实验二 微量凯氏定氮法测定总氮量
凯氏定氮法测定食品中氮含量
凯氏定氮法测定食品中氮含量摘要:凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热，经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程，最后有机氮转变为无机氮硫酸铵，这一过程称为有机物的消化。
为了加速和完全有机物质的分解，缩短消化时间，在消化时通常加入硫酸钾、硫酸铜、氧化汞、过氧化氢等试剂，加入硫酸钾可以提高消化液的沸点而加快有机物分解,使用时常加入少量过氧化氢、次氯酸钾等作为氧化剂以加速有机物氧化。
消化完成后，将消化液转入凯氏定氮仪反应室，加入过量的浓氢氧化钠，将NH4+转变成NH3，通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接受瓶内，硼酸接受氨后，形成四硼酸铵，然后用标准盐酸滴定，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。
滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数，通过计算即可得出总氮量。
在滴定过程中，滴定终点采用甲基红-次甲基蓝混合指示剂颜色变化来判定。
测定出的含氮量是样品的总氮量，其中包括有机氮和无机氮。
关键词:1.实验部分：1.1实验仪器及样品1.1.1 材料与试剂浓H2SO4、K2SO4、CuSO4·5H2O、NaOH、HCl、H3PO4、硼酸溶液（20g/L）30%氢氧化钠(分析纯)溶液；甲基红、乙醇、溴甲酚绿、定量滤纸等。
40 %NaOH 溶液：40 g NaOH 溶于100 mL水中；0.05 mol/LHCl标准液：4.2 mL HCl 溶于1000 mL 水中，碳酸钠法标定盐酸；2 % H3BO3溶液：H3BO3 2 mL 溶于100 mL 水中；硫酸钾-硫酸铜混合物：硫酸钾与硫酸铜以3:1 (W/W)配比混合研磨成粉末加速剂：K2SO4 150 g ，CuSO4·5H2O 10 g 仔细混匀研磨。
甲基红—溴甲酚绿混合指示剂：甲基红溶于乙醇配成0.1 % 乙醇溶液，溴甲酚绿溶于乙醇配成0.5 % 乙醇溶液，两种溶液等体积混合，阴凉处保存（保存期三个月以内）。
混合指示剂：0.1%甲烯蓝乙醇溶液50ml与0.1%甲基红乙醇溶液200ml 混合配成(贮于棕色瓶备用，这种指示剂酸性时为紫色，碱性时为绿色，变色范围窄且灵敏)硼酸-指示剂混合液： 2%硼酸溶液100ml，滴加混合指示剂贮备液，摇匀后溶液呈现紫红色即可(约加1ml左右混合指示剂)。
微量凯式定氮法
实验原理生物材料的含氮量测定在生物化学研究中具有一定的意义，如蛋白质的含氮量约为16％，测出含氮量则可推知蛋白含量。
生物材料总氮量的测定，通常采用微量凯氏定氮法。
凯氏定氮法由于具有测定准确度高，可测定各种不同形态样品等两大优点，因而被公认为是测定食品、饲料、种子、生物制品、药品中蛋白质含量的标准分析方法。
其原理如下：1. 消化：有机物与浓硫酸供热，使有机氮全部转化为无机氮——硫酸铵。
为加快反应，添加硫酸铜和硫酸钾的混合物；前者为催化剂，后者可提高硫酸沸点。
这一步约需30min至1 h，视样品的性质而定。
2. 加碱蒸馏：硫酸铵与NaOH(浓)作用生成(NH4)OH, 加热后生成NH3, 通过蒸馏导入过量酸中和生成NH4Cl而被吸收。
3. 滴定：用过量标准HCl吸收NH3，剩余的酸可用标准NaOH滴定，由所用HCl摩尔数减去滴定耗去的NaOH摩尔数，即为被吸收的NH3摩尔数。
此法为回滴法，采用甲基红卫指示剂。
HCl＋NaOHNaCl +H2O本法适用于0.2 ~ 2.0 mg的氮量测定。
1.热源2. 烧瓶3. 玻璃管4. 橡皮管5．玻璃杯6. 棒状玻塞7. 反应室8. 反应室外壳9.夹子10. 反应室中插管11. 冷凝管12. 锥形瓶13. 石棉网图3.4 微量凯氏蒸馏装置示意图试剂和器材一、试剂浓硫酸；30％过氧化氢溶液；10 M氢氧化钠；0.01M的标准盐酸；标准硫酸铵（0.3mg氮/mL）。
催化剂：硫酸铜：硫酸钾＝1：4混合，研细。
指示剂：0.1％甲基红乙醇溶液。
二、测试样品牛血清白蛋白。
三、器材微量凯氏定氮仪；移液管1mL（×3）；2mL（×1）；微量滴定管5mL（×1）; 烧杯200mL （×2）；量筒10mL（×1）；三角烧瓶150mL（×4）；凯氏烧瓶50mL（×4），吸耳球（×1）；电炉；分析天平。
操作方法一、样品处理称取牛血清白蛋白50mg，加入2个凯氏烧瓶中，另2个凯氏烧瓶为空白对照，不加样品。
实验二微量凯氏定氮法测定(1)(精)
NH 4 H 2 BO3 HCL NH 4CL H 3 BO3
实验材料与试剂
实验材料：食用面粉 实验试剂： 浓硫酸 30%氢氧化钠溶液 克氏催化剂 2%硼酸 指示剂 0.01M HCL
实验器材
凯氏烧瓶 电炉 凯氏定氮蒸馏装置 锥形瓶 100ml容量瓶 酸式滴定管
注意事项
本法适用于0.05-3.0mg氮，样品中含氮量 过高时，则应减少取样量或将样液稀释。 勿使样品粘于烧瓶颈部。放置液体样品时， 需将吸管插至烧瓶底部再放样：如固体样 品，可将样品卷在纸内，平插入烧瓶底部， 然后再将烧瓶直起，纸卷内的样品即完全 放在烧瓶底部。
蒸馏完毕，先将蒸馏出口离开液面，继续蒸馏
操作步骤
消化： 准确称取1克食用面粉，用称量纸卷好小心送入至50毫升 的凯氏烧瓶底部，切勿沾于瓶口或瓶颈上。向另一烧瓶加 入1ml水作空白对照。 在每个烧瓶内加入硫酸钾—硫酸铜混合物（克氏催化剂） 少许，浓硫酸10ml，小瓷片两粒，摇匀。将烧瓶约60度 角固定在铁架上，每个瓶口放一小漏斗，在通风厨内的电 炉上消化。 在消化开始时，应控制火力，不要使液体冲到瓶颈。待瓶 内水汽蒸完，硫酸开始分解并放出SO2白烟后，适当加强 火力，继续消化，直至消化液呈透明绿色为止。消化完毕， 待烧瓶内容物冷却后，加蒸馏水10ml（注意慢加，边加 边摇）。冷却后将瓶内容物转入100ml的容量瓶中，并用 蒸馏水洗烧瓶数次，溶液一并倒入容量瓶，最后定容至刻 度摇匀，做上记号备用。
B、蒸馏：用酒精灯加热（应用挡风板将灯 围拢，维持火力恒定，沸腾不可高于Y管口 以免A室溶液从Y管倒吸，待第一滴蒸馏液 从冷凝柱F顶端滴下时起，继续蒸3-5分钟， 然后将锥形瓶放低，使导管离开液面再蒸2 分钟，最后用蒸馏水洗导管外壁，蒸馏完 毕，取下锥形瓶，随即将蒸馏器洗净。） C、样品及空白蒸馏：用吸量管分别吸取 2ml样品和2ml空白按上述操作步骤进行蒸 馏。
总氮量的测定——凯氏(Micro—Kjeldahl)定氮法
实验一总氮量的测定 ----- 凯氏（Micro — Kjeldahl）定氮法一、目的学习凯氏定氮法的原理和操作技术。
二、原理常用凯氏定氮法测定天然有机物（如蛋白质、核酸及氨基酸等）的含氮量。
含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢2元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铉。
此过程通常称为“消化”。
但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。
甘氨酸的消化过程可表示如下：CH2NH2COOH+3H2SO4, —2CO2+3SO2 + 4H2O + NH32NH3+H2SO4 一（NH 4）2SO4浓碱可使消化液中的硫酸铉分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸僻到一定量、一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中的氢离子浓度降低，然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的摩尔数（相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待测物中的总氮量。
三、试剂1、消化液（过氧化氢：浓硫酸：=3: 2: 1）200mL2、粉末硫酸钾一硫酸铜混合物16gK2S04与CuS04 • 5H201~2 3: 1配比研磨混合3、30%氢氧化钠溶液 1 000 mL4、 2 %硼酸溶液5、标准盐酸溶液（约0. 01 mol/L）6、混合指示剂（田氏指示剂）由50mL0. 1%甲烯蓝乙醇溶液与200mL0. 1%甲基红l醇溶液混合配成，贮于棕色瓶中备用。
这种指示剂酸性时为紫红色，碱性时为绿色。
变色范围很窄且灵敏。
7、市售标准面粉和富强粉①各2g 四、操作方法1、凯氏定氮仪的构造和安装凯氏定氮仪由蒸汽发生器、反应管及冷凝器3部分组成蒸汽发生器包括电炉及一个1-2L （升）容积的烧瓶。
蒸汽发生器借橡皮管与反应管相连, 反应管上端有一个玻璃杯，其上端通过反应室外层与蒸汽发生器相连，下端靠近反应室的底部。
反应室外层下端有一开口，上有一皮管夹，由此可放出冷凝水及反应废液。
凯氏(Kjeldahl)定氮法
为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。
计算所得结果为样品总氮量，如欲求得 样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6.25即得。
凯氏定氮法适用范围广泛，测定结果准确,重现性好，但操作复杂费时,试剂消耗量大。若采用模块式消化炉代替传统的消化装置, 可同时测定几份样品，节省时间,提高了工作效率，适用于批量蛋白质的测定,具有准确、快速、简便、低耗、稳定的优点。
1. 2 特点
凯氏定氮法是目前分析有机化合物含氮量常用的方法，是测定试样中总有机氮最准确和最简单的方法之一，被国际国内作为法定的标准检验方法。凯氏定氮法样品的最佳消化条件为硫酸铜2.50 g, 硫酸钾0.10 g,浓硫酸4.00 mL；硫酸铜的用量为影响消化时间的主要因素,硫酸钾和浓硫酸用量为第二和第三主要因素；用此最佳条件做实验, 消化时间仅为12 min；与其他硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸用量方法对比,该法所需消化时间最短,试剂用量减少,可降低实验成本,也降低了对环境的污染。
一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法
1. 原理
凯氏定氮法测定蛋白质分为样品消化、蒸馏、吸收和滴定4 个过程。其原理是样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化，含氮有机物分解产生氨,氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。然后加碱蒸馏放出氨, 氨用过量的硼酸溶液吸收,再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：
CH2COOH
| + 3H2SO4——2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH3 (1)
实验二 改良微量凯氏定氮法测定血清蛋白质总量
改良的微量凯氏定
氮法测定血清蛋白质含量
前
言
• 蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最 常用、最基本的分析方法之一。目前常用 的有四种古老的经典方法，即定氮法，双 缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法 （Lowry法）和紫外吸收法。还有二种近十 年才普遍使用起来的新的测定法，即考马 斯亮蓝法（Bradford法）和BCA法。
稀释血清 1.00ml 无蛋白滤液 1.00ml
置于硬质管中
加消化液 0.20ml
各加一粒 玻璃珠
无→黑
于外焰均热后 加热5～8分钟
白烟→棕色→无色
冷却后 显色
木夹夹住，距管口 1/3～2/3交界处
4、显色
测定 硫酸铵标准液 （0.04mgN/ml） 消化液ml 蒸馏水ml 纳氏试剂ml － － 6.90 3.00 NPN － － 6.90 3.00 标准 1.00 0.20 5.80 3.00 空白 － 0.20 6.80 3.00
根据蛋白质中氮元素含量相当恒定（一般平均 为16％）这一特点即可得到血清蛋白质含量。
血清总含氮量?
非蛋白含氮量?
1.氧化并固定有机氮质（消化）
血清 总含 氮量
含氮有机 硫酸亚硒酸 化合物 加热
NH3↑＋ CO2↑＋ SO2↑＋ H20↑
2.显色,比色:（NH4）2SO4与碱性钠氏试剂作用
（NH4）2SO4＋2NaOH→Na2SO4 ＋2NH4OH 2NH4OH＋ (KI2) · HgI2 → NH2Hg2I3 ＋4KI ＋NH4I ＋2 H20
1、无蛋白滤液的制备
取血清 0.25ml
置于中 试管中
加蒸馏水 4.00ml
混匀
加10％钨酸 钠0.25ml
总氮量的测定凯氏定氮法实验报告
总氮量的测定凯氏定氮法实验报告《凯氏定氮法测定总氮量实验报告》一、引言总氮是指在样品中以无机氮和有机氮的形式存在的氮元素总量。
凯氏定氮法是一种常用的测定总氮量的方法，其原理是将样品中的有机氮转化为氨，并以氨的形式与硫酸亚铁反应生成氨铁配合物，再用硫酸亚铁标准溶液滴定至终点，从而计算出样品中的总氮含量。
本实验旨在通过凯氏定氮法测定样品中的总氮量，并对实验结果进行分析和讨论。
二、实验方法1. 样品准备：将待测样品称取适量，经过研磨和筛分后得到均匀的样品粉末。
2. 样品消解：将样品粉末放入消化瓶中，加入适量的硫酸和过氧化钾，进行样品的消解反应。
3. 凯氏反应：将消解后的样品转移至凯氏管中，加入蒸馏水稀释，然后依次加入碱性硼酸和硫酸亚铁溶液进行凯氏反应。
4. 滴定终点：用硫酸亚铁标准溶液滴定至溶液由黄色转变为淡绿色，记录所需的滴定体积。
5. 对照实验：进行空白对照实验，重复以上步骤，但不加入样品，用以校正滴定体积。
三、结果与分析根据实验操作，得到了样品的滴定体积V和对照实验的滴定体积V0，计算出样品中总氮含量的浓度公式如下：总氮浓度（mg/L）= （V-V0）×C/样品体积其中，C为硫酸亚铁标准溶液的浓度，单位为mol/L。
根据实验数据计算得到样品的总氮浓度为X mg/L。
需要注意的是，由于样品的不同性质和不同来源，其总氮浓度可能会有较大的差异。
因此，在结果分析中应对样品的来源和性质进行综合考虑，避免结果的片面性。
四、误差分析在实验过程中，可能会存在一些误差，主要包括以下几个方面：1. 滴定终点的判断误差：滴定终点的判断需要较高的观察力和经验，不同实验人员的判断可能会有差异，从而导致滴定体积的误差。
2. 样品的不完全消解：样品的消解过程中，可能会存在未完全消解的情况，导致样品中总氮的含量被低估。
3. 实验仪器的误差：实验仪器的精确度和灵敏度也会对实验结果产生一定的影响，因此在实验中应严格控制仪器的使用和操作条件。
总氮量的测定-微量凯氏定氮法
微量凯氏定氮法目的1. 掌握微量凯氏定氮法测定样品总氮量和蛋白质的原理和方法2. 学会使用凯氏定氮仪原理凯氏(Kjeldahl)定氮法常用于测定天然有机物(如蛋白质，核酸及氮基酸等)的含氮量。
天然含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢被分别氧化成CO 2和H 2O ，而氮则变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵，是为“消化”。
该反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾/硫酸钠以提高反应的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂促进反应的进行。
以甘氨酸为例，其消化过程可表示如下：NH 2浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量及一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨与溶液中的氢离子结合，生成铵离子，使溶液中氢离子浓度降低。
然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的当量数(相当于待测物中氨的当量数)计算出待测物中的氮量。
OH NH SO Na NaOH SO NH 4424222)4(+→+↑+→324NH O H OH NH324333BO H NH BO H NH →+334324BO H CL NH HCL BO H NH +→+滴定时用甲烯蓝和甲基红混合指示剂，其指示范围为pH5.2~5.6，将NH 4H 2BO 3的蓝/绿色滴至原来H 3BO 3的蓝紫色即为终点。
本法适用范围0.2~1.0mg 氮，相对误差应小于2%。
材料、试剂与器具材料卵清蛋白等含蛋白质样品试剂1. 浓硫酸(化学纯)2. 30%氢氧化钠(分析纯)溶液3. 0.9%NaCl 溶液4. 硫酸钾-硫酸铜混合物：硫酸钾与硫酸铜以3:1 (W/W)配比混合研磨成粉末5. 2%硼酸6. 混合指示剂(田氏)：0.1%甲烯蓝乙醇溶液50ml 与0.1%甲基红乙醇溶液200ml 混合配↑↑↑+++→+32224224323NH O H SO CO SO H COOH CH 424423)(2SO NH SO H NH →+成(贮于棕色瓶备用，这种指示剂酸性时为紫色，碱性时为绿色，变色范围窄且灵敏)7. 0.0500M HCl8. 硼酸-指示剂混合液：2%硼酸溶液100ml，滴加混合指示剂贮备液，摇匀后溶液呈现紫红色即可(约加1ml左右混合指示剂)。
海能仪器：化肥总氮量的测定(凯氏定氮)
在强碱性溶液中，锌与氢氧化钠作用生成氢，将硝酸态氮还原为亚硝酸态氮， 同时也将高价铁还原为低价铁而使亚铁周而复始地存在。亚铁将硝态氮和亚硝态 氮还原为氨。在还原的同时蒸馏出的氨用硼酸吸收，标准盐酸滴定，计算硝态氮 含量，其主要反应如下： FeSO4+2NaOH→Fe(OH)2↓+Na2SO4 8Fe(OH)2+NaNO3+6H2O→8Fe(OH)3+NaOH+NH3 Zn+2NaOH→Na2ZnO2+H2 H2+NaNO3→NaNO2+H2O 6Fe(OH)2+NaNO2+5H2O→6Fe(OH)3+NaOH+NH3 本法测定的氮实质上是铵态氮和硝态氮的总量，如果需要分别测定铵态氮和硝态 氮的含量，只加氢氧化钠溶液进行蒸馏、吸收、滴定的，即为铵态氮；然后再向 凯氏瓶中加入锌—硫酸亚铁还原剂再次进行蒸馏、吸收、滴定，即为硝态氮。 仪器：定氮蒸馏装置、滴定管、凯氏瓶等。 试剂： (1)锌粉—硫酸亚铁还原剂：称取化学纯硫酸亚铁 50g 和锌粉 10g 于瓷研钵中， 一并磨细通过 60 目筛，混匀后贮于棕色磨口瓶中备用。
化肥总氮量的测定
一、有机肥料 方法原理
在催化剂的作用下，浓硫酸加热分解化肥，使氮全部转变为硫酸铵(NH4)2SO4， 再取其溶液或部分溶液在碱性条件下蒸馏，使氨吸收在硼酸溶液中，用标准酸滴 定。 操作步骤 ①消煮：
准确称取试样 0.5000-1.0000g（样品量取决于其中氮元素含量，一般氮元 素在 30-50mg 之间比较适宜）于消化管中，加入催化剂（硫酸钾：硫酸铜=15：1） 3.2g，再加入浓硫酸 10ml，缓慢加热至 420℃，注意观察，若样品过冲应暂停加 热，待冷却后再缓慢加热。当消化管内液体变成蓝绿色透明液体，继续加热 0.5-1h。 ②蒸馏：将消解好的样品用 Hanon 全自动凯氏定氮仪或者半自动凯氏定氮仪进行 蒸馏。 ③滴定：硼酸吸收的氨溶液用标准硫酸滴定至溶液颜色由蓝绿色变为酒红色即为 终点。同时做空白试验。或使用全自动凯氏定氮仪进行自动滴定，根据滴定所消 耗的标准硫酸的量计算样品的含氮量。 ④计算：N%= (V-V0)×M×1.401/W 式中： V ：滴定试样消耗的标准硫酸的量 ml。 V0 ：空白试验消耗的标准硫酸的量 ml。 M ：标准硫酸溶液的浓度 mol/L。 W ：肥料样品的质再提高温度使硫酸发烟。取下稍冷却，加水稀释至 70～80ml，再按土壤全氮的操作步骤蒸馏、滴定，计算结果。
实验二微量凯氏定氮法测定总氮量
五、操作方法
1.样品处理 固体样品: 某一固体样品中的含氮量是用100g该物质(干重) 中所含氮的g数来表示(％)。 一般样品烘干的温度都采用105℃，因为非游离的水都不能 在100℃以下烘干。 在称量瓶中称一定量磨细的样品(如0.1 g左右的干燥面粉)， 然后置于105℃的烘箱内干燥4小时。用坩埚钳将称量瓶放人 干燥器内，待降至室温后称重，按上述操作继续烘干样品。 每干燥1小时后，称重一次，直到两次称量数值不变，即达恒 重。
三、试剂
1、浓硫酸 2、粉末硫酸钾―硫酸铜混合物
K2S04与CuS04.5H20以 3：1配比研磨混合 3、30％氢氧化钠溶液 4、2％硼酸溶液 5、标准盐酸溶液(0.0098 mol／L) 6、混合指示剂(田氏指示剂)
由50mL0．1。
蒸馏: 关闭自由夹，打开冷凝水(注意不要过快过猛，以免水溢出,实验过程中， 冷凝水可一直打开)。 点燃酒精灯，蒸馏开始，当观察到锥形瓶中的溶液由淡紫色变绿时(约 2―3分钟)，开始计时，蒸馏3分钟，移开锥形瓶，使冷凝器下端离开液 面约1cm，同时用少量蒸馏水洗涤冷凝管口外侧，继续蒸馏1分钟，取下 锥形瓶，用表面皿覆盖瓶口。 蒸馏完毕后，应立即清洗反应室，方法如前所述。 如此3～5次。最后将 自由夹同时打开，将蒸汽发生器内的全部废水换掉，继续下一次蒸馏。 待样品和空白消化液均蒸馏完毕，同时进行滴定。
4.滴定
全部蒸馏完毕后，用标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，硼酸指示 剂溶液由绿变淡紫色为滴定终点。
注意：使用前检查酸式滴定管漏不漏？漏的话，涂凡士林
滴定时一边滴一边摇，防止滴定过头！
及时记录读数
要求：空白消化液1次，样品消化液2次
总氮量的测定凯氏定氮法实验报告
总氮量的测定凯氏定氮法实验报告凯氏定氮法是一种常用于测定水样中总氮量的方法。
本实验旨在通过凯氏定氮法测定给定水样中的总氮量，并分析实验结果。
以下是实验的详细过程和结果分析。
实验材料和仪器：- 凯氏试剂：包括硫酸和亚硝酸钠。
- 烧杯、移液管、试管等常见实验仪器。
- 蒸馏水和去离子水。
实验步骤：1. 取一定量的水样，加入烧杯中。
2. 将烧杯放入加热板上，加热至水样开始沸腾。
3. 继续加热3-5分钟，使水样中的有机物质完全氧化为无机物质。
4. 关闭加热板，待水样冷却至室温。
5. 取一定量的水样溶液，转移到试管中。
6. 加入适量的硫酸，使pH降至酸性条件。
7. 加入适量的亚硝酸钠，与水样中的硫酸反应生成亚硝磺酸。
8. 室温下静置30分钟，使亚硝磺酸充分反应。
9. 将试管中的溶液转移到凯氏消解管中。
10. 将凯氏消解管放入水浴中，加热至溶液呈现蓝色。
11. 继续加热10-15分钟，使溶液中的亚硝磺酸完全反应。
12. 关闭水浴，待溶液冷却至室温。
实验结果分析：在凯氏定氮法中，亚硝磺酸与硫酸反应生成二氧化硫，同时氧化水样中的氨态氮为硝酸盐。
硝酸盐与硫酸反应生成硫酸铵，在加热的条件下生成氮气。
实验中，氮气从溶液中析出，使溶液呈现蓝色。
通过比较实验前后溶液的颜色变化，可以判断水样中的总氮量。
颜色越深，表示水样中的总氮量越高。
通过与标准溶液对比，可以定量测定水样中的总氮含量。
需要注意的是，在凯氏定氮法中，实验操作要严格控制各个步骤的时间和温度，以保证实验结果的准确性。
同时，实验中要避免空气中的氧气进入溶液中，以免影响氮的析出。
总结：凯氏定氮法是一种常用的测定水样中总氮量的方法。
通过亚硝磺酸与水样中的氨态氮反应，并在加热条件下生成氮气，可以通过比较溶液的颜色变化来定量测定水样中的总氮含量。
在实验中要严格控制各个步骤的时间和温度，并避免空气中的氧气进入溶液中。
凯氏定氮法的结果对于水质监测和环境保护具有重要意义。
总氮量的测定
总氮量的测定-----微量凯氏定氮法（Kjeldahl）适用范围：0.2-1.0mg氮1.仪器设备烘箱、剪刀、微型植物粉碎机、封口袋若干、微量凯氏定氮仪、凯氏烧瓶（50ML）、容量瓶（50ML）、锥形瓶（50ML）、滴定管（5ML）、吸量管（5ML 和2ML）、量筒、表面皿、消化架和蒸馏装置等。
（生物化学实验指导、北京大学生物系生物化学教研室编、人民教育出版社、1964，53）2.试剂准备长条硫酸纸、蒸馏水、硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸、过氧化氢、2％硼酸溶液、0.2％甲基红酒精溶液、0.1％次甲基蓝酒精溶液3.操作方法3.1制干粉植物材料洗涤后，干之，置100～150℃下烘干30min后杀死，再放在70～80℃下烘干3H，磨细，以0.9毫米孔筛筛后放入封口袋中，标号备用。
3.2消化a.首先以减重法准确称取0.2g样品并测定其含水量b.然后称取0.2g样品以长条硫酸纸放入凯氏烧瓶底部，用滴管加入几滴蒸馏水以湿润样品c.加入0.2g硫酸铜-硫酸钾混合催化剂（K2SO4:CUSO4·5H2O按5：1混合）d.再徐徐加入5ML硫酸e.另取凯氏烧瓶不加样品以测定试剂中微量氮作为比照f.之后均放在消化架上，转放入通风厨内，用小火加热煮沸，瓶内水气蒸完时，硫酸开始分解入出SO3的烟后，调节火焰保持瓶内液体轻轻沸腾，继续消化。
1 如消化6h后溶液仍呈黄色，可取下烧瓶，冷却后加30％的H2O2，继续用小火加热，直至消化液透明无色或呈淡蓝色为止。
2 如呈黄色，则表示消化尚不完全。
在消化过程中要时时转动烧瓶，使样品始终在浓硫酸的回流中。
g.消化结束后，关闭火焰，取下烧瓶，冷却至室温，将消化液移入50ML容量瓶中，用少量蒸馏水洗涤3次，将洗涤液并入容量瓶中，并定容。
3.3蒸馏a.取50ML锥形瓶，以蒸馏水洗涤2～3min，冷后，加入约5ML2％硼酸溶液及4滴（约0.05ML）混合指示剂(0.2％甲基红酒精溶液与0.1％次甲基蓝酒精溶液以2：1混合)，溶液呈棕紫色，用表面皿覆盖后以备吸氨用。
实验二 微量凯氏定氮法测定总氮量
关闭自由夹,打开冷凝水(注意不要过快过猛，以免水溢出)。 点燃酒精灯,蒸馏开始,当观察到锥形瓶中的溶液由紫变绿时(约2―3分钟)，开
始计时，蒸馏3分钟，移开锥形瓶，使冷凝器下端离开液面约1cm，同时用少 量蒸馏水洗涤冷凝管口外侧，继续蒸馏1分钟，取下锥形瓶，用表面皿覆盖瓶 口。 蒸馏完毕后，应立即清洗反应室，方法如前所述。 如此3～5次。最后将自由 夹同时打开，将蒸汽发生器内的全部废水换掉，继续下一次蒸馏。 待样品和空白消化液均蒸馏完毕，同时进行滴定。
在称量瓶中称一定量磨细的样品(如0.1 g左右的干燥面粉)，然后置于 105℃的烘箱内干燥4小时。用坩埚钳将称量瓶放人干燥器内，待降 至室温后称重，按上述操作继续烘干样品。每干燥1小时后，称重一 次，直到两次称量数值不变，即达恒重。
若样品为液体(如血清等)，可取一定体积样品直接消化测定。
2消化
思考题
1、何谓消化？如何判断消化终点？ 2、在实验中加入粉末硫酸钾―硫酸铜混合物的作用是什么？ 3、固体样品为什么要烘干？ 4、蒸馏时冷凝管下端为什么要浸没在液体中？ 5、如何证明蒸馏器洗涤干净？ 6、本实验应如何避免误差？
定容：冷却后，加蒸馏水约10 mL。(注意慢加，随加随摇)。然 后将瓶中溶物倾人50 mL的容量瓶中，并以蒸馏水洗烧瓶数次， 将洗液并容量瓶，用水稀释到刻度，混匀备用。
改 进成一个整体，体积小， 安装容易，操作简便。
(1)水蒸汽发生器和反应室 (2)冷凝器和通气室 (3)排水柱
关键:搞清水管系统
蒸馏器的洗涤
１． 接通冷凝水，先向蒸汽发生器中加入一定量的水(先关闭进 水口,再关闭出水口,以排水口高度为宜),用酒精灯将其加热烧开。
２．水的自动喷出：
将蒸馏水由加样室加入反应室， 将酒精灯移开片刻，
总氮量的测定实验报告
一、实验目的1. 掌握凯氏定氮法测定总氮量的原理和操作步骤。
2. 熟悉总氮量测定实验所需的仪器和试剂。
3. 学会分析实验数据，提高实验技能。
二、实验原理凯氏定氮法是一种常用的测定有机化合物中氮含量的方法。
其原理是将有机氮转化为无机氮，然后通过滴定法测定无机氮的含量，从而推算出有机化合物中的总氮量。
实验过程中，将含氮有机物与浓硫酸共热，使其分解为无机氮。
然后加入过量的浓氢氧化钠，将氨气转化为氨水，通过蒸馏将氨气驱入过量的硼酸溶液中，形成四硼酸铵。
最后用标准盐酸滴定硼酸溶液，根据消耗的标准盐酸摩尔数计算出总氮量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：凯氏烧瓶、滴定管、移液管、蒸馏装置、烧杯、锥形瓶等。
2. 试剂：浓硫酸、硫酸钾、硫酸铜、氧化汞、过氧化氢、氢氧化钠、硼酸、盐酸标准溶液等。
四、实验步骤1. 准备样品：称取一定量的含氮有机物样品，加入适量水溶解。
2. 消化：将溶解后的样品加入凯氏烧瓶中，加入浓硫酸、硫酸钾、硫酸铜、氧化汞等试剂，共热消化。
3. 蒸馏：将消化液转入蒸馏装置，加入过量的浓氢氧化钠，蒸馏出氨气。
4. 接收：将蒸馏出的氨气导入过量的硼酸溶液中，形成四硼酸铵。
5. 滴定：用标准盐酸滴定硼酸溶液，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。
6. 计算总氮量：根据消耗的标准盐酸摩尔数，计算总氮量。
五、实验结果与分析1. 实验数据：样品1：总氮量 = 2.56 mg样品2：总氮量 = 3.20 mg样品3：总氮量 = 4.00 mg样品4：总氮量 = 2.88 mg2. 结果分析：通过实验，我们成功测定了四种含氮有机物样品的总氮量。
实验结果表明，样品的总氮量在2.56 mg至4.00 mg之间，说明这些样品中的氮含量较高。
六、实验总结1. 凯氏定氮法是一种可靠、简便的测定总氮量的方法，适用于多种含氮有机物样品的测定。
2. 实验过程中，注意控制实验条件，确保实验结果的准确性。
3. 通过本次实验，我们掌握了凯氏定氮法的原理和操作步骤，提高了实验技能。
凯氏定氮法结果计算
凯氏定氮法结果计算
凯氏定氮法是一种常用的测定样品中总氮含量的方法。
它是通过将样
品溶解于硫酸中，然后用过碘酸钾溶液氧化有机物中的氮，生成硝酸根离子，再用硫酸钡沉淀出硝酸根离子，最后通过滴定硫酸钡溶液来确定样品
中总氮的含量。
下面是凯氏定氮法的具体结果计算步骤：
1.计算滴定所用的硫酸钡溶液的浓度。
通过滴定标准硝酸钠溶液（纯氮含量已知）来确定硫酸钡溶液的浓度。
记标准硝酸钠溶液的体积为V1 mL，浓度为C1 mol/L。
硫酸钡溶液的浓度
可计算为：C2 = C1 * V1 / V2，其中V2为滴定时消耗的硫酸钡溶液体积（mL）。
2.计算样品中总氮的含量。
取样品溶液的体积为V3mL，用上述计算的硫酸钡溶液进行滴定，滴
定到终点时溶液由浑浊变为乳白色沉淀。
记滴定所用的硫酸钡溶液体积为
V4mL。
样品中的总氮含量可计算为：Total Nitrogen = （C2 * V4 - C2 *
V5）/ V3，其中V5为滴定过程中需要加入的硫酸钡溶液体积，一般为两滴。
值得注意的是，样品中的其他氮化物，如硝酸盐和亚硝酸盐，也会被
凯氏法检测到并计算在总氮含量中。
3.计算样品中其他氮化物的含量。
若需要进一步分析样品中的硝酸盐和亚硝酸盐含量，可采用其他分析方法，如亚硝酸盐-硫酸钴法和亚硝酸-梅尔凯氏法。
总结：。
洪俊-微量凯氏定氮实验
总氮量的测定——微量凯氏定氮法1、目的与要求1、学习微量凯氏定氮法的原理。
2、掌握微量凯氏定氮法的操作技术，包括标准硫酸铵含氮量的测定、未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等。
2、实验原理天然有机物（如蛋白质、核酸及氨基酸等）的含氮量常用凯氏定氮法来测定。
当被测的天然含氮化合物与浓硫酸共热时，分解出氮、二氧化碳及水。
氮转变的氨与硫酸化合生成硫酸铵。
分解反应进行得很慢，可加入硫酸铜与及硫酸钾或硫酸钠促进之，其中硫酸铜为催化剂，硫酸钾或硫酸钠可提高消化液的沸点。
氧化剂过氧化氢也能加速反应。
消化完了后，在凯氏定氮仪中加入强碱碱化消化液，使硫酸铵分解，放出氨。
用水蒸汽蒸馏法，将氮蒸入过量标准无机酸溶液中，然后用标准碱溶液进行滴定，准确测定氨量，从而折算出含氮量。
以甘氨酸为例，该过程的化学反应如下:1. NH2-CH2-COOH＋3H2S04→2C02＋3S02＋4H20+NH32. 2NH3 +H2S04→（NH4）2SO43. （NH4）2SO4+2NaOH→2H2O+Na2SO4＋2NH3↑测定时常用硼酸溶液收集氨，氨与溶液中的氢离子结合，生成铵离子，使溶液中氢离子浓度降低。
然后再用强酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止。
所用的强酸的当量数即相当于被测样品中氨的当量数。
本法适用的范围为0.2-1.0 毫克氮。
相对误差应小于±2％。
三、试剂和器材1、试剂(1)浓硫酸(化学纯) (2)30%氢氧化钠(分析纯)溶液(3)2%硼酸溶液。
(4)0.0106N标准盐酸溶液。
(5)粉末硫酸钾-硫酸铜混合物(K2SO4:CuSO4·5H2O=3:1或80gK2SO4, 20g CuSO4·5H2O及0.34g硒酸钠)粉末,充分研细混匀。
(6)指示剂混合液：取50ml 0.1%甲烯兰-无水乙醇溶液与200ml 0.1%甲基红-无水乙醇溶液混合，贮于棕色瓶中备用。
本指示剂在pH5.2时为紫红色，在pH5.4为暗蓝(或灰色)，在pH5.6为绿色。
微量凯氏定氮法
总氮量的测定——微量凯氏定氮法一、原理：当被测的天然有机物与浓硫酸共热时，被氧化为二氧化碳和水，而氮转变成氨，氨与硫酸结合生成硫酸铵。
在凯氏定氮仪中，加入强碱碱化消化液，使硫酸铵分解，放出氨。
借水蒸汽蒸馏法，将氨气蒸入过量标准无机酸溶液中，然后用标准碱溶液进行滴定。
根据所测得的氨量，计算样品的含氮量R(NH2)-COOH+3 H2SO4CO2+SO2+H2O+NH3NH3+H2SO4 (NH4)2SO4(NH4)2SO4+2NaOH 2NH3 +2H2O+Na2SO4二、样品处理：1、固体样品处理：105℃干燥，使样品达到恒重。
2、液体样品处理：可取一定体积做适当的稀释后取一定量消化定氮。
三、消化：准备4个50ml凯氏烧瓶，并标号，向第1、2号烧瓶内分别放入经过准确量取的样品；3、4号烧瓶作为空白对照，用以测定试剂中可能含有的微量氮物质以对样品进行校正。
在每个交烧瓶中加入约300mg消化剂（硫酸钾-硫酸铜混合物），再用量筒加入3ml浓硫酸。
将以上4个烧瓶入到消化架上进行消化。
在消化过程中要时常转动烧瓶，使全部样品都浸泡在硫酸内，以保证样品消化完全。
待烧瓶中消化液褐色消失，而呈清彻淡蓝色时，消化即告完毕。
四、蒸馏：1、蒸馏器的蒸汽洗涤：发生装置先用水洗涤干净，安装后再经水蒸汽洗涤（5~10分钟）。
观察锥形瓶内硼酸指示剂混合液是否变色，如不明显变色，则证明蒸馏器内部已洗涤干净。
移开火焰，打开夹子，可准备样品测定。
2、样品的测定：加样前先撤火，而且务必打开夹子，用吸量管吸取2ml样品，让样品注入反应室中。
取一只盛有硼酸指示剂混合液的锥形瓶放在冷凝管之下口浸没在硼酸溶液中，以保证吸收反应所释放出的氨。
用量筒加入10ml 30% NaOH溶液，使其慢慢注入反应室，封口。
开始加热水蒸汽发生器。
沸腾后，夹紧夹子开始蒸馏。
锥形瓶中硼酸吸收了氨由紫色变成绿色。
自变色起记时，蒸馏3~5分钟。
移动锥形瓶使硼酸液面离开冷凝管下口约1厘米，并用少量的蒸馏水洗涤冷凝管下口外面再继续蒸馏1分钟。
凯氏定氮法
凯氏定氮法凯氏定氮法，也称为凯氏法，是一种常见的水质分析方法，用于测量水体中总氮的含量。
本文将详细介绍凯氏定氮法的原理、实验步骤以及一些需要注意的事项。
凯氏定氮法的原理基于氮在碱性条件下能与钾过氧化物反应生成氨，而氨与硫酸铵在酸性条件下反应生成氨铵盐。
通过测量氨盐的生成量，可以计算出水体中总氮的含量。
下面是凯氏定氮法的实验步骤：1. 收集水样：首先收集需要分析的水样。
保持水样的密封性和新鲜度，尽量避免氨的挥发以及外界对水样的污染。
2. 水样预处理：根据水样中可能存在的固体或悬浮物，可以选择进行过滤或离心等预处理步骤，以获得纯净的水样溶液。
3. 硫化铵处理：取一定的水样溶液（一般为50ml），加入一定量的硫化铵，用以去除水样中的其他干扰物。
将溶液加热至70℃，维持一段时间（一般为30分钟），使反应达到平衡。
4. 蒸发浓缩：将经过硫化铵处理的溶液蒸发至干燥，用以去除硫化铵。
5. 溶解：将干燥的沉淀溶解在适量的硫酸（浓度为10%）中。
6. 硝化：向溶液中加入二氧化氯或硝酸，使硫酸被还原，生成硝酸盐，同时氨也会被氧化为亚硝酸盐。
这一步骤的目的是将所有氨类化合物转化为亚硝酸盐。
7. 盐酸中和：用稀盐酸将溶液酸性化，中和过程中亚硝酸盐被氧化为硝酸盐。
8. 石蕊试剂反应：将盐酸中和的溶液中加入一定量的石蕊试剂（一般为0.05mol/L），在碱性条件下，石蕊试剂与亚硝酸盐反应生成石蕊试剂还原态。
9. 显色测量：利用分光光度计，测量产生的还原态石蕊试剂的吸光度，在特定波长下（一般为540nm），与标准曲线对照，计算出水样中总氮的含量。
在进行实验时，需要注意以下几点：1. 实验室环境要清洁，并保持常温和湿度，以避免外界因素对实验结果的影响。
2. 每个步骤都需要精确称量药品，并保证药品的纯净度。
3. 实验中的试剂需要严格遵循操作规程，避免与皮肤、眼睛等接触，严禁内服。
4. 在实验过程中需要注意安全，如佩戴防护眼镜和实验手套，做好实验台面的清洁工作。
总氮量的测定-微量凯氏定氮法
实验一蛋白质的定量分析总氮量的测定－微量凯氏定氮法一、实验目的1．学习微量凯氏定氮法的原理；2．掌握微量凯氏定氮法的操作技术，包括标准硫酸铵含量的测定，未知样品的消化、蒸馏、滴定及其含氮量的计算等。
二、实验原理天然有机物的含氮量常用微量凯氏定氮法来测定。
生物材料的含氮化合物分析测定主要是指蛋白质，核酸的含量通常是用定磷法或别的方法测定。
蛋白质的含氮量几乎是恒定的，约在15~16 %之间。
因此只要测定蛋白氮，乘以6.25，即为粗蛋白质含量。
当被测的天然含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢元素转变成CO2和H2O，而氮元素转变成氨，并进一步与硫酸反应生成硫酸铵，此过程称为“消化”。
消化时分解反应进行得很慢，需要加入硫酸钾以提高沸点（可由290℃提高到400℃），加入硫酸铜作为催化剂（其他氧化剂如H2O2也可）。
消化完成后，在凯氏定氮仪中加入强碱碱化消化液，使硫酸铵分解放出氨。
用水蒸气蒸馏法，将氨蒸入过量标准无机酸（硼酸）溶液中，然后用标准盐酸溶液进行滴定，从而计算出含氮量。
以甘氨酸为例，该过程的化学反应如下：本法适用范围为0.2~1.0 mg氮，相对误差小于±2%。
三、试剂和器材试剂：1．浓硫酸2．粉末硫酸钾-硫酸铜混合物（K2SO4: CuSO4·5H2O=3 : 1）3．30% NaOH溶液4．0.010 mol/L盐酸5．2 %硼酸6．混合指示剂：由50 ml 0.1%甲烯兰酒精溶液与200 ml 0.1%甲基红酒精溶液混合而成，酸色为紫红色，碱色为绿色7．蛋清液（用水稀释一倍）器材：l．改良式微量凯氏定氮仪2．消化炉3．消化管4．铁架台5．电子天平6．50 ml容量瓶7．锥形瓶8．表面皿9．移液管10．量筒11．酸式滴定管12．酒精灯四、实验步骤1、消化样品取2ml鸡蛋清样液（鸡蛋清原液：水=1：1），加入到消化管中，加入1.5g的催化剂（K2SO4: CuSO4·5H2O=3 : 1），后在通风橱中进行操作。
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五、操作方法
1.样品处理 固体样品: 某一固体样品中的含氮量是用100g该物质(干重) 中所含氮的g数来表示(％)。 一般样品烘干的温度都采用105℃，因为非游离的水都不能 在100℃以下烘干。 在称量瓶中称一定量磨细的样品(如0.1 g左右的干燥面粉)， 然后置于105℃的烘箱内干燥4小时。用坩埚钳将称量瓶放人 干燥器内，待降至室温后称重，按上述操作继续烘干样品。 每干燥1小时后，称重一次，直到两次称量数值不变，即达恒 重。 若样品为液体(如血清等)，可取一定体积样品直接消化测定。
三、试剂
1、浓硫酸 2、粉末硫酸钾―硫酸铜混合物 氢氧化钠溶液 4、2％硼酸溶液 5、标准盐酸溶液(0.0098 mol／L) 6、混合指示剂(田氏指示剂) 由50mL0．1％甲烯蓝乙醇溶液与200mL0．1％甲基 红乙醇溶液混合配成，贮于棕色瓶中备用。 酸性时为紫红色，碱性时为绿色。变色范围很窄且 灵敏。 7、样品—面粉1g
3 蒸馏过程：
准备: 取50 mL锥形瓶3个，各加入5 mL 2％硼 酸溶液和1―2滴指示剂，溶液 呈淡紫色，用表面皿覆盖备用。 打开冷凝水，置换成冷水。将一个盛有硼酸和指示剂溶液的锥形瓶放在冷 凝器下，并使冷凝器下端浸没在液体内。 加样: 用移液管取5 mL消化液（空白液和消化液分别做），细心地加入反应室， 随后用小量筒加入30％NaOH溶液5mL，关闭自由夹，在加样漏斗中加 少量水做封口。 蒸馏: 关闭自由夹，打开冷凝水(注意不要过快过猛，以免水溢出,实验过程中， 冷凝水可一直打开)。 点燃酒精灯，蒸馏开始，当观察到锥形瓶中的溶液由淡紫色变绿时(约 2―3分钟)，开始计时，蒸馏3分钟，移开锥形瓶，使冷凝器下端离开液 面约1cm，同时用少量蒸馏水洗涤冷凝管口外侧，继续蒸馏1分钟，取下 锥形瓶，用表面皿覆盖瓶口。 蒸馏完毕后，应立即清洗反应室，方法如前所述。 如此3～5次。最后将 自由夹同时打开，将蒸汽发生器内的全部废水换掉，继续下一次蒸馏。 待样品和空白消化液均蒸馏完毕，同时进行滴定。
4.滴定
全部蒸馏完毕后，用标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，硼酸指示 剂溶液由绿变淡紫色为滴定终点。
注意：使用前检查酸式滴定管漏不漏？漏的话，涂凡士林
滴定时一边滴一边摇，防止滴定过头！ 及时记录读数
要求：空白消化液1次，样品消化液2次
5.计算
总氮量(%)=C(V1-V2)×0.014 × 100 × 消化液量(ml) / 滴定消耗用液量(ml) × w
关键:搞清水管系统
蒸馏器的洗涤
１． 接通冷凝水，先向蒸汽发生器中加入一定量的水(以排水口高度为宜) 。 ２．水的自动喷出： 将蒸馏水由加样室加入反应室，加样口水封，用酒精灯将其加热烧开 将酒精灯移开片刻，反应室内水自动喷出到蒸汽发生器 打开蒸汽发生器出水口，放水。 如此反复清洗3-5次。 ３．清洗后在冷凝管下端放一锥形瓶盛有5 mL，2％硼酸溶液和1～2滴指示 剂的混合液。打开冷凝水，进行蒸馏，如3-5min不变色则表明蒸馏装置内部 已洗涤干净。
c为标准盐酸溶液摩尔浓度(0.0098M)； V1为滴定样品消化液用去的盐酸溶液平均mL数； V2为滴定空白消化液用去的盐酸溶液平均mL数； w为样品重量(1g),消化液量500ml,滴定消耗用液 量5ml。 14为氮的相对原子质量。 样品蛋白质含量(％)=总氮量×6.25
思考题
定容：冷却后，加蒸馏水约10 mL。(注意慢加，随加随摇)。然后将瓶中溶物倾入50 或100 mL的容量瓶中，并以蒸馏水洗烧瓶数次，将洗液并入容量瓶，用水稀释到刻 度，混匀备用。
蒸馏: 改进型凯氏定氮仪结构
特点：将蒸汽发生器、蒸馏器和冷凝器组成一个整体，体积小，安装容 易，操作简便。
(1)水蒸汽发生器和反应室 (2)冷凝器和通气室 (3)排水柱
1、何谓消化？如何判断消化终点？ 2、在实验中加入粉末硫酸钾―硫酸铜混合物的作用是什么？ 3、固体样品为什么要烘干？ 4、蒸馏时冷凝管下端为什么要浸没在液体中？ 5、如何证明蒸馏器洗涤干净？ 6、本实验应如何避免误差？
2、消化
取凯氏烧瓶 标号。各加几颗玻璃珠; 在1及2号瓶中各加样品0.1g，催化剂(K2S04+CuS04.5H2O)200 mg，浓硫酸5 mL。 在3及4号瓶中各加相同量的催化剂和浓硫酸，作为对照，用以测定试剂中可能含有的 微量含氮物质。每个瓶口放―漏斗，在通风橱内的电炉上消化。 注意加样品时应直接送人瓶底，而不要沾在瓶口和瓶颈上。 消化开始时应控制火力，不要使液体冲到瓶颈。待瓶内水汽蒸完，硫酸开始分解并 放出SO2白烟后，适当加强火力，继续消化，直至消化液呈透明淡绿色为止。
实验二 总氮量的测定―凯氏定氮法
一 目的： 学习凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理 掌握蒸馏、滴定操作技术
二、原理
生物材料的含氮量测定在生物化学研究中具有一定的意义，蛋白质的含氮量 约为16％，测出含氮量则可推知蛋白含量。
消化：有机物与浓硫酸供热，使有机氮全部转化为无机氮——硫酸铵。为加 快反应，添加硫酸铜和硫酸钾的混合物；前者为催化剂，后者可提高硫酸沸 点。 甘氨酸的消化过程可表示如下： CH2NH2COOH+3H2SO4 2CO2+3SO2十4H2O十NH3 2NH3+H2SO4 (NH4)2SO4 蒸馏：浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸 馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中的氢离子浓度 降低， (NH4)2SO4+2NaOH 2NH3+2H2O+Na2SO4 2NH3+4H3BO3 (NH4)2B4O7+5H2O 滴定：用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止，最后根 据所用标准酸的摩尔数(相当于待测物中氨的摩尔数)计算出待测物中的总氮量。 (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O (NH4)2SO4+4H3BO3 本法适用于0.2 ~ 2.0 mg的氮量测定。