呼吸道九联检ppt课件
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呼吸道九联检
呼吸道九联检的局限性
检测时间较长需要等待结果 检测费用较高可能增加患者负担 检测结果可能受到样本采集、保存等因素的影响
检测结果可能存在假阳性或假阴性需要结合临床症状和病史进行综合判断
如何扬长避短发挥呼吸道九联检的最大价值
优势：快速、 准确、全面 地检测呼吸 道疾病
局限性：可 能存在假阳 性和假阴性 结果
智能化：随着人工智能技术的发展呼吸道九联检技术将更加智能化可以实现自动 检测、分析、报告等
远程医疗：随着远程医疗技术的发展呼吸道九联检技术可以实现远程检测、诊断 和治疗提高医疗服务的效率和便捷性。
呼吸道九联检在未来的应用前景
技术进步：随着 科技的发展呼吸 道九联检的准确 性和灵敏度将不 断提高
应用范围扩大： 未来呼吸道九联 检的应用范围将 不断扩大包括但 不限于医院、社 区、家庭等
呼吸道九联检在临床诊断中的应用
呼吸道感染：用于诊断呼吸道 感染性疾病如流感、肺炎等
过敏性疾病：用于诊断过敏性 鼻炎、哮喘等疾病
呼吸道肿瘤：用于诊断肺癌、 喉癌等呼吸道肿瘤性疾病
呼吸道慢性疾病：用于诊断慢 性阻塞性肺疾病、支气管扩张 等疾病
呼吸道九联检在流行病学调查中的应用
呼吸道九联检是一种快速、准确的检测方法可以检测多种呼吸道病原体。 在流行病学调查中呼吸道九联检可以用于筛查疑似病例确定感染源。 呼吸道九联检还可以用于监测疫情发展趋势为制定防控措施提供依据。
原体
检测试剂：使 用呼吸道九联 检检测试剂对 样本进行检测
检测结果：根据 检测试剂的反应 结果判断患者是 否感染了呼吸道 九联检中的病原
体
报告结果：将 检测结果报告 给医生以便医 生进行诊断和
治疗
呼吸道九联检的检测结果解读
呼吸道九联检
抗原抗体的检测方法
• 胶体金法：抗体 • 凝集法：抗体 • 微孔板法和磁珠法：抗体、抗原 • 直接免疫荧光法：抗原--抗体 • 间接免疫荧光法 ：抗原--抗体--二抗
检测IgG抗体还是IgM抗体？
• IgM • IgG
潜伏期和IgM抗体出现
潜伏期 军团菌 4-10天 IgM抗体出现时间 4-7天
流
感
肺
炎
混
合
感
N=126
N=63
N=56
菌
N=40
N=62
体
菌
体
染
各病原体在CAP中感染率
病原菌 肺炎链球菌 肺炎支原体 流感嗜血杆菌 肺炎衣原体 军团菌 病毒类 混合感染（两种或以上） 其他及不明原因
a
感染率（%） 27 15 12 7 4.8 8.5 17 13
在养老院获得的肺炎
数据来源： 《各国社区获得性肺炎指南对非典型病原体的重视情况》 《肺炎的诊断与治疗研究进展》 《重视非典型病原体在CAP致病中的作用》 《要重视非典型病原体在小儿呼吸道疾病中的致病作用》等
Ø 快速准确的呼吸道联检试剂,对于呼吸道感染的病原学诊断, 有着重要的临床指导意 义。 -------呼吸道联检试剂在急性呼吸道感染诊断中的应用价值 河南省郑州市第五人民 医院呼吸内科(郑州450053) 王 敏 Ø MIF法(vircell)与颗粒凝集法和微量凝集法有高度的相关性 -------昆明地区小非典型肺炎病原体临床实验研究 昆明市儿童医院中心实验室 倪 林仙
------《用量子点标记技术检测肺炎支原体抗原》，中国医科大学基础医学院病原生物学教研室，何梦博，曾
晶晶，张晗，杨颖，赵之娜，王桂珍。发表于《中国卫生检验杂志》2012年2月第22卷第2期。 ------Sillis M． The limitation of IgM assays in the serological diagnosis of Mycoplasma pneumoniae infections［J］． J Med Microbiol，1990，33 ( 4) : 253 －258． ------Lind K，Hoier － Madsen M，Wiik A． Autoantibodies to the mitotic spindle apparatus in Mycoplasma pneumoniae disease［J］． Infect Im-mun，1988，56( 3) : 714 － 715．
呼吸道九联检
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------呼吸道九联检呼吸道病原体检测探讨1/ 42主要内容? 呼吸道感染的概况? 常见非典型病原体? 实验室检测方法学? 间接免疫荧光法—IgM抗体检测---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 呼吸道病原体感染概况?上呼吸道感染鼻腔、咽、喉部 ----- 常见病因病毒，少数为细菌；?下呼吸道感染(最常见的感染性疾患)气管、支气管、肺部----由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起。
以社区获得性肺炎(CAP)多见3/ 42呼吸道病原体感染概况一、典型“致病菌”细菌：肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌等症状：典型，咳嗽、脓性痰、胸膜炎性胸痛，一般都伴有发热，或有脓血痰病史：①悠久，古代的“瘟疫”很多细菌性肺炎②重症致死性肺炎很多是细菌性③上世纪50年代以前的肺炎90%以上为细菌性肺炎，现在报道约在40%左右④肺炎链球菌大约占在60%---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 呼吸道病原体感染概况二、非典型病原体非典型肺炎：泛指所有由某种未知的病原体引起的肺炎。
病原体可能是病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体或军团菌、真菌等1、20世纪60年代首次发现了非典型的病原体——肺炎支原体 2、临床症状差异大 3、在CAP中感染的比例逐年增加，据报道大约占4060%5/ 42（一）最常见的非典型病原体肺炎支原体、肺炎衣原体、军团菌和立克次体等①感染比例高，超过50% ②临床症状：干咳为主，少痰或无痰，肺外症状较常见明显，尤其军团菌感染，表现相对较重，多脏器受累明显。
呼吸道九联检-
至亚太地区的研究表明
肺炎链球菌是社区获得性呼吸道感染的常见致病菌 近年来随着检测手段的提高，非典型病原体亦是社区获得性呼吸道感染的 常见致病菌之一
我国CAP病原学构成-流调1
2003年11月-2005年3月份，595例，22个城市，33家医院
He Lixian,Beijie,et.al.2005.Unpublished data
在养老院获得的肺炎
数据来源： 《各国社区获得性肺炎指南对非典型病原体的重视情况》 《肺炎的诊断与治疗研究进展》 《重视非典型病原体在CAP致病中的作用》 《要重视非典型病原体在小儿呼吸道疾病中的致病作用》等
呼吸道病原菌合并感染的分析
More than one pathogen was identified in 27 (34%) patients in whom an etiological diagnosis was established. It is concluded that RTI is caused by a broad spectrumof etiological agents, a considerable number of patients having evidence of infection with more than one pathogen. :685–689 One or more viral agents were identified in 369 (45.9%) cases; of which 3.3% were mixed infections. -------Pediatric Infectious Disease Journal Single infections were noted in 48 (74%) whereas mixed infections occurred in 17 (26%) of 65 infected infants. pp. 322-329 -------PEDIATRICS Vol. 68 No. 3 September 1981, ------Eur J Clin Microbiol Infect Dis (1998) 17
肺炎链球菌是社区获得性呼吸道感染的常见致病菌 近年来随着检测手段的提高，非典型病原体亦是社区获得性呼吸道感染的 常见致病菌之一
我国CAP病原学构成-流调1
2003年11月-2005年3月份，595例，22个城市，33家医院
He Lixian,Beijie,et.al.2005.Unpublished data
在养老院获得的肺炎
数据来源： 《各国社区获得性肺炎指南对非典型病原体的重视情况》 《肺炎的诊断与治疗研究进展》 《重视非典型病原体在CAP致病中的作用》 《要重视非典型病原体在小儿呼吸道疾病中的致病作用》等
呼吸道病原菌合并感染的分析
More than one pathogen was identified in 27 (34%) patients in whom an etiological diagnosis was established. It is concluded that RTI is caused by a broad spectrumof etiological agents, a considerable number of patients having evidence of infection with more than one pathogen. :685–689 One or more viral agents were identified in 369 (45.9%) cases; of which 3.3% were mixed infections. -------Pediatric Infectious Disease Journal Single infections were noted in 48 (74%) whereas mixed infections occurred in 17 (26%) of 65 infected infants. pp. 322-329 -------PEDIATRICS Vol. 68 No. 3 September 1981, ------Eur J Clin Microbiol Infect Dis (1998) 17
呼吸道病原体检测PPT课件
呼吸道病原体
❖ 病毒，包括鼻病毒、冠病毒、呼吸道合胞病毒、 流感病毒、副流感病毒、腺病毒等
呼吸道病原体
❖ 支原体、衣原体感染导致的呼吸道感染与其它病 原体感染的早期临床表现类似。可能在2-3天后 咳嗽的病症会表现比较突出。在小于30岁的年轻 人中，肺炎支原体是最重要的下呼吸道病原体
非典型呼吸道病原体
试剂盒组成
组分 载玻片
成分和用途
检测的物理载体，覆有聚四氟乙烯并包被有针对 检测物的特异性抗原，
质控品
吸附剂 羊抗人IgG用来吸附人IgG避免干扰IgM 检测
FITC结合 荧光素标记的抗人免疫球蛋白结合物，和抗原抗 物 体复合物反应，并显色
封闭介质 甘油缓冲液，便于观察 磷酸盐缓 用于洗涤步骤，从反应介质中除去未结合的免疫 冲液(PBS) 球蛋白和结合物
❖ 检测抗体IgM比IgG更有临床意义
采样
抗原检测
❖拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入，不是向鼻 腔伸入。 伸入距离为从耳垂部到鼻尖长度的 一半，一般针对两周岁以下儿童，伸入距离约 为拭子绒毛头的长度两倍
❖拭子伸入后要轻轻捻动拭子转3圈。 取样后在 一小时之内洗脱到生理盐水中，12小时内送 检
抗原检测采样
下呼吸道感染
❖ 包括急性气管/支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、 支气管扩张等
❖ 由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生 物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及 时治疗的原那么，治疗时必须明确引起感染的病 原体以选择有效的抗生素
Hale Waihona Puke 呼吸道病原体❖ 常见的呼吸道病原体主要有病毒、细菌、支原体、 衣原体和立克次体等
❖ IgM ❖ IgG
❖ 机体产生IgM一般需要一周左右的时间，而有免 疫缺陷或免疫系统不健全的个体如儿童，特别是 3岁以下的小孩，其产生抗体往往需要更久，且 抗体产生的水平也较低
呼吸道九联检
肺炎衣原体
➢5-15岁青年易被感染，尤其是人群聚集处 ➢多起病缓慢，潜伏期30天左右 ➢临床多出现流感样的症状，发热一般低于38度，数天至数周后出现 持续性干咳，若不及时治疗会持续数月 ➢阳性率一般在1-3%左右 ➢治疗：大环内酯类红霉素、罗红霉素、阿奇霉素 大环内酯类抗生素①红霉素：衣原体肺炎的抗生素应首选红霉素。重 症或不能口服者，可静脉给药。②罗红霉素③阿奇霉素
《肺炎的诊断与治疗研究进展》《重视非典型病原体在CAP致病中的作用》
《要重视非典型病原体在小儿呼吸道疾病中的致病作用》等
精品课件
呼吸系统疾病死亡率排第四位 《2精0品1课3件年北京市卫生工作统计资料简编》
精品课件
儿童肺炎是全球儿童死亡第一病因
精品课件
常见的非典型病原体
嗜肺军团菌 肺炎支原体 Q热立克次体 肺炎衣原体
精品课件
国内发表的有关九联检的文章举例
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临床应用
2：其他科室 1 心内科 先天性心脏病常引起肺炎并迁延反复发作，呼吸道感染常诱发心肌
炎 2 呼吸道感染常诱发眼部疾病 3 脑外伤病人常并发呼吸道感染 4 很多鼻炎患者常并发呼吸道感染 5 肺炎支原体可引起支原体脑炎 6 风湿病患者可引起下呼吸道感染 7 肝胆外科术后常并发呼吸道感染 8 川崎病常伴随呼吸道感染，并易发心血管病变 9 老年糖尿病患者冬季易发呼吸道感染，并发展为肺部感染 10 血液病患者院内感染以呼吸道感染最为常见
抗原与抗体的标本保存
• 抗体—血清 • 抗原—宿主细胞
精品课件
抗原检测受药物和其他微生物的干扰
最新文献报道“从105份患者病历资料分析显示，肺部有明显病
理改变，有典型临床症状，但用药物(佩罗欣、其仙、明可欣等)治疗后， ··· ···出现阴性结果，说明药物干预后对抗原的检测有一定程度影响 。”
呼吸道九联检
病毒：如腺病毒、呼吸道合胞病毒等
寄生虫：如蛔虫、钩虫等
过敏原：如花粉、尘螨等
其他：如肿瘤标志物、激素等
检测方法
采集样本：采集患者呼吸道分泌物，如痰液、鼻咽拭子等
检测项目：检测呼吸道常见病原体，如流感病毒、肺炎支原体等
检测方法：采用PCR技术，快速、准确检测病原体
结果分析：根据检测结果，为患者提供个性化治疗方案
01
03
02
04
检测意义
呼吸道九联检是一种快速、准确的呼吸道疾病检测方法
检测结果可以帮助医生快速诊断呼吸道疾病，制定治疗方案
检测结果可以帮助患者了解自己的健康状况，及时采取预防措施
检测结果可以帮助公共卫生部门了解呼吸道疾病的流行趋势，制定预防和控制措施
2
呼吸道疾病诊断
3
2
4
1
呼吸道九联检：检测呼吸道疾病的一种方法
04
呼吸道九联检在公共卫生监测中的应用
市场前景
市场需求：随着人们对健康意识的提高，呼吸道九联检的市场需求将不断增加
政策支持：政府对医疗行业的支持力度加大，有利于呼吸道九联检的发展
技术进步：随着科技的发展，呼吸道九联检的技术将更加先进，检测结果更加准确
市场竞争：随着市场竞争的加剧，呼吸道九联检需要不断创新，提高产品质量和品牌影响力
结果解读：根据检测结果，及时采取相应措施，如就医、隔离等
检测结果解读
阴性结果：表示没有呼吸道感染，但需要注意其他疾病
02
临界值：表示检测结果可能存在误差，需要进一步检查和确认
03
阳性结果：表示存在呼吸道感染，需要进一步检查和治疗
01
检测结果与实际病情不符：可能存在其他原因，需要进一步检查和治疗
九联检结果判断课件 (1)
乙型流感病毒（阳性）
注： 荧光数量多，且荧光亮度 强，报为阳性。（进口显微 镜下观察：平均每个视野的 阳性细胞>3-5个）
副流感病毒（阴性）
注： 荧光数量很少，且荧光亮度 弱，报为阴性。
副流感病毒（弱阳性）
注： 荧光数量符合要求，且荧光 亮度偏弱，报为弱阳性。 （进口显微镜下观察：平均 每个视野的阳性细胞>3-5个）
呼吸道合胞病毒（阴性）
注： 荧光数量很少，且荧光亮度 很弱，报为阴性。
呼吸道合胞病毒（弱阳性）
注： 荧光数量较少，且荧光亮度 较好，报为弱阳性。但是鉴 于合胞病毒阳性在临床上接受 程度较高，特别是婴儿感染 率较多，可以选择报阳性 （进口显微镜下观察：平均每个视 野的阳性细胞>3-5个）
呼吸道合胞病毒（阳性）
的项目报告结果，如果肺支和其中病毒孔都比较明显，可以选择肺支与 病毒（一项）进行结果报告
肺炎衣原体（弱阳性）
注： 荧光数量较多，荧光亮度一 般，可以选择报为弱阳性， 如果医院不接受弱阳性结 果，可以直接报为阳性
肺炎衣原体（阳性）
注： 荧光数量多，且荧光亮度 强，报为阳性。
腺病毒（阴性）
注： 荧光数量很少，且荧光亮度 弱，报为阴性。或全部都是 红色细胞，未见细胞外围或 胞浆有荧光，排除洗板原因 存在的一些杂质荧光，报阴 性
甲型流感病毒（阳性）
注： 荧光数量多，且荧光亮度 强，报为阳性。（进口显微 镜下观察：平均每个视野的 阳性细胞>3-5个）
乙型流感病毒（阴性）
注： 荧光数量很少，且荧光亮度 弱，报为阴性。
乙型流感病毒（弱阳性）
注： 荧光数量符合要求，且荧光 亮度稍弱，报为弱阳性。如 果临床上接受程度较高，可 以直接报为阳性 （进口显微镜下观察：平均 每个视野的阳性细胞>3-5个）
呼吸道九联检病原体检测及其临床意义讲课文档
现在二十页，总共六十六页。
抗原检测的劣势
采样对结果影响较大 非典型感染多为干咳，无痰/少痰 阳性率低（标本问题，病毒颗粒小） 抗原在体内存在时间短
现在二十一页，总共六十六页。
抗体检测
采样
现在二十二页，总共六十六页。
检测样本要求 本试剂盒仅适用于检测人血清。其血液采集需由专业
人员无菌静脉穿刺采集。建议使用消毒或无菌技术，以保 持样本的完整性。血清样本采集后如不在8小时内检测应 2～8 ºC冷藏，如7天内不检测，则应冷冻（-20ºC）保存。 不要反复冻融以防止免疫球蛋白滴度降低，特别是IgM。不 要使用高血脂或污染的血清。若样本中含有微粒要离心使 之澄清。
菌、卡他莫拉菌等 症状：典型，咳嗽、脓性痰、胸膜炎性胸痛，一般都
伴有发热，或有脓血痰 病史：①悠久，古代的“瘟疫”很多细菌性肺炎
②重症致死性肺炎很多是细菌性
③上世纪50年代以前的肺炎90%以上为细 菌性肺炎，现在报道约在40%左右
④肺炎链球菌大约占在60%
现在六页，总共六十六页。
呼吸道病原体感染概况
各病原体在CAP中感染率
病原菌 肺炎链球菌 肺炎支原体 流感嗜血杆菌 肺炎衣原体
军团菌 病毒类 混合感染（两种或以上） 其他及不明原因
感染率（%） 27 15 12 7 4.8 8.5 17 13
ห้องสมุดไป่ตู้
数据来源： 《各国社区获得性肺炎指南对非典型病原体的重视情况》
《肺炎的诊断与治疗研究进展》《重视非典型病原体在CAP致病中的作用》 《要重视非典型病原体在小儿呼吸道疾病中的致病作用》等
操作繁琐，价格昂贵
采样
抗原检测
拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入，不是向鼻 腔伸入。 伸入距离为从耳垂部到鼻尖长度的一 半，一般针对两周岁以下儿童，伸入距离约为 拭子绒毛头的长度两倍
抗原检测的劣势
采样对结果影响较大 非典型感染多为干咳，无痰/少痰 阳性率低（标本问题，病毒颗粒小） 抗原在体内存在时间短
现在二十一页，总共六十六页。
抗体检测
采样
现在二十二页，总共六十六页。
检测样本要求 本试剂盒仅适用于检测人血清。其血液采集需由专业
人员无菌静脉穿刺采集。建议使用消毒或无菌技术，以保 持样本的完整性。血清样本采集后如不在8小时内检测应 2～8 ºC冷藏，如7天内不检测，则应冷冻（-20ºC）保存。 不要反复冻融以防止免疫球蛋白滴度降低，特别是IgM。不 要使用高血脂或污染的血清。若样本中含有微粒要离心使 之澄清。
菌、卡他莫拉菌等 症状：典型，咳嗽、脓性痰、胸膜炎性胸痛，一般都
伴有发热，或有脓血痰 病史：①悠久，古代的“瘟疫”很多细菌性肺炎
②重症致死性肺炎很多是细菌性
③上世纪50年代以前的肺炎90%以上为细 菌性肺炎，现在报道约在40%左右
④肺炎链球菌大约占在60%
现在六页，总共六十六页。
呼吸道病原体感染概况
各病原体在CAP中感染率
病原菌 肺炎链球菌 肺炎支原体 流感嗜血杆菌 肺炎衣原体
军团菌 病毒类 混合感染（两种或以上） 其他及不明原因
感染率（%） 27 15 12 7 4.8 8.5 17 13
ห้องสมุดไป่ตู้
数据来源： 《各国社区获得性肺炎指南对非典型病原体的重视情况》
《肺炎的诊断与治疗研究进展》《重视非典型病原体在CAP致病中的作用》 《要重视非典型病原体在小儿呼吸道疾病中的致病作用》等
操作繁琐，价格昂贵
采样
抗原检测
拭子伸入鼻部后向鼻咽部水平伸入，不是向鼻 腔伸入。 伸入距离为从耳垂部到鼻尖长度的一 半，一般针对两周岁以下儿童，伸入距离约为 拭子绒毛头的长度两倍
呼吸道九联检-ppt课件
对肾病综合征患者的随访结果表明：不论活动期、缓解期或停药2年， 均有IgG明显降低和IgM明显升高。 —《肾病综合征缓则低IgG血症原因的探讨 》
特殊人群--肿瘤和呼吸道感染
九项呼吸道病原体IgM抗体检测试剂
产品简介
西班牙VIRCELL公司：成立于1991年。专业从事呼吸道 病原体检测试剂盒的研发和生产。 西班牙VIRCELL公司研发生产的九项呼吸道感染病原体 IgM抗体检测试剂盒涵盖了以上所有最常见的非典型呼吸 道病原体；联合检测，避免漏检，特别是避免混合感染的 漏检。
至2012年国内已有超过200家的大型三甲医院、CDC在开 展、使用。
载玻片 1、独特的载片包被工艺，视野清晰，显色持久
2、一人一片，专人专用 3、一片九项
载玻片
包被有下列抗原： 1. 嗜肺军团菌血清1型（悬浮于0.5%正常鸡卵黄囊中以增强抗原吸附性和避免细菌聚 集） 2. McCoy细胞中的肺炎支原体 3. Q热立克次体II期（悬浮于0.5%正常鸡卵黄囊中以增强抗原吸附性和避免细菌聚集） 4. 肺炎衣原体（原生小体） 5. HEp-2细胞中的腺病毒 6. HEp-2细胞中的呼吸道合胞病毒 7. LLC-MK2细胞中的甲型流感病毒 8. LLC-MK2细胞中的乙型流感病毒 9. LLC-MK2细胞中副流感病毒1、2和3型 10. 质控
在养老院获得的肺炎
数据来源： 《各国社区获得性肺炎指南对非典型病原体的重视情况》 《肺炎的诊断与治疗研究进展》 《重视非典型病原体在CAP致病中的作用》 《要重视非典型病原体在小儿呼吸道疾病中的致病作用》等
呼吸道病原菌合并感染的分析
More than one pathogen was identified in 27 (34%) patients in whom an etiological diagnosis was established. It is concluded that RTI is caused by a broad spectrumof etiological agents, a considerable number of patients having evidence of infection with more than one pathogen. :685–689 One or more viral agents were identified in 369 (45.9%) cases; of which 3.3% were mixed infections. -------Pediatric Infectious Disease Journal Single infections were noted in 48 (74%) whereas mixed infections occurred in 17 (26%) of 65 infected infants. pp. 322-329 -------PEDIATRICS Vol. 68 No. 3 September 1981, ------Eur J Clin Microbiol Infect Dis (1998) 17ຫໍສະໝຸດ （一）最常见的非典型病原体
呼吸道感染病原体抗体检测及应用PPT课件
西班牙VIECELL公司出品 安图代理
8
1.检测样本要求 本试剂盒仅适用于检测人血清。其血液采集需由 专业人员无菌静脉穿刺采集。建议使用消毒或无菌技 术，以保持样本的完整性。血清样本采集后如不在8小 时内检测应2～8 ºC冷藏，如7天内不检测，则应冷冻 （-20ºC）保存。不要反复冻融以防止免疫球蛋白滴度 降低，特别是IgM。不要使用高血脂或污染的血清。若 样本中含有微粒要离心使之澄清。
13
2）阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克 次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、 呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。
14
6.注意事项 1）每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试 验和试剂盒的有效性。观察到的荧光模式应与说明书 要求相符合，否则检验无效。 2）洗涤时注意不要直接对着孔直接冲洗，以免冲洗 掉已经固化反的应复合物。 3）单一样本抗体检测结果不能帮助作出近期感染的 诊断。应采集双份样本（急性期和康复期）同时检测 来观察血清转化或抗体水平的明显升高。 4）载玻片上病人样本交叉污染会导致错误结果，要 小心操作防止发生。 5） 吸附剂加入样本后要注意观察是否有明显的沉 淀出现。
混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）
12
5.结果判读 1）阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸 道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细 胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光（在副流感病毒 和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军 团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿 色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色 荧光。
15
谢谢！
16
呼吸道感染病原体抗体 检测及应用
1
一、呼吸道感概述
二、九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测
8
1.检测样本要求 本试剂盒仅适用于检测人血清。其血液采集需由 专业人员无菌静脉穿刺采集。建议使用消毒或无菌技 术，以保持样本的完整性。血清样本采集后如不在8小 时内检测应2～8 ºC冷藏，如7天内不检测，则应冷冻 （-20ºC）保存。不要反复冻融以防止免疫球蛋白滴度 降低，特别是IgM。不要使用高血脂或污染的血清。若 样本中含有微粒要离心使之澄清。
13
2）阴性结果：可观察到军团菌、肺炎衣原体和立克 次体无荧光，支原体、腺病毒、甲型和乙型流感病毒、 呼吸道合胞病毒和副流感病毒的细胞呈现红色。
14
6.注意事项 1）每一次试验都应设立阳性和阴性对照，以确认试 验和试剂盒的有效性。观察到的荧光模式应与说明书 要求相符合，否则检验无效。 2）洗涤时注意不要直接对着孔直接冲洗，以免冲洗 掉已经固化反的应复合物。 3）单一样本抗体检测结果不能帮助作出近期感染的 诊断。应采集双份样本（急性期和康复期）同时检测 来观察血清转化或抗体水平的明显升高。 4）载玻片上病人样本交叉污染会导致错误结果，要 小心操作防止发生。 5） 吸附剂加入样本后要注意观察是否有明显的沉 淀出现。
混合荧光模式（细胞核和胞浆或胞膜）
12
5.结果判读 1）阳性结果：可以观察到腺病毒、流感病毒、呼吸 道合胞病毒或副流感病毒对阳性血清的1-15%细胞的细 胞核、胞浆或胞膜出现苹果绿色荧光（在副流感病毒 和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着色的合胞）；军 团菌、衣原体或立克次体中所有的细菌呈现出苹果绿 色荧光；支原体对阳性血清在细胞外围呈现苹果绿色 荧光。
15
谢谢！
16
呼吸道感染病原体抗体 检测及应用
1
一、呼吸道感概述
二、九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测
呼吸道九联检-
①除组织胞浆菌为原发吸入性感染外，多数为条件致病 ②多发生在免疫低下患者和长时间接受广谱抗生素治疗的患者
白色念珠菌肺炎
各病原体在CAP中感染率
病原菌 肺炎链球菌 肺炎支原体 流感嗜血杆菌 肺炎衣原体 军团菌 病毒类 混合感染（两种或以上） 其他及不明原因
a
感染率（%） 27 15 12 7 4.8 8.5 17 13
对肾病综合征患者的随访结果表明：不论活动期、缓解期或停药2年， 均有IgG明显降低和IgM明显升高。 —《肾病综合征缓则低IgG血症原因的探讨 》
特殊人群--肿瘤和呼吸道感染
九项呼吸道病原体IgM抗体检测试剂
产品简介
西班牙 VIRCELL 公司：成立于 1991 年。专业从事呼吸道 病原体检测试剂盒的研发和生产。 西班牙 VIRCELL 公司研发生产的九项呼吸道感染病原体 IgM抗体检测试剂盒涵盖了以上所有最常见的非典型呼吸 道病原体；联合检测，避免漏检，特别是避免混合感染的 漏检。
一项来至亚太地区的研究表明
肺炎链球菌是社区获得性呼吸道感染的常见致病菌 近年来随着检测手段的提高，非典型病原体亦是社区获得性呼吸道感染的 常见致病菌之一
我国CAP病原学构成-流调1
2003年11月-2005年3月份，595例，22个城市，33家医院
He Lixian,Beijie,et.al.2005.Unpublished data
载玻片 1、独特的载片包被工艺，视野清晰，显色持久
2、一人一片，专人专用 3、一片九项
载玻片
包被有下列抗原： 1. 嗜肺军团菌血清1型（悬浮于0.5%正常鸡卵黄囊中以增强抗原吸附性和避免细菌聚 集） 2. McCoy细胞中的肺炎支原体 3. Q热立克次体II期（悬浮于0.5%正常鸡卵黄囊中以增强抗原吸附性和避免细菌聚集） 4. 肺炎衣原体（原生小体） 5. HEp-2细胞中的腺病毒 6. HEp-2细胞中的呼吸道合胞病毒 7. LLC-MK2细胞中的甲型流感病毒 8. LLC-MK2细胞中的乙型流感病毒 9. LLC-MK2细胞中副流感病毒1、2和3型 10. 质控
白色念珠菌肺炎
各病原体在CAP中感染率
病原菌 肺炎链球菌 肺炎支原体 流感嗜血杆菌 肺炎衣原体 军团菌 病毒类 混合感染（两种或以上） 其他及不明原因
a
感染率（%） 27 15 12 7 4.8 8.5 17 13
对肾病综合征患者的随访结果表明：不论活动期、缓解期或停药2年， 均有IgG明显降低和IgM明显升高。 —《肾病综合征缓则低IgG血症原因的探讨 》
特殊人群--肿瘤和呼吸道感染
九项呼吸道病原体IgM抗体检测试剂
产品简介
西班牙 VIRCELL 公司：成立于 1991 年。专业从事呼吸道 病原体检测试剂盒的研发和生产。 西班牙 VIRCELL 公司研发生产的九项呼吸道感染病原体 IgM抗体检测试剂盒涵盖了以上所有最常见的非典型呼吸 道病原体；联合检测，避免漏检，特别是避免混合感染的 漏检。
一项来至亚太地区的研究表明
肺炎链球菌是社区获得性呼吸道感染的常见致病菌 近年来随着检测手段的提高，非典型病原体亦是社区获得性呼吸道感染的 常见致病菌之一
我国CAP病原学构成-流调1
2003年11月-2005年3月份，595例，22个城市，33家医院
He Lixian,Beijie,et.al.2005.Unpublished data
载玻片 1、独特的载片包被工艺，视野清晰，显色持久
2、一人一片，专人专用 3、一片九项
载玻片
包被有下列抗原： 1. 嗜肺军团菌血清1型（悬浮于0.5%正常鸡卵黄囊中以增强抗原吸附性和避免细菌聚 集） 2. McCoy细胞中的肺炎支原体 3. Q热立克次体II期（悬浮于0.5%正常鸡卵黄囊中以增强抗原吸附性和避免细菌聚集） 4. 肺炎衣原体（原生小体） 5. HEp-2细胞中的腺病毒 6. HEp-2细胞中的呼吸道合胞病毒 7. LLC-MK2细胞中的甲型流感病毒 8. LLC-MK2细胞中的乙型流感病毒 9. LLC-MK2细胞中副流感病毒1、2和3型 10. 质控
呼吸道九联检
------Sillis M． The limitation of IgM assays in the serological diagnosis of Mycoplasma pneumoniae infections［J］． J Med
Microbiol，1990，33 ( 4) : 253 －258．
腺病毒 呼吸道合胞病毒 流感病毒(甲型、乙型)
副流感病毒
第十六页，编辑于星期六：一点 十一分。
嗜肺军团菌
➢ 广泛分布于天然淡水域或人工水域，空调冷凝水，革兰氏阴性短
小杆菌。 其中1 型在人军团菌肺炎中占70% ~ 90%。 ➢易感人群为老年人、吸烟者、慢性肺部患者、免疫功能低下、癌症病
人、肾透析病人和艾滋病人。
------Lind K，Hoier － Madsen M，Wiik A． Autoantibodies to the mitotic spindle apparatus in Mycoplasma pneumoniae
disease［J］． Infect Im-mun，1988，56( 3) : 714 － 715．
➢大部分病例发于春天或初夏，流行分布全世界
➢节肢动物如蜱，虱、蚤、螨和家畜类羊、牛是主要传染源，宠
物和屠宰场。
➢多见于男性青壮年，潜伏期12～39天，平均18天 ➢多急骤起病，发热、头痛、寒颤，肌痛、胸痛，体温可升至 40℃持续1～3周 少数患者有关节痛和胃肠道、 呼吸道症状, 以及肝脏和 中枢神经系统症状，可见血小板减少，白细胞减少，贫血以及肝 脏天冬氨酸氨基转移酶水平升高 ➢治疗：氯霉素、四环素、强力霉素效果突出
4-7天 1-7天 2-7天 2-7天
第三十二页，编辑于星期六：一点 十一分。
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菌性肺炎，现在报道约在40%左右 ④肺炎链球菌大约呼吸占道九联在检 60%
呼吸道病原体感染概况
二、非典型病原体
非典型肺炎：泛指所有由某种未知的病原体引起 的肺炎。病原体可能是病毒、肺炎支原体、肺炎 衣原体或军团菌、真菌等
1、20世纪60年代首次发现了非典型的病原体— —肺炎支原体
2、临床症状差异大
9.2%
6.6%
10.2%
0% 肺炎支原N体=126
肺炎链球菌N=63 流感嗜血杆菌N=56
肺炎衣原体N=40
混合感染N=62
7个城市、12个研究中心、665例
刘又宁等．中华结核和呼吸杂志呼，吸2道006九;2联9(检l):3-8.
各病原体在CAP中感染率
病原菌 肺炎链球菌
感染率（%） 27
肺炎支原体
➢ 广泛分布于天然淡水域或人工水域，空调冷凝水，革兰氏 阴性短小杆菌。 其中1 型在人军团菌肺炎中占70% ~ 90%。
➢易感人群为老年人、吸烟者、慢性肺部患者、免疫功能低下 、癌症病人、肾透析病人和艾滋病人。
➢症状表现为：发冷、不适、肌痛、头晕、头痛，伴有烦躁、 呼吸困难、胸痛。９０％以上患者体温急剧上升，咳嗽、粘痰 ，偶尔出现腹泻呕吐胃肠道紊乱，重症患者可发生肝功能变化 及肾衰
➢治疗：大环内酯类如阿奇霉素 红霉素
呼吸道九联检
肺炎支原体
➢介于病毒与细菌之间一种没有细胞壁的病原体； ➢40%以上的非典型肺炎病例是由肺炎支原体引起的； ➢ MP好发于 1岁以上年长儿，近年来发病年龄明显 提前，发病率也有所增加，婴幼儿发病也逐渐 增多。 ➢病原菌培养是目前公认的检测标准，IgM抗体检测 ➢治疗：大环内酯类首选、喹诺酮类药物。
呼吸道九联检
腺病毒
➢无外壳的双链DNA病毒，与人类呼吸道感染密切有关 ➢多发生于2～48月婴幼，冬春两季常见 ➢约占病毒性肺炎的20%～30%，居第二位 ➢潜伏期3～8天，急骤发热，自第1～2日即39℃以上的高热， 第3～4日呈不规则的高热；60%以上的病例体温超过40℃ ➢在呼吸、神经、循环、消化等系统都有症状显现 ➢治疗：西多福韦等抗病毒药物或中药疗法
肺炎衣原体
➢5-15岁青年易被感染，尤其是人群聚集处 ➢多起病缓慢，潜伏期30天左右 ➢临床多出现流感样的症状，发热一般低于38度，数天至数周后出现 持续性干咳，若不及时治疗会持续数月 ➢阳性率一般在1-3%左右 ➢治疗：大环内酯类红霉素、罗红霉素、阿奇霉素 大环内酯类抗生素①红霉素：衣原体肺炎的抗生素应首选红霉素。重 症或不能口服者，可静脉给药。②罗红霉素③阿奇霉素
呼吸道九联检
（二）病毒类
流感病毒、副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病 毒、冠状病毒、禽流感病毒等
①季节性或区域性流行 ②临床症状：干咳为主，少痰或无痰、呼吸困难，
低氧血症
呼吸道九联检
（三）真菌性肺炎
念珠菌，曲菌，新型隐球菌，放线菌，组织胞浆菌，毛 霉菌属等
①多数为条件致病 ②多发生在免疫低下患者和长时间接受广谱抗
呼吸道九联检
呼吸系统疾病死亡率排第四位 《呼2吸0道1九3联年检 北京市卫生工作统计资料简编》
呼吸道九联检
儿童肺炎是全球儿童死亡第一病因
呼吸道九联检
常见的非典型病原体
嗜肺军团菌 肺炎支原体 Q热立克次体 肺炎衣原体
腺病毒 呼吸道合胞病毒 流感病毒(甲型、乙型) 副流感病毒
呼吸道九联检
嗜肺军团菌
呼吸道病原体检测探讨
呼吸道九联检
主要内容
• 呼吸道感染的概况 • 常见非典型病原体 • 实验室检测方法学 • 间接免疫荧光法—IgM抗体检测
呼吸道九联检
呼吸道病原体感染概况
➢上呼吸道感染
鼻腔、咽、喉部 ----- 常见病因病毒，少数为细菌 ；
➢下呼吸道感染(最常见的感染性疾患)
气管、支气管、肺部----由病毒、细菌、支原体、 衣原体、军团菌等微生物引起。
15
流感嗜血杆菌
12
肺炎衣原体
7
军团菌
4.8
病毒类
8.5
混合感染（两种或以上）
17
其他及不明原因
13
a 在养老院获得的肺炎
数据来源：
《各国社区获得性肺炎指南对非典型病原体的重视情况》
《肺炎的诊断与治疗研究进展》《重视非典型病原体在CAP致病中的作用》
《要重视非典型病原体在小儿呼吸道疾病中的致病作用》等
共计610例患者有病原学证据可供评价，其中细菌/非典型病原体致感染患者采 用常规方法检测病原体，混合感染和化脓性肺炎患者具有血清学诊断证据
呼吸道九联检
国内CAP流行病学
---非典型性肺炎应引起足够重视
阳性率(%)
40% 30% 20% 10%
肺炎链球菌和非典型病原体为主要致病菌
20.7%
10.3%
以社区获得性肺炎(CAP)多见
呼吸道九联检
呼吸道病原体感染概况
一、典型“致病菌” 细菌：肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜 血杆菌、卡他莫拉菌等 症状：典型，咳嗽、脓性痰、胸膜炎性胸痛， 一般都伴有发热，或有脓血痰
病史：①悠久，古代的“瘟疫”很多细菌性肺炎 ②重症致死性肺炎很多是细菌性 ③上世纪50年代以前的肺炎90%以上为细
3、在CAP中感染的比例逐年增加，据报道大约
占4原体、肺炎衣原体、军团菌和立克次体等 ①感染比例高，超过50% ②临床症状：干咳为主，少痰或无痰，肺外症状
较常见明显，尤其军团菌感染，表现相对较重， 多脏器受累明显。可有高热、耳鸣、相对缓脉、 血尿、腹痛、腹泻、肝酶升高、电解质紊乱、精 神神经症状等 ③β-内酰胺类 （青霉素类、头孢类）等药物无效
生素治疗的患者
白色念珠菌肺炎
呼吸道九联检
各病原体感染率
一项来至亚太地区的研究表明 Ø 肺炎链球菌是社区获得性呼吸道感染的常见致病菌 Ø 近年来随着检测手段的提高，非典型病原体亦是社区获得性呼吸道感染的
常见致病菌之一
呼吸道九联检
欧洲一项回顾性评价1511例CAP患者病原学 研究结果（1996-2001）
呼吸道九联检
Q热立克次体
➢介于最小细菌和病毒之间一类的细胞内寄生原核细胞型微生 物 ➢大部分病例发于春天或初夏，流行分布全世界 ➢节肢动物如蜱，虱、蚤、螨和家畜类羊、牛是主要传染源， 宠物和屠宰场。 ➢多见于男性青壮年，潜伏期12～39天，平均18天 ➢多急骤起病，发热、头痛、寒颤，肌痛、胸痛，体温可升至 40℃持续1～3周 少数患者有关节痛和胃肠道、 呼吸道症状, 以及肝脏和中枢神经系统症状，可见血小板减少，白细胞减少， 贫血以及肝脏天冬氨酸氨基转移酶水平升高 ➢治疗：氯霉素、四环素、强呼力吸道霉九素联检效果突出
呼吸道病原体感染概况
二、非典型病原体
非典型肺炎：泛指所有由某种未知的病原体引起 的肺炎。病原体可能是病毒、肺炎支原体、肺炎 衣原体或军团菌、真菌等
1、20世纪60年代首次发现了非典型的病原体— —肺炎支原体
2、临床症状差异大
9.2%
6.6%
10.2%
0% 肺炎支原N体=126
肺炎链球菌N=63 流感嗜血杆菌N=56
肺炎衣原体N=40
混合感染N=62
7个城市、12个研究中心、665例
刘又宁等．中华结核和呼吸杂志呼，吸2道006九;2联9(检l):3-8.
各病原体在CAP中感染率
病原菌 肺炎链球菌
感染率（%） 27
肺炎支原体
➢ 广泛分布于天然淡水域或人工水域，空调冷凝水，革兰氏 阴性短小杆菌。 其中1 型在人军团菌肺炎中占70% ~ 90%。
➢易感人群为老年人、吸烟者、慢性肺部患者、免疫功能低下 、癌症病人、肾透析病人和艾滋病人。
➢症状表现为：发冷、不适、肌痛、头晕、头痛，伴有烦躁、 呼吸困难、胸痛。９０％以上患者体温急剧上升，咳嗽、粘痰 ，偶尔出现腹泻呕吐胃肠道紊乱，重症患者可发生肝功能变化 及肾衰
➢治疗：大环内酯类如阿奇霉素 红霉素
呼吸道九联检
肺炎支原体
➢介于病毒与细菌之间一种没有细胞壁的病原体； ➢40%以上的非典型肺炎病例是由肺炎支原体引起的； ➢ MP好发于 1岁以上年长儿，近年来发病年龄明显 提前，发病率也有所增加，婴幼儿发病也逐渐 增多。 ➢病原菌培养是目前公认的检测标准，IgM抗体检测 ➢治疗：大环内酯类首选、喹诺酮类药物。
呼吸道九联检
腺病毒
➢无外壳的双链DNA病毒，与人类呼吸道感染密切有关 ➢多发生于2～48月婴幼，冬春两季常见 ➢约占病毒性肺炎的20%～30%，居第二位 ➢潜伏期3～8天，急骤发热，自第1～2日即39℃以上的高热， 第3～4日呈不规则的高热；60%以上的病例体温超过40℃ ➢在呼吸、神经、循环、消化等系统都有症状显现 ➢治疗：西多福韦等抗病毒药物或中药疗法
肺炎衣原体
➢5-15岁青年易被感染，尤其是人群聚集处 ➢多起病缓慢，潜伏期30天左右 ➢临床多出现流感样的症状，发热一般低于38度，数天至数周后出现 持续性干咳，若不及时治疗会持续数月 ➢阳性率一般在1-3%左右 ➢治疗：大环内酯类红霉素、罗红霉素、阿奇霉素 大环内酯类抗生素①红霉素：衣原体肺炎的抗生素应首选红霉素。重 症或不能口服者，可静脉给药。②罗红霉素③阿奇霉素
呼吸道九联检
（二）病毒类
流感病毒、副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病 毒、冠状病毒、禽流感病毒等
①季节性或区域性流行 ②临床症状：干咳为主，少痰或无痰、呼吸困难，
低氧血症
呼吸道九联检
（三）真菌性肺炎
念珠菌，曲菌，新型隐球菌，放线菌，组织胞浆菌，毛 霉菌属等
①多数为条件致病 ②多发生在免疫低下患者和长时间接受广谱抗
呼吸道九联检
呼吸系统疾病死亡率排第四位 《呼2吸0道1九3联年检 北京市卫生工作统计资料简编》
呼吸道九联检
儿童肺炎是全球儿童死亡第一病因
呼吸道九联检
常见的非典型病原体
嗜肺军团菌 肺炎支原体 Q热立克次体 肺炎衣原体
腺病毒 呼吸道合胞病毒 流感病毒(甲型、乙型) 副流感病毒
呼吸道九联检
嗜肺军团菌
呼吸道病原体检测探讨
呼吸道九联检
主要内容
• 呼吸道感染的概况 • 常见非典型病原体 • 实验室检测方法学 • 间接免疫荧光法—IgM抗体检测
呼吸道九联检
呼吸道病原体感染概况
➢上呼吸道感染
鼻腔、咽、喉部 ----- 常见病因病毒，少数为细菌 ；
➢下呼吸道感染(最常见的感染性疾患)
气管、支气管、肺部----由病毒、细菌、支原体、 衣原体、军团菌等微生物引起。
15
流感嗜血杆菌
12
肺炎衣原体
7
军团菌
4.8
病毒类
8.5
混合感染（两种或以上）
17
其他及不明原因
13
a 在养老院获得的肺炎
数据来源：
《各国社区获得性肺炎指南对非典型病原体的重视情况》
《肺炎的诊断与治疗研究进展》《重视非典型病原体在CAP致病中的作用》
《要重视非典型病原体在小儿呼吸道疾病中的致病作用》等
共计610例患者有病原学证据可供评价，其中细菌/非典型病原体致感染患者采 用常规方法检测病原体，混合感染和化脓性肺炎患者具有血清学诊断证据
呼吸道九联检
国内CAP流行病学
---非典型性肺炎应引起足够重视
阳性率(%)
40% 30% 20% 10%
肺炎链球菌和非典型病原体为主要致病菌
20.7%
10.3%
以社区获得性肺炎(CAP)多见
呼吸道九联检
呼吸道病原体感染概况
一、典型“致病菌” 细菌：肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜 血杆菌、卡他莫拉菌等 症状：典型，咳嗽、脓性痰、胸膜炎性胸痛， 一般都伴有发热，或有脓血痰
病史：①悠久，古代的“瘟疫”很多细菌性肺炎 ②重症致死性肺炎很多是细菌性 ③上世纪50年代以前的肺炎90%以上为细
3、在CAP中感染的比例逐年增加，据报道大约
占4原体、肺炎衣原体、军团菌和立克次体等 ①感染比例高，超过50% ②临床症状：干咳为主，少痰或无痰，肺外症状
较常见明显，尤其军团菌感染，表现相对较重， 多脏器受累明显。可有高热、耳鸣、相对缓脉、 血尿、腹痛、腹泻、肝酶升高、电解质紊乱、精 神神经症状等 ③β-内酰胺类 （青霉素类、头孢类）等药物无效
生素治疗的患者
白色念珠菌肺炎
呼吸道九联检
各病原体感染率
一项来至亚太地区的研究表明 Ø 肺炎链球菌是社区获得性呼吸道感染的常见致病菌 Ø 近年来随着检测手段的提高，非典型病原体亦是社区获得性呼吸道感染的
常见致病菌之一
呼吸道九联检
欧洲一项回顾性评价1511例CAP患者病原学 研究结果（1996-2001）
呼吸道九联检
Q热立克次体
➢介于最小细菌和病毒之间一类的细胞内寄生原核细胞型微生 物 ➢大部分病例发于春天或初夏，流行分布全世界 ➢节肢动物如蜱，虱、蚤、螨和家畜类羊、牛是主要传染源， 宠物和屠宰场。 ➢多见于男性青壮年，潜伏期12～39天，平均18天 ➢多急骤起病，发热、头痛、寒颤，肌痛、胸痛，体温可升至 40℃持续1～3周 少数患者有关节痛和胃肠道、 呼吸道症状, 以及肝脏和中枢神经系统症状，可见血小板减少，白细胞减少， 贫血以及肝脏天冬氨酸氨基转移酶水平升高 ➢治疗：氯霉素、四环素、强呼力吸道霉九素联检效果突出