细胞污染
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黑胶虫
病毒 细胞污染
真菌污染
霉菌污染后培养液 中漂浮着白色或浅 黄色的小点,肉眼 可见,培养液一般 短期不发生混浊; 倒置显微镜下可见 丝状、管状或树枝 状的菌丝纵横交错 在细胞之间,有的 呈链状排列
霉菌污染
细菌污染
黑色细沙状,高 倍镜下呈圆球状 颗粒,做布朗运 动; 细胞内颗粒增多、 变粗; 培养基浑浊变黄, pH改变。
培养液可轻微浑浊,显 微镜下那些细小的点状 物数量非常多,轻微活 动,细胞虽然可以 生长 但繁殖速度却明显减慢, 而且细胞状态不好,边 缘不清楚,细胞不透亮。
螨虫污染
黑胶虫污染
• 存在争论
生物:直径小于0.1μm,大多国外血清中多见,可能是国 外牛血清中含有的某种原虫。 非生物:血清中的某些蛋白成分的物质,经过灭活之后丧 失活性,在培养基中,镜检见到的运动其实是这些物质在 溶液中做“布朗运动”。
病毒污染
由于病毒有种属特异性, 所以病毒污染的概率比 较小。病毒污染难于发 现,一般的实验室都没 能力检查细胞培养中污 染的病毒。由于病毒一 般潜伏在细胞内,对整 个细胞培养不是致死的, 但它可能会影响实验的 结果。
人角膜上皮细胞被HSV-1感染后的形态学变化
细胞交叉污染
• 细胞污染是由于在培养过程中各种细胞同时进行, 而所用器具或液体混杂使用所致。这种污染使培 养细胞不同种类之间发生混乱,细胞生长特性, 形态发生变化。
细胞污染的类型、状态及 预防措施
陈鹏鹏
什么是细胞污染?
• 凡混入细胞培养环境中对细胞生存有害的 成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染 • 细胞污染不能完全被消除,但能减少其发 生的频率和后果的严重性
一、细胞污染的类型及状态
物理污染
器皿、器械
化学污染
(内毒素)
化学试剂 蒸馏水
真菌 细菌
生物污染
支原体 原虫
• 温度过冷或过热的温度对细胞可引起细胞生理状态的改变,如从冰
箱 中取出的培养液直接加至37℃培养的细胞中可能会造成细胞应激, 影响 实验现象的观察
• 辐射对紫外线敏感的试剂不能放在紫外线下灭菌,同时对见光易分
解的物质进行避光处理
• 放射线试剂周围不能放同位素 • 振动
细菌内毒素
它是革兰氏阴性细菌细胞死亡后解体释放 出的疏水性的细胞壁组成物质,对塑料等 疏水性强的物质有很强的吸附能力。细菌 内毒素可刺激部分细胞产生一些激素或细 胞因子,对细胞生长和实验结果产生影响。 细菌内毒素是临床上的最主要的热原(即 注射到动物体内会导致动物发热)。
射、臭氧熏
无菌操作
• 整个操作过程要迅速敏捷但不能过快,以免形成气流。 • 超净台内放置的所有培养瓶瓶口不能与与风向相逆,不允 许用手触及器皿的无菌部分,如瓶口。 • 开启或封闭瓶口操作时要经过酒精灯的烧灼,并在火焰附 近工作。 • 吸取培养液、DPBS或其它试剂是注意换管,防止交叉污染 或污染扩大。 • 使用培养液前,不宜较早开启瓶口。 • 不再使用的培养液应立即封口。 • 培养的细胞在处理之前不要过早的暴露空气中。 • 操作时不要交谈、咳嗽,以防止唾沫和呼出气流引发污染。 • 操作完毕后应将工作台面整理好,并消毒擦拭工作面,关 闭超净台
支原体污染ห้องสมุดไป่ตู้
支原体无细胞壁形态呈高度 多形性,可为圆形、丝状或 梨形。直径0.2~0.3μm,一 般过滤除菌无法去除它,光 镜下难以看清它的形态结构。 培养细胞受支原体污染后, 多数细胞病理变化轻微,部 分敏感细胞可见细胞生长增 殖变慢,部分细胞变圆,从 瓶壁脱落。
支原体内的DNA被荧光染料着色
原虫污染
• 有些变化轻微,不易察觉,有些则可能由于污染 的细胞具有生长优势而最终压过原来细胞而导致 细胞生长的抑制,最终死亡。 • 污染过的细胞由于种类不纯,无法进行实验研究。
二、细胞污染的预防
消毒(耗 材、制备 间)
无菌操作
消毒
• 制备间 0.1% 新洁尔灭、75%酒精、紫外
照 射、臭氧熏
• 物料耗材 高压灭菌、75%酒精、紫外照