基因工程参考答案20页word文档

名词解释

基因工程：用人工方法, 在体外对DNA分子进行切割、连接，组成重组DNA分子，再导入生物体内,并使其在异种生物内复制、表达,从而使受体生物获得新的遗传性状,这一全过程称为基因工程。（PPT）

限制酶：限制酶是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶。（P 21页）

DNA连接酶：DNA连接酶是一种能够将两段DNA拼接起来的酶称为DNA连接酶。

（或DNA连接酶是一种能够催化双链DNA片段紧靠在一起的3`羟基末端与5`磷酸基团末端之间形成磷酸二酯键，使两末端连接起来的酶）（P 27页）

DNA聚合酶：DNA聚合酶是能够催化DNA复制和修复DNA分子损伤的一类酶。（P 30页）DNA修饰酶：DNA修饰酶是一类通过添加或删除化学基团来修饰DNA分子的酶，主要有末端脱氧核苷酸转移酶（简称末端转移酶）、碱性磷酸酶、T4噬菌体多核苷酸激酶等。（P 22页与网上整理结合）

质粒：质粒是一些存在于微生物细胞染色体外的小型闭合环状双链DNA分子，是能够进行独立复制并保持恒定遗传的复制子。（P 42页）

穿梭质粒：穿梭质粒载体是指一类由人工构建的具有两种不同复制起点和选择标记，因而可在两种不同的寄主细胞中存活和复制，并可以携带着外源DNA在不同物种的细胞之间往返穿梭的质粒载体。（P 56页）：

噬菌粒：噬菌粒是一类由质粒载体和单链噬菌体载体结合而成的新型载体系列。（P 77页）粘粒载体：粘粒又称柯斯质粒，是一类由人工构建的含有λDNA粘性末端cos序列和质粒复制子的杂种质粒载体。（P 70页）

M13噬菌体载体：

M13噬菌体是一种含有6.4kb环状单链DNA分子的大肠杆菌丝状噬菌体。（73页及PPT）

克隆载体：克隆载体是指具有在细胞内进行自我复制能力的DNA分子，是外源基因的运载体，

又称无性繁殖载体。

末端脱氧核苷酸转移酶：末端脱氧核苷酸转移酶是一种来源于小牛胸腺，为核酸末端加上一个同聚物尾巴的DNA修饰酶。

T4噬菌体多核苷酸激酶：T4多聚核苷酸激酶（T4 polynucleotide kinase）酶是由T4噬菌体的pseT基因编码的一种蛋白质。该酶催化r(是拉丁文不是字母)-磷酸从ATP分子转移给DNA 或RNA分子的 5’-OH末端,生成5’－P。

碱性磷酸酶：碱性磷酸酶有两种不同来源，一种是从大肠杆菌中纯化出来的细菌碱性磷酸酶，另一种是从小牛肠中纯化出来的小牛肠碱性磷酸酶。它们的共同特性是能够催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA（或RNA）的5’-P末端转化为 5’-OH末端。（P 36）

定向克隆：当用两种不同的限制酶消化外源DNA时，可以产生非互补突出末端的外缘DNA片段，此种片段可采用定向克隆法，即只以一个方向很容易地将其插入到同样用这两种限制酶进行消化而产生相匹配粘端的载体当中。（P 104）

DNA体外重组：DNA体外重组是将目的基因用DNA连接酶在体外连接到合适的载体DNA上，这种重新组合的DNA称为重组DNA。（P 101）

转化：将带有目的基因的重组质粒DNA引入受体细胞的过程。

转染：将带有目的基因的重组噬菌体DNA直接引入受体细胞的过程。

转导：将带有目的基因的重组噬菌体DNA包装到噬菌体头部成为有感染力的颗粒，再导入受体细胞中的过程。

电穿孔转化法：将宿主细胞置于高压脉冲电场中，通过电击使细胞产生可逆性的穿孔，瞬时提高细胞膜的通透性周围基质中的DNA可渗进细胞

化学转化法：化学药物如氯化钙等的转化

氯化钙法转化细胞：细菌处于0℃及CaCl

低渗溶液中时，菌细胞膨胀成球形。转化混合物

2

中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热击处理促进细胞吸收DNA复合物。适用于大部分大肠杆菌菌株，并具有简单快速、重复性好的优点。

感受态细胞：受体细胞经过电穿孔、CaCl

、 RbCl(KCl,铷)等处理后，细胞膜的通透性暂时

2

改变，允许外源DNA分子进入。

放射性探针：是指一段带有放射性同位素标记的、与目的DNA或RNA片段的序列互补的单链核苷酸，将它与一个DNA片段进行杂交可检测该片段中是否含有目的序列（放射自显影技术）。抗生素抗性基因插入失活法：许多质粒载体都含有抗生素抗性基因，这些基因内有某些酶的识别位点。当用某种限制酶消化并插入外源目的基因时，抗药性基因将不被表达，从而在药物筛选平板上培养时，可区分出重组转化子的菌株的方法。

β-半乳糖苷酶插入失活法：许多载体带有来自大肠杆菌Lac操纵子DNA区段（含β-半乳糖苷酶的头146个编码信息和调控序列，还插入了一个多克隆位点）。而宿主细胞可编码β-半乳糖苷酶C端，两者之间可以实现基因内的互补，成为具有酶学活性的蛋白质。Lac+细菌在有诱导物，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）和生色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷（X-gal）存在下形成蓝色菌落。当多克隆位点上插入了外源基因时，LacZ的N端片段失活。因此带有重组质粒的细菌将产生白色菌落。

基因产物鉴定法：通过鉴定产物从而确定所克隆的DNA片段或分离的mRNA是否是目的片段或其mRNA。

复制子：DNA复制从起始点开始直到终点为止，每个这样的DNA单位称为复制子或复制单元(replicon)。

启动子：是一段能被宿主RNA聚合酶特异性识别和结合并指导目的基因转录的DNA序列，是基因表达调控的重要元件。

终止子：是一段终止RNA聚合酶转录的DNA序列。转录启动后，RNA酶沿着DNA链移动，持续合成RNA链，直到遇到终止信号为止。

起始密码：也称翻译起始密码子，是翻译的起始位点,通常为AUG（ATG）,是首选的起始密码子，编码甲硫氨酸，也有极少数生物利用其他密码子作为翻译的起始位点。

终止密码：即翻译终止密码子，翻译过程中，当核糖体移动遇到终止密码子，核糖体就从