比较两种粪便隐血试剂的检测

比较2种粪便隐血试剂的检测
［摘要］目的通过用邻联甲苯胺和便隐血胶体金检测试纸分别检测200例粪标本进行对照实验并分析探讨粪潜血二种检测方法的优劣和应用。

结果：二者一致性符合率为90％。

结论：化学法灵敏度、特异性较胶体金法低，受饮食影响因素大，胶体金法有假阴性，故建议二者结合判断。

［关键词］大便潜血；邻联甲苯胺法；免疫胶体金
Abstract：Objective Methods To detect the sed occult blood of 200 specimens with both orthotolidine method and immunogold method． To explore the comparability between the chemical method and immunogold method in detecting sed occult blood． then analyse the results．Results The coincidence of the detecting results between the two methods is 90％．Conclusion Food and drink impact the results of chemical method very much．so chemical method is lesssensitive and specific than immunogold method．But immunogold method also has false positivereaction，therefore we suggest detecting sed occult blood with the both two methods.
Key words：Sed occult blood；Orthotolidine method；Mmunogold method
1材料和方法
1.1样本来源自我院消化科门诊患者收集粪便493份，患者随机分为2组：一组未按医嘱指引进行饮食及药物控制，称无指引组250例；另一组按医嘱指引进行饮食及药物控制3日，称指引组243例。

1.2试剂
万华普曼生物工程有限公司生产的万华牌“消康保”粪便隐血胶体金试剂盒（简称WH 试纸条）。

邻联甲苯胺试剂：由上海远航试剂厂生产，冰乙酸及无水乙醇由广州东红化工厂生产，均为AR级。

称取AR级邻甲苯胺1 g溶于冰乙酸及无水乙醇各50 ml中，存放于棕色瓶中，4℃冰箱保存备用。

3%过氧化氢溶液。

1.3方法
每份标本均做粪便隐血胶体金试纸和邻联甲苯胺法检测、粪便隐血胶体金试纸法按说明书操作，邻联甲苯胺法按全国操作规程，。

2结果
2.1灵敏性试验
取正常人粪便2 g加入刻度离心管中，加蒸馏水至5 ml刻度混匀，再加入纯化的人血红蛋白的质控品(浓度为80 g/L）10 μl，其Hb含量为160 μg/ml，然后再吸出含Hb的粪便混合液用蒸馏水稀释成含Hb16.0 μg/ml、4.0 μg/ml、1.0 μg/ml、0.8 μg/ml、0.4 μg/ml、0.2 μg/ml、0.15 μg/ml、0.10 μg/ml的系列混合液，用两种方法进行测定，结果见表1。

两种方法检测不同浓度的人血红蛋白液结果比较Hb含量（略）
WH试纸条最低Hb检测出浓度为0.2 μg/ml，联苯法最低检测出浓度为0.80 μg/ml。

这说明WH试纸法比单克隆抗体法灵敏度高，对人体早期的消化道微量出血更为敏感。

2.2敏感性试验
用单克隆抗体法及联苯胺法同时分别检测120例大便隐血标本，结果如表2。

对联苯胺法阳性，单抗法阴性的24例患者，素食3 d后，留大便，重新用联苯胺法测试大便隐血，仅有1例阳性，而单抗法检测均为阴性结果。

2.3特异性和准确性试验
在单克隆抗体法阴性标本中，分别加各种动物血红蛋白和肌红蛋白时，单克隆抗体法始终还是阴性，而在联苯胺法阴性标本中，加各种动物血红蛋白和肌红蛋白，联苯胺法则均为阳性。

表2两种方法检测大便隐血结果检测（略）
2.4干扰试验
用含维生素C浓度分别为5.0 mg/ml、10.0 mg/ml、20.0 mg/ml、40.0 mg/ml、80.0 mg/m 加入约含Hb3.5 μg/ml的粪便中，用两种方法比较见表3，结果单抗法仍为阳性，而联苯胺法测得结果为阴性，再用铁剂及含过氧化物酶的蔬菜汁加入含Hb3.5 μg/ml粪便中做同样的隐血试验，结果是单克隆抗体法所做的结果始终不变，而联苯胺法测得的结果为阴性。

这说明单克隆抗体法不受其他化学药品、铁剂、过氧化物酶等的干扰，而联苯胺则受之影响较大，易形成假阴性结果。

表3维生素C对二种隐血试验方法的干扰比较维生素C(略) 3讨论
粪便隐血试验对消化道出血性疾病有非常重要的诊断与鉴别诊断的价值，要求大便隐血试验必须具有高度的灵敏度及特异性，以上实验充分证明用联苯胺法测大便隐血试验，灵敏度差，易受饮食影响，假阳性率较高，抗干扰性能差，也易形成假阴性结果，加之联苯胺试剂为一种强致癌物，对人体危害极大。

而单克隆抗体法能够真实地反映到消化道出血与否，特异性高，灵敏度高，不受其他药物及铁剂、动物血等干扰，只特异性地结合人血红蛋白抗原，对人体亦无害，且不受饮食限制，简便、快速，是目前早期诊断
消化道出血性疾病的一个首选的好方法。

参考文献：
［1］叶应妩，王毓三．全国临床检验操作规程［M］.第2版.南京：东南大学出版社，1997：1.
1 材料和方法
1.1研究对象及材料2009年1月至8月我院消化内科诊断为消化道出血的患者42
例分别采用联苯胺法和胶体金法进行大便潜血的检测，以50例无消化系统疾病的患者为阴性对照组，并统计结果。

1.2试剂大便潜血试纸条自购。

1.3方法化学法：用棉签挑取少量粪便于白陶瓷板上，加10g/L邻联甲苯胺冰乙酸试剂2～3滴，滴加3%过氧化氢溶液2～3滴。

立即观察结果（2分钟内变蓝色为阳性）。

胶体金法：按试纸说明书进行。

1.4结果判读化学法：阴性结果2分钟内不变蓝色，阳性结果在2分钟内变蓝色，或蓝褐色。

胶体金法：按操作说明将配制好的样本加入小试管中，将试纸条max线一端插入小试管中，1min～3min观察结果(最长不超过5min)，出现两条红线为阳性，只有控制线显色为阴性，控制线不显色者为失效。

42例粪便标本两法结果比较结果见表1，50例阴性对照组结果见表2
2 结果
表1 42例消化道出血粪便标本两方法结果
注：胶体金法试验阴性的2例，系柏油样便，经过稀释后，再检测，胶体金法即显示阳性。

表2 50例阴性对照组结果
3 讨论
大便隐血实验是诊断各种原因引起的消化道出血及筛选诊断胃肠道肿瘤及消化道出血的简便易行的重要手段。

[2]粪便中血红蛋白的检测可作为胃肠道出血的一个指标，现在国内外出现了很多检测大便潜血的方法，不同方法的特异性及敏感性均有一定差异。

本研究对邻联甲苯胺法和胶体金法进行了方法学比较。

从表1中42例消化道出血粪便标本两方法结果显示，邻联甲苯胺法阳性率为100%，胶体金法则由于前带现象，在标本处理前阳性率为95.24%，标本处理后阳性率为100%。

所以，在标本处理得当的前提下，二者在方法学上无显著差异。

表2中50例阴性标本邻联甲苯胺法则存在12%的假阳性，而胶体金法不存在假阳性的情况。

化学法的试验原理是根据红细胞中血红蛋白具有的过氧化酶作用，使邻联甲苯胺底物产生蓝色反应，从而证实粪便标本中血液的存在。

但邻联甲苯胺法对食物(如瘦肉、猪肝、动物血)、药物等其他一些物质可导致假阳性，所以在化学法检测前3天，应该禁食动物血、
肉、肝脏及富含叶绿素的食物和铁剂及中药；另外，齿龈出血、鼻出血及月经血均可造成结果的假阳性。

而胶体金法大便隐血的特异性强，不易受其他因素的干扰，同等条件下，比邻联甲苯胺法影响因素少，其反应灵敏度强。

所以胶体金免疫法被世界卫生组织和世界胃镜检查协会推荐作为粪便隐血试验的一种较为确切的方法[3]。

综上所述，化学法简便，成本低，但其干扰因素多，特异性低，假阳性率高。

胶体金法灵敏度比邻联甲苯胺法高得多，检出最低浓度为0.2μg/ml，最高检出浓度可达2000μg/ml，但大于2000μg/ml 时，由于前带反应可出现假阴性，故在胶体金法检测柏油样便出现阴性结果时，应充分稀释后进行检测或结合化学法潜血试验。

将两种试验的结果分析比较后再出具报告。

这样能有效提高检出率，并能降低粪便隐血试验的假阳性、假阴性率，以更好地为临床做出指导。

参考文献
[1]叶应妩，王毓三，申子瑜，等.全国临床检验操作规程（第3版）.中华人民共和国卫生部医政司，R446，1—65.
[2]李秀，王金萍.便潜血免疫学试验方法的临床应用价值[J].天津医药,1997,25:247.
[3]朱忠勇，陈之航.临床医学检验.上海：上海科学技术出版社，1978：202.。