细胞冻存步骤

一、复苏

1.把冻存管从液氮中取出来，立即投入42℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后(大概1-2分钟) 。

2.把上述细胞悬液吸到恶评EP管或离心管中，1200转离心5分钟。

3.把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞完全悬浮。吸到装有培养基的10cm培养皿或培养瓶中前后左右轻轻摇动，使细胞均匀分布。

4.标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

5.2或3天换一次培养基。

二、传代

1.培养皿中的细胞生长率达到80%-90%时要传代。

2.把原来的培养基吸掉，加PBS冲洗1到2次，弃掉PBS。

3.加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行)，消化1-3分钟。

4.待细胞都变圆后加如入含血清的培养基终止消化。

5.用移液枪吹打细胞，把细胞完全都悬浮起来。

6.把细胞吸到EP管或离心管中，1200转离心5分钟。

7.倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞完全都吹起来。

8.根据细胞种类把细胞传到几个培养皿或培养瓶中。

三、冻存

细胞处理同二步骤中的前6步。第七步用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到冻存管中，写明细胞种类，冻存日期。4℃10min，-20℃30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。或直接放冻存盒中，再放到-80冰箱。

冻存液的配制：FBS：完全培养基：DMSO=5：4：1