脓液及创伤感染分泌物的细菌学检验

• 脓液及创伤感染分泌物标本的检验程序中 主要包括哪些检验方法？
• 脓液及创伤感染分泌物标本检验的结果报 告怎样发出？
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第一节 标本采集、运送和验收 一、采集指征 二、采集方法 三、标本的保存和运送
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第二节 标本的实验室检验 一、标本的形态学检验 二、标本的分离培养 三、阳性结果报告
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第三节 报告与解释 一、阴性结果报告 二、阳性结果报告
一、阴性结果报告
（2）开放性病灶标本提示 由于病灶创面使用了 消毒剂，或采样前已经对患者使用过抗菌药物。 标本直接涂片染色镜检时可能发现细菌，但分离 培养时不一定有细菌生长。有必要时重新采样送 检。 （3）封闭性病灶标本提示 标本分离培养无细菌 生长，可能是病灶内细菌在抗菌药物和机体免疫 功能的作用下或已死亡。也可能误把肿瘤或其他 非感染病因形成的液囊认作脓肿。
其他
白假丝酵母菌、放线菌（衣氏放线
菌、诺卡菌）
通过本章学习，你将能回答以下问题：
• 机体形成化脓性感染和创伤感染的原因？ • 常见的脓液及创伤感染分泌物标本有哪几
种？分别用什么方法采集？
• 脓液及创伤感染分泌物标本的验收标准有 哪些？
通过本章学习，你将能回答以下问题：
• 脓液及创伤感染分泌物标本中常见的病原 菌有哪些？
标本的形态学检验
3.疑似放线菌感染标本的检查 此类标本多来自瘘 管或窦道，用肉眼或放大镜可发现直径1mm以下 的灰白色或硫磺样颗粒。用接种环挑取标本中的颗 粒置洁净载玻片上，可加50g/L 的氢氧化钾溶液加 以消化，加盖盖玻片，用低倍镜及高倍镜观察颗粒 中的菌丝。随之分别涂片，进行革兰染色和抗酸染 色，用油镜观察其形态结构及染色特征。
标本的验收
6.标本不合格的处理 实验室应该拒收不合格标本， 并及时通知临床医师重新取材送检。侵入性操作等 难以重复的方法采取的不合格标本，经与临床医师 协商后可按常规处理，但报告单上须注明，不合格 标本可能影响检验结果。
第二节 标本的实验室检验
脓汁在接种培养前均须涂片染色镜检，镜检的 结果可提供初步诊治的依据和做为分离培养的质控 指标。理想的结果是，通过涂片染色观察对比，标 本培养前直接涂片染色观察到的细菌种类及特性， 与分离培养后生长出的细菌种类及特性相吻合。
采集方法
1.开放脓肿 用无菌生理盐水擦洗病灶表面后，用 蘸有无菌生理盐水的灭菌拭子采取脓液和病灶深部 的分泌物，置无菌试管内送检。采集两个棉拭子较 好，分别用于细菌培养和涂片染色。也可将沾有脓 汁的最内层敷料放入无菌平皿内送检。化脓组织与 正常组织交界处的脓汁含活菌较多，采取此处标本 可提高阳性率。开放病灶仅做需氧培养,不做厌氧 培养。
采集方法
⑤褥疮溃疡部位采样，尽量切取化脓组织与正常组 织交界处的组织块，在难以获得活检标本时，可用 拭子在伤口底部采取标本，或以注射器抽取脓液或 冲洗液。⑥ 患者局部已用过抗生素或其它抗菌药 物的，应在培养基中加入抗菌药物抑制剂（如青霉 素酶、对氨基苯甲等)降解或抵消抗菌药物的作用。 ⑦瘘管 以无菌方法采取脓壁组织碎片，置于无菌 试管内送检。疑似放线菌感染的标本，常用无菌棉 拭挤子压瘘管，流出脓汁中如有“硫磺样颗粒”，则 优先选取。也可将灭菌纱布塞入瘘管内，次日取出 送检。
革兰阳性菌
革兰阴性菌
球菌
金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球
脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、
菌、化脓链球菌、肺炎链球菌、肠球
卡他布兰汉菌
菌、消化链球菌、四联球菌
杆菌
结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌、破
肺炎克雷伯杆菌、变形杆菌、
伤风梭状芽孢杆菌、产气荚膜梭状芽
大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、
孢杆菌、炭疽芽孢杆菌
流感嗜血杆菌、拟杆菌、梭杆菌
采集指征
2.疾病指征 根据病灶位置不同，有浅表软组织的 急性化脓性炎症，如疖、痈和蜂窝组织炎等，有深 层软组织的化脓性疾病，如化脓性骨髓炎、化脓性 扁桃体炎等。根据病灶形态不同，有形成完整脓壁 的脓肿，如肝脓肿、直肠肛管周围脓肿等，包括手 术或其它创伤后引起的开放性的病灶，如切口感染、 烧伤感染等。
采集方法
2.封闭性脓肿 采集前用2.5～3%的碘酊和75%的 酒精对周围皮肤进行消毒，以无菌注射器穿刺抽取 脓液或无菌棉拭子蘸取手术引流液。疑似厌氧菌感 染的标本用无菌注射器抽取脓液，随即将针头刺入 无菌橡皮塞中（隔绝空气）送检，或直接采集于厌 氧培养基中运送。胸腔、腹腔、心包腔和滑液腔等 腔隙部位的标本，应严格按专业规范程序采取。
2.病原菌的鉴定
（4）分子生物学鉴定 分子生物学技术方法可用 于检测纯培养菌株，还可以直接检测未经分离培 养的标本中的细菌。有多种技术类型可供选择， 目前临床标本检测常用的主要是聚合酶链式反应 （PCR）方法。
2.病原菌的鉴定
（5）药物敏感试验 获得纯培养菌株或疑似致病 菌的优势生长菌株后，应该尽快通过药物敏感试 验选择有效药物，在大面积烧伤感染或脓毒血症 等危重疾病时显得尤为迫切。
脓液及创伤感染分泌物的 细菌学检验
赤峰学院附属医院检验科微生物 王媛
化脓性炎症多由化脓菌感染引起，病原体是 栖息在病灶周围的正常菌群时，称为内源性感染。 病原体是来自体外的微生物时，称为外源性感染。 依据发生部位不同，把化脓性炎症分为表面化脓 和积脓、蜂窝组织炎和脓肿等类型。脓液及创伤 分泌物的细菌学检验可鉴定病原体的种类、提供 药物敏感结果，对临床治疗具有重要的指导意义。
标本的形态学检验
1.湿片检查 脓液标本或以无菌生理盐水稀释的标 本，加盖盖玻片。或取一滴脓液于载玻片上，然后 滴加一滴卢戈碘或0.1%亚甲蓝染液混合，加盖盖 玻片。用高倍镜观察细胞和细菌的分布、细菌的数 量和运动特性等情况。 2.固定染色检查 将标本制成涂片，进行革兰染色 或抗酸染色，必要时再加其他染色方法，用油镜观 察细菌形态结构及染色特征。
2.病原菌的鉴定
（6）微生物自动化检测 细菌自动化鉴定与药敏 系统，不仅可以鉴定临床培养分离得到的大多数 菌株，而且可以同时获得精确定量的药物敏感实 验结果，较人工操作鉴定和药物敏感试验有明显 优势。
第三节 报告与解释
一、阴性结果报告
1. 报告条件 无论什么来源的标本，涂片染色检 查未发现细菌，需氧培养和厌氧培养无菌落生长， 可报告标本经涂片染色检查及分离培养未检出细 菌。结核菌、放线菌及真菌等病原体，生长慢， 形成可见菌落时间较长，疑似此类病原体感染时， 经临床医生同意可延后发报告。
标本的分离培养
3.其他细菌的分离培养 不同来源的脓液及创伤感 染分泌物标本中可能含有多种病原体，需根据临床 表现和初步检查的结果，参考疑似病原体的具体检 验方法进行分离培养和鉴定试验。
标本的分离培养
（1）分枝杆菌 将脓汁直接做结核分枝杆菌培养， 组织与脏器先进行切碎、乳化后再培养。如有杂 菌应先预处理后再培养。详见分枝杆菌检验章节。 （2）真菌 需将标本接
细 菌 检 验 操 作 流 程
2.病原菌的鉴定
（1）形态染色特征鉴定 根据患者的临床表现、 细菌的形态染色特点，可以初步判断出细菌的类 属，有些细菌的特殊形态特点具有鉴定意义。如 泌尿生殖道来源的标本中，发现双肾或咖啡豆样， 凹面相对，无动力，无芽胞，或有荚膜的革兰染 色阴性双球菌时，可以判定是淋病奈瑟菌。
采集方法
3.特殊类型化脓性炎症 ①导管治疗引起的感染， 无菌操作将导管尖端用无菌生理盐水或培养基冲洗， 洗液立即送检培养，应同时采血培养。②蜂窝组织 炎、坏疽，用无菌生理盐水或75%乙醇擦拭清洁感 染部位，然后用注射器将少量无菌生理盐水注入病 灶，自病灶中心抽取标本。③烧伤感染部位细菌定 量培养，清洁感染部位后清创，切取3～4mm3的 活组织块送检。④手术切口部位感染，以注射器抽 取脓液或将拭子插入伤口深处采集标本。
标本的பைடு நூலகம்离培养
2．厌氧菌的分离培养 厌氧培养需遵循有关章节 的技术要求。 （1）无芽孢厌氧菌的分离培养 将标本分别接种 合适的液体培养基（如硫乙醇酸盐增菌肉汤、牛心 脑浸出液或布氏肉汤）和平板培养基（如厌氧血平 板、KVA血平板或LKV血平板），在厌氧环境中 35℃，培养18～24小时。根据生长情况和涂片染 色镜检结果，按检验程序选择合适鉴定试验和药物 敏感性试验。
标本的分离培养
（2）芽孢厌氧菌的分离培养 疑为炭疽芽胞杆菌、 破伤风芽胞梭菌及产气荚膜芽胞梭菌感染时，可取 患部脓液接种于血平板和液体培养基中。对于污染 严重的标本，液体培养基先置80℃水浴中加热20 分钟杀灭非芽胞细菌，然后再移种血平板，在厌氧 环境中35℃，培养18～24小时。根据生长情况和 涂片染色镜检结果，按检验程序选择合适鉴定试验 和药物敏感性试验。
种于2套沙保弱培养基， 分别置35℃和22℃～28℃， 培养4～10天。 详见真菌检验章节。
标本的分离培养
（3）放线菌 以无菌蒸馏水洗涤溶解血细胞，挑 选典型或可疑的硫磺样颗粒，将其压碎，接种于 两份葡萄糖肉汤琼脂平板上，分别于需氧和厌氧 条件下，置35℃，培养培养4～6天。同时接种 沙保弱葡萄糖琼腊斜面（或平板)上，置22 ℃～ 28 ℃，培养4～6天。如无硫磺样颗粒，也可取 标本直接接种于上述各种培养基，按上述方法培 养。详见放线菌检验章节。
多种机体内外因素决定化脓性感染的病程，除 外其他因素的影响，一般认为，每克组织内化脓菌 数量达到105～106即可导致化脓性感染。化脓性感 染的细菌学检查，应该在患者使用抗菌药物之前采 集标本。已经使用抗菌药物的患者，停药1～2天后 采集的标本，才可能避免残余抗菌药物对实验结果 的影响。
脓液及创伤感染分泌物中常见病原体
标本的验收
1.容器 以专用容器或灭菌容器盛装标本，不得有 渗漏、破裂或污染。 2.标签 容器标签与申请单须相符合，送检目的填 写应注明病灶解剖部位及伤口状态（开放脓肿或封 闭脓肿）。 3.标本量 标本需适量，足够涂片和培养接种。 4.标本采集时间 采集时间过长,超过允许最长保存 时间者应拒收。 5.显微镜检查 标本涂片革兰染色发现较多上皮细 胞，提示标本已被污染，一般不适合再做培养。
标本的保存和运送
标本采集后，室温条件下应在2小时之内送至微生 物实验室。若不能及时送检，可保存在4℃冰箱中， 但保存时间不得超过24小时。采集疑似对低温敏 感的细菌（如淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌）感染病 例的标本，立即接种于预温的培养基中，或将标本 35℃保温运送至实验室。按厌氧培养要求采集的 标本，如不能及时接种培养，需在厌氧条件下室温 保存，但保存时间不得超过24小时。
2.病原菌的鉴定
（3）免疫学鉴定 传统方法主要是利用已知的诊 断血清，通过凝集试验进行鉴定。针对不同种类 的病原菌，商品化的诊断血清种类很多，例如淋 球菌属Lancefield群特异性抗原血清，沙门菌属 A-F多价分群血清和O抗原单价因子血清等。近 年来，免疫标记技术、载体放大技术和芯片技术 等新型技术类型的试剂得到推广应用。
第一节 标本采集、运送和验收
采集指征
1.症状指征 局部出现红、肿、热、痛和功能 障碍等不同程度的化脓性感染的特征。或 有轻重不一的发热、头痛、全身不适、乏 力和食欲减退等全身症状。感染较重者， 可有白细胞计数增加和核左移，及CRP或 PCT明显增高。感染严重的病人可发生感 染性休克。病程较长时，可有水和电解质 紊乱，血浆蛋白减少。可出现营养不良、 贫血、水肿等症状体征。
2.病原菌的鉴定
（2）生理生化鉴定 在形态学鉴定的基础上，选 择合适的分离培养方案获得纯培养菌株或疑似病 原菌优势生长菌株。根据细菌的生化实验结果， 可判断多数细菌的种类和型别。例如，血平板上 见中等大小，有脂溶性金黄色色素或无特殊色素， 有透明溶血环，革兰阳性球菌呈葡萄状排列，甘 露醇发酵试验阳性，血浆凝固酶试验阳性，则可 判定为金黄色葡萄球菌。
标本的分离培养
1．需氧菌的分离培养 将标本用分段划线法接种 于血琼脂平板和麦康凯（或中国蓝平板）平板，同 时接种肉汤中增菌，置35℃需氧培养18～24小时。 特殊来源（如眼、耳、扁桃体等）的标本，需接种 于血琼脂和巧克力琼脂平板，置5%CO2环境， 35℃培养18～24小时，利于苛养菌的分离。根据 菌落特征和涂片染色镜检结果，按检验程序选择合 适的鉴定试验和药物敏感性试验。