水质的细菌学检查

水质的细菌学检查

一、目的要求

（一）学习水质的细菌学检查法

（二）了解水质状况同细菌数量的关系及大肠菌群的数量在饮水中的重要性。

二、基本原理

检测水中的细菌数量是评价水质状况的重要指标之一。饮水是否合乎卫生标准，需要进行水中细菌数量及大肠菌群数量的测定。大肠菌群是肠道最普遍存在和数量最多的一群细菌，由于大肠菌群是一群能发酵乳糖的革兰氏阴性、无芽孢杆菌，它们在乳糖培养基中经37C培养24小时即能产酸、产气，所以常将其作为粪便污染的标志。

饮用水一般规定：1 毫升自来水中总菌数不得超过100 个；1000毫升自来水中大肠菌群数不得超过3 个。

三、实验材料

培养基及器皿、牛肉膏蛋白胨培养基、乳糖蛋白胨发酵管（内倒置小管）、三倍乳糖蛋白胨发酵管（内倒置小管）、伊红美蓝琼脂培养基、无菌空瓶、无菌水、无菌培养皿、移液管、试管。

四、实验内客

（一）采取水样

1、自来水：从学校各生活区取样。先将自来水龙头用火焰灭菌,再开放水龙头使水流1—2 分钟后，用无菌空瓶接取水样。

2、池水、湖水或河水：用无菌空瓶取距水面10—15 厘米深层水样。水样采取后应立即检验，不得超过4小时。

（二）水中细菌总数测定

l 、自来水：

稀释水样：原水样和10-1水样，用无菌移液管分别吸取l 毫升原水样和10-1 水样，分别注入二个无菌培养皿中。每皿各加13--15 毫升已融化并冷却到4 5-- 50C的牛肉膏蛋白胨培养基，轻轻旋转，使培养基与水样充分混匀，待凝固后，将平板倒置于37E 恒温箱内，培养24小时进行菌落计数。

制作培养基方法、消毒灭菌、接种、计数皆参照参微生物学实验指导，具体如下：培养基制作：实验五、培养基的制备

培养基配方：附录二、常用培养基之一培养基灭菌：实验六、灭菌与消毒水样接种：实验七、土壤微生物的分离与测数细菌总数测定：实验七、土壤微生物的分离与测数

2、池水、湖水或河水等。

稀释水样：稀释倍数视水样污浊程度而定，使水样培养后每个平板中的菌落数在30--300 之间的的稀释度最为合适。例如：取湖水稀释成10-1、10-2、10-3。每个稀释度作两个培养皿，并依上法倾入培养基制成平板，培养，计数。

菌落计数方法：

（1）先计算同一稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不应采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落的大小不到培养皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一

半的菌落数乘2代表全平板的菌数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。

（2）首先选择平均菌落在30— 300之间的平板，当只有一个稀释度的平均菌落 数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数（见表

1中例1）。

（3）若有两个稀释度的平均菌落数都在

30--300之间，则按两者菌落总数之比

值来决定。若其比值小于2则应取两者的平均数；若大于2则取其中较小的菌落

（三）用发酵法检查大肠菌群

1、 自来水：分三个步骤进行检查

（1） 初发酵试验：在2个装有50毫升三倍乳糖蛋白胨发酵管中，各加入 100 毫升水

样，在10支装有5毫升三倍乳糖蛋白胨发酵管中，各加入10毫升 水样。混匀后37°C 培养24小时。

（2） 平板分离：经24小时培养后，将产酸产气及只产酸的发酵管，分别划线接 种于伊红美蓝平板上，于37C 培养18--24小时，将符合下例特征的菌落的一部 分，进行涂片、

革兰氏染色、镜检。

a •深紫黑色，具有金属光泽的菌落；

b. 紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；

c. 淡紫红色，中心色较深的菌落。

（3） 复发酵试验：经涂片、染色、镜检为革兰氏阴性无芽抱杆菌时，则挑取该

菌落的另一部分，再接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中， 每管可接种来自同 一发酵管的同类型菌落1---3个。37C 培养24小时，结果若产酸产气，即证实有 大肠菌群存在。

证实有大肠菌群存在后，再根据发酵试验的阳性管数查表二 ，即得大肠菌群 数。

2. 池水，湖水或河水等

分别取湖水10-2、10_1的稀释液及原水样各1毫升，加到装有10毫升普通乳 糖蛋白胨发酵液试管中。另取10毫升和100毫升原水样，分别加到装有5毫升 和50毫升三倍乳糖蛋白胨发酵液的试管中。

以下步骤同上述自来水的平板分离和复发酵试验。

总数（表1中例2及3）。

（4） 若所有稀释度的平均菌落数均大于 乘以稀释倍数（表1中例4）。

（5） 若所有稀释度的平均菌落数均小于 以稀释倍数（表1中例5）

（6） 若所有稀释度的平均菌落数均不在 平均菌落数乘以稀释倍数（表一中例（

300,则应按稀释度最高的平均菌落数

30,则应按稀释度最低的平均菌落数乘 30--300之间。则以最接近300或30的

若证实有大肠菌群存在，则根据大肠菌群阳性管数查表三或表四即得每升水样中的大肠菌群数。

表二大肠菌群检数表

表三大肠菌群检数表

升各1份）

表四大肠菌群检数表

接种水样总量11.1毫升（10毫升、1毫升、0.1毫升、0.01毫升各1份）

五、实验报告内容

（一）我校各生活区水样中，细菌总数每毫升多少？经大肠菌群检查每升水中含多少？水源被污染，出现什么情况？

（二）在湖水（或河水）水样中细菌总数及大肠菌群数是多少？不同区域取样有无区别，为什么？

六、思考题

（一）大肠菌群中的细菌种类一般并非是病原菌，为什么要选大肠菌群作为水源被污染的指标？

（二）伊红美兰培养基中的哪些成分有助于我们鉴别大肠杆菌