链球菌属检验
链球菌属检验
1.概述链球菌属是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。
该菌属种类繁多,目前临床上仍沿用Lancefield血清学方法进行分群(A、B、C、D、F、G等18个群),或根据溶血现象(β溶血、α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血)进行分类。
化脓性链球菌是临床上最重要的链球菌,属A群、β溶血的链球菌。
2. 标本类型血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。
3. 鉴定3.1 形态与染色革兰阳性球菌,固体培养基上呈单个或成双排列,较少呈链状排列,肉汤培养基中呈长链状排列,肺炎链球菌呈矛头状,成双或链状排列。
3.2 培养特性在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应:α溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环;β溶血周围有明显较大的完全透明环;γ溶血(不溶血性)无异常变化。
肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平,周围有草绿色α溶血环。
3.3 生化反应触酶试验阴性,对各种碳水化合物的分解因菌种而异,链球菌不被胆汁溶解。
肺炎链球菌胆盐溶菌试验阳性,Optochin试验敏感(抑菌环>14mm)。
3.4 鉴别要点3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌,单个、成双或链状排列,菌落较小,可出现β溶血、α溶血或不溶血,触酶试验阴性。
3.4.2 根据溶血及关键性试验,对链球菌进行推测性鉴定分群。
A群链球菌(化脓性链球菌):β溶血,杆菌肽敏感。
B群链球菌(无乳链球菌):β溶血,CAMP试验阳性,马尿酸钠试验阳性。
C群链球菌(似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等):马尿酸钠、6.5%氯化钠耐盐试验均为阴性,血清学分型、杆菌肽耐药(抑菌试验阴性)。
D群肠球菌(粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌等):胆汁七叶苷、6.5%氯化钠耐盐试验均为阳性,45℃生长。
现归属于肠球菌属。
C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。
非β溶血链球菌的鉴别见表1。
表1 非β溶血链球菌的鉴别菌名Optochin试验胆汁溶菌试验胆汁七叶苷试验肺炎链球菌+ + -牛链球菌- - +其他草绿色链球菌群- - -3.5 操作步骤3.5.1 涂片、染色观察菌落特征,挑取可疑菌落,涂片染色镜检。
临床微生物学检验:链球菌属
肺炎链球菌脐窝状菌落(培养48h后)
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肺炎链球菌粘液样菌落 28
3.生化反应
• 分解葡萄糖,产酸不产气。 • 一般不分解菊糖,不被胆汁溶解(鉴别
甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌)。 • 触酶(-),与葡萄球菌不同。
•肺炎链球菌: 分解葡萄糖、乳糖和菊糖,胆汁可溶菌, Optochin敏感,触酶(-)
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小结
• 链球菌属细菌种类多,其中某些菌种为毒力强的 致病菌。分类较为复杂,临床分离株仍以传统的 血平板上溶血现象、菌落特点和Lancefield抗原 血清分型,结合生化反应进行鉴定。
• 肺炎链球菌:革兰阳性双球菌,有荚膜,脐窝样 菌落、OP(+)、胆汁溶菌(+)
• A群链球菌:镜下特点、菌落特点、杆菌肽、血清 试验
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链球菌微生物检验程序
涂片染色 G+球菌,触酶(-)
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五、药敏试验药物选择
β溶血链球菌 肺炎链球菌 草绿色链球菌
药敏时药物选择不同
首选青霉素和氨苄西林
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预防分娩妇女B群链球菌感染:
①推荐使用青霉素和氨苄西林。 ②低危险性青霉素过敏者,推荐头孢唑林。 ③高危险性青霉素过敏者推荐克林霉素或红霉素
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血清学检查
抗O试验(ASO test): 链球菌侵入体内产生SLO,刺激机体产生
相应抗体ASO(血清),加入SLO乳胶试剂,SLO 抗体(ASO)与乳胶试剂(吸附有SLO)反应,产生 凝集,为阳性;无凝集,为阴性。
–原理:中和试验,用SLO检测血清中的ASO –方法:间接凝集 –结果:效价大于400单位 –意义:活动性风湿热及肾小球肾炎辅助诊断
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急性肾小球肾炎的临床表现:水肿、 血尿、蛋白尿等。
(完整版)猪链球菌的检测和鉴定技术
ATCC43765
+ + + + + + + + + + 4641427 (92%)
HA9801
+ + + + + + + + + + + 4651427 (80%)
ATCC35246
+ + + + + + + + + 0461607 (99.9%)
32210 化脓链球菌
0161415 (99.9%)
读数仪
比浊仪 电子加样枪
计算机 打印机
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试条组成
试条种类:
24h常规鉴定试条
Ref.32400,ID32 E Ref.32100,ID32 GN Ref.32500,ID32 Staph Ref.32200,ID32 C
4h快速鉴定试条
Ref.32700,rapid ID32 E Ref.32300,rapid ID32 A Ref.32600,rapid ID32 Strep
粪肠球菌
7143711 (98.7%)
猪链球菌的API鉴定结果
TRE(海藻糖)、RAF(棉子糖)等几个的试验与API 菌种库有些不符,但 都属于SS2型或1型,数值分类
相对于双歧分类的优点
ATCC43765
HA9801
ATCC35246
32210 化脓链球菌
粪肠球菌
编码 4641427(92%) 4651427(80%) 0461607(99.9%)0161415(99.9%)7143711(98.7%)
需氧和兼性厌氧性球菌鉴定—链球菌属的鉴定(微生物检验课件)
二、致病性和免疫性
(一)致病物质 1、链球菌溶血素 (1)链球菌溶血素O(SLO):SLO抗体 抗链球菌溶血素O试验:协助诊断风湿热
(>1:400) (2)链球菌溶血素S (SLS):无抗原性。
2、致热外毒素(猩红热毒素/红疹毒素) 3、M蛋白 4、透明质酸酶 5、链激酶 6、链道酶
(二)所致疾病 主要由A群链球菌引起。 1、化脓性感染:由皮肤伤口侵入,经呼吸道
第二节 链球菌属
(Streptococcus)
一、生 物 学 特 性
(一)形态与染色 G+,球形或椭圆 形,呈链状排列, 无鞭毛、无芽胞, 有荚膜。
一、生 物 学 特 性
(二)培养特性
条件:营养要求较高,多数为兼性厌氧 菌,少数专性厌氧,5%CO2。
液体:沉淀生长(絮状或颗粒状)。 血液琼脂平板:
3 、按对氧的需求分型:需氧菌、厌氧菌、 兼性厌氧菌。
Байду номын сангаас
(六)抵抗力 不强,60℃30min杀死,对多种消毒剂敏感。 乙链:对青霉素、四环素、红霉素等敏感。 肺炎链球菌:PRSP和多重耐药。 其他群的细菌:对青霉素耐药频度增加。 (七)变异性 肺炎链球菌荚膜变异:有荚膜的光滑(S)型菌 有毒力,失去荚膜的粗糙(R)型毒力减低或消 失。
链球菌在血平板上菌落特征
丙链
甲链
乙链
(三)生化反应
活泼 分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。
菊糖(-)
胆汁溶菌试验(-)
(区别甲链与肺链)
optochin敏感试验(-)
触酶(-)(区别于葡萄球菌属)
(四)抗原构造 1、多糖抗原(C抗原):群特异性。 2、蛋白抗原(M、T、R、S)
型特异性,M蛋白抗原是与致病有关的主 要物质,引起超敏反应。
链球菌属微生物临床检验
链球菌属微生物临床检验链球菌属(Streptococcus)原包括40个种别,但有的种后来被排除,按16S rRNA分类,现有6个群30个种和两个单独的种。
链球菌DNA中G+C含量为34m01%~46m01%。
链球菌的检验主要包括两方面,卫生微生物学和临床微生物学。
卫生微生物学重点检测食品微生物、环境微生物、水质微生物及流行病学检测;临床微生物学重点检测脓汁、咽拭、炎性分泌物、脑脊液、血液等标本。
现将检验方法汇总如下。
一标本的采集和处理1.疫情标本患者咽拭子涂抹标本,采取后放入无菌中试管或运送培养基中送检。
同时涂抹可能污染的环境和衣物,同上方法送检。
2.食物标本①大包装乳制品:以灭菌刀、勺取样,从不同部位采取代表性样品,放入灭菌器内送检。
②小包装乳制品:采取原包装样品送检。
3.临床样品采取脓汁、咽拭子、炎性分泌物、脑脊液、血液等标本送检。
二增菌与分离培养1.疫情标本和临床标本将采取的标本直接分离于血琼脂平板上,37℃培养24h。
同时增菌于肉浸液葡萄糖肉汤中,或匹克增菌液中,放10%二氧化碳环境,37℃培养24 h 或放入厌氧环境中进行增菌培养。
同上分离培养和观察结果。
血液标本,直接放入50ml肉浸液葡萄糖增菌液或匹克增菌液中,同上培养和分离。
2.乳制品①炼乳将罐外洗净,罐盖用75%酒精消毒,再用火焰消毒,然后用灭菌开罐器打开,样品混匀取出10g,放入装有玻璃珠的广口瓶中,加入肉浸液肉汤90ml或匹克增菌液肉汤,37℃培养24h。
②奶油将奶油样品置水浴中加热,溶化后以灭菌吸管吸出10ml加入灭菌水中,混匀,同上培养和分离。
③奶粉以无菌手续取样10g,放入上述培养基中,培养和分离。
④奶酪以灭菌刀削去蜡皮,然后切开,切取表层和深处共10g,放入上述培养基中。
培养和分离。
三鉴定技术1.挑选可疑菌落溶血性链球菌:从血琼脂平板上挑选灰白、圆形、突起、小米粒大小、周围有透明溶血环的菌落,分纯于血琼脂平板上,37℃培养,观察结果。
链球菌属的特性及其检验
链球菌属的特性及其检验目的:总结链球菌属的特性及其检验技术,结合临床经验,进一步提高细菌分离及鉴定水平。
方法:采用显微镜检查、分离培养、细菌生化反应、血清学试验等进行分离和鉴定。
结果:根据菌体形态、菌落形态、溶血特征将链球菌分为甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、丙型链球菌;按链球菌细胞壁中多糖抗原不同,可分成A、B、C、D等20个群。
结论:链球菌是临床常见的致病菌,正确掌握检验方法,科学地分离和鉴定,有助于临床做出合理的诊治决策。
标签:链球菌属;特性;分离培养;生化反应;血清学试验链球菌属细菌广泛分布于自然界、人及动物肠道和鼻咽部,大多数不致病。
其中A、B群及肺炎链球菌是本属的3种重要致病菌,可引起各种化脓性炎症、医源性伤口感染、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病[1]。
另外草绿色链球菌为条件致病菌。
因此,本属细菌的鉴定、药敏试验是微生物检验工作的重要内容之一,临床上常见的标本包括咽拭子、痰液、分泌物、穿刺液、尿液、脑脊液和血液。
现将本属的特性及其检验总结如下:1 资料与方法1.1一般资料本院微生物实验室2009年共接收咽拭子样本299例、痰液样本1 319例、分泌物817例、穿刺液239例、尿液704例、脑脊液54例和血液培养815例,合计4 247例。
其中门诊患者样本239例,住院患者样本4 008例。
细菌培养阳性结果1 475例,阳性率为34.73%。
其中链球菌属阳性83例,占5.63%。
1.2 检验方法根据不同疾病采集不同标本。
1.2.1 显微镜检查咽拭子、痰液、脓液、穿刺液、脑脊液等标本可直接涂片革兰染色,镜检见链状排列革兰阳性球菌可初步报告,及时供临床参考。
1.2.2 分离培养血液标本需要先增菌培养,脓液、咽拭可直接接种血琼脂平板。
链球菌属初代分离需5%CO2,35℃24 h观察菌落性状。
菌落太小可延长观察时间。
1.2.3 鉴定根据菌体形态、菌落形态、溶血特征以及下列鉴定试验进行。
链球菌属实验报告
一、实验目的1. 掌握链球菌属的分离与纯化方法。
2. 了解链球菌属的形态特征和生化特性。
3. 学会运用生化试验对链球菌属进行鉴定。
二、实验原理链球菌属是一类革兰氏阳性球菌,呈链状排列,无芽胞,无鞭毛。
根据溶血能力,链球菌属可分为甲型、乙型和丙型。
甲型链球菌为条件致病菌,乙型链球菌致病性最强,丙型链球菌一般不致病。
链球菌属的分离与鉴定主要通过以下步骤进行:1. 分离与纯化:将待检标本接种于血琼脂平板,进行分离培养,挑取单个菌落进行纯化。
2. 形态观察:观察菌落的形态、颜色、大小等特征。
3. 生化试验:进行触酶试验、PYR试验、杆菌肽敏感试验、V-P试验、CAMP试验等,以鉴定链球菌属。
三、实验材料1. 实验动物:小白鼠2. 实验试剂:血琼脂平板、肉汤、无菌生理盐水、无菌接种环、无菌试管、无菌棉签、显微镜、酒精灯、触酶试剂、PYR试剂、杆菌肽试剂、V-P试剂、CAMP试剂等。
四、实验方法1. 分离与纯化(1)将待检标本接种于血琼脂平板,37℃培养24小时。
(2)挑取单个菌落,接种于新的血琼脂平板,37℃培养24小时,观察菌落特征。
(3)重复上述步骤,直至获得纯化菌落。
2. 形态观察(1)将纯化菌落涂片,革兰氏染色。
(2)在显微镜下观察菌体的形态、大小、排列等特征。
3. 生化试验(1)触酶试验:将纯化菌落接种于触酶试剂中,观察是否产生气泡。
(2)PYR试验:将纯化菌落接种于PYR试剂中,观察是否产生红色沉淀。
(3)杆菌肽敏感试验:将纯化菌落接种于杆菌肽试剂中,观察是否产生抑菌圈。
(4)V-P试验:将纯化菌落接种于V-P试剂中,观察是否产生红色沉淀。
(5)CAMP试验:将纯化菌落接种于CAMP试剂中,观察是否出现协同溶血现象。
五、实验结果1. 分离与纯化:成功分离出纯化菌落,菌落特征为灰白色、光滑、圆形、边缘整齐。
2. 形态观察:菌体呈球形或椭圆形,直径0.5~1.0μm,革兰氏染色阳性,呈链状排列。
3. 生化试验(1)触酶试验:产生气泡。
乳酸链球菌素检测标准
乳酸链球菌素检测标准
乳酸链球菌素检测标准是一种用于评估产品中乳酸链球菌素含量的标准方法。
乳酸链球菌素是一种由乳酸链球菌(Streptococcus lactis)产生的一种蛋白质,具有抗菌和抗病毒作用,被广泛用于食品、保健品和医疗领域。
乳酸链球菌素的检测标准通常包括以下几个方面:
首先是检测方法的选择。
目前常用的检测方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、高效液相色谱法(HPLC)和质谱法(MS)。
不同的方法具有不同的
灵敏度、准确度和操作难度,因此在选择检测方法时需要根据具体的需要进行选择。
其次是样品的制备和处理。
样品的制备和处理对检测结果的准确性和可靠性有
重要影响。
通常情况下,样品需要经过提取、稀释和净化等步骤,以保证样品中乳酸链球菌素的含量可以被准确检测。
再者是标准品的选择和制备。
标准品是用于建立检测标准曲线和确定样品中乳
酸链球菌素含量的参照物。
选择合适的标准品和准确制备标准曲线是保证检测结果准确性的关键。
最后是数据的处理和结果的解读。
在完成检测后,需要对检测数据进行处理和
分析,得出样品中乳酸链球菌素的含量。
此外,还需要根据相关的标准和法规对结果进行解读,判断样品的质量和安全性。
总的来说,乳酸链球菌素检测标准是确保产品质量和安全的重要手段。
通过严
格遵守检测标准和方法,可以有效评估产品中乳酸链球菌素的含量,保证产品的质量和安全性,促进行业的健康发展。
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链球菌属及其检验「微生物检验」(一篇)
链球菌属及其检验「微生物检验」(一篇)链球菌属及其检验「微生物检验」 1链球菌属及其检验「微生物检验」⒈分类链球菌的分类方法尚未统一。
常用下列两种方法。
⑴根据溶血现象:分为3类。
①甲型溶血性链球菌(α-hemolytic streptococcus):菌落周围有1~2mm宽的草绿色溶血环,称甲型溶血或α溶血,该类菌又称草绿色链球菌,为条件致病菌。
②乙型溶血性链球菌(β-hemolytic streptococcus):菌落周围有2~4mm宽的透明溶血环,称乙型溶血或β溶血,该类菌又称溶血性链球菌,致病性强,常引起人和动物多种疾病。
③丙型链球菌(γ-streptococcus):菌落周围无溶血环,因而又称不溶血性链球菌,一般不致病。
⑵根据抗原结构:按链球菌细胞壁中多糖抗原不同,可分成A、B、C、D 。
等20个群。
同群链球菌间,因表面蛋白质抗原不同又分若干型。
如A群根据其M抗原不同,可分成约100个型;B群分4个型。
对人致病的链球菌菌株,主要是A群,多数呈现乙型溶血。
⒉细菌特性⑴链球菌① 形态染色球形或椭圆形,直径0.5~1.0μm,链状排列,链的长短与细菌的种类和生长环境有关,在液体培养基中形成的链较长。
无芽胞,无鞭毛。
多数菌株在培养早期(2~4h)形成透明质酸的荚膜。
革兰染色阳性。
②分离培养营养要求较高,培养基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等物质。
多数菌株兼性厌氧,少数为专性厌氧。
在液体培养基中呈沉淀生长,在血平板上,37℃18~24h 后可形成灰白色、圆形、凸起、光滑、直径为0.5mm~0.75mm 的细小菌落,菌落周围出现不同类型的溶血环。
③生化反应触酶阴性、一般不分解菊糖,不被胆汁溶解,这两特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。
④抗原构造主要有三种:蛋白质抗原:或称表面抗原。
具型特异性有M、T、R、S 4种,位于C抗原外层。
与致病性有关的是M抗原。
多糖抗原:或称C抗原。
为群特异性抗原,位于细胞壁。
链球菌及其检验
第二节链球菌及其检验目的要求:了解链球菌属生物学特性,掌握其检验程序重点难点:致病性链球菌的检验程序课时安排:2教学过程:链球菌系指一大类呈链状排列的球菌。
本菌广泛分布于自然界,一般存在于水、乳、粪便以及人和动物的病灶内。
健康人和动物的皮肤和粘膜上,呼吸道和消化道内往往带菌。
有些可引起各种化脓性炎症,猩红热,丹毒,脑膜炎,产褥热以及链球菌变态反应性疾病等,还有马腺疫链球菌,肺炎、乳腺炎、败血症等。
本菌在血液琼脂上培养时,按其对红细胞的落解现象,将其分为三类:;(1)甲型溶血(又称为α溶血),菌落周围呈现弱溶血,并有绿色环,放冰箱一夜后,绿色环周围呈现溶血环,(2)亚甲型溶血(又称为α溶血)在菌落周围无明显溶血境界,溶血环狭小;镜检时,可见部分残留红细胞。
(3)乙型溶血(又称β溶血)菌落周围红细胞完全溶解,并有明显的溶血境界,出现完全透明的溶直环.本型包括大部分对人畜致病的链球菌。
此外,还有的链球菌无任何溶血现象。
链球菌的检验工作不仅在临床和流行病学上具有重要意义,在食品卫生工作上也具有十分重要的意义,一方面根据食品卫生要求,对食品中(如牛乳及乳制品)的致病性链球菌进行检验;另一方面,在可疑为链球菌引起食物中毒暴发时,应通过检验证实该菌与食物中毒的关系。
链球菌在自然界分布广泛,是食物污染的重要原因。
文献报导,许多由食物引起的脓毒性咽喉痛和猩红热,是由A群链球菌引起,近年来,由链球菌引起的食物中毒已逐渐为人们所注意。
链球菌性食物中毒,经常由乳、肉类食品所引起,多为α溶血型。
β溶血型链球菌引起食物中毒较少。
一、生物学特性1、形态与染色特性本菌为圆形或卵圆形,常排列成链状,链的长短不一。
致病性链球菌一般较长,非致病性或毒力弱的菌株菌链较短,在液体培养中易呈长链,在固体培养基上常呈短链。
大多数链球菌无鞭毛,不能运动,但D群中某些菌株具有鞭毛。
不能形成芽胞。
多数链球菌在血清肉汤幼龄培养物中,易发现荚膜,当培养时间延长,荚膜即逐渐消失。
医院微生物室链球菌属鉴定标准操作规程
XXXX医院
微生物室链球菌属鉴定标准操作规程
1 目的
2 适用范围
3 工作职责
4 检验步骤
4.1 培养特性
4.2 形态与染色
4.3 生化反应
5 药物敏感实验
6 结果报告
7 注意事项
1 目的
规范链球菌属鉴定标准操作规程,确保检验结果准确可靠。
2 适用范围
各类痰、尿、粪、脓液、血、拭子、分泌物、静脉导管、气管穿刺抽取的痰液等标本。
3 工作职责
检验人员严格执行本程序。
4 检验步骤
4.1 培养特性
在血琼脂平板上菌落呈灰暗色、扁平、干燥、边缘不整齐,可出现β-溶血、α-溶血或不溶血,根据上述特征,可初步推测链球菌的种类。
4.2形态与染色
选择平板上的可疑菌落涂片、革兰染色、镜检,观察细菌的形态和染色性,并估计标本中大致的含菌量。
镜下可见革兰染色阳性细菌,菌体形态圆或卵圆形,成链状或不规则排列。
4.3 生化反应
生化试验主要包括触酶试验、杆菌肽、CAMP、PYR、6.5% NaCl生长试验、胆汁七叶苷、胆汁溶菌试验、奥普托新敏感试验和多种糖类发酵试验等。
可用VITEK自动微生物鉴定系统鉴定链球菌。
5 药物敏感实验
采用K-B法,用血琼脂药敏平板,抗生素选用参考CLSI的标准。
6 结果报告
所有的标本如分离出链球菌,应尽可能鉴定至种,报告“XX菌生长”。
7 注意事项
7.1 操作人员在工作过程中要注意生物安全防护,要戴口罩和手套。
7.2 所有报告结果后的标本及污染物,必须经高压灭菌、焚烧或浸泡杀菌剂中。
链球菌属的微生物检验分析
链球菌属的微生物检验分析摘要】链球菌是临床常见的致病菌,对链球菌属的检查方法试验方法进行分析。
采用标本的直接涂片和分离培养方法进行检查。
掌握正确的检验方法,科学地分离鉴定,为临床出作合理的诊断。
【关键词】链球菌属;微生物检验;试验方法【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2016)16-0391-02链球菌属,亦属化脓性球菌中的一大类常见菌。
为链状、单个或成双排列的革兰阳性球菌。
分布广泛,存在于人及动物肠道和健康人鼻咽部,大多不致病。
少数可引起人类的化脓性炎症、猩红热、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏性疾病。
1.一般资料对微生物实验室接收实验样本70例,其中咽拭子样本6例,痰液样本24例,分泌物16例,穿刺液4例,尿液14例、脑脊液1例,血液培养15例。
其中门诊患者样本4例,住院患者样本64例。
细菌培养结果:阳性24例,阳性率34.2%,其中链球菌属阳性为2例。
2.检查方法标本的直接涂片,革兰染色后镜检,如符合链球菌形态且无正常菌群污染的标本可初报。
分离培养,血液标本须先增菌培养;其他标本多采用羊血平板,有利于识别溶血性。
初代分离需用5%的CO2、35~37℃环境中孵育24 h观察菌落性状[1]。
3.试验方法3.1 溶血性检查溶血性是鉴定球菌最常用的项目,也是鉴定过程中重要的一步。
1919年Brown对溶血性进行了描述。
3.1.1菌种α溶血或称甲型溶血,在血平板上,菌落周围部分红细胞被破坏,呈现一个草绿色环。
β溶血或称乙型溶血,在血平板上,菌落周围红细胞完全溶解,呈现一个清楚透明溶血环。
γ溶血或称丙型溶血,血平板上,菌落周围无红细胞溶解,因而无溶血环。
溶血性的识别可在血平板表面菌落周围和穿刺处通过肉眼观察,也可用显微镜观察。
除在分离血平板上观察菌落周围的溶血性外,还可用以下方法确认。
3.1.2材料羊血平板。
3.1.3方法将标本接种于羊血平板上,用接种针在已接种过的血平板上扎2~3处,使细菌被接种到琼脂层深处,35℃环境中孵育过夜。
常见致病菌检验—溶血性链球菌检验
三、微生物检验
(二)检验操作要点 6、生化鉴定: (2)杆菌肽敏感试验
将分纯的乙型溶血性链球菌接种血平板,在划 线处贴附杆菌肽纸片,37℃18h,出现抑菌带 为阳性,据此可推测为乙型溶血性链球菌。
三、微生物检验
(二)检验操作要点 7、报告: 根据培养后的形态,菌落特征及生化试验可报 告:有乙型溶血性链球菌生长。
2)链激酶(streptokinase;SK)
3) 链道酶(streptodornase;SD)
2. 所致疾病
淋巴管炎, 化脓性感染 蜂窝组织炎,
扁桃体炎等
毒素性疾病 猩红热
超敏反应性疾病 风湿热 急性肾小球肾炎
痈
链球菌感染
金黄色葡萄球菌感染
Ⅱ型超敏反应
溶血性链球菌
肾小球基底膜 共同抗原 急性肾小球肾炎
(2)外毒素类 1)致热外毒素
• 红疹毒素,猩红热毒素 • A群链球菌溶原菌菌株产生 • 引起猩红热
2) 链球菌溶血素
• SLO:对O2敏感。测定SLO抗体含量,可作为链球菌新近感染指 标之一或风湿热及其活动性的辅助诊断
• SLS:对O2稳定,β溶血环
(3)侵袭性酶 1) 透明质酸酶
• 扩散因子 • 分解细胞间质的透明质酸→组织中扩散
1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化 脓性炎症时造成食品的污染;
二、 生物学特性
2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺 炎或畜禽局部化脓时,其奶和肉尸某些部位污染; 3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。 溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性 炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以 及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风 湿热、肾小球肾炎等变态反应。
病原学特性
链球菌检验作业指导书.docx
链球菌检验作业指导书1主题内容与适用范围本作业指导书规定了链球菌的检验方法。
木作业指导书适用于患者的生物样品(如:尿液、脓液、脑脊液、痰等)及医院物体表面涂抹样本及使用中消毒剂链球菌的检验。
2引用标准GB/T 4789. 28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂全国临床检验操作规程(第三版)临床微生物学诊断与图解(第二版)周庭银编著3设备和材料3.1无菌棉拭子。
3.2 无菌5cmX 5cm规格板。
3.3温箱:36±1°C, 42°Co3.4显微镜。
3.5灭菌广口瓶:500mLo3.6灭菌三角烧瓶:500mL, 250mL o3.7 灭菌吸管:10mL、ImLo3.8 天菌平皿:90mmX 15mmo3.9灭菌小试管:内径3n)m,长5cm。
3.10灭菌毛细管。
3.11 无菌注射器:5mL、10mL3.12橡皮乳头。
3. 13载玻片。
3. 14酒精灯。
3. 15灭菌金属匙或玻璃棒。
3. 16接种棒、鎳銘丝。
3.17试管架、试管篓。
4培养基和试剂4.1 1%葡萄糖肉汤:按GB/T 4789. 28中4. 1规定。
4.2血琼脂平板:按GB 4789. 28中4. 6规定。
4.3SCDLP液体培养基:按卫生部《消毒技术规范》附录A.23中规定。
4.4麦康凯琼脂:按GB 4789. 24屮4. 4规定。
4,5 6. 5%氯化钠肉汤:见附录A1。
4.6马尿酸钠培养基:按GB/T 4789. 28'P3. 9规定。
4.7过氧化氢酶试验:按GB 4789. 28中3.21规定。
4.8蛋白月东水、靛基质试剂:按GB 4789. 28中3. 13规定。
4.9氨基酸脱竣酶试验培养基:按GB 4789. 28屮3. 12规定。
4.10糖发酵管:按GB 4789. 28中3. 2规定。
4.11溶血性检查:见附录A1。
4.12杆菌肽敏感试验:见附录A4。
4.13 CAMP试验:见附录A5。
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编写:常晓林2011-09-0
9 审核:文佳琼2011-11-01 批准:牛华2011-11-01
1.概述
链球菌属是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。
该菌属种类繁多,目前临床上仍沿用Lancefield血清学方法进行分群(A、B、C、D、F、G等18个群),或根据溶血现象(β溶血、α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血)进行分类。
化脓性链球菌是临床上最重要的链球菌,属A群、β溶血的链球菌。
2. 标本类型
血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。
3. 鉴定
3.1 形态与染色革兰阳性球菌,固体培养基上呈单个或成双排列,较少呈链状排列,肉汤培养基中呈长链状排列,肺炎链球菌呈矛头状,成双或链状排列。
3.2 培养特性在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应:α溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环;β溶血周围有明显较大的完全透明环;γ溶血(不溶血性)无异常变化。
肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平,周围有草绿色α溶血环。
3.3 生化反应触酶试验阴性,对各种碳水化合物的分解因菌种而异,链球菌不被胆汁溶解。
肺炎链球菌胆盐溶菌试验阳性,Optochin试验敏感(抑菌环>14mm)。
3.4 鉴别要点
3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌,单个、成双或链状排列,菌落较小,可出现β溶血、α溶血或不溶血,触酶试验阴性。
3.4.2 根据溶血及关键性试验,对链球菌进行推测性鉴定分群。
A群链球菌(化脓性链球菌):β溶血,杆菌肽敏感。
B群链球菌(无乳链球菌):β溶血,CAMP试验阳性,马尿酸钠试验阳性。
C群链球菌(似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等):马尿酸钠、6.5%氯化钠耐盐试验均为阴性,血清学分型、杆菌肽耐药(抑菌试验阴性)。
D群肠球菌(粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌等):胆汁七叶苷、6.5%氯化钠耐盐试验均为阳性,45℃生长。
现归属于肠球菌属。
C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。
非β溶血链球菌的鉴别见表1。
表1 非β溶血链球菌的鉴别
菌名Optochin试验胆汁溶菌试验胆汁七叶苷试验
肺炎链球菌+ + -
牛链球菌- - +
其他草绿色链球菌群- - -
3.5 操作步骤
3.5.1 涂片、染色观察菌落特征,挑取可疑菌落,涂片染色镜检。
3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。
3.5.3 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落,用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4. 药敏
参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件。
5. 质量控制
参见《质量管理程序》。
6. 检验结果解释与分析
6.1 草绿色链球菌是人体正常菌群的一部分,通常是不致病的,只有当草绿色链球菌出现在血液等无菌体液中时,鉴定才有意义。
6.2如果检测出链球菌对青霉素敏感,同时该菌被认为对氨苄西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、阿莫西林、头孢克洛、头孢唑林、头孢地尼、头孢布坦、头孢曲松、头孢吡肟、头孢唑肟、头孢噻肟等头孢类敏感,则不必进行上述抗生素的药敏试验。
如果检测出肺炎链球菌苯唑西林抑菌圈≤19mm,应当检测青霉素、头孢噻肟和头孢曲松的MIC,因为可能发生青霉素耐药或中介现象。
如果检测出链球菌对红霉素敏感或耐药,则提示该菌对克拉霉素、阿奇霉素、地红霉素敏感或耐药。
近年来青霉素耐药肺炎链球菌(PRSP)及多重耐药(MDRSP)菌株的增加,给临床治疗带来一定的困难。
7. 临床意义
化脓性链球菌(A群链球菌)是引起化脓性感染的主要病原菌,致病力最强,可引起痈、蜂窝织炎、急性咽炎、丹毒、脓疱疮、猩红热、医源性伤口感染和产后感染等。
此外其感染后也可发生急、慢性风湿热和急性肾小球肾炎等严重变态反应性并发症。
无乳链球菌(B群)正常寄居于妇女阴道和人体肠道,带菌率可达30%左右,此菌可引起新生儿感染。
肺炎链球菌存在于正常人群的口腔、鼻咽部,属正常菌群,可引起大叶性肺炎或支气管炎。
草绿色链球菌是人体上呼吸道正常菌群,通常不致病。
如果在血液内或无菌体液中检出草绿色链球菌,有临床意义。
8. 鉴定流程
编写:常晓林2011-09-0
9 审核:文佳琼2011-11-01 批准:牛华2011-11-01
参考文献
[1] 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-GL23:2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南.2008
[2] 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海:上海科学技术出版社,2007
[3] 叶应妩,王毓三,申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京:东南大学出版社,2006
[4] Murray PR. Manual of Cinical Microbilogy. 9th ed.Washington:ASM Press,2007
[5] ISO 15189:2007医学实验室-质量和能力认可准则. 2007。