微生物-志贺氏菌
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三、志贺氏菌的检验
志贺氏菌检验
GB/T4789.5-2003 中志贺氏菌检验程序
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
（一）实验内容
样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分离→→生化学 试验→→结果报告 第一天 样品处理和增菌培养
上午 规格名称 准备并灭菌的器材 数量 下午 1、样品处理 无菌操作称取检样25g，加入装有 225mLGN增菌液的500mL广口瓶内， 固体食品用均质器以800010000r/min打碎1min。 2、增菌培养 放于36℃培养6～8h。 培养时间视细菌生长情况而定，当 培养液出现轻微混浊时即应中止培 养。
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
一、生物学特性 （一）形态与Leabharlann Baidu色
革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有 菌毛。 2~3um×0.5~0.7um
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
（二）培养特性
1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37℃，PH7.2~7.4
志贺氏菌检验
（三）结果报告 综合生化试验结果判定菌型并作出报告。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
志贺氏菌检验
葡萄糖半固体原理及结果
三糖铁（TSI）琼脂试验的原理
2－志贺氏菌
1. 铜绿假单胞菌 2. 志贺氏菌 3－沙门氏菌 4－大肠杆菌 3. 枯草芽孢杆菌 闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
在志贺氏菌检验中可弃去的培养物： （1）在TSI表面上呈现蔓延生长的培养物 （2）在18~24h发酵乳糖、蔗糖的培养物 （3）不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面生长的 培养物。 （4）产气的培养物 （5）有动力的培养物 （6）产H2S的培养物
菌落为无色半透明状，
可能为志贺氏菌。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
大肠杆菌
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
第三天 初步生化试验
（一）接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体培养基 从HE或SS、麦康凯或EMB琼脂平板、挑取平板上的 可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一 般应多挑几个菌落，以防遗漏。经36℃培养18～24h， 分别观察结果。 （二）培养 放于36℃培养18～24h。 结果：乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志 贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力。
（三）生化反应
1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺氏菌外，均 不发酵乳糖。
2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3、不产生H2S，不分解尿素，V-P试验阴性，不能利用 柠檬酸盐。 4、甲基红阳性。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
二、志贺氏菌的致病性与食物中毒
（一）传染源
食物、病人、粪便、苍蝇等
（二）志贺氏菌的致病性
致病因素： 侵袭力、菌体内毒素、外毒素。 临床症状： A、急性细菌性痢疾： 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性细菌性痢疾： 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
闽北职业技术学院食品与生物工程系
HE平板原理及反应
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
发酵乳糖的肠杆菌 不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生 硫化氢，可能是沙门氏菌
不发酵乳糖，菌落呈蓝绿色或蓝色 可能就是志贺氏菌 闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
SS平板原理及反应 SS Agar (Salmonella Shigella Agar) 是沙门氏菌。有黑色中心。 如果没有黑色中心，就很可 能是志贺氏菌了。
西蒙氏柠檬酸盐：阳性者斜面上菌落生长，培养基由绿 色转为蓝色，阴性者不生长。
赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶：阳性者为紫色，阴性者为黄色。 pH7.2尿素：阳性者为红色，阴性者为黄色。 KCN：阳性者细菌生长，阴性者细菌不生长。 水杨苷和七叶苷：阳性者产气。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
大肠杆菌或者别的发酵 乳糖的肠杆菌。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分） 麦康凯琼脂平板
志贺氏菌检验
可 能 为 志 贺 氏 菌 。
菌 落 为 粉 红 色 ， 半 透 明 的 ，
闽北职业技术学院食品与生物工程系
EMB平板照片及原理 食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
（二）生化分群试验
志贺氏菌检验
接种生化培养基 从三糖铁琼脂上挑取培养物上,拌种到：5%乳糖、 靛基质培养基中，36℃培养。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
各项生化试验现象
葡萄糖铵：阳性者斜面上有正常大小的菌落生长，阴性 者不生长或生长极微小的菌落。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
第四天
进一步的生化试验
凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺 氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做进一步的 生化试验和生化分型实验。
（一）进一步生化试验 即：葡萄糖铵，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和鸟氨酸 脱羧酶，pH7.2尿素，KCN生长，以及水杨苷和七 叶苷的分解， 36℃培养。 志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。
2、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、光 滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落
3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁平， 在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。
4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
志贺氏菌在TSI生长的结果（现象）： （1）斜面产碱仍为红色或粉红色； （2）底层产酸不产气，变黄色； （3）不产H2S，不出现黑色。
志贺氏菌在葡萄糖半固体培养基生长：沿线生长，无 动力。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
500ml广口瓶
18×180mm试管 13×100mm试管 10ml移液管 直径为90mm平皿 250ml量筒 不锈钢汤匙1把 ，玻璃珠， 杜氏小管
1个
6支 13支 1支 6套 1支
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
第二天 接种选择性平板进行分离培养 （一）接种选择性平板 取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平 板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和EMB （伊红美蓝）琼脂平板各1个。 （二）培养 放于36℃培养18～24h。 结果：志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发 酵乳糖的菌落。
志贺氏菌检验
GB/T4789.5-2003 中志贺氏菌检验程序
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
（一）实验内容
样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分离→→生化学 试验→→结果报告 第一天 样品处理和增菌培养
上午 规格名称 准备并灭菌的器材 数量 下午 1、样品处理 无菌操作称取检样25g，加入装有 225mLGN增菌液的500mL广口瓶内， 固体食品用均质器以800010000r/min打碎1min。 2、增菌培养 放于36℃培养6～8h。 培养时间视细菌生长情况而定，当 培养液出现轻微混浊时即应中止培 养。
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
一、生物学特性 （一）形态与Leabharlann Baidu色
革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有 菌毛。 2~3um×0.5~0.7um
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
（二）培养特性
1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37℃，PH7.2~7.4
志贺氏菌检验
（三）结果报告 综合生化试验结果判定菌型并作出报告。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
志贺氏菌检验
葡萄糖半固体原理及结果
三糖铁（TSI）琼脂试验的原理
2－志贺氏菌
1. 铜绿假单胞菌 2. 志贺氏菌 3－沙门氏菌 4－大肠杆菌 3. 枯草芽孢杆菌 闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
在志贺氏菌检验中可弃去的培养物： （1）在TSI表面上呈现蔓延生长的培养物 （2）在18~24h发酵乳糖、蔗糖的培养物 （3）不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面生长的 培养物。 （4）产气的培养物 （5）有动力的培养物 （6）产H2S的培养物
菌落为无色半透明状，
可能为志贺氏菌。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
大肠杆菌
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
第三天 初步生化试验
（一）接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体培养基 从HE或SS、麦康凯或EMB琼脂平板、挑取平板上的 可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一 般应多挑几个菌落，以防遗漏。经36℃培养18～24h， 分别观察结果。 （二）培养 放于36℃培养18～24h。 结果：乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志 贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力。
（三）生化反应
1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺氏菌外，均 不发酵乳糖。
2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3、不产生H2S，不分解尿素，V-P试验阴性，不能利用 柠檬酸盐。 4、甲基红阳性。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
二、志贺氏菌的致病性与食物中毒
（一）传染源
食物、病人、粪便、苍蝇等
（二）志贺氏菌的致病性
致病因素： 侵袭力、菌体内毒素、外毒素。 临床症状： A、急性细菌性痢疾： 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性细菌性痢疾： 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。
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食品安全检验技术（微生物部分）
闽北职业技术学院食品与生物工程系
HE平板原理及反应
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
发酵乳糖的肠杆菌 不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生 硫化氢，可能是沙门氏菌
不发酵乳糖，菌落呈蓝绿色或蓝色 可能就是志贺氏菌 闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
SS平板原理及反应 SS Agar (Salmonella Shigella Agar) 是沙门氏菌。有黑色中心。 如果没有黑色中心，就很可 能是志贺氏菌了。
西蒙氏柠檬酸盐：阳性者斜面上菌落生长，培养基由绿 色转为蓝色，阴性者不生长。
赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶：阳性者为紫色，阴性者为黄色。 pH7.2尿素：阳性者为红色，阴性者为黄色。 KCN：阳性者细菌生长，阴性者细菌不生长。 水杨苷和七叶苷：阳性者产气。
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食品安全检验技术（微生物部分）
大肠杆菌或者别的发酵 乳糖的肠杆菌。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分） 麦康凯琼脂平板
志贺氏菌检验
可 能 为 志 贺 氏 菌 。
菌 落 为 粉 红 色 ， 半 透 明 的 ，
闽北职业技术学院食品与生物工程系
EMB平板照片及原理 食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
（二）生化分群试验
志贺氏菌检验
接种生化培养基 从三糖铁琼脂上挑取培养物上,拌种到：5%乳糖、 靛基质培养基中，36℃培养。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
各项生化试验现象
葡萄糖铵：阳性者斜面上有正常大小的菌落生长，阴性 者不生长或生长极微小的菌落。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
第四天
进一步的生化试验
凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺 氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做进一步的 生化试验和生化分型实验。
（一）进一步生化试验 即：葡萄糖铵，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和鸟氨酸 脱羧酶，pH7.2尿素，KCN生长，以及水杨苷和七 叶苷的分解， 36℃培养。 志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。
2、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、光 滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落
3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁平， 在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。
4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
志贺氏菌在TSI生长的结果（现象）： （1）斜面产碱仍为红色或粉红色； （2）底层产酸不产气，变黄色； （3）不产H2S，不出现黑色。
志贺氏菌在葡萄糖半固体培养基生长：沿线生长，无 动力。
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
500ml广口瓶
18×180mm试管 13×100mm试管 10ml移液管 直径为90mm平皿 250ml量筒 不锈钢汤匙1把 ，玻璃珠， 杜氏小管
1个
6支 13支 1支 6套 1支
闽北职业技术学院食品与生物工程系
食品安全检验技术（微生物部分）
志贺氏菌检验
第二天 接种选择性平板进行分离培养 （一）接种选择性平板 取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平 板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和EMB （伊红美蓝）琼脂平板各1个。 （二）培养 放于36℃培养18～24h。 结果：志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发 酵乳糖的菌落。