大肠杆菌和沙门氏菌生化试验鉴定表教学内容
实验六 肠杆菌科细菌的微生物学鉴定
实验六肠杆菌科细菌的微生物学鉴定课程名称：兽医微生物学实验学时：6学时一、目的要求1．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌形态与染色特性以及主要培养特性；2．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌常规微生物学诊断法；3．掌握大肠杆菌和沙门氏菌生化试验的方法和原理；4．熟悉大肠杆菌和沙门氏菌在选择性和鉴别培养基上的生长表现；5．熟悉沙门氏菌血清分群、定型的方法和步骤。
二、知识背景肠杆菌科的细菌为革兰氏阴性、中等大小的杆菌，运动者周身鞭毛；在普通培养基上生长好；发酵葡萄糖和碳水化合物者产酸或产酸产气；在麦康凯琼脂上生长；细胞色素氧化酶阴性；还原硝酸盐为亚硝酸盐等。
碳水化合物的利用和其它生化试验是肠杆菌科细菌鉴定的重要试验。
大肠埃希氏菌（E.coli）简称大肠杆菌，作为原发和继发病原可引起多种动物疾病：犊牛的肠道感染和水泻；幼猪的水泻和腹泻，二月龄以上猪的出血性肠炎和水肿病；狗的尿道感染；鸡的气囊炎和大肠杆菌肉芽肿（Coligranuloma）。
沙门氏菌（Salmonella），虽然沙门氏菌血清型超过2200个，但承认的种为数不多，在O抗原的基础上，沙门氏菌血清组（群）用字母A、B、C…表示，然后根据它的H抗原（鞭毛抗原）再分，用阿拉伯数字1、2、3…等表示，沙门氏菌可引起多种动物和人的疾病，是肠杆菌科重要的致病菌，如鼠伤寒沙门氏菌（S.typhimurium）可引起动物流产，胃肠炎和败血症。
其它肠杆菌科成员：肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）可引起牛乳房炎、肺炎、母马的宫颈炎和子宫炎，这个菌常形成厚的荚膜。
变形杆菌（proteus）引起动物的尿道和胃肠道疾病。
耶尔森氏菌（yersinia）引起鼠疫、胃肠炎等。
生化试验和血清群的鉴定和定型在肠杆菌科细菌的鉴定中占很重要的位置。
三、实验材料每6人一组，每组所需材料：1．普通琼脂斜面培养物2管：分别为大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌（提供实验用菌种）；2．普通肉汤2管：分别用来接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌；3．普通琼脂平板2个分别用来划线接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌；4．生化试验用培养基2套，包括葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖发酵试验管、靛基质，M．R、V．P试验、柠檬酸盐利用，硝酸盐还原试验等；5．三糖铁琼脂斜面培养基2管；6．选择性培养基2个，如：麦康凯琼脂平板或远滕氏琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板；7．各种生化试验试剂：靛基质试剂，M．R试剂，V．P试剂，硝酸盐还原试剂；8．沙门氏菌因子血清。
大肠杆菌生化实验报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生化特性，掌握大肠杆菌的鉴定方法。
2. 掌握微生物生化实验的基本操作技术，提高实验技能。
3. 通过实验，加深对微生物生化反应原理的理解。
二、实验原理大肠杆菌是一种革兰氏阴性细菌，属于肠杆菌科。
在微生物学中，生化实验是鉴定细菌的重要手段之一。
通过观察细菌对特定底物的代谢能力，可以判断细菌的种类和特性。
本实验主要采用糖发酵实验、吲哚试验、甲基红试验等方法对大肠杆菌进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌菌种、葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、吲哚试剂、甲基红试剂、卢戈氏碘液、乙醚、蒸馏水等。
2. 实验仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管、电子天平、纱布、脱脂棉、灭菌锅、PH计或PH试纸、电炉、石棉网、铁架台、100ml量筒、橡皮手套、超净台等。
四、实验步骤1. 糖发酵实验（1）将大肠杆菌接种于葡萄糖发酵培养基中，37℃培养24小时。
（2）观察培养基中是否产生气泡，若有气泡产生，则说明大肠杆菌能够利用葡萄糖。
2. 吲哚试验（1）将大肠杆菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃培养24小时。
（2）取少量培养液加入吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀。
3. 甲基红试验（1）将大肠杆菌接种于乳糖发酵培养基中，37℃培养24小时。
（2）加入甲基红试剂，观察培养基颜色变化。
五、实验结果与分析1. 糖发酵实验：大肠杆菌在葡萄糖发酵培养基中产生气泡，说明其能够利用葡萄糖。
2. 吲哚试验：大肠杆菌在蛋白胨水培养基中产生红色沉淀，说明其具有吲哚酶活性。
3. 甲基红试验：大肠杆菌在乳糖发酵培养基中不产生红色沉淀，说明其不能发酵乳糖。
根据实验结果，可以判断该菌株为大肠杆菌。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了微生物生化实验的基本操作技术，加深了对微生物生化反应原理的理解。
在实验过程中，我们学会了如何观察细菌对特定底物的代谢能力，从而对大肠杆菌进行鉴定。
大肠杆菌与沙门氏菌鉴定
大肠杆菌与沙门氏菌的鉴定08动检1班：魏静翟阿官李盼盼尚延丽田方方崔亚婷一、实验目的与要求1、通过本实验了解大肠杆菌及沙门氏菌的主要生化特性与培养特性2、掌握大肠杆菌与沙门氏菌的鉴别方法二、实验器材及试剂温箱、显微镜、载玻片、营养琼脂、接种环、灭菌平皿、麦康凯培养基、无菌试管、伊红美兰培养基、三糖铁培养基、革兰氏染色剂、棉签、火柴等三、实验内容1、直接镜检法：1）操作步骤：a）用棉签沾取适量样液直接涂在载玻片上b）用革兰氏染色剂染色c）显微镜下观察2）预期实验结果：a）大肠杆菌：大肠杆菌为革兰氏阴性菌，中等大小，两端略圆的短粗杆菌，成单个存在，也有成双排列；周身鞭毛，能运动，有时两端着色较浓，要注意与巴氏杆菌区分开来。
b）沙门氏菌：沙门氏菌也为革兰氏阴性菌，无芽孢，大小通常为0.7~1.5um*2.0~5.0um，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。
2、分离培养法：将样液分别划线接种在麦康凯培养基、伊红美兰培养基上，温箱培养24h后观察生长情况，根据菌落的形态、颜色、大小等方面的差异来鉴别大肠杆菌和沙门氏菌。
1）麦康凯培养基（预期实验结果）：a）大肠杆菌：鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润；b）沙门氏菌：无色至浅橙色，透明或半透明，菌落中心有时为暗色。
2）伊红美兰培养基（预期实验结果）：a）大肠杆菌：紫黑色菌落，有的有金属光泽b）沙门氏菌：形态特征与在麦康凯培养基上的相似2、三糖铁培养基穿刺试验1）操作方法：将待检样液穿刺接种于三糖铁培养基中，培养18~24h后，取出观察2）预期实验结果：a）大肠杆菌：穿刺后不变黑，表面呈黄色b）沙门氏菌：穿刺底部有气体，穿刺后变黑，中间为黄色表面为红色3、乳糖发酵试验1）操作方法：将待检样液接种于乳糖发酵管内放于温箱内培养18h后，观察结果2) 预期实验结果：a）大肠杆菌：产酸产气b）沙门氏菌：不产酸产气。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案实验原理：1、大肠杆菌的性质：大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，吲哚试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S，不能利用枸椽酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：沙门氏杆菌是G-直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产吲哚，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：（1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
（2）用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
（3）用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37°C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：（1）取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C 恒温培养24小时。
（2）取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：（1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
实验原理：1、大肠杆菌的性质:大肠杆菌是G无芽抱直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，口引噪试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S,不能利用xx酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：-沙门氏杆菌是G直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产呵噪，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SQ、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：(1) 取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
(2) 用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
(3) 用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37 C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：(1) 取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37 C恒温培养24小时。
(2) 取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37 C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：(1) 检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
实训二十三 大肠杆菌、沙门菌属生化反应试验
四、结果分析
1、1、2、3、4号菌分别用接种针接种一套肠
编码
鸟 赖 葡 纤 山 侧 鼠 木 蔗 丙 甘 氨 氨 磷 维 梨 金 李 糖 糖 二 露 酸 酸 胨 二 醇 盏 糖 酸 醇 水 糖 花 盐 醇 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1 0 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 阿 拉 伯 糖 蛋 七 半 氨 白 叶 固 基 胨 苷 体 酸 水 对 照 1 13 14 15 2 4 2 1
4 2 1
－
+ 3
+
－
+ 2
－ －
+ 2
－ － + + 3
+
+ 7+来自 该菌序号为32237
2、鸟氨酸、赖氨酸、氨基酸对照需要加石蜡
封口（氨基酸对照不能变色，如不变色，鸟 氨酸与氨对同色，为阴性；不同色，为阳 性）； 3、1、2、3、4号菌分别用接种针接种一支 KIA； 4、放置温箱37度24h培养后观察结果。
实验十一、大肠杆菌、沙门菌属 生化反应试验
一、目的：
1、掌握肠道杆菌鉴定方法和原则； 2、掌握肠道杆菌生化反应（肠编码）名称、
试验原理。
二、内容：
1、观察记录上次试验结果－画图、描述菌落
特点、颜色； 2、挑取可疑单个菌落接种生化反应培养基； 3、记录生化培养基初始颜色。
三、操作：
实训二十四 大肠杆菌、沙门菌属血清学鉴定
4 2 1
－
+ 3
+
－
+ 2
－ －
+ 2
－ － + + 3
+
+ 7
+
该菌序号为32237 2、玻片凝集实验（需作阴性对照） 先多价血清，若阳性再作单价因子血清（先0
单价血清，再H单价血清） 3、放置温箱37度24h培养后观察结果。
四、结果分析
甲型副伤寒沙门菌－O2+Ha； 乙型副伤寒沙门菌－O4+Hb； 伤寒沙门菌――――O9+Hd。
实验十二、大肠杆菌、沙门菌属 血清学鉴定
一、目的：
1、掌握肠道杆菌生化反应判定方法（肠编
码）； 2、掌握肠道杆记录1、2、3、4号菌各套肠编码结果； 2、从双糖铁培养基挑取细菌作血清学鉴定；
三、操作：
1、记录颜色判断肠编码结果 鸟 赖 葡 纤 山 侧 鼠 木 蔗 丙 甘 氨 氨 磷 维 梨 金 李 糖 糖 二 露 酸 酸 胨 二 醇 盏 糖 酸 醇 水 糖 花 盐 醇 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1 0 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 阿 拉 伯 糖 蛋 七 半 氨 白 叶 固 基 胨 苷 体 酸 水 对 照 1 13 14 15 2 4 2 1
大肠杆菌生化鉴定实验报告
大肠杆菌生化鉴定实验报告
实验目的：鉴定样品中是否存在大肠杆菌，并确定其特性和代谢途径。
实验步骤：
1.选择大肠杆菌鉴定常用的生化试验，包括甲烷氧化、尿素加水
解、氧化/发酵葡萄糖、氧化/发酵乳糖、氧化/发酵葡萄糖醇、胱氨酸脱羧等试验。
2.在实验室条件下，将样品分别接种到不同的培养基中，进行上
述生化试验。
3.根据不同试验的结果，判断样品中是否存在大肠杆菌，并确定
其特性和代谢途径。
实验结果：
1.甲烷氧化试验：阴性，说明大肠杆菌无法利用甲烷进行代谢。
2.尿素加水解试验：阳性，说明大肠杆菌能够加水解尿素，产生
氨。
3.氧化/发酵葡萄糖试验：发酵，说明大肠杆菌能够利用葡萄糖进
行发酵代谢。
4.氧化/发酵乳糖试验：发酵，说明大肠杆菌能够利用乳糖进行发
酵代谢。
5.氧化/发酵葡萄糖醇试验：发酵，说明大肠杆菌能够利用葡萄糖
醇进行发酵代谢。
6.胱氨酸脱羧试验：阳性，说明大肠杆菌能够脱羧胱氨酸，产生
氨和二氧化碳。
根据上述结果，样品中存在大肠杆菌，并且其代谢途径主要包括葡萄糖、乳糖和葡萄糖醇的发酵代谢，以及尿素的加水解和胱氨酸的脱羧代谢。
结论：样品中存在大肠杆菌，其代谢途径主要包括葡萄糖、乳糖和葡萄糖醇的发酵代谢，以及尿素的加水解和胱氨酸的脱羧代谢。
肠道杆菌的实验报告
一、实验目的1. 熟悉肠道杆菌的基本生物学特性。
2. 掌握肠道杆菌的分离与鉴定方法。
3. 学会使用生化反应和显微镜观察等方法对肠道杆菌进行鉴定。
二、实验原理肠道杆菌是一类革兰氏阴性细菌，广泛存在于人体肠道中。
它们分为条件致病菌和致病菌两大类。
本实验通过观察肠道杆菌的形态特征、生化反应和血清学试验等方法，对分离到的肠道杆菌进行鉴定。
三、实验材料1. 实验菌株：大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌等。
2. 培养基：普通琼脂培养基、双糖铁培养基、血清学反应用培养基等。
3. 试剂：革兰氏染色液、生化试剂、血清等。
4. 仪器：显微镜、接种环、酒精灯、培养箱等。
四、实验方法1. 菌株分离（1）将实验菌株接种于普通琼脂培养基上，在37℃培养箱中培养18-24小时。
（2）用接种环挑取单菌落，接种于双糖铁培养基上，观察菌落生长情况。
2. 形态观察（1）将分离得到的菌株涂片，进行革兰氏染色。
（2）在显微镜下观察菌体的形态、大小、染色特性等。
3. 生化反应（1）将分离得到的菌株接种于双糖铁培养基上，观察菌落生长情况和颜色变化。
（2）根据菌落生长情况和颜色变化，判断菌株的生化反应类型。
4. 血清学试验（1）将分离得到的菌株与相应的血清进行玻片凝集试验。
（2）观察凝集反应，判断菌株的血清学类型。
五、实验结果1. 菌株分离实验菌株在普通琼脂培养基上生长良好，菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为白色。
2. 形态观察革兰氏染色结果显示，实验菌株为革兰氏阴性菌，菌体呈短杆状，大小约为0.5×1.5μm。
3. 生化反应双糖铁培养基结果显示，实验菌株能够发酵葡萄糖，产生酸和气体，不发酵乳糖，不还原硝酸盐。
4. 血清学试验玻片凝集试验结果显示，实验菌株与相应的血清发生凝集反应，判断为该血清学类型。
六、实验讨论本实验通过对肠道杆菌的分离与鉴定，掌握了肠道杆菌的基本生物学特性和鉴定方法。
实验结果表明，分离得到的菌株为革兰氏阴性菌，能够发酵葡萄糖，不发酵乳糖，不还原硝酸盐，且与相应的血清发生凝集反应，符合肠道杆菌的生物学特性。
实验五 大肠杆菌与沙门氏菌
扬州大学兽医学院
2019年12月31日星期二
实验原理
各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养 物质的能力有所差异，排泄的代谢产物亦 不同，所以利用这点进行生化试验，可达 到鉴定细菌种的目的，尤其在鉴定肠道杆 菌时，生化试验是极其常用的一种方法。
一、目的要求
1. 学习常用的生化实验方法； 2. 掌握大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。
＋(－) ；＋(－)
3. 细菌的染色、镜检
大肠杆菌
沙门氏菌
G－直杆菌，大小0.4-0.7×2-3μm， 无芽胞，两端钝圆，散在或成对。
4. 生化管接种培养
大肠杆菌
沙门氏菌
葡乳麦甘蔗
⊕⊕H/⊕2-
S⊕ －
尿⊕ 枸 －
葡乳麦甘蔗
H⊕ ＋ － 2
S⊕ －
尿⊕ ＋
枸－
5. 吲哚、M.R、V-P试验结果
2. 沙门氏菌
G－
个体为杆状 散在或成对
① 是一大群寄生于人和动物肠道内、生化特性和抗原结构 相似，G－，兼性厌氧的无芽胞直杆菌。
② 在医学、兽医和公共卫生上均十分重要： • 绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性； • 能致人和动物多种不同临床表现的沙门氏菌病； • 人类食物中毒的主要病原之一。
大肠杆菌
沙门氏菌
吲 M V哚 .R P 试试 试
吲 M V哚 .R P 试试 试
六、思考题
大肠杆菌与沙门氏菌：
1. 革兰氏染色特性与形态特点？ 2. 在麦康凯平板上的生长表现？ 3. 在三糖铁琼脂上的生长表现？ 4. 常规糖发酵情况？ 5. IMViC试验结果？
二、背景知识介绍
1. 大肠杆菌
G－
个体为杆状 散在或成对
大肠杆菌和沙门氏菌的鉴别诊断要点。
大肠杆菌和沙门氏菌的鉴别诊断要点。
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大肠杆菌和沙门氏菌在伊红美蓝培养基的实验报告
大肠杆菌和沙门氏菌在伊红美蓝培养基的实验报告今天，我们学习了第三课：微生物的分类以及沙门氏菌、大肠杆菌等细菌。
其中有一个叫做大肠杆菌的微生物，是个好奇心很强而且非常淘气的孩子。
它可不愿意听课，一会儿吃口香糖，一会儿去啃铅笔，真让人担心这么下去，它就会变成铅笔，吞进肚里，那可就麻烦啦！所以，为了保护它不要被饿死或渴死，我便给他取名叫“细菌”。
说起来，细菌还真能干呢！只要把它丢进水里，没过多久，你再仔细观察，你准会发现，水面上漂浮着许多细菌的尸体。
如果你用手去捞，也总能捞出几十个。
据科学家研究表明，像铅笔头一样大小的细菌在自然界最少有两万亿种之多，占地球已知生物的五千分之一。
大肠杆菌与细菌一样都属于细胞型微生物，只不过由于形状不同，导致对身体产生危害的方式也各不相同。
它对人体造成的损伤主要是破坏肠壁，引起痢疾，导致腹痛、呕吐甚至休克等症状；同时它也经常作为传染源，通过污染食品而使人得病。
大肠杆菌的培养，在高中阶段要求掌握。
但是对于大肠杆菌的毒性机理，包括它与其它细菌间的关系却涉及较少。
本次实验则要求我们能够通过研究找出杀灭细菌的特定药剂。
正因为如此，才能在无菌操作环境下，让同学们亲自动手尝试完成此实验。
根据资料显示：在环境卫生条件良好的实验室，以除去菌落的生长和繁殖外，其余操作均需严格遵守无菌操作技术。
大肠杆菌和沙门氏菌在伊红美蓝培养基的实验报告小组成员：我姓张，是高二（5）班的学生。
我的任务是制备大肠杆菌和沙门氏菌的生长曲线，结果我利用以前学过的大肠杆菌培养基和沙门氏菌培养基合在一起制备大肠杆菌的生长曲线，再根据实验数据画图并记录。
首先我准备好实验材料：试管3支，培养基6支，培养箱1台，倒置显微镜1架，解剖盘1块，滤纸若干，碘液1瓶，显微镜油镜2瓶，酒精灯1盏，接种针若干。
首先将24只平皿分别放入4号恒温培养箱内预热到37℃±1℃并调整至相应的恒温度。
同时还要选择适宜的无菌工具，最后戴好无菌手套。
实验六 大肠杆菌和沙门氏杆菌
增 菌 ：血清肉汤
运动性
不溶血
G-菌球杆
动物接种：小白鼠皮下接种 死亡检剖败血症 可疑菌落
脏器涂片镜检
分离培养纯培养源自血液、肠淋巴结及肠黏膜刮取物
及其他病变组织
革
兰
麦康凯或伊红美
麦康凯或血琼脂
氏
兰平板划线分离
平板划线分离
染
色
镜
挑取疑似菌落5-10个分别接种TSI和普通琼脂斜面
检
TSI呈A（K）/A 反应的，其 STI
+（-） 生长物或普通琼脂斜面纯培养菌
生化试验鉴定 猪水肿病菌株 血清型鉴定
ETEC菌株毒力因子鉴定
沙门氏杆菌微生生学诊断程序
未污染病料
在肠道杆菌鉴别培 养基上划线分离
病料
革
兰
污染病料
氏
染
色
用肠道杆菌增菌
镜
培养基增菌
检
挑取疑似菌落分别接种TSI和尿素培养基
普 通
斜
TSI呈 K（A）/K 反应的，尿素分解阴性的STI培养菌
面
+(-), +(-)
纯
培
菌株鉴定
养
沙门菌生化鉴定
沙门菌A-F群多价 O血清平板凝集
大肠杆菌
大肠杆菌
大肠杆菌
麦康凯培养基上形成红色菌落； 伊红美蓝平板：黑色带有金属光泽菌 落； 远腾琼脂平板：红色带有光泽菌落
大肠杆菌
大肠杆菌
大肠杆菌（E．coli）
结果观察
大肠杆菌 葡乳麦甘蔗
⊕⊕⊕⊕⊕
沙门氏菌 葡乳麦甘蔗
+- + + -
动物致病性大肠杆菌分离鉴定程序
病料
粪便、肠内容物
实验五大肠杆菌与沙门氏菌
实验原理
各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养 物质的能力有所差异，排泄的代谢产物亦 不同，所以利用这点进行生化试验，可达 到鉴定细菌种的目的，尤其在鉴定肠道杆 菌时，生化试验是极其常用的一种方法。
一、目的要求
1. 学习常用的生化实验方法； 2. 掌握大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。
• 在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。
② V-P试验： 某些细菌能发酵
粉
碱
红
+ 二乙酰 色
葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 2,3-丁二烯醇
+
化 合
胨中的胍基化合物 物
注意：通常M.R和V-P试验是密切相关： 如果一个微生物M.R是 95％酒精 蒸馏水
③ 除雏沙门和鸡沙门氏菌外， 其余各菌具有周生鞭毛。
伤寒沙门氏菌
鼠伤寒沙门氏菌
三、实验材料
1. 常规接种工具：接种棒、酒精灯等 2. 革兰氏染色液、玻片、滴管 等 3. 菌种:
• 大肠杆菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（1个/组） • 沙门氏菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（1个/组） • 大肠杆菌、沙门氏菌的邓亨氏蛋白胨水培养物； • 大肠杆菌、沙门氏菌的葡萄糖蛋白胨水培养物。 4. 培养基： • 三糖铁斜面（1支/人） 5. 生化管： • 葡、乳、麦、甘、蔗、H2S 、尿、枸（1套/人） 6. 试剂： • 吲哚试剂、M.R试剂、V-P试剂 等
② 于培养物中加入0.5mL V-P甲液；
③ 随后加V-P乙液0.5mL，轻摇；
④ 静置10-15min。
⑤ 15min内变红者为阳性。
V-P甲液
V-P乙液
阳性 阴性
M.R与V-P试验原理
① M.R试验：
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大肠杆菌和沙门氏菌生化试验鉴定表
大肠杆菌和沙门是杆菌鉴定表
1．糖发酵试验取纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖发酵管，37℃培养2～3d，观察结果。
2．吲哚试验取纯培养物接种蛋白胨水，37℃培养2～3d，加入吲哚指示剂，观察结果。
3．MR试验和VP试验取纯培养物接种葡萄糖蛋白胨水，37℃培养2～3d，分别加入MR和VP指示剂，观察结果。
4．枸橼酸盐试验取纯培养物接种枸橼酸盐培养基上，37℃培养18～24h，观察结果
5．硫化氢试验取纯培养物接种醋酸铅琼脂，37℃培养18～24h，观察结果。
大肠杆菌与沙门氏菌生化试验鉴别表
注：⊕产酸产气、+ 阳性、- 阴性、 +/- 大多数菌株阳性/少数阴性、 v 种间有不同反应。
（四）运动性检查及在鉴别培养基上的培养特性
1．运动性有周鞭毛，镜检可见呈圆周运动；半固体培养基穿刺培养使培养基呈云雾状。
2．培养特性钩取纯培养物分别接种远滕氏琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板、SS琼脂平板，37℃温箱培养18～24ｈ，观察菌落特征。
1、给出周鞭毛菌镜下观察结果的动态图片画
2、给出在半固体培养基上的结果观察图片
大肠杆菌与沙门氏菌在鉴别培养基上的菌落特征
由于大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。
最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。
在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：（1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。
（2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。
（3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。
此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。