：无菌操作、 孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、 储藏。
第一章细胞培养设施与基本条件
1．储藏室 主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮
罐、无菌培养液、培养瓶等，此环境 也需要清洁无尘。
划分不同功能区或用铝合金隔板隔开 无菌操作区应在室内较少走动的内侧 清洗和消毒安置在另室
第一章细胞培养设施与基本条件
Chapter 1 细胞培养的设施与基 本条件
◆ 细胞工程实验室的设置
◆ 常用仪器与设备 ◆ 实验室的生物安全
第一章细胞培养设施与基本条件
第一节 细胞工程实验室的设置
第一章细胞培养设施与基本条件
养用的液体等的制备。 应具备什么要求？
第一章细胞培养设施与基本条件
4.无菌操作室 相对密封、防尘、防菌的工作空间，
在结构和消毒方面都有具体要求。
更衣室： 缓冲间 无菌操作室
第一章细胞培养设施与基本条件
a 更衣室:供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口 罩。要求
b 缓冲间:位于更衣间与操作间之间，目的是 为了保证操作间的无菌环境，同时可放置 恒温培养箱及某些必需的小型仪器。
•净化台的工作原理 – 利用鼓风机驱动空气通过高效滤器
除去空气中的尘埃疯粒，使空气得 到净化。
•分类
第一章细胞培养设施与基本条件
④净化工作区内不应存放不必要的物品，以保持 洁净气流型不受干扰。
⑤一般情况下，高效过滤器三年更换一次。更换 高效滤器应请专业人员操作，以保持密封良好。 要定期将粗过滤器中的过布（无纺布）拆下清洗， 时间应根据环境洁净程度而定，通常间隔3~6个月 进行一次。 ⑥每次使用净化台要及时清除工作台面上的物品， 并用洒精擦洗台面使之始终保持洁净。
复习细胞工程概念
第一章细胞培养设施与基本条件
课前思考？
到目前为止，同学们都学习了哪些专业实验？
植物学实验
动物学实验
生物化学实验
微生物实验
细胞工程实验室与这些常规实验室相比较的主 要区别是什么？
离体培养
第一章细胞培养设施与基本条件
• 细胞工程实验室设计
– 原则 防止微生物污染和有害因素影响 – 要求 工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘
第一章细胞培养设施与基本条件
•分类
第一章细胞培养设施与基本条件
•使用超净工作台应注意的几点问题