实验设计：卵清蛋白

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刺激性、过敏性和溶血性试验的方案设计与实施

被动致敏：上述各组抗血清应根据反应特点决定稀释倍数，一般用生理盐水稀释成1：2、1：4、1：8、1：16或1：32等。在动物背部预先脱毛3×4cm2的皮内注射各对应组的抗血清0.1mL，进行被动致敏。
被动皮肤过敏实验
实验方法：
➢ 激发：被动致敏24或48小时后，各组静脉注射与致敏剂量相同的激发抗原加等量的0.5-1%伊文思兰染料共1mL，进行激发。
皮肤刺激性实验
表 1.皮肤刺激反应评分标准
皮肤刺激性实验
结果评价：
单次给药：计算每一观察时间点各组受试物及赋形剂皮肤反应积分的平均分值，按表2进行刺激强度评价；
多次给药：首先计算每一观察时间点各组积分值，然后计算观察期限内每天每只动物积分均值，按表2进行刺激强度评价；
皮肤刺激性实验
实验动物：成年白色豚鼠，雌雄各半，每组动物数至少6只。实验方法： ➢ 实验分组：应设阴性、阳性对照组和受试物不同剂量组。阴性对
照组应给予赋形剂或溶媒，阳性对照组给予8-甲氧基补骨脂素，受试物低剂量组给予临床用药浓度，高剂量组给予不引起皮肤刺激反应的浓度 ➢ UV光源：波长为320-400nm的UVA，用前需用辐射计量仪在实验动物背部照射区设6个点测定光强度（mw/cm2)，以平均值计。照射剂
溶血性实验
实验方法：
➢ 受试物的制备：用于血管内给药的注射剂以使用说明书规定的临床使用浓度作
为供试品溶液；临床用于非血管内途径给药的注射剂，以各药品使用说明书规
定的临床使用浓度，用0.9%氯化钠溶液1∶3稀释后作为供试品溶液。
溶血性实验
实验方法：
➢ 操作步骤：取洁净试管7只，进行编号，1-5号管为供试品管，6号管为
致敏期间：每日观察每只动物的症状。初次，末次致敏和激发当日测定每组每只动物的体重。

蛋白质发泡法制备多孔氧化锆陶瓷

表中可看出，随着氧化锆含量的增加，烧结样品的体积密度逐渐增加，总体气孔率降低．开孔气孔率降低，闭气孔率提高。同时样品的抗弯强度增加，这是由材料的微观结构决定的。由于氧化锆含量的增加，孔壁的厚度增加，孔壁的强度增加，孔壁之间的连通程度降低，材料的宏观力学性能得到提高。采用发泡法可以制备高气孔率的多孔陶瓷制品。最高可以达到９５％。
收稿日期：２００７．０２．１５
基金项目：国家高技术研究发展计划（８６３计划）项目（２００６从０３２５４０）资助
作者简介：刘海燕，女，１９８２年生，硕士研究生，天津大学材料学院，天津３０００７２
万方数据
增刊ｌ
刘海燕等；蛋白质发泡法制备多孔氧化锆陶瓷
·５９ｌ－
１６００℃，烧结速率为ｌ℃，ｍｉｎ，保温适当的时间，随炉冷却。
Ｆｉｇ．２ＳＥＭｉｍａｇｅｓｏｆｃｅｌｈ哺ＩＩ疗０ｍ４０％∞ＩｉｄＩｏ蚯．ｍｇｓ蚴ｐＩｅｇ
ｓｉｎｔｅｎｄａｔ（ａ）１５００℃，（ｂ）１５５０℃，柚ｄ“）１６００℃
综合上述因素，结合实验优化，确定烧结制度如下：以ｌＫ·ｍｉｎ．１升温到８００℃，并在１５０℃（３０ｍｉｎ），２００℃（６０ｍｉｎ），２３０℃（３０ｍｉｎ）和３６０℃（３０ｍｉｎ）保温。然后以３Ｋ．ｍｉｎ－１升温到１５５０℃，保温２ｈ，随炉冷却。３．２微观结构
ＬｉｕＨａｉ”ｎ，ＬｉｕＪｉａｃｈｅｎ，ＺｈａｎｇＰｅｎｇ”，Ｓ０ｎｇ）（ｊａｎｍｉ，ＭｅｎＲｏｎｇｌｅｉ（ｋｌｙＬ丑ｂｏ蛆枷＿ｙｏｆＡｄＶ柚ｃｃｄｃｅｒａｍｉｃｓａⅡｄＭａｃｈｉⅡｉⅡｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＭｉｎｉｓ竹ｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｔｉ孤巧ｉｎｕｎｉｖⅢｉ吼Ｔｉ蛆ｊ．ｍ３０００７２，ｃｈｉｎａ）
２实验

实验设计：卵清蛋白

实验注意事项
1 2 3
蛋白质浓度过大，盐析时发生共沉，分离效果不好。 • 蛋白质浓度太稀，耗盐量过大，蛋白质回收率较低。一般蛋白质浓度在2.5%～3.0%较适中。
蛋白质提取过程中须注意温度的控制，一般在20℃ 以下进行
调节等电点一定要准确，在本实验中，球蛋白和卵清蛋白的等电点相差较小，若不准确，会导致蛋白质不纯。
9 提取液
1.0 3.0
0 4.0 0
0.5 3.5 0.125
1.0 3.0 0.25
1.5 2.5 0.375
2.0 2.0 0.50
2.5 1.5 0.625
3.0 1.0 0.75
4.0 0 1.0
实验步骤
（二）蛋白提取液中蛋白质含量测定 1、提取液分别稀释1倍、10倍、20倍后，取待测蛋白质溶液1ml，加入蒸馏水3ml，摇匀，按上述方法在280nm 波长处测定光吸收值，并从标准曲线上查出经稀释的待测蛋白质的浓度。排除干扰：将待测蛋白质溶液适当稀释，在波长260nm 和280nm处分别测出A值，然后利用280nm及260nm下的吸收差求出蛋白质浓度。 2.计算：蛋白质浓度（mg/ml）=1.45A280-0.74A260 （式中A280和A260分别是该溶液在280nm和260nm波长下测得的光吸收值）
.
弃上清液
实验步骤
二.卵清蛋白活性测定：
（一）紫外吸收法测定卵清蛋白的含量 1、标准曲线法（1）标准曲线的绘制按下表分别向每支试管加入各种试剂，摇匀。在280nm波长处分别测定各管溶液的A280值。以A280值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
试管号试剂标准蛋白溶液 /mL 蒸馏水/mL 蛋白质浓度 /mg/mL A280 1 2 3 4 5 6 7 8

高一生物《蛋白质的鉴定》教案-

高一生物《蛋白质的鉴定》教案?篇一：还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定教案(word版)人教版实验一生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定教案一、实验原理（1）鉴定实验设计的理念：某些化学试剂+ 生物组织中有关有机化合物（2）具体原理：①可溶性还原糖+ 斐林试剂→砖红色沉淀。

②脂肪小颗粒+ 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒。

③蛋白质+ 双缩脲试剂→紫色反应。

二、目标要求初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。

三、重点、难点 1.重点①初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。

②通过实验的操作和设计培养学生的动手能力，掌握探索实验设计技巧，从而培养创新思维能力。

2.难点根据此实验方法、原理，设计实验来鉴定常见食物的成分。

四、实验材料1.可溶性还原糖的鉴定实验:选择含糖量较高、颜色为白色或近白色的植物组织，以苹果、梨为最好。

2.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好(实验前浸泡3h～4h)。

3.蛋白质的鉴定实验:可用浸泡1d～2d的黄豆种子(或用豆浆、或用鸡蛋蛋白)。

产生特定的颜色反应。

五、仪器、试剂1.仪器:剪刀,解剖刀,双面刀片,试管,试管架,试管夹,大小烧杯,小量筒,滴管,玻璃漏斗,酒精灯,三脚架,石棉网,火柴,研钵,石英砂,纱布,载玻片,盖玻片,毛笔,吸水纸,显微镜。

2.试剂:①斐林试剂(0.1g/L的NaOH溶液+ 0.05g/mL的CuSO4溶液)；②苏丹Ⅲ染液；③双缩脲试剂；④体积分数为50%的酒精溶液；⑤蒸馏水。

六、方法步骤(演示教学课件) 1.制备试剂。

2.可溶性还原糖的鉴定、方法、步骤。

3.脂肪的鉴定、方法、步骤。

4.蛋白质的鉴定、方法、步骤。

七、教学过程新课引入：我们在化学中学习过物质的鉴定，其原理是被鉴定的物质与所用的化学试剂要么发生颜色反应，要么产生沉淀，我们生物学上也采用此原理，在生物学中物质鉴定的理念是：某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。

生物化学实验--蛋白质性质试验

（三）黄色反应原理：蛋白质分子中含有苯环结构的氨基酸（如
酪氨酸、色氨酸等），于浓硝酸可反应并生成黄色物质，此物质在碱性环境下变为桔黄色的硝基苯衍生物硝醌酸等。
操作：取一支试管，加入1ml蛋白液及浓硝酸5滴。加热，冷却后注意颜色变化。然后再加入10%NaOH溶液 1ml，颜色有什么变化？
（四）茚三酮反应原理：蛋白质与茚三酮共热，产生兰紫色的还原茚三
操作：
1、尿素实验
取少量尿素晶体放在干燥的试管中，微火加热使其
熔化成液体，此时有氨气放出，可用湿润的试纸检验，
至液体重新结晶出现白色固体时，停止加热，冷却。然
后加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加2-4滴1% 混匀，观察有无紫色出现。
CuSO4溶液，
2、蛋白液实验
取蛋白液1ml，加10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加2-4 滴1% CuSO4溶液，混匀，观察有无紫色出现。
荧光法gml不同种类蛋白最大吸收波长nm标准方法准确操作麻烦费时灵敏度低适用于标准的测定紫外分光光度280205灵敏快速不消耗样品核酸类物质有影响100010000540重复性线性关系好灵敏度低测定范围窄样品需要量大folin酚试剂750灵敏费时较长干扰物质多25050500595灵敏度高稳定误差较大颜色会转移bca50500562灵敏度高稳定干扰因素少费时较长蛋白质不同方法比较一实验原理一实验原理蛋白质或多肽分子中有带酚基酪氨酸或色氨酸在碱性条件下可使酚试剂中的磷钼酸化合物还原成蓝色生成钼蓝和钨蓝化合物
察结果。（四）生物碱试剂沉淀蛋白质取一支试管，加入蛋白液2ml及醋酸4-5滴，再加饱和苦味酸数滴，
观察现象。
http://222.195.234.199/openclass 登录名：自己的学号密码：自己的学号大家先把电子版的实验报告作好，然后在

生化综合实验报告--测定蛋白质含量的三种方法及其比较

器材:
①容量瓶②试管及试管架
③恒温水浴槽④吸量管
⑤分光光度计⑥电热套
⑦锥形瓶⑧比色皿
(3)紫外吸收法
试剂:
样品蛋白溶液:准确称样品蛋白质,配制成一定浓度的溶液。
器材:
①紫外分光光度计②容量瓶
③试管、试管架④吸量管
⑤锥形瓶⑥比色皿
4．实验方法步骤及注意事项
双缩脲法
标准曲线的绘制:
取12支试管分成两组，按下表平行操作，绘制标准曲线。
实验远没有我想象的那样简单，要想做好一个实验，容不得半点马虎。综合实验正是这培养了我们的耐心、恒心和信心，让我们的思维和创造力得到了大幅度的提高，让我们的科学素养有了很大的飞越。真真正正变学生的被动学习为主动学习，激发了我们的学习热情，不管实验成功或是失败，我们都能从中获得很多从其它地方得不到的知识，让我们获益匪浅！
若样品中含有大量吸收紫外线的物质，会出现较大的干扰。
5.实验数据处理方法
双缩脲法
试
剂
0
1
2
3
4
5
样品1
样品2
O．D540
0
0.021
0.052
0.160
0.316
0.345
0.08
0.029
标准蛋白质浓度(mg/ml）
0
1
2
3
4
5
X
Y
考马斯亮蓝染色法
试
剂
0
1
2
3
4
5
样品1
样品2
蛋白质浓度（ug/ml）
样品测定:
①制备样品的蛋白质提取液。
②取出两份1.0 ml样品液。操作同标准曲线，测定样品的OD值，平行两份
计算:

鸡蛋清蛋白酶水解物的制备及功能性质分析

堡主竺竺堡兰望望塑堡鱼鳖查竺塑堕型鱼墨基望些丝堕些堑塞查！！查些盔兰参考文献［１】Ｗｅｌｌｓｔｅａｄ，Ｄ．ｔ１９９５．Ｇｒｏｗｔｈｌｉｍｉｔｅｄｔｏｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｃｏｕｎｔｒｉｅｓ．ＭｉｓｓｅｔＷｏｒｌｄＰｏｕｌｔｒｙ．１１（７）：２１·２３【２】刘宝全等，鸡蛋深３ｎＴ技术，农牧产品开发，１９９９（６）：３４．３５【３】ＫａｚｕｋｏＳｈｉｍａｄａａｎｄＳｅｔｓｕｒｏＭａｔｓｕｓｈｉｔａ．１９８０．ＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＴｈｅｒｍｏｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓａｎｄＡｍｉｎｏＡｃｉｄＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ．Ｊ．Ａｇｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．２８“１：４１３－４ｔ７【４】郑桂芝，蛋白质水解与水解物之利用，食品工业，１９９７２９（５）：１０～１７【５】赵新怀等，酶促水解大豆蛋白的研究，食品与发酵工业，１９９４（５）：７一ｎ【６］６Ｄｅｅｓｌｉｅ，ｗＤ．，Ｃｈｅｒｙａｎ，Ｍ．１９９８Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｓｏｙｐｒｏｔｅｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｆｒｏｍａｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｕｌｔｒａｆｉｔｒａｔｉｏｎｒｅａｔｏｒ．ＪＡｇｒｉｃＦｏｏｄＣｈｅｍ．３６：２６－－３１［７】Ｃｈｏｂｅｒｔ，ＪＭ．ｅｔａｌ，１９８８．ＳｏｌｕｂｉｌｉｔｙａｎｄｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｃａｓｅｉｎｓａｎｄｗｈｅｙｐｒｏｔｅｉｎｓｍｏｄｉｆｉｅｄｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙｂｙｔｒｙｐｓｉｎＪ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．３６：８８３·８９２［８】８Ｋｅｓｔｅｒ，Ｊ．Ｊ．，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ．ｔ１９８４．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｗｈｅｙｐｒｏｔｅｉｎｓｔｏｉｍｐｒｏｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ．Ｊ．ＤａｉｒｙＳｃｉ．６７：２７５７－－２７７４【９】９汤亚杰，吴思方，酪蛋白磷酸肽的研究进展，食品科学，１９９８１９（５）：３—６【１０】Ｓｈｉｍｉｚｕ，Ｍ．，Ｌｅｅ，Ｓ．Ｗ１９８６．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ２３ｒｅｓｉｄｕｅｓｐｕｒｉｆｉｅｄｆｒｏｍｔｈｅＩⅪｐｔｉｃｈｙｄｍｌｙｓａｔｅｏｆａ，ｌ—ｃａｓｅｉｎ：ｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙｄｕｒｉｎｇｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｅｐｔｉｄｅ．Ｊ．ＦｏｏｄＳｃｉ．５１（５）：１２４８—１２５２【１１］刘杰，蒲萍萍，全蛋儿童食品新技术，食品研究与开发，１９９６１７（３）：３０－－３１【１２】黄毅，鸡蛋奶饲料的研制，食品工业，１９９６（２）：３７【１３】Ｌａｈｌ，ＷＪ．，Ｂｒａｕｎ，Ｓ．Ｄ．１９９４．Ｅｎｚｙｍａｔｉｃｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｆｏｒｆｏｏｄｕ∞．４６（１０、：６８—７１【１４］Ｍａｈｍｏｕｄ，Ｍ．Ｉ．１９９４．ＰｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｉｎｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌｐｒｏｄｕｃｔＳ，ＦｏｏｄＴｅｃｉ＇ｍ０１．４８（１０）：８９．９５ｆ１５】Ｃｈｏｂｅｎ，Ｊ．Ｍ．ｅｔａｌ，１９８８．ＳｏｌｕｂｉｌｉｔｙａｎｄｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｃａｓｅｉｎｓａｎｄｗｈｅｙｐｒｏｔｅｉｎｓｍｏｄｉｆｉｅｄｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙｂｙｔｒｙｐｓｉｎＪＡｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．３６：８８３—８９２【１６】Ｃｈｏｂｅｒｔ，ｊ．Ｍ．１９８８ＳｏｌｕｂｉｌｉｔｙａｎｄｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｃａｓｅｉｎｓｍｏｄｉｆｉｅｄｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙｂｙＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｕｓａｕｒｅｕｓＶ８ｐｒｏｔｅｉｎ．．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．３６：２２０．２２４［１７】Ｃｈｏｂｅｒｔ，Ｊ．Ｍ．１９８９．Ｓｌｕｂｉｌｉｔｙａｎｄｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｂｅｔａ·ｃａｓｅｉｎｍｏｄｉｆｉｅｄｅｎｚｙｍａｔｉｃａｌｌｙｂｙｔｒｙｐｓｉｎ．Ｊ．ＦｏｏｄＢｉｃｃｈｅｍ．１３：３３５—３５２【１８】Ｋｕｅｈｌｅｒ，ＺＡ．ａｎｄＳｆｉｎｅ，ＣＭ．１９７４ＥｆｆｅｃｔｏｆｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｎｓｏｍｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｗｈｅｙｐｒｏｔｅｉｎｊＦｏｏｄＳｃｉ．５０：１４０３－－１４０５【１９】Ｍｏｎｔｉ，Ｊ．Ｃ．ＡｎｄＪｏｓｔ．Ｒ，１９７８．ＥｍｚｙｍａｔｉｃＳｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｈｅａｔ－ｄｅｎａｔｕｒｅｄｃｈｅｅｓｅｗｈｅｙｐｒｏｔｅｉｎ．Ｊ．ＤａｉｒｙＳｃｉ．６１：１２３３－１２３７【２０】ＢＪ中ＲＧＥＧＥＬ＾ＮＤＳＤＡＬ１９８０Ｈｅａｔ—ｉｎｄｕｃｅｄＧｅｌｌｉｎｇｉｎｓｏｌｕｔｉｏｎｓｏｆＯｖａｌｂｕｍｉｎ．Ｊ．ｏｆＦｏｏｄＳｃｉ．４５：５７ｖ－ｚ５７３－４５－【２１】Ｋｕａｎ—ＪｕＬｉｕ；Ｓｈｅｎｇ－ＣｈｉｎＹａｎｇ１９９２ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｈｅａｔｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｌｉｍｉｔｅｄｅｎｚｙｍｅｈｙｄｒｏｌｙｓｅｄＣｈｉｃｋｅｎｅｇｇｗｈｉｔｅ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ３０（４）：５８２—５９２【２２】Ｈｉｄａｌｇｏ，Ｊ．ａｎｄＧｒａｐｅｒ，Ｅ．１９９７Ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙａｎｄｈｅａｔｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｗｈｅｙｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ．Ｊ．ＤａｒｉｒｙＳｃｉ：６０：１５１５—１５１８［２３】Ｊｏｏｔ，Ｒ．ａｎｄＮｏｎｔｉ，Ｊ．Ｃ．１９７７．Ｐａｒｔｉａｌｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆｗｈｅｙｐｒｏｔｅｉｎｂｙｔｒｙｐｓｉｎ．Ｊ．ＤａｉｒｙＳｃｉ．６０：１３８７－１３９３【２４】Ｄｕｒｇｅｏｎ，Ｓ．Ｌ．ｅｔａ１．１９９２．Ｅｍｕｌｓｉｆｙｉｎｇｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｗｈｅｙｐｅｐｔｉｄｅｆｒａｃｔｉｏｎａｓａｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆａｎｄｉｏｎｉｃｓｔｒｅｎｇｔｈ．Ｊ．ＦｏｏｄＳｃｉ．５７（３）：６０１－６０４［２５】ＭｉｔｃｈｅｌｌＪ．ＲａｎｄＳ．Ｅ．Ｈｉｌｌ１９９５．Ｔｈｅｕｓｅａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｒｅａｃｔｉｏｎｓｔｏｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙｏｆｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓｉｎｈｅａｔ－ｐｒｏｃｅｓｓｅｄｆｏｏｄｓ．ＴｒｅｎｄｓｉｎＦｏｏｄｓｃｉ．＆＂ｒｅｃｈ．６（５）：２１９－２２４【２６】ＭａｒｙＫ．Ｓｃｈｍｉｄｌ１９９３．Ｆｏｏｄｐｒｏｄｕｃｔｓｆｏｒｍｅｄｉｃａｌｐｕｒｐｏｓｅｓ．ＴｒｅｎｄｓｉｎＦｏｏｄｓｃｉ．＆Ｔｅｃｈ４（６）：１６４－１６８ｆ２７】Ｔｕｒｇｅｏｎ，Ｓ．Ｌ，ｅｔａｌ，１９９２，ＩｎｔｅｒｒａｃｉａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｔｒｙｐｔｉｃｐｅｐｔｉｄｅｓｏｆＬａｃｔｏｇｌｏｂｕｌｉｎ．Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ１０：６６９·６７５【２８】Ｂｅｈｎｋｅ，Ｕ．ｅｔａ１．１９８６．Ｅｎｚｙｍａｔｉｃｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｅｇｇｗｈｉｔｅｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｓｏｍｅｏｆｉｔｓｉｔｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．Ｎａｈｒｕｎｇ３０（３／４）：３１９－一３２６【２９］Ｍａｈｎｏｕｄ，Ｍ．Ｊ．ｅｔａ１．１９９２．Ｅｎｚｙｍａｔｉｃｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆｃａｓｅｉｎ：ｅｆｆｅｃｔｏｆｄｅｇｒｅｅｏｆｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｎａａｔｉｇｅｎｉｃｉｔｙａｎｄｐｈｙｓｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．ＪＦｏｏｄＳｃｉ．５７（５）：１２２３，１２２９［３０１Ｇｒｉｍｂｌｅ，Ｇ．Ｋ．１９９４．Ｔｈｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎｃｌｉｎｉｃａｌｎｕｔｒｉｔｉｏｎ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｕｔｒ，１４：４１９－４４７【３１】Ｇｒｉｍｂｌｅ，Ｒ．Ｆ．１９９４．Ｃｙｓｔｒｉｎｅａｎｄｇｌｙｃｉｎｅｓｕｐｐｌｅ—ｍｅｎｔａｔｉｏｎｍｏｄｕｌａｔｅｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｃｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｔｕｎｌｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａｌｐｈａｉｎｒａｔｓｆｅｄａｌｏｗｐｒｏｔｅｉｎｄｉｅｔ．ＪＮｕｔｒ．１２２：２０６６－２０７３【３２］Ｌｅｍｏｎ，Ｐ．ｗＲ．１９８７．Ｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｅｘｅｒｃｉｓｅ：Ｕｐｄｅｔｅ１９８７．ＭｅｄＳｃｉ．ＳｐｏｒｔｓＥｘｅｒｃ．１９：１７９．１９０【３３］Ｌｅｍｏｎ，ＥｗＲ·ｅｔａｌ１９８４．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｉｎｔｅｎｓｉｔｙｏｎｐｒｏｔｅｉｎｕｔｉｌｉｚｉｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇｐｒｏｌｏｎｇｅｄｅｘｅｒｃｉｓｅ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．ＳｐｏｒｔｓＥｘｅｒｃ１６：１５１【３４】Ｅｖｅｎｓ，ｗＪ．１９８３Ｐｒｏｔｅｉｎｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｅｎｄｕｒａｔｉｏｎａｎｄｅｎｄｕｒａｔｉｏｎｅｘｅｒｃｉｓｅ．ＰｈｙｓｉｃｉａｎＳｐｏｒｔｓＭｅｄ．１１：６３—７１ｆ３５】Ｆｒｋｊａｅｒ，Ｓ．１９９４．Ｕｓｅｏｆｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｆｏｒｐｒｏｔｅｉｎｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ．ＦｏｏｄＴｅｃｈｎ０１．４８（１０）：８６’８８【３６】ＭａｒｙＫ．Ｓｃｈｍｉｄｌ１９９３．Ｆｏｏｄｐｒｏｄｕｃｔｓｆｏｒｍｅｄｉｃａｌｐｕｒｐｏｓｅｓ．ＴｒｅｎｄｓｉｎＦｏｏｄｓｃｉ．＆Ｔｅｃｈ．４（６）：１６４－１６８６３７］Ｓｔｅｈｌｅ，Ｐ．ｅｔａ１．１９８２．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｏｆｔｙｒｏｓｉｎｅａｎｄｇｌｕｔａｍｉｎｅｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｐｅｐｔｉｄａｓ．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４：２８０－２８６【３８］Ｇｒｉｍｂｌｅ，ｇ·ｋ·ｅｔａｌ·１９８７Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｐｅｐｔｉｄｅｃｈａｉｎ－ｌｅｎｇｔｈｏｎａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｏｆｅｇｇ－ｐｒｏｔｅｉｎｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓｉｎｔｈｅｎｏｒｍａｌｈｕｍａｎｊｅｊｕｎｕｍＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ９２：１２６．１４２【３９】Ｓｈａｒｐ，ｗＲ．，Ｅｖａｎｓ，Ｄ．Ａ．ａｎｄＡｎｎｉｒａｔｏ，ＰｍＶ．１９８４．ＦｏｏｄＴｅｃｈｎ０１．３８位）：１１２－－１１９—４６—硕士学位论文鸡蛋清蛋白酶水解物的制各及其功能性质的研究东北农业大学【４０】ＣｏｎｏｒＲｅｉｌｌｙ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｆｏｏｄｓ－－ａｃｈａｌｌｅｎｇｅｆｏｒｃｏｎｓｕｍｅｎ１９９４．ＴｒｅｎｓｉｎＦｏｏｄＳｃｉ．＆Ｔｅｃｈｎ０１．５（４）：１２１——１２３ｆ４１】Ｋｒｉｔｃｈｅｖｓｋｙ，Ｄ．ｅｔａｌｌ９８７．ＤｉｅｔａｒｙｐｒｏｔｅｉｎａｎｄａｔｈｒｏｓｅｌｅｒｏｓｉｓＪＡＯＣＳ．６４（８）：１１６７一“７ｌ【４２】Ｂｅｙｎｅｎ，Ａ．Ｃ．，Ｗｅｓｔ，Ｃ．Ｅ．１９８７．ＣｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎＳｗｉｎｅｆｅｄｄｉｅｔｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｅｉｔｈｅｒｃａｓｅｉｎｏｒｓｏｙｂｅａｎｐｒｏｔｅｉｎＪＡＯＣＳ．６４（８）：１１７８—１１８２【４３】ＭｅｅＬＵ．Ｅ．１９８７．Ｓｐｅｃｉｅｓ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓｏｆＳｕｒｕｍＣｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｔｏｄｉｅｔａｒｙｐｒｏｔｅｉｎｓ．ＪＡＯＣＳ．６４（８）：１１７２—１１７７【４４】陈历俊，东北农业大学博士论文，１９９８【４５】于国平，马力编，食品生物化学实验指导，东北农业大学实验教材，１９９６［４６１马成林等编著，动物性食品理化检验学，中国人民解放军兽医大学出版社，１９８２【４７］ＪＩＮＱＵＡＮＸＵ，ＭＡＫＯＴＯＳＨＩＭＯＹＡＭＡＤＡ，ａｎｄＫＥＮＪＩＷＡＴＡＮＡＢＥ．１９９７．ＧｅｌａｔｉｏｎｏｆｅｇｇｗｈｉｔｅｐｒｏｔｅｉｎｓａｓａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｃｏｍｂｉｎｅｄＨｅａｔｉｎｇａｎｄＦｒｅｅｚｉｎｇ．Ｊ．ｏｆＦｏｏｄＳｃｉ．６２（１）：９６３－－－－９６６．【４８】ＫＥＮＪＩＷ６Ｔ６ＮＡ，ｅｔａｌ１９８５．Ｈｅａｔ－ｉｎｄｕｃｅｄＡｇｇｒｅｇａｔｉｏｎａｎｄＰｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎｏｆＥｇｇＷｈｉｔｅＰｒｏｔｅｉｎｓｉｎＡｃｉｄＭｅｄｉａ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ．５０：５０７—５１０【４９】ＡＯＡＣ．ＯｆｆｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓｏｆｔｈｅＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆＯｆｆｉｃｉａｌＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｓＳｉｄｎｅｙＷｉｌｌｉａｍｓ（ｅｄ）．１４ｔｈｅｄ，ＵＳＡ１９８４：８７７ｆ５０ｊ汤巫杰，吴思方，酪蛋向磷酸肽的研究进展，１９９８，１９ｆ５）：３－６【５１】李书国等，中空纤维超滤器生产人豆分离蛋白的工艺研究，中国粮油学报，１９９４１４（４）：２１—２４【５２】王学松编著，膜分离技术及应用，科学出版杜，１９９４【５３】刘茉娥，陈欢林，新型分离技术基础，杭州：浙江大学出版社，１９９３【５４】徐仲儒编著，农业试验最优回归设计，黑龙江科技出版社，１９９８【５５】郭铁城等，旋转设计试验专用程序包，东北农学院学报，１９８６，４：４１３［５６】ＤｉｎａｋａｒＰａｎｙａｍａｎｄＡｒｕｍＫｉｌａｒａ，ｌ９９６．Ｅｎｈａｎｃｉｎｇｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｒｙｏｆｆｏｏｄｐｒｏｔｅｉｎｓｂｙｅｎｚｙｍａｔｉｃｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ．ＴｒｅｎｄｓｉｎＦｏｏｄＳｃｉ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ４（７）：１４２－１４８【５７】ＮａｏｆｕｍｉＫＩＴＡＢＡＴＡＫＥ．１９８５Ｈｅａｔ—ＴｒｅａｔｅｄＯｖａｌｂｕｍｉｎａｎｄＥｇｇＷｈｉｔｅ．Ａｇｒｉｃ．Ｂｉ０１．Ｃｈｅｍ４９（８）：２４５７—２４５８【５８】Ｆｒｅｅｎｅｙ，Ｒ．Ｅ１９８０．ＣｈｅｍｉｃａｌＤｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓ．ＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ．１：４７［５９】许永红，蛋白质酶法水解物苦昧的控制，食品工业科技，１９９７（３）：ｌ一４－４７－。

最新实验设计：卵清蛋白

❖ 沉淀法是分离纯化生物大分子物质常用的一种经典方法，可分盐析法、等电点沉淀法和有机溶剂沉淀法等。
❖ 蛋白质分子表面含有带电荷基团，这些基团与水分子有较大的亲和力，故蛋白质在水溶液中能形成水化膜，增加了蛋白质水溶液的稳定性。如果在蛋白质溶液中加入大量中性盐，导致蛋白质分子表面电荷被中和，水化膜被破坏，最终引起蛋白质分子间相互聚集并从溶液中析出，这就是盐析作用。
管溶液的A280值。以A280值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。
试管号试剂
1
2
3
4
5
6
7
8
9 提取液
标准蛋白溶液
/mL
0
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 4.0 1.0
蒸馏水/mL
蛋白质浓度 /mg/mL
4.0
3.5
3.0
2.5 2.0 1.5 1.0 0
3.0
0 0.125 0.25 0.375 0.50 0.625 0.75 1.0
实验设计：卵清蛋白
Contents
实验目的实验原理实验方法实验材料及用品实验步骤实验注意事项
实验目的
1.掌握提取鸡蛋清中卵清蛋白的基本原理和方法。 2.掌握紫外分光光度计的使用方法及注意事项。 3.掌握用紫外吸收法测定蛋白质活性，了解其他测定蛋白质活性的方法。
实验原理
❖ 一、沉淀法粗分离蛋白质
❖ 由于各种蛋白质分子表面的极性基团所带电荷数目不同，它们在蛋白质表面上的分布情况也不一样，因此，将不同蛋白质盐析出来所需要的盐浓度也各异，盐析法就是通过控制盐的浓度，使蛋白质混合液中的各个成分分步盐析出来，达到粗分离蛋白质的目的。
实验原理
❖ 鸡蛋清的主要成分是球蛋白和白蛋白（卵清蛋白），球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而卵清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。

医学生物化学实验_教(学)案

《医学生物化学实验》教案第1 次课2学时《医学生物化学实验》教案第2次课2学时《医学生物化学实验》教案第3次课2学时12、0.1mol/L盐酸溶液300mL13、0.1mol/L氢氧化钠溶液300mL14、0.05mol/L碳酸钠溶液300mL15、甲基红溶液20mL（三）器具水浴锅、温度计、200mL锥形瓶、100mL容量瓶、吸管、试管及试管架实验容1.实验原理★：蛋白质是两性电解质。

在蛋白质溶液中存在下列平衡：最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。

蛋白质的沉淀反应可分为两类。

（1）可逆的沉淀反应此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来溶剂中，并保持其天然性质而不变性。

如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用于蛋白质。

提纯蛋白质时，常利用此类反应。

（2）不可逆沉淀反应此时蛋白质分子部结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。

加热引起的蛋白质沉淀与凝固。

蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。

蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析出。

因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。

二、实验步骤：《医学生物化学实验》教案第4 次课2学时《医学生物化学实验》教案第5次课2学时《医学生物化学实验》教案第6次课2学时《医学生物化学实验》教案第7次课2学时《医学生物化学实验》教案第8 次课2学时《医学生物化学实验》教案第9次课2学时《医学生物化学实验》教案第10次课2学时《医学生物化学实验》教案第11次课2学时《医学生物化学实验》教案第12次课2学时《医学生物化学实验》教案第13次课2学时《医学生物化学实验》教案第14 次课2学时《医学生物化学实验》教案第15 次课2学时《医学生物化学实验》教案第16 次课2学时。

膜法水处理综合设计性实验-超滤膜截留分子量实验设计

超滤膜技术因其优良的出水水质和固液分离性能，已经在饮用水、再生水等水处理领域中得到越来越广泛的应用。

但超滤膜有多种分离精度，针对不同的水体应该选择不同的分离精度超滤膜，这对减缓膜污染、保障膜产水通量和出水水质至关重要。

因此，作为从事水处理领域的环境工程人员，必须掌握超滤膜分离精度的测定和评价方法-超滤膜截留分子量测定，这是合理选择超滤膜的基础和前提。

一、实验目的与原理（一）实验目的了解超滤膜分离精度的评估是通过测定膜截留分子量实现的，掌握超滤膜截留分子量测定的基本方法和途径，了解不同标准溶液对膜截留性能表征的差异。

学会如何针对不同水质选择合适的超滤膜。

（二）实验原理超滤膜的截留分子量是指在一定过滤条件下，采用系列已知分子量的有机物溶液进行膜过滤实验，计算不同分子量有机物溶液被膜的截留效率，其中被膜截留率达到或大于90%时的最小分子量即为该超滤膜的截留分子量。

由于实际使用的有机物分子形形状不会是绝对的球形，因此测定的有机物截留效率率和有机物分子尺度之间不一定绝对对应，用该实验所得的截留率表征超滤膜的截留分子量存在一定的误差。

加之，膜的制备方法决定了膜孔本身的尺寸大小并不是一致，而是围绕某一中心值呈现一定的分布。

因此，截留分子量并不能完全代表膜的分离能力。

本实验使用紫外分光光度法测试平板超滤膜对两种不同分子量大小的蛋白质溶液的截留效果。

根据透过液中蛋白质含量，计算超滤膜截留率，估算平板超滤膜孔径大小，确认平板膜的性能。

实验原理如下：配制不同分子量的蛋白质溶液，分别用紫外分光光度法分别测定板式超滤膜装置进出水中蛋白质溶液浓度，计算平板超滤膜对不同分子量蛋白质的截留率，估算膜的截留分子量。

二、实验仪器设备与药品图1 实验装置图（一）仪器设备自制平板膜过滤装置一套，含隔膜泵、压力表、流量计、膜组件支架等单元，如图1所示。

超滤平板膜，截留分子量约为50kDa。

使用前膜片浸泡在去离子水中；紫外分光光度计；千分之一电子天平；pH计；容量瓶、吸管、烧杯等；（二）实验药品去离子水；卵清蛋白（分子量45000）；牛血清白蛋白（分子量67000）；氯化钠（NaCl）；氯化钾（KCl）；磷酸二氢钾（KH2PO4）；磷酸氢二钾(K2HPO4）；HCl。

实验报告

高氏Ⅰ号培养基用于放线菌牛肉膏蛋白胨用于细菌
这都是最常用的，正好是一个事有机氮一个无机氮，而事实上用于培养细菌的培养基也可以用无机氮，细菌的合成培养基基本上都是用无机氮，铵盐、硝酸盐、尿素都可以
配制合适的培养基一般就是要选择好碳源、氮源以及合适的碳氮比，并不是说细菌和放线菌有什么差别，而是不同种的菌对培养基的成分和比例要求不同（就像每个人的胃口不同一样），放线菌在无机氮上生长的更好
实验内容：
（一）牛肉膏蛋白胨培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下：牛肉膏 3g，蛋白胨 10g，Nacl5g，琼脂 15～20g，水 1000mL，PH7.4～7.6 1．称药品
按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放入热水中，牛肉膏使与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 2．加热溶解
已经灭菌的培养基灭菌时残留有生命力的孢子或在贮存时有可能被杂菌污染，所以在使用该培养基时要进行无菌检查通常是放在37℃的恒温箱中一两天后培养基上没有生长任何微生物的就可以使用（若有微生物则是以菌落出现的肉眼可以看见的）
3、细菌能在高氏Ⅰ号培养基上生长吗？为了分离放线菌，你认为应该采取什么措施？
灭菌后，如制斜面，则需趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜度，使斜面的长度不超过试管总长的 1/2。 10．无菌检查
将灭菌的培养基放入 37℃温箱中培养 24～48h，无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁的橱内，备用。（二）高氏Ⅰ号培养基的配制高氏 1 号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基。其配方如下：可溶性淀粉 20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4·3H2O 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，琼脂 15～20g，水 1000mL，pH7.4～7.6。 l．称量和溶解

卵清蛋白诱导的过敏小鼠模型中多不饱和脂肪酸代谢变化

卵清蛋白诱导的过敏小鼠模型中多不饱和脂肪酸代谢变化武玉凤;黎海芪【摘要】目的观察卵清蛋白(OVA)诱导的过敏小鼠模型中多不饱和脂肪酸(PUFA)代谢的变化.方法以缺乏n-3 PUFA饲料饲养雌鼠的仔鼠(21日龄)24只,随机分为空白组、OVA组和PBS组,各8只.实验第1 d,空白组心脏采血处死.实验第1 和15 d,OVA组腹腔注射含50 μg OVA和1.3 mg氢氧化铝凝胶的PBS 0.2 mL,PBS 组腹腔注射等量PBS.实验第29~39 d,OVA组以含50 mg OVA的PBS 0.3 mL 隔日灌胃,共6次;PBS组予等量PBS灌胃.实验第39 d末次灌胃后,OVA组和PBS 组均心脏采血处死,取空肠组织和脾组织. OVA过敏小鼠模型成功建立的判断标准:观察灌胃后小鼠腹泻情况,对空肠组织切片进行形态学观察(HE染色)和肥大细胞计数(甲苯胺蓝染色),血清sIgE水平检测(ELISA 法),脾组织中IL-4和IFN-γ检测(ELISA法).提取各组小鼠血清中的脂肪酸,采用液相色谱法检测α-亚麻酸(ALA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、花生四烯酸(AA)和亚油酸(LA)水平.结果①成功建立OVA诱导过敏小鼠模型:与PBS组比较,OVA组在灌胃后发生急性腹泻;小肠绒毛有大量炎症细胞浸润,潘氏细胞脱颗粒,固有层中肥大细胞聚集脱颗粒,肥大细胞数目增加(P<0.05);血清OVA-sIgE 水平、脾细胞培养上清中IL-4和IL-4/IFN-γ升高(P<0.05).②PBS组血清DHA、EPA和LA水平较空白组降低,AA水平升高,差异均有统计学意义,OVA组较PBS组血清DHA水平降低.结论 OVA过敏小鼠出现以DHA降低为主的脂肪酸代谢紊乱.%ObjectiveTo observe the changes of polyunsaturated fatty acid metabolism in Balb/C mice model of ovalbumin(OVA)-induced allergy.MethodsAt 21 day old, 24 baby Balb/C mice, whoes mother had a diet of n-3PUFA deficiency, randomly divided into 3 groups, blank, OVA and PBS groups.There were 8 offsprings in eachgroup.Weaned BALB/c offsprings in group h, m and l were sensitized with 50 μg of OVA (grade V, Sigma) in the presence of 1.3 mg of aluminum hydroxide gel (Sigma) as an adjuvant by intraperitoneal injection twice at 3 and 5 weeks old.Half of the offsprings delivered from the mice of the control group were sensitized with OVA as positive control.And remainders of the offsprings were injected with PBS as negative control.The sensitized BALB/c mice with 7 weeks of life were fed with 50 mg of OVA dissolved in 0.3ml of sterile saline by intragastric needles at interval day for six times.One hour after the last oral administration, all BALB/c mice were sacrificed with excessive carbon dioxide and blood samples were collected by cardiac puncture.At the first day of the test, blood samples of baby mice in blank group were collected by cardiac puncture.The offsprings in group OVA were sensitized with 50 g of OVA dissolved in 0.2 mL PBS in the presence of 1.3 mg of aluminum hydroxide gel by intraperitoneal injection at 1 and 15 day.From 29 to 39 day, the offsprings in OVA group were fed wiht 50 mg of OVA dissolved in 0.3 mL of PBS by intragastric needles at interval day for six times.The offsprings in PBS group were given equivalent PBS.After the last oral administration, all BALB/c mice were sacrificed by cardiac puncture and blood, jejunum, spleen samples were collected.To establish the model of OVA-induced allergy, diarrhea was observed after OVA challenge;histological examinations of jejunum were performed by HE staining and the mast cells in jejunum were observed by toluidine blue staining;and the levels of OVA-sIgE in serum, IL-4 and IFN-γ in spleen cell culture supernatants were measured by ELISA.Fatty acidswere extracted from serum in each group.The linoleic acid (ALA), inolenic acid (LA), arachidonic acid (AA), eicosapentaenoic acid (EPA) and docosahexenoic acid (DHA) levels of serum were analyzed by high performance liquid chromatography.Results①The model of OVA-induced allergy in Balb/C mice was established: compared with group PBS, after the oral OVA challenge allergic diarrhea, gathered phenomenon of inflammatory cells in jejunum villus,aggregation of mast cells in lamina propria(P<0.05),increasing of the levels of OVA-specific IgE in serum and IL-4, IL-4/IFN-γ in spleen cells(P<0.05) were observed in the offspring of OVA group.②The levels of DHA, EPA and LA of mice in group PBS were statistically lower than those in blank pared with PBS group, the levels of DHA decreased in mice of OVA group.ConclusionBalb/Cmice,repeatedly exposed with OVA, exerted a fatty acid metabolic disorder, mainly a reduction of DHA.【期刊名称】《中国循证儿科杂志》【年(卷),期】2017(012)003【总页数】4页(P200-203)【关键词】n-6多不饱和脂肪酸;卵清蛋白;食物过敏【作者】武玉凤;黎海芪【作者单位】重庆医科大学附属儿童医院儿保科,儿童发育疾病研究教育部重点实验室,儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地,儿科学重庆市重点实验室重庆400014;重庆医科大学附属儿童医院儿保科,儿童发育疾病研究教育部重点实验室,儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地,儿科学重庆市重点实验室重庆 400014【正文语种】中文多不饱和脂肪酸(PUFA)按照不饱和双键位置的不同，分为n-3PUFA和n-6 PUFA。

四种蛋白质测定方法的比较研究

四种蛋白质测定方法的比较研究一、本文概述蛋白质测定是生物化学和分子生物学研究中的基本步骤，对于理解生物体的生理功能和疾病机制具有重要意义。

在众多蛋白质测定方法中，Bradford法、Lowry法、Bicinchoninic Acid (BCA)法和Kjeldahl法是常用的几种。

本文旨在对这些方法进行比较研究，分析各自的原理、优缺点以及适用范围，为科研工作者在选择合适的蛋白质测定方法时提供参考。

本文将简要介绍每种方法的原理和操作步骤。

Bradford法基于蛋白质与考马斯亮蓝G250染料的结合反应Lowry法基于蛋白质与FolinCiocalteu试剂的反应，以及后续的铜离子参与的反应BCA法则是基于蛋白质与Cu2在碱性条件下与BCA形成复合物的原理而Kjeldahl法则是一种经典的有机物氮含量测定方法，通过测定蛋白质中的氮含量来计算蛋白质浓度。

本文将深入探讨这些方法的优缺点。

例如，Bradford法操作简便、灵敏度高，但易受某些氨基酸的影响Lowry法准确度较高，但操作复杂、耗时较长BCA法准确度和灵敏度均较高，适用范围广泛，但试剂成本较高Kjeldahl法则适用于大批量样品的测定，但前处理复杂，且无法区分不同类型的蛋白质。

本文将结合实际应用场景，讨论各种方法的适用范围。

例如，在实验室规模的研究中，Bradford法和BCA法因其操作简便、灵敏度高而受到青睐而在需要高准确度的研究中，Lowry法则可能是更好的选择对于大批量样品的测定，Kjeldahl法则显示出其独特的优势。

本文通过对四种常见蛋白质测定方法的比较研究，旨在为科研工作者在选择合适的蛋白质测定方法时提供理论依据和实践指导。

二、蛋白质测定的四种主要方法蛋白质是生命活动的主要承担者，其浓度的测定在生物化学研究中占有举足轻重的地位。

目前，有多种方法可用于蛋白质的定量分析，但本文将重点介绍四种最常用且被广泛认可的方法：比色法、Bradford法、Biuret法以及Kjeldahl法。

蛋白质性质实验

生化试验指导实验一：蛋白质及氨基酸的呈色反应目的：1.了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。

2.了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。

3.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。

（一）双缩脲反应实验原理尿素加热至180℃左右生成双缩脲并放出一分子氨。

双缩脲在碱性环境中能与cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。

蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。

可用于蛋白质的定性或定量测定。

•一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。

实验器材及试剂器材：试管、酒精灯、试管夹、试管架试剂：（1）尿素（2）10%氢氧化钠溶液（3）1%硫酸铜溶液（4）2％卵清蛋白溶液实验步骤1.取少量尿素结晶，放在干燥试管中。

用微火加热使尿素熔化。

熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。

冷后，加10％氢氧化钠溶液约1毫升，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。

观察出现的粉红颜色。

避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。

2.向另一试管加卵清蛋白溶液约l毫升和10％氢氧化钠溶液约2毫升，摇匀，再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇，观察紫玫色的出现。

（二）茚三酮反应实验原理•除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。

•该反应十分灵敏，1：1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。

•茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分于和氨缩合生成有色物质。

实验器材及试剂器材：试管、酒精灯、试管夹、试管架试剂：(1)蛋白质溶液：2％卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液(蛋清：水＝1：9)(2)0.5％甘氨酸溶液(3)0.1％茚三酮水溶液(4)0.1％茚三酮—乙醇溶液实验步骤(1)取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升，再各加0.5毫升0.1％茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1—2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。

卵清蛋白致敏大鼠支气管哮喘模型的制备

卵清蛋白致敏大鼠支气管哮喘模型的制备刘贵颖;刘文彬;张慧琪;朱振刚;刘?n;刘超武;常力;狄冠麟;田常宏;窦迎婷【摘要】目的建立卵清蛋白特异性致敏诱导的大鼠支气管哮喘模型.方法 20只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为空白组和模型组,每组10只.第1天致敏:空白组给予生理盐水1ml腹腔注射致敏,而模型组给予1mL造模液(含V级卵清蛋白100 mg,氢氧化铝100 mg和灭活百日咳杆菌6×109个)腹腔注射致敏;第15天开始激发:将两组大鼠分别置于相同大小的雾化箱内,空白组给予生理盐水6 ml雾化激发,模型组给予5%的 V级卵清蛋白溶液6 ml雾化激发,每天激发一次,每次激发30 min,连续激发10天后处死大鼠,并采集相应标本.结果空白组大鼠激发后没有特殊异常表现,而模型组大鼠每次激发后出现烦躁不安、呼吸加深、加快,点头呼吸,咳嗽,闻及哮鸣音,呈哮喘样、口周发绀、反应迟钝等表现;空白组大鼠肺泡灌洗液和血液中嗜酸性粒细胞数量正常,而模型组大鼠出现相应增加;病理切片显示空白组肺组织和气道壁嗜酸性粒细胞浸润较少,而模型组嗜酸性粒细胞浸润相应地增多.结论卵清蛋白特异性致敏能成功构建大鼠支气管哮喘模型.%Objective To establish the bronchial asthma model in Wistar rats sensitized by subcutaneous injection oi ovalbumin ( OVA). Methods 20 Wistar rats were randomly and evenly divided into the normal group and the model group. On the first day, the normal group was sensitized by intraperitoneally injected 1 ml oi normal saline, and the model group was treated with 1 ml oi sensitization liquid which contained 100 mg of OVA ( Grade V ), 100 mg oi aluminum hydroxide and 6 × 109 strains oi inactivated bordetell a pertussis. From the 15th day, the normal group was treated with 6 ml oi normal saline aerosol inhalation once a day, 30min a time for 10 days, and the model group wastreated with 6 ml of OVA (5% , V Grade ) with the same method as above mentioned. Then all rats were killed to collect samples. Results The rats in the normal group behaved normally and the number oi eosinophils was also normal in their blood and their broncho alveolar lavage fluid ( BALF ) and on pathological section oi their lung tissue. Instead, the rats in the model group showed dysphoria, breathing deeply and quickly, nod breathing, cough, wheezing, oral cyanosis, slow response and so on. The number oi eosinophils increased abnormally in the model group. Conclusion The bronchial asthma model in Wistar rats can be successiully established by the intraperitoneal injection oi ovalbumin ( OVA ) and aerosol inhalation oi sensitization liquid.【期刊名称】《临床肺科杂志》【年(卷),期】2013(018)007【总页数】3页(P1167-1169)【关键词】支气管哮喘;卵清蛋白;动物模型【作者】刘贵颖;刘文彬;张慧琪;朱振刚;刘?n;刘超武;常力;狄冠麟;田常宏;窦迎婷【作者单位】300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科;300193,天津,天津中医药大学第一附属医院呼吸科【正文语种】中文哮喘动物模型可选择猫、狗、猪、羊、牛、猴、鼠等动物[1]，但鼠类仍然是比较经济实用的动物模型[2]，其中卵清蛋白致敏诱导的鼠类哮喘动物模型属于经典的常用哮喘模型，在鼠类动物的选择上小鼠和豚鼠比较普遍，近年来大鼠的选择越来越多，国外常选择BN大鼠、Fisher344大鼠，国内常采用SD大鼠和Wistar大鼠[3]。

食品生物化学实验

食品生物化学实验要求1.学生做实验前必须写好实验预习报告，做好实验预习，无实验预习报告者不许进入实验室。

每大组实验人数28人，4人一小组。

2.实验试剂的配制，现场由教师指导，学生操作完成。

学生在试剂配制过程中，掌握试剂配置的基本步骤，基本方法和注意事项。

3.实验室所有设备都必须按说明书使用，器皿要小心使用，按规范要求操作，如有损坏，照价赔偿。

4.卫生要求：每次试验完毕小组成员务必将本试验台及地面收拾整洁，器皿摆放整齐有序，如哪组成员发现没有搞好自己组的环境卫生，这次试验的所有组员的实验报告都会扣分。

一、10食品科学食品生物化学实验项目表1. 淀粉的显色、水解和老化（4学时）2. 蛋白质的功能性质（4学时）3. 牛奶中酪蛋白等电点测定和氨基酸的分离鉴定（4学时）4. 或果胶的提取（4学时）5. 酶的性质实验（4学时）实验总课时：16学时二、食品生物化学实验指导书实验一淀粉的显色、水解和老化一、实验目的和要求1、了解淀粉的性质及淀粉水解的原理和方法。

2、掌握淀粉水解的条件和产物的实验方法。

3、淀粉的老化原理和方法二、实验原理1、淀粉与碘的反应直链淀粉遇碘呈蓝色，支链淀粉遇碘呈紫红色，糊精遇碘呈蓝紫、紫、橙等颜色。

这些显色反应的灵敏度很高，可以用作鉴别淀粉的定量和定性的方法，也可以用它来分析碘的含量。

纺织工业上用它来衡量布匹退浆的完全度，它还可以用来测定水果果实（如苹果等）的淀粉含量。

近年来用先进的分析技术（如X射线、红外光谱等）研究碘跟淀粉生成的蓝色物，证明碘和淀粉的显色除吸附原因外，主要是由于生成包合物的缘故。

直链淀粉是由α-葡萄糖分子缩合而成螺旋状的长长的螺旋体，每个葡萄糖单元都仍有羟基暴露在螺旋外。

碘分子跟这些羟基作用，使碘分子嵌入淀粉螺旋体的轴心部位。

碘跟淀粉的这种作用叫做包合作用，生成物叫做包合物。

在淀粉跟碘生成的包合物中，每个碘分子跟6个葡萄糖单元配合，淀粉链以直径 pm绕成螺旋状，碘分子处在螺旋的轴心部位。