活体染色实验
实验 细胞内液泡系和线粒体的活体染色
1. 原理：中性红是一种弱碱性 pH 指示剂，变色 范围 pH6.4～8.0之间（由红变黄）。其胶粒表面 带阳离子，被染部分具阴离子，它们彼此之间就 发生了电吸附作用（静电吸附）。
在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收 中性红并向液泡中排泌。由于液泡为酸性，因此进入液 泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色。原生 质和细胞壁一般不着色。
软骨细胞内含有较多的粗面内质网和发达的高 尔基复合体，能合成与分泌软骨粘蛋白及胶原纤维 等，因而液泡系发达。
中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡 系染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核 不被染色，中性红染色可能与液泡中的蛋白有关。
2. 健那绿(Janus green B)染液，原来也曾译为 詹纳斯绿B，是专一性染线粒体的活细胞染料，线 粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有 色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还 原，成为无色状态。因此可以使活细胞中的线粒体 呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。线粒体能在健那 绿染液中维持活性数小时，通过染色，可以在高倍 显微镜下观察到生活状态的线粒体的形态和分布。
死细胞由于原生质变性凝固，细胞液不能维持在液 泡内，用中性红染色不产生液泡着色现象；相反，中性 红的阳离子却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合， 而使原生质与细胞核带微红色 。
在动物细胞内，凡是由膜所包围的小泡和液泡 除线粒体外都属于液泡系，包括高尔基器、溶酶体、 微体、消化泡、自噬小体、残体、胞饮液泡和吞噬 泡，都是由一层单位膜包围而成。这些细胞器几乎 每个细胞都有。
细胞内液泡系和线粒体 的活体染色
一、实验目的
1. 了解活体染色的定义及原理； 2. 熟悉液泡系和线粒体活体染色的方法
和步骤。
二、定义及原理
实验三 线粒体活体染色
油镜下小鼠骨髓细胞染色体
油镜下观察
染色体标本观察
线粒体活体染色
线粒体活体染色
线粒体电镜观察
A
C
M
C
N
M
线粒体电镜观察
C C C
N M
MV L
线粒体电镜观察
B M
M
N L
MV
MV
N
L
N
1、人口腔粘膜上皮细胞活体染色显示线粒体 （1）用消毒牙签刮取口腔粘膜细胞，用力应稍重些， 以便得到生活力教旺盛的细胞，将刮取物涂在载玻片 中央。 （2）滴1滴詹纳斯绿B染液于细胞涂片处，2~3分钟后 盖上盖玻片。 （3）用显微镜观察，在高倍镜下可见细胞质中散在一 些被染成亮绿色的短棒状和圆形颗粒，即为线粒体。
实验三 线粒体活体染色
线粒体活体染色
实验目的： 掌握线粒体活体染色的方法与原理
实验原理：
线粒体是细胞内一种重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。 活 体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而 又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿 B是线粒体的专一 性活体染色剂。呈碱性，具有脂溶性，能够穿过细胞膜进入细胞内，并 通过其结构中带有正电荷的染色基团结合到带负电荷的线粒体内膜上。 线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细 胞质中染料被还原，成为无色状态。
线粒体活体染色
活体染色：是使生活有机体的细胞或组织特异性着色， 但对该样本又没有毒害作用的一种染色方法。 目的：既显示活体细胞内的某些结构，又不影响细胞 的生命活动和产生任何物理和化学变化以致细胞的死亡。 应用：活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形 态结构和细胞生理、病理状态
线粒体活体染色
实验二、活体染色
活染注意问题
1、染料使用浓度： 中性红体外一般1/1000－1/3000，动物注 射可达1％－2％ 健纳绿：1/3000－1/5000 2、配染液用溶剂 尽量接近观察材料生活环境的液体
（二）植物叶肉细胞线粒体染色及观查
1、取清洁载玻片（最好放在37℃恒温箱）， 滴2滴0.02％詹纳绿生理盐水液； 2、撕取小片植物叶下表皮，放入染液中压实； 3、染色10－15min； 4、加盖玻片，吸水纸吸去周围多余染液 5、观察叶肉细胞中线粒体的形态、大小及分 布
肝组织詹纳绿染色及肝细胞线粒体观察
实验仪器用品
普通光学显微镜 小剪刀 圆头牙签 载玻片与盖玻片 胶头吸管
实验操作
（一）口腔粘膜上皮细胞詹纳绿染色 1、取清洁载玻片（最好放在37℃恒温箱），滴2滴 0.02％詹纳绿生理盐水液； 2、用牙签钝头在自己口腔脸颊粘膜处用力刮取上皮 细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液中搅匀； 3、染色10－15min； 4、加盖玻片，吸水纸吸去周围多余染液 5、观察口腔粘膜上皮细胞及其中染成蓝绿色的线粒 体，画图示线粒体形态及分布
1、剪取肝边缘较薄处组织1小块，放在凹玻片凹槽中， 用生理盐水反复浸泡冲洗以除去血液； 2、将凹玻片放在37℃恒温葙（为什么？），滴2滴 1/5000健那绿生理盐水液，注意不可将组织完全 淹没，使组织边缘染成蓝绿色即可，一般需2剖剪剪取 组织块边缘着色部位，放入生理盐水中，剪碎后压 片观察，画图示肝细胞及其中线粒体形态、分布。
活体染色常用染料
詹纳绿－线粒体（体外活染） 亮焦油紫－线粒体（体内活染） 中性红－液泡系（体内体外兼可） 次甲蓝－神经组织 尼罗蓝（Nile Blue）－原生动物大核
实验目的
了解常用活体染色剂及使用方法 通过活体染色了解细胞的结构和功能
实验一 植物细胞的活体染色与死活鉴定
实验一植物细胞的活体染色与死活鉴定一、实验原理：1、活体染色是利用某种对植物无害的染料溶液对活细胞进行染色的技术。
2、中性红是常用的活体染料之一，它是一种弱碱性pH指示剂，变色范围在pH6.4~8.0之间（由红变黄）。
在酸性条件下中性红解离度很强，带色的阳离子呈樱桃红色，在pH7以上，它不解离而以分子态溶于水呈橙黄色的溶液。
3、染色（1）即使是显微镜有足够的分辨率和合适的放大倍数，未经染色的组织切片或涂片常常不能直接在光镜下观察，其原因主要是标本各部分结构对光的折射率没有显著的差别。
染色则是通过改变标本各部分之间对光的折射率，使其可以在光镜下观察。
（2）在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌，由于液泡在一般情况下呈酸性反应。
因此，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色，在这种情况下，原生质和细胞壁一般不着色；死细胞由于原生质变性凝固，胞液不能维持在液泡内。
因此，用中性红染色后，不产生液泡着色现象。
相反，中性红的阳离子，却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，而使原生质与细胞核染色。
二、仪器与用具：显微镜；载玻片；盖玻片；单面刀片；尖头镊子；酒精灯；火柴；吸水纸适量。
三、试剂：0.03%中性红溶液；1mol/L硝酸钾溶液四、实验步骤：1、切下一片较幼嫩的洋葱鳞片，用单面刀片在鳞片内侧割划成0.5cm2左右的小块，用尖头镊子将内表皮小块轻轻撕下，将制好的洋葱鳞茎内表皮放置于滴加蒸馏水的载玻片上，小心地将制片平展到载玻片上，加盖玻片，多余液体用吸水纸吸干，在显微镜下观察（注意调节光线强度）2、另取一小块表皮，滴加0.03%的中性红溶液，染色5~10min；在蒸馏水中稍加冲洗，在载玻片上滴一滴蒸馏水，小心地将制片平展到载玻片上，加盖玻片，多余液体用吸水纸吸干，在显微镜下观察。
3、将步骤2中的活体染色制片取出几片放入pH略高于7.0的自来水中浸泡10~15min，再置于载玻片上镜检（为了确证中性红染色部位，可将上述洋葱内表皮染片浸入1mol/L 的硝酸钾溶液中浸泡10min左右，然后取出观察。
实验一 线粒体的超活染色
实验一线粒体的活体染色与观察一、实验目的1．观察动物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。
2．学习一些细胞器的活体染色技术。
二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是将胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。
一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿B（Janus green B）是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
三、实验仪器、材料和试剂1．仪器：显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、。
动植物细胞的活体染色
观察：
淋巴细胞：细胞中线粒体着色明显 粒细胞：细胞中液泡系着色明显 单核细胞：线粒体及液泡系均着色明显 观察白细胞的阿米巴运动（以多幅图描述动态过程） 观察中性粒细胞中的布朗运动 观察成垛的红细胞（缗钱状形态）
×
实验结果（部分）
黑色箭头所指为嗜中性粒细胞
黑色箭头所指为淋巴细胞
白细胞的阿米巴运动：请以多幅图表示运动过程（必画）
中性粒细胞中的布朗运动：绘制轨迹或文字描述
整理
显微镜复原
镊子、小烧杯等物品清洗后，请放回托盘中晾 干；请将托盘整理干净；
加过镜油、涂过凡士林膏的盖玻片丢弃，载玻 片用洗涤剂洗干净后集中放置（最后一条实验台 上的玻片回收缸）。
材料：新鲜血液 试剂：健那氏绿迅速取出，沥掉多 余的染液后风干。
取一干净盖玻片，四周涂上凡士林。 取一滴血滴于盖玻片涂有凡士林的一面上。 将盖玻片置于载玻片上，轻压使盖玻片和载玻片 之间形成一层薄而均匀的血膜。（注：镜下观察）
血细胞的活体染色
细胞活体染色
实验原理
活体染色
染液
健那氏绿 中性红
植物细胞的活体染色
材料：黄豆根尖、洋葱鳞片 试剂：中性红染液 步骤：
在载玻片上滴加一滴染液，将材料浸入染液中， 染色若干分钟。
弃掉染液，以蒸馏水漂洗。 盖上盖玻片，用吸水纸将多余水渍吸干。 观察液泡并绘图。
实验结果（部分）
小液泡
血细胞的活体染色
实验结果（部分）
实验结果（部分）
实验报告要求
将所观察到的细胞（或结构）绘图并描述其形态特点
植物细胞：绘制一幅分生区细胞图（示初生液泡），伸长 区、根毛区细胞以及洋葱表皮细胞内液泡的特点及染色情 况请以文字描述，并分析造成不同细胞内液泡着色差异的 原因。（必画）
实验三 线粒体活体染色
线粒体活体染色
活体染色：是使生活有机体的细胞或组织特异性着色， 但对该样本又没有毒害作用的一种染色方法。 目的：既显示活体细胞内的某些结构，又不影响细胞 的生命活动和产生任何物理和化学变化以致细胞的死亡。 应用：活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形 态结构和细胞生理、病理状态
线粒体活体染色
3. 加至5ml低渗液，吹打后将离心管置37℃水浴中低渗 20min。
染色体标本制备
4. 1000r／min离心8min。，弃上清液。 5. 固定：加入新配制的甲醇：冰醋酸(3：1)固定液5ml，
立即用吸管将细胞轻轻吸打均匀，静置固定20min。 （如此反复固定2～3次，每次20min。） 6. 滴片：固定的细胞经离心后，吸去上层固定液，加入
油镜下小鼠骨髓细胞染色体
油镜下观察
染色体标本观察
线粒体活体染色
线粒体活体染色
线粒体电镜观察
A
C
M
C
N
M
线粒体电镜观察
C C C
N M
MV L
线粒体电镜观察
B M
M
N L
MV
MV
N
L
N
染色体标本制备
实验仪器、用具
天平 离心机 温箱 显微镜 酒精灯
注射器 解剖盘 解剖剪 刀片 离心管 吸管 烧杯 冰冻载玻片
骨髓细胞染色体标本制备
1. 秋水仙素处理动物：按4μg/g体重的剂量经腹腔注 射秋水仙素，3～4h后杀死动物。
2. 取骨髓取出动物后肢的股骨，剪去两端骨骺。 用注射器吸取2ml 0.075M KCl溶液注入骨髓腔，将 骨髓细胞冲入离心管中，用吸管反复吸打骨髓细胞， 使细胞团块分散。
线粒体的活体染色
不同细胞中线粒体的形态和数目不同; 在电子显微镜下 ;线粒体的外形多样;如圆形 椭圆形 哑铃形和杆状; 线粒体 的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关;线粒体多聚集 在细胞生理功能旺盛的区域;
线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的; 一般与线粒 体长轴垂直排列;但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊; 脊的横切面呈囊状或管状; 脊的数量与细胞呼吸机能的强 度有很大关系;
2 在干净的平皿中;滴加1/5000詹纳斯绿B溶液;再将肝组织 块移入染液;注意不可将组织块完全淹没;要使组织块上面 部分半露在染液外;这样细胞内的线粒体酶系可充分得到 氧化;易被染色; 当组织块边缘被染成蓝绿色即成一般需染 20～30min;
3 吸去染液;滴加Ringer 溶液;用眼科剪将组织块着色部分 剪碎;使细胞或细胞群散出; 然后;用吸管吸取分离出的细 胞悬液;滴一滴在载玻片上;盖上盖玻片进行观察;
二 线粒体的活体染色与观察
1 人口腔上皮细胞线粒体的超活染色观察 1取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上;滴两滴
1/5000詹纳斯绿B染液;
2实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮 细胞;将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中;染色 10—15分钟注意不可使染液干燥;必要时可再加滴染液; 盖上盖玻片;用吸水纸吸去四周溢出的染液;置显微镜下 观察;
实验二 线粒体的活体染色
一 实验目的：
1 观察动物活细胞内线粒体的形态 数量与分 布;
2 掌握线粒体的活体染色原理及方法; 3 小鼠肝脏细胞线粒体染色及观察;
二 实验原理：
线粒体是细胞内一种重要细胞器;是细胞进行呼吸作用 的场所; 细胞的各项活动所需要的能量;主要是通过线粒体 呼吸作用来提供的; 活体染色是应用无毒或毒性较小的染 色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命 活动的一种染色方法; 詹纳斯绿 BJanus green B是线粒体 的专一性活体染色剂; 线粒体中细胞色素氧化酶系使染料 保持氧化状态呈蓝绿色;而在周围的细胞质中染料被还原; 成为无色状态;
线粒体及液泡系的活体染色
线粒体及液泡系的活体染色一、实验目的掌握动、植物细胞活体染色的原理和技术。
掌握各种染料的染色原理。
使我们对细胞中的线粒体及液泡系有一定的了解。
二、实验原理a)活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害或毒性很小的一种染色方法。
它的目的是在保持细胞活性的前提下，显示细胞内的某些特定结构。
b)线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随物种、组织器官和生理状态的不同而发生变化。
健纳绿可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
c)中性红为弱碱性染料，对液泡系的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。
d)亮焦油紫可用于活体染色，中性红用于染液泡系，健纳绿用于线粒体染色，次甲基蓝可用于染神经组织，尼罗蓝可用于染原生动物的大核。
三、实验试剂及器材a)实验试剂i.0.04%中性红生理盐水溶液：先配成1%中性红水溶液，再用0.65%氯化钠溶液将1%中性红水溶液稀释成0.04%溶液，盛于棕色瓶中，暗处保存。
ii.0.02%健纳绿生理盐水溶液：先配成1%健纳绿水溶液，再用0.9%氯化钠将1%健纳绿水溶液稀释成0.02%溶液，盛于棕色瓶中，暗处保存。
b)实验器材青菜叶、人口腔黏膜上皮细胞、载玻片、盖玻片、牙签、普通光学显微镜、刀片四、实验步骤a)口腔黏膜上皮细胞线粒体的染色观察i.取清洁载玻片，滴2滴0.02%健纳绿生理盐水溶液。
ii.用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞，将刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中，搅匀。
（注意事项：应稍用力刮取口腔颊粘膜处上皮细胞，否则无活细胞染色不能成功。
）iii.染色10－l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液)。
iv.盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察，拍照。
细胞活体染色技术
吸出染液，滴加Ringer氏液，盖片、镜检，注意观察线粒体分布及所呈形 状。
2. 用动物细胞观察线粒体的活体染色。 取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块，放入盛有Ringer氏液的表面皿中洗去血
液。
将肝组织洗净后吸去血液，加入1／5000詹纳斯绿B染液染色30分钟，注 意不可将组织块完全淹没。
2. 在载玻片中央滴加中性红染料。使材料在其中染色5一10分钟。 3. 吸去染料，滴加Ringer氏液一滴，盖片、镜检、注意液泡系染成什么颜色，其形态、大小如何、分布
位置。
线料体的活体染色
1. l、用植物细胞观察线粒体的活体染色 用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块(约lcm2)，放在载玻片上用1/5000詹
一．取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1 ／5000詹纳斯绿B溶液。
二．用牙签取口腔上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的 染液滴中，染色10一15分钟(注意不能干燥)，盖上盖片， 吸去多余的溶液，即可镜检。
三．台盼蓝染色鏊别死活细胞。
○ 抽取小鼠腹腔水细胞涂于洁净载玻片上，滴加l％台盼蓝1滴， 盖上盖玻片于显微镜下观察。
实验三、细胞活体染色 技术
一、实验目的
学习细胞活体染色的方法。 观察动、植物活细胞内线粒体，
液泡系的形态、数量与分布。
二、实验原理
一．活体染色是利用某些无毒或毒性较小的染色剂，在不影响细胞生命活动的情况下显示细胞的天 然构造，更具真实性。活性染色又分为体内活体染色和体外活体染色。 二．詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色并且呈现染成蓝色。它可以和线粒体中 的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色 状态)呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无色状态。必须指出B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的 材料的活性。通常，需要把生物材料置于０℃～４℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。
液泡活体染色的实验原理
液泡活体染色的实验原理
液泡活体染色实验是一种用于研究细胞膜和液泡的生物学实验。
该实验原理基于液泡膜的选择性渗透性，通过注射染料进入液泡内部，使液泡内部的液体染色，从而观察液泡的动态变化和功能。
液泡活体染色实验通常使用荧光染料或荧光探针，例如Acridine Orange、FM dyes、LysoTracker、GFP-tagged proteins等。
这些染料可以穿过液泡膜并在液泡内部发出荧光信号。
通过观察液泡内部的荧光信号变化，可以了解液泡的运动、融合和分裂等过程。
实验中，通常需要将生物样品放置在显微镜下，利用荧光显微镜观察荧光信号的变化。
在实验过程中，需要注意控制染料的浓度和注入液泡的量，以避免染料的毒性对生物样品的影响。
液泡活体染色实验是研究生物学中液泡和细胞膜的重要手段，可以帮助我们更好地理解细胞内部的结构和功能。
实验三—细胞的活体染色
1、在仔细观察的基础上，选择典型结构进行描绘， 要求真实、准确（注意各部分结构的比例关系）。
2、用铅笔绘图，线条要明确清晰，图的深浅明暗一 律以点的疏密来表示，点要圆而一致，不得涂暗影 或进行其它美术加工。
3、各部结构名称要在图的一侧引直幅图的大小、位置在纸面上必须安排得当，并 注意纸面的整洁。
(2)吸出染液，滴加Ringer氏液，盖片、
镜检，注意观察线粒体分布及所呈形
状。
2、用动物细胞观察线粒体的活体染色。
(1)取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块，放入盛 有Ringer氏液的表面皿中洗去血液。 (2)将肝组织洗净后吸去血液，加入1／5000詹 纳斯绿B染液染色30分钟，注意不可将组织块完全淹 没。 (3)染色后撕开组织块，这样溶液中就会有一 些细胞或细胞群。 (4)用吸管吸取溶液，放在载玻片的Ringer氏 液中。垫两根短头发，加盖玻片，即可镜检。 (5)用油镜观察活染色的线粒体标本，要不断 地来回转动细调焦螺旋，使盖玻片上下慢慢移动。使
载玻片上，滴加l％台盼蓝1滴，盖上
盖玻片于显微镜下观察。
注意事项：
1. 在对口腔上皮细胞进行染色时不可使染液
干燥，可适当补加染液。 2.在对植物进行观察时一定要让材料尽量展开。 3.詹姆斯绿B溶液现用现配，以保持它的充分 氧化能力。
4.实验中速度要快，以免组织细胞死亡。
细胞生物学实验绘图方法与要求：
活体染色
詹纳斯绿B(Janus green B)能够活 染线粒体为蓝色，主要是由于线粒 体内膜上的细胞色素酶系使染料始 终保持在氧化状态(即有色状态)，
在周围的细胞质内，这些染料被还
原为无色的色基(即无色状态)。
中性红是液泡系的特殊活体染
色剂，它可将不同发育时期的
4 活体染色
在光镜下观察。 4、观察结果，可见软骨细胞为椭圆形，细胞核部分 不被染色，细胞核轮廓清晰可见，在核的一侧 有许多被染成红色的大小液泡组成的一个特别区域 叫液泡系。
【作业】
分别绘图示细胞中线粒体和液泡系的形态和分布。
5、观察结果，可见肝细胞内线粒体被染成蓝色， 呈颗粒状或线条状，分布在核周围的特别多。 （二）中性红活染液泡系 1、解剖牛蛙，取胸突软骨，置于盛有含0.64% NaCl的Ringer溶液的平皿中。 2、将胸突软骨前端最薄的部分剪成数小块，置于 另一平皿内，加中性红染液，染色10-15min。 3、在干净载玻片上滴一滴含0.64%NaCl的Ringer 溶液，将染好的小块软骨放上，盖上盖玻片，
占那斯绿之所以能够活染线粒体，是由于线 粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终 保持在氧化状态（即有色状态），而在周围的细 胞质内，这些染料被还原为无色的色基（即无色 状态）。 中性红是碱性染料，它是无毒性的活体染料之 一，它的色根位于阳离子上，在酸性环境内起电 离作用。阳离子即为带红色的组成部分，细胞活 染时，染料透过质膜而进入细胞质内，活细胞的 液泡PH<7, 这样，中性红就会在液泡内电离，经 电吸附的积累后，液泡显红色，由于细胞核与细 胞质的PH大于等于7，所以不被中性红染色。
【实验步骤】 实验步骤】
（一） 占纳斯绿活染线粒体 1、牛蛙一只，取出其肝脏置于盛有含 0.64%NaCl 的 Ringer溶液平皿内。 2、将肝剪成小块，放在另一干净平皿内，加占纳斯 绿液，注意:不可将所有组织块全部淹没在溶液内， 最好使组织有一点裸露在染液的外面，这样细胞 内线粒体的酶系可充分氧化，线粒体易染色。 3、染色30min以上，用两根解剖针将肝组织分离， 使一些细胞和细胞群离析出来。 4、用吸管轻轻吸取一些离散的细胞，放在清洁的载 玻片上，盖上盖玻片，光镜下观察。
生化实验室活体实验报告(3篇)
第1篇实验名称：细胞培养与细胞染色观察实验目的：1. 学习细胞培养的基本操作和注意事项。
2. 掌握细胞染色技术，观察细胞形态和结构。
3. 了解细胞生长周期及其在不同培养条件下的变化。
实验时间：2023年X月X日实验地点：生化实验室实验材料：1. 细胞株：人肺上皮细胞（A549）2. 培养基：DMEM培养基3. 细胞培养瓶：25cm²培养瓶4. CO2培养箱5. 离心机6. 显微镜7. 细胞染色剂：姬姆萨染液8. 吸管、移液器、试管等实验器材实验步骤：1. 细胞复苏：- 将冻存的细胞株取出，用DMEM培养基溶解。
- 将溶解后的细胞悬液离心，弃去上清液。
- 用DMEM培养基重悬细胞，调整细胞浓度为1×10⁵个细胞/mL。
2. 细胞接种：- 将25cm²培养瓶用75%乙醇消毒，晾干。
- 将细胞悬液接种于培养瓶中，每瓶接种1mL。
- 将培养瓶放入CO2培养箱中，37℃、5%CO2培养。
3. 细胞培养：- 每隔24小时更换一次培养基。
- 观察细胞生长情况，记录细胞生长周期。
4. 细胞染色：- 取对数生长期的细胞，用胰酶消化。
- 收集细胞，离心，弃去上清液。
- 用姬姆萨染液染色30分钟。
- 水洗，晾干。
5. 显微镜观察：- 将染色后的细胞涂片放在显微镜下观察。
- 观察细胞形态、核质比、细胞核染色质等。
实验结果：1. 细胞培养成功，细胞生长旺盛，呈典型的铺路石状排列。
2. 细胞染色效果好，细胞核染色质清晰，核质比适中。
3. 观察到细胞生长周期为G1期、S期、G2期和M期。
实验讨论：1. 细胞培养过程中，应注意无菌操作，避免污染。
2. 细胞染色剂的选择和浓度对染色效果有重要影响。
3. 细胞生长周期受多种因素影响，如培养基成分、温度、CO2浓度等。
实验结论：本次实验成功培养了人肺上皮细胞，并观察了细胞形态和结构。
细胞染色效果良好，成功观察到细胞生长周期。
实验结果表明，细胞培养和染色技术在生物学研究中具有重要意义。
实验5 细胞器的活体染色
实验5 细胞器的活体染色活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同分为体内活染和体外活染两类。
体内活染是将胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特有结构里，达到易于识别的目的。
体外活染或称超活染色，是用染料溶液浸染从活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，染料被选择固定在生活细胞的某种结构上而显色。
活体染色的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活体染色技术可用来研究活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
活体染色是利用染料的“电化学”特性是细胞结构着色。
碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。
并非任何染料都可以作为活体染色剂，应选择对细胞无毒性或毒性极小的染料，并配成稀淡的溶液来使用。
一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。
詹纳斯绿B(Janus green B)和中性红(neutral red)是活体染色剂中最重要的碱性染料，分别对线粒体和液泡系具有专一性的染色。
詹纳斯绿B解离后带正电，由电力吸引堆积在线粒体膜上，线粒体中的细胞色素氧化酶系使詹纳斯绿B始终保持氧化状态，呈蓝绿色，周围的细胞质被还原成无色的色基；在活细胞体内，中性红只将液泡染成红色，细胞质和细胞核不被中性红染色。
【实验目的】掌握动植物细胞活体染色的技术和原理。
【实验器具、材料和药品】材料：人体口腔上皮黏膜细胞、洋葱。
器具：显微镜、牙签、镊子、双面刀片、载玻片、盖玻片试剂：1%中性红溶液、1%詹纳斯绿B溶液【实验方法和步骤】1 线粒体的超活染色与观察1.1 人体口腔黏膜细胞线粒体的超活染色和观察(1) 取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴l/5 000詹纳斯绿B染液。
线粒体的活体染色
2、小白鼠肝细胞线粒体的活体染色观察 、 1) 用脊椎脱臼法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔， 取小白鼠肝边缘较薄的肝组织块，放入表面皿内。用吸管 吸取Ringer 液，反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。 Ringer 2) 在干净的平皿中，滴加1/5000詹纳斯绿B溶液，再将肝 组织块移入染液，注意不可将组织块完全淹没 注意不可将组织块完全淹没，要使组织 注意不可将组织块完全淹没 块上面部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体酶系可充 分得到氧化，易被染色。当组织块边缘被染成蓝绿色即成 (一般需染20～30min)。
3) 吸去染液，滴加Ringer 溶液，用眼科剪将组织块着色部 分剪碎，使细胞或细胞群散出。然后，用吸管吸取分离出 的细胞悬液，滴一滴在载玻片上，盖上盖玻片进行观察。
4) 在低倍镜下选择不重叠的肝细胞，在高倍镜下观察，可 见具有l～2 个核的肝细胞质中，有许多被染成蓝绿色的 线粒体，注意其形态和分布状况。
五、作业： 作业：
1、绘口腔上皮细胞形态结构。Biblioteka 口腔上皮细胞 的线粒体分布
洋葱内表皮细胞的线粒体分布
不同细胞中线粒体的形态和数目不同。在电子显微镜 下，线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。 线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体 多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。 线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线 粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的 脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能 的强度有很大关系。
（二）、线粒体的活体染色与观察 ）、线粒体的活体染色与观察 1、人口腔上皮细胞线粒体的超活染色观察 1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴两 滴1/5000詹纳斯绿B染液。
2）实验者用牙签宽头在自己口腔颊粘膜处稍用力刮取上 皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中， 染色10—15分钟（注意不可使染液干燥，必要时可再 加滴染液），盖上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的 染液，置显微镜下观察。 3）在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜进 行观察。可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布 着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是 线粒体。
细胞生物学实验课件-活体染色
4、用吸管輕輕吸取一些離散的細胞，放在清潔的載 玻片上，蓋上蓋玻片，光鏡下觀察。
Hale Waihona Puke 5、觀察結果，可見肝細胞內線粒體被染成藍色， 呈顆粒狀或線條狀，分佈在核周圍的特別多。
（二）中性紅活染液泡系 1、解剖牛蛙，取胸突軟骨，置於盛有含0.64% NaCl的Ringer溶液的平皿中。 2、將胸突軟骨前端最薄的部分剪成數小塊，置於 另一平皿內，加中性紅染液，染色10-15min。 3、在乾淨載玻片上滴一滴含0.64%NaCl的Ringer 溶液，將染好的小塊軟骨放上，蓋上蓋玻片，
【實驗步驟】
（一） 占納斯綠活染線粒體
1、牛蛙一只，取出其肝臟置於盛有含0.64%NaCl 的 Ringer溶液平皿內。
2、將肝剪成小塊，放在另一乾淨平皿內，加占納斯 綠液，注意:不可將所有組織塊全部淹沒在溶液內， 最好使組織有一點裸露在染液的外面，這樣細胞 內線粒體的酶系可充分氧化，線粒體易染色。
實驗五 活體染色
【實驗目的】
1. 掌握活體染色基本原理和方法。 2. 觀察動物細胞內兩種重要細胞器。
【實驗材料】
牛蛙的軟骨和肝細胞。
【實驗儀器及染色液】
顯微鏡，載玻片，蓋玻片，解剖針，手術剪， 中性紅溶液，占納斯綠（B）溶液等。
【實驗原理】
占那斯綠之所以能夠活染線粒體，是由於線 粒體內的細胞色素氧化酶系的作用，使染料始終 保持在氧化狀態（即有色狀態），而在周圍的細 胞質內，這些染料被還原為無色的色基（即無色 狀態）。
在光鏡下觀察。 4、觀察結果，可見軟骨細胞為橢圓形，細胞核部分
不被染色，細胞核輪廓清晰可見，在核的一側 有許多被染成紅色的大小液泡組成的一個特別區域 叫液泡系。
实验2细胞的活体染色
器 具
显微镜，恒温水浴锅，载玻片，盖玻片，牙签， 吸水纸等。
实验步骤
（1）取2滴1/5000詹纳斯绿B溶液于清洁的载玻片上。 （2）用牙签宽头端在自己的口腔颊黏膜处稍用力刮 取上皮细胞，将刮下的黏液状物放到染液滴中，载 玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上染色15min(注 意不可使染液干燥，必要时可再滴加1滴染液)，盖 上盖玻片，用吸水纸吸去四周溢出的染液。 (3) 置显微镜下观察线粒体。
作 业
1、绘制口腔上皮细胞线粒体形态与分布。
细胞生物学实验
实验2 细胞活体染色
目的要求
观察活细胞内线粒体的形态、数量与分布。 掌握细胞活体染色技术及观察方法。
实验原理
活体染色是指对细胞或组织在活体状态下进行的一 种无毒害的染色方法，可以显示出活细胞内的某种 天然结构存在的真实性，不影响细胞的生命活动和 产生任何物理、化学变化。 一般的生物材料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固 定后，细胞膜被破坏，染料才能进入细胞内部。但 是，有一些染料（称“活体染料”）却能进入活细 胞，它们是一些无毒或毒性很小的染色剂，能使细 胞中某些特定结构着色。活体染料基本上不影响或 很少影响细胞的生命活动。
实验原理
活体染色的机制是染料的堆集。利用染料的“电化学” 特性起作用。由于染料(碱性染料)的胶粒表面带有阳 离子，酸性染料的胶粒表面带阴离子，而被染部分本 身具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间发生吸 引作用，染料就被堆集下来。 活体染料多为碱性染料,如中性红、詹纳斯绿B、次甲 基蓝、甲苯胶蓝、亮焦油紫等。活体染料一般具有专 一性，例如，中性红染液泡，詹纳斯绿染线粒体。如 中性红为弱碱性染料，对液泡 (高尔基体)的染色有专 一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细 胞质完全不着色，这可能与液泡中某些蛋白质有关。 詹纳斯绿Ｂ可专一性地对对线粒体进行活染,这是由 于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终 保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色。
实验六 线粒体的活体染色和观察
谢谢观赏
• 3、染色后，用两根解剖针，同时用左右两手，用 一手的针压住组织块，然后用另一手的针稍稍用 力拉肝组织块边缘，就会有一些细胞或细胞群和 组织块分离。
• 4、用吸管将分离的细胞吸起，放在载玻片中央的 Ringer氏液中。垫两根头发，盖上盖玻片，液体 不要太多。
• 5、油镜观察：观察时，不断地上下微调节螺旋， 使盖玻片上下稍稍移动，这样所观察到的材料总 得到充足的氧气，线粒体的染色才显示得非常清 楚。
实验六 线粒体的活体染色和 观察
实验七、线粒体的活体染色和观察
一、实验目的： 了解线粒体在细胞中的分布及形态、掌握研究方法。
二、实验原理： 健纳绿B（Janus Green B）对线粒体具有专一性染
色、毒性最小的碱性染料，由于线粒体中细胞色素酶 系的作用，使它始终保持氧化状态，并呈现蓝绿色， 在线粒体周围的细胞质中的染料被还原为无色的色基。
• 三、实验材料：常规解剖器、大白鼠肝细胞
• 四、步骤及方法
• 1、鼠肝边沿较薄组织小块，放入盛有Ringer氏液 的培养皿内，洗去血液。
• 2、将1/5000Janus Green B 染液倒入另一培养皿 中，将肝组织移入其内，但不可将组织块完全淹 没，要让组织上面部分半裸露在染液外面，这样， 细胞内的线粒体的酶系可充分得到氧化，线粒体 才易染色，一般染30-40分钟（组织块边缘染成蓝 绿色即可）。
• 6、结果：油镜下，可见肝细胞质中线粒体被染成蓝绿色， 呈颗粒状或线条状，在细胞核周围分布：
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实验目的
1、练习并掌握动物组织活体染色方法。 2、学习大鼠肠系膜铺片制作方法。 3、学习大鼠皮下结缔组织铺片制作方法。 4、了解大鼠肝脏石蜡切片制片方法，观察Kupffer 细胞。
实验原理
要显示巨噬细胞多采用活体染色法，即将一种对 动物无毒害或毒性很小的染料，用注射器注入动物体 的腹膜腔或血管内，体内有吞噬能力的细胞会将注入 的活体染料吞噬入细胞内。然后将动物杀死取材，经 固定、浸洗、复染、脱水、透明、封固等手续制成玻 片标本。
再用蒸馏水浸洗片刻，即可进行染色。也可直接进 入70%酒精中保存。 5、染色
固定好的铺片进行常规HE染色（详细过程见石 蜡切片制作介绍）。
注意：盐酸酒精分色要适度，过量会导致巨噬 细胞脱色。
活体染色法显示巨噬细胞
定义：活体染色(vital staining)一 般是指用无毒或毒性很小的染料,在不影响 细胞的正常生命活动的前提下而使活细胞 的某些结构着色的一种实验方法。
最早进行活体染色的是Paul Ehrlich (1885)他把刚切下的新鲜组织浸泡在亚甲 基蓝(美蓝)溶液中,再用显微镜来观察尚处 在生活状态下的活细胞结构。
活体染色一般选用的燃料有台盼蓝、中性红、锂 洋红、墨汁等。
实验材料与器材
实验动物：成年大白鼠
实验试剂与器材：1%台盼蓝染液，乙醚，福尔马林，
酒精（梯度），harris苏木精染液、曙红染液，二甲 苯，中性树胶；手术器械一套， 5ml注射器，载玻 片，盖玻片，卧式染缸，单面刀片。
实验步骤
1、活体注射 大白鼠麻醉、称重，按8ml每千克体重动物，注
射1%的台盼蓝溶液。每天注射一次，注射、取材 动物断头处死，取皮下结缔组织、肠系膜、肝脏或
大网膜为材料。取小块结缔组织或肠系膜，置于载玻片 上，用解剖针尽量将其铺平，干燥后浸入10%福尔马林 中固定。 3、固定
用10%福尔马林固定12—24h。
4、浸洗 用70%酒精浸洗数小时，中间更换数次新液，