叶绿素含量测定方法(精)
叶绿素含量的测定分光光度法
叶绿素含量的测定分光光度法叶绿素是植物和一些原生生物中重要的光合色素之一，它在光合作用中起到接收和转换光能的关键作用。
测定叶绿素含量可以帮助我们了解植物的光合效率和健康状况，以及研究光合作用的机制和调控。
分光光度法是一种常用的测定叶绿素含量的方法，本文将介绍该方法的原理、实验步骤和数据分析。
一、原理分光光度法测定叶绿素含量的原理是基于叶绿素对光的吸收特性。
叶绿素分子可以吸收特定波长的光，特别是蓝光和红光，而对绿光的吸收较弱。
利用分光光度计测量叶绿素溶液在不同波长的光下的吸光度，可以通过比较吸光度与叶绿素浓度的标准曲线，计算出待测样品中叶绿素的含量。
二、实验步骤1. 制备叶绿素提取液：将适量的鲜叶片（去除茎和大的叶脉）放入离心管中，加入少量酒精，并用研钵捣碎，使叶绿素释放到酒精中。
然后用酒精将研钵中的残渣洗入离心管中，最后用酒精将叶绿素完全溶解。
注意，酒精的使用要避免火源。
2. 离心沉淀：将叶绿素提取液离心10分钟，以沉淀残渣和悬浮物。
3. 分光光度计测量：取离心后的叶绿素提取液，用分光光度计在特定波长下（如645 nm和663 nm）测量其吸光度。
记录吸光度值。
4. 制备标准曲线：取不同浓度的叶绿素标准溶液，用同样的方法测量其吸光度，记录吸光度值。
5. 计算叶绿素含量：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代入，通过计算叶绿素浓度的公式，得出叶绿素的含量。
三、数据分析1. 标准曲线的绘制：将各个标准溶液的叶绿素浓度作为横坐标，吸光度作为纵坐标，绘制曲线。
利用标准曲线可以通过待测样品的吸光度值，反推出其叶绿素的浓度。
2. 计算待测样品中叶绿素的含量：根据标准曲线，将待测样品的吸光度值代入，通过计算叶绿素浓度的公式，得出叶绿素的含量。
四、注意事项1. 实验中应尽量避免阳光直射，以免光线对实验结果的干扰。
2. 操作时应注意安全，避免酒精接触到火源。
3. 叶绿素提取液的制备应充分溶解，避免残渣和悬浮物的影响。
叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定之答禄夫天创作一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C 和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在分歧波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在分歧波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
已知叶绿素a、叶绿素b的80%丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于663、645nm处。
已知在波长663nm下叶绿素a、叶绿素b 在该溶液中的吸光系数的分别为82.04和9.27；在波长645nm处的吸光系数分别为16.75和45.60。
根据加和性原则列出以下关系式：A663=82.04Ca+9.27Cb（1） A645=16.76Ca+45.60Cb （2）式（1）（2）A 663nm 和A645nm 为叶绿素溶液在663nm 和645nm 处的吸光度，C a C b 分别为叶绿素a 、叶绿素b 的浓度，以mg/L 为单位。
解方程（1）（2）组得C a 2 A 663—2.59 A 645 (3) C b =22.88 A 645—4.67 A 663 (4) 将C a +C b 相加即得叶绿素总量C TC T ＝ C a 十C b ＝20.29A 645—5 A 663 (5)从公式（3）、（4）、（5）可以看出，，就可计算出提取液中的叶绿素a 、b 浓度另外，由于叶绿素a 叶绿素b 在652nm 的吸收峰相交，两者有相同的吸光系数（均为），也可以在此波长下测定一次吸光度（A 652）而求出叶绿素a 、叶绿素 b 总量所测定资料的单位面积或单位重量的叶绿素含量可按下式进行计算： C T ＝5.341000652 A (6)有叶绿素存在的条件下，用分光光度法可同时测出溶液中类胡萝卜素的含量。
叶绿素的测量方法
叶绿素的测量方法叶绿素是植物和浮游生物体内的一种绿色色素，具有光合作用和光合细菌中也存在这种色素。
叶绿素对于生物体内的光合作用非常重要，因此对于叶绿素的测量方法，一直是科学研究和工程应用中的重要问题。
本文将介绍叶绿素的几种常用测量方法，旨在通过详细的介绍和分析，使读者对叶绿素的测量方法有更为全面深入的了解。
一、光学吸收法1.常用紫外-可见分光光度计法(UV-Vis)光学吸收法是一种广泛使用的叶绿素测量方法之一。
通过利用叶绿素对特定波长光的吸收特性，可以测量叶绿素的浓度。
常用的是紫外-可见分光光度计法(UV-Vis)。
通过用叶绿素标准溶液构建标准曲线来测定待测叶绿素溶液的浓度，精确、快速、准确。
2.高效液相色谱法(HPLC)高效液相色谱法(HPLC)是一种专业的叶绿素测量方法，对于复杂样品的分离和测量更加准确。
利用HPLC技术，可以进一步分析不同种类的叶绿素和其同系物的含量。
二、荧光法1.光诱导荧光法(PAM)光诱导荧光法(PAM)是一种基于叶绿素光合效率的测量方法。
通过测量叶绿素在光合作用过程中释放的荧光信号，可以快速、准确地评估叶绿素的光合活性和健康状态。
2.激光诱导荧光法(LIF)激光诱导荧光法(LIF)是利用激光激发样品后产生的荧光信号来测量叶绿素含量和活性的一种方法，具有高灵敏度和高空间分辨率。
三、生物化学法1.粉末化学法粉末化学法是通过将叶绿素样品制成粉末，再用特定的溶剂提取叶绿素进行测定的方法。
这种方法操作简单，适用于对叶绿素的快速测量。
2.超声波破碎法超声波破碎法利用超声波的作用，能够快速破碎植物细胞壁，并释放出细胞内的叶绿素。
该方法操作简单、高效。
以上所述的叶绿素测量方法只是其中的几种常用方法，随着科技的不断发展，还有许多新的测量方法不断涌现。
在实际的应用中，根据需求和样品的特性选择合适的测量方法至关重要。
希望本文所介绍的叶绿素测量方法能够为相关研究和实际应用提供参考。
叶绿素含量测定方法(精)
叶绿素含量测定方法---丙酮法由于微藻的生长周期比较复杂，包括无性繁殖阶段和有性繁殖阶段，其在不同阶段的生理形态不同，有时藻细胞会聚集在一起，以片状或团状形式存在，在显微镜下难以确定其所包含的细胞数量。
藻细胞中叶绿素的含量（特别是叶绿素a的含量）通常随与细胞的生长呈较好的线性关系，因此可通过测定藻细胞中叶绿素含量变化来反映微藻的生长情况。
叶绿素测定采用丙酮研磨提取法。
取适量藻液于10 mL离心管中在4000 rpm转速下离心10 min，弃去上清液，藻泥中加入适量的100 %的丙酮。
采用丙酮提取法时在试管研磨器中冰浴研磨5 min，4000 rpm离心后，上清液转入10 mL容量瓶中。
按上述方法对藻体沉淀进行萃取，直至藻体沉淀呈白色为止。
定容后，采用722S型可见分光光度计分别测定645 nm和663 nm下萃取液的吸光值，叶绿素含量用以下公式进行计算（Amon,1949）：叶绿素a含量用以下公式进行计算：Chlorophyll a (mg/L) = (12.7×A663 nm－2.69×A645 nm)×稀释倍数叶绿素b含量用以下公式进行计算：Chlorophyll b (mg/L) = (22.9×A645 nm－4.64×A663 nm)×稀释倍数叶绿素总含量用以下公式进行计算：Chlorophyll a＋b (mg/L) = (20.2×A645 nm＋8.02×A663 nm)×稀释倍数由于丙酮的沸点较低，较高温度下挥发很快。
此外，叶绿素稳定性较差，见光易分解，因此，本实验中叶绿素的提取和测定均在低温黑暗条件下进行，以减少提取过程中的损失。
叶绿素提取方法提取液：本试验用DMSO/80%丙酮(l/2，v/v)提取的叶绿素，谭桂英周百成底栖绿藻叶绿素的二甲基亚砜提取和测定法* 海洋与湖沼 1987 18（3）295--300.一、直接浸提法：1、准确量取10ml藻液,加到15ml离心管中，放在台式离心机离心，3500r/min （根据不同的藻选择不同那个的离心转速）离心5min倒上清；留藻泥。
实验10叶绿素含量的测定
叶绿素不溶于水，溶于有机溶剂，可用多种有机溶 剂，如丙酮、乙醇或二甲基亚砜等研磨提取或浸泡提取。 叶绿色素在特定提取溶液中对特定波长旳光有最大吸收， 用分光光度计测定在该波长下叶绿素溶液旳吸光度(也 称为光密度)，再根据叶绿素在该波长下旳吸收系数即 可计算叶绿素含量。 利用分光光计测定叶绿素含量旳根据是Lambert-Beer 定律，即当一束单色光经过溶液时，溶液旳吸光度与溶 液旳浓度和液层厚度旳乘积成正比。其数学体现式为： A=Kbc 式中： A为吸光度；K为吸光系数；b为溶 液旳厚度；c为溶液浓度。
叶绿素a、b旳丙酮溶液在可见光范围内旳最大吸收峰 分别位于663、645nm处。叶绿素a和b在663nm处旳吸 光系数（当溶液厚度为1cm，叶绿素浓度为g·L-1时旳 吸光度）分别为82.04和9.27；在645nm处旳吸光系数 分别为16.75和45.60。根据Lambert-Beer定律,叶绿素 溶液在663nm和645nm处旳吸光度（A663和A645）与 溶液中叶绿素a、b和总浓度（a+b）（Ca、Cb 、Ca十 b，单位为g·L-1），旳关系可分别用下列方程式表达：
叶绿素含量旳测定
一.试验原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱旳吸收， 利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度， 即可用公式计算出提取液中各色素旳含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液旳吸光 度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即 A＝αCL.式中：α百分比常数。当溶液浓度以百 分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质 旳吸光系数。多种有色物质溶液在不同波长下 旳吸光系数可经过测定已知浓度旳纯物质在不 同波长下旳吸光度而求得。
漏斗、大试管
三. 试验环节
叶片洗净、吸干、去大叶脉 ↓
称0.5g叶用丙酮研磨 ↓
叶绿素含量的测定方法
叶绿素含量的测定方法
以下是 8 条关于叶绿素含量测定方法：
1. 嘿，你知道吗，分光光度法就可以测定叶绿素含量哦！就像用魔法镜一样，能把叶绿素的秘密都照出来。
比如说，在实验室里，小明拿着样本放在分光光度计前，专注地操作着，那认真的样子，简直酷毙啦！
2. 还有一种方法叫荧光分析法呢！哇哦，这就像是给叶绿素装上了信号灯，一测就知道它的情况啦！想象一下，小红在那里调试着仪器，期待着结果，那心情肯定很激动呀！
3. 说起来，高效液相色谱法也是很厉害的哟！这不就是给叶绿素来个精准的“体检”嘛！记得有一次，小王看着色谱图出来，脸上露出了惊喜的表情，嘿，肯定是发现了什么有趣的结果！
4. 重量法也能行呀！这就像称一称叶绿素有多重一样。
就像那次和小李一起做实验，看着天平上的数字，我们都在猜叶绿素到底有多少呢！
5. 浸提法也不错呢！感觉就像是给叶绿素泡个舒服的“澡”，然后就能知道它在里面的情况。
那次和朋友们一起用这个方法，大家边做边讨论，可有意思了！
6. 哇塞，难道你不知道还有纸层析法呀！这简直就是给叶绿素来一次奇妙的“旅行”嘛！上次看到老师熟练地操作着，那技术，真牛！
7. 原子吸收光谱法也能测定哦！这是不是跟找宝藏一样神奇呀！就像我们有一次好奇地看着仪器，在想它怎么就能找到叶绿素的秘密呢。
8. 近红外光谱法也很管用呢！想想看，就像是给叶绿素照了个特别的“照片”。
我记得有一次和同学一起用这个方法，大家都觉得好新奇呀！
总之呀，这些方法都各有各的奇妙之处，都能帮助我们了解叶绿素含量呢！。
叶绿素含量的测定方法
叶绿素含量的测定叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，叶绿素含量的测定无论是在生理上，还是在选育品种以及抗性研究等方面都很有必要。
叶绿素含量的经典测定方法是光电比色法，即用光电比色计以无机有色溶液为标准进行比色测定。
该方法不仅要配制无机标准溶液，而且不能对溶液中不同色素分子进行定量测定；分光光度法则不需配制标准溶液，又可对溶液中不同色素分子进行定量测定，已得到广泛应用。
一、原理分光光度法测定叶绿素含量，就是利用叶绿素 a和叶绿素b吸收光谱的不同，测定各特定峰值波长下的光密度，再根据色素分子在该波长下的消光系数，计算出浓度。
叶绿素 a、叶绿素b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于 663nm、 645nm处，同时已知叶绿素a和叶绿素b在663nm处的消光系数分别为82.04和9.27；在645nm处的消光系数分别为16.75和45.60。
这样叶绿素a和叶绿素b的浓度与他们在663nm、645nm处的光吸光密度的关系可用下式表示：D663=82.04C a+9.27C bD645=16.75C a+45.60C b式中D663和D645分别为叶绿素溶液在波长663nm、645nm处的光密度；C a、C b分别为叶绿素a和叶绿素b的浓度，单位g.·L-1。
解方程可得到：计算：C a=12.7D663-2.59D645C b=22.9D645-4.67D663C a+b=20.3D645+8.04D663C a ,C b分别为叶a和叶b的浓度，C a+b为叶a和叶b的总浓度，单位为mg·L-1所测材料单位重量或单位面积的叶绿素含量可按下式进一步计算：叶绿素含量（mg·L-1或mg·dm-2）= C*VA*1000式中C：叶绿素浓度（mg·L-1）；V：提取液总体积（ml）；A：叶片鲜重（g）或面积（dm2）二、丙酮乙醇混合液法提取叶绿素：药品：丙酮：乙醇按1：1体积混合成浸提液仪器：分光光度计-1-1-1方法：丙酮乙醇混合液法1．将丙酮、无水乙醇按1：1比例配成混合浸提液。
叶绿素含量的测定(精)
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6、结果计算：将测定得到的吸光值代入下面的式子： Ca=12.7A663－2.69A645； Cb=22.9A645－4.69A663； 据此即可得到叶绿素a和叶绿素b的浓度（Ca、Cb： mg/L），二者之和为总叶绿素的浓度。最后根据下式可进 一步求出植物组织中叶绿素的含量： 叶绿素的含量（mg/g）= [叶绿素的浓度×提取液体 积×稀释倍数]/样品鲜重（或干重）。
3、取滤纸1张，置漏斗中，用80%丙酮湿润，沿玻棒把提取 液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量80% 丙酮冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入 漏斗中。 4、用滴管吸取80%丙酮，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入 容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用80%丙 酮定容至25ml，摇匀。 5、把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以80% 丙酮为空白，在波长663nm、645nm下测定吸光度。
能否用蓝光区的最大吸收峰波长进行叶绿素a和叶绿素b的
定量分析，为什么？
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今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、 b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个 特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类 胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。 在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰， 所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸 收峰。 2、了解叶绿素a和b及总量的最大吸收峰，学会分 光光度计的使用方法及其原理。
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四、操作步骤
1、取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干材料，擦净组 织表面污物，剪碎(去掉中脉)，混匀。 2、称取剪碎的新鲜样品0.2g，放入研钵中，加少量石英砂 和碳酸钙粉及5ml 80%丙酮，研成均浆，再加80%丙酮 10ml，继续研磨至组织变白。静置3～5min。
叶绿素含量测定方法
叶绿素含量测定方法叶绿素是植物体内含量较高的绿色色素，它在光合作用中起着重要的作用。
因此，测定叶绿素含量对于研究植物的生理过程和生态体系具有重要意义。
本文将介绍几种常用的测定叶绿素含量的方法。
1. 直接萃取法：直接萃取法是最常用的测定叶绿素含量的方法之一。
具体步骤如下：(1) 取新鲜叶片，将其切碎并放入含有乙醇或丙酮的试管中。
(2) 在测定之前，将试管置于黑暗中，以避免光照对叶绿素的破坏。
(3) 将试管加热至60-80摄氏度，使用超声波震荡器震荡一段时间，以使叶绿素从叶片中完全溶解到溶液中。
(4) 将溶液离心，收集上层液体，并使用分光光度计测定其吸光度。
(5) 根据吸光度测定值和标准曲线来计算叶绿素的含量。
2. 酸碱法：酸碱法是测定叶绿素含量的一种简便方法。
具体步骤如下：(1) 取新鲜叶片，用醋酸乙酯将其完全浸泡。
(2) 在测定之前，将其放在黑暗中保护叶绿素不受光照。
(3) 将浸泡叶片的醋酸乙酯溶液转移到一个离心管中，再添加一些酸性乙醇（如95%乙酸）。
(4) 离心一段时间，使叶绿素溶于酸性乙醇中。
(5) 将上清液转移到一个试管中，并用乙醚稀释，使其适合测定。
(6) 使用分光光度计测定溶液的吸光度，并根据标准曲线计算叶绿素的含量。
3. 间接法（叶绿素含量的计算）：间接法是一种根据叶片在不同波长下吸光度的差异来推测叶绿素含量的方法。
具体步骤如下：(1) 使用分光光度计测定叶片在不同波长下的吸光度，包括440 nm、645 nm和663 nm。
(2) 根据以下公式计算：非光合色素 Chl (a+b) = 0.0073 A663 + 0.036 A645叶绿素 a = 0.0127 A663 - 0.00269 A645叶绿素 b = 0.0205 A645 - 0.00488 A663叶绿素 a/b = (0.0127 A663 - 0.00269 A645) / (0.0205 A645 - 0.00488 A663)(3) 使用所得结果进行各种关于叶绿素含量的统计分析。
叶绿素含量测定方法
叶绿素含量测定方法一、引言叶绿素是植物体内的一种重要的生物色素，对于植物的光合作用和生长发育有着至关重要的作用。
因此，测定叶绿素含量对于研究植物生理生态学、环境保护等领域具有重要意义。
本文将介绍几种常用的叶绿素含量测定方法。
二、材料与仪器1. 乙醇：纯度为95%。
2. 醋酸：纯度为99%。
3. 氯仿：纯度为99%。
4. 石油醚：纯度为95%。
5. 甲醛：纯度为37%。
6. 碳酸钠：分析纯。
7. NaOH溶液：浓度为0.1mol/L。
8. 蒸馏水：去离子水或超纯水均可。
9. 离心管、比色皿、移液管等实验器具。
三、方法1. 乙醇法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入95%乙醇中，放置在室温下静置20-24小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的95%乙醇；（5）用分光光度计在663nm和645nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
2. 醋酸法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入80%醋酸中，放置在室温下静置24小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的80%醋酸；（5）用分光光度计在652nm和665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
3. 氯仿-甲醛法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入95%甲醛中，在水浴中加热至90℃保持10分钟；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的氯仿，并振荡混合均匀后静置10分钟；（5）用分光光度计在649nm和665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
4. 石油醚-乙醇法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入石油醚中，放置在室温下静置2-3小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，加入等体积的95%乙醇；（5）用分光光度计在663nm和645nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
5. NaHCO3-NaOH法步骤：（1）取适量新鲜叶片，洗净后切成小段；（2）加入NaHCO3-NaOH缓冲液中，在冰箱中保持暗处理2小时；（3）将样品离心，取上清液；（4）将上清液转移到比色皿中，并用蒸馏水稀释至一定浓度；（5）用分光光度计在665nm处测定吸光度，计算叶绿素含量。
叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定：
1实验仪器：高级型分光光度计，离心机，电子天平，剪刀，研钵，漏斗，移液管。
2实验试剂：丙酮，石英砂。
3实验材料：植物叶片。
4实验步骤：
（1）色素的提取：取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并剪成碎块，秤取0.5g放入研钵中加纯丙酮5ml ，少许石英砂，研磨成匀浆，，再加入80%丙酮5ml ，将匀浆转入离心管，并用适量80%丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心后弃沉淀，上清液用80%丙酮定容至20ml。
（2）测定OD值：取上述色素提取液1ml，加80%丙酮4ml稀释后转入比色杯中，以80%丙酮为对照，分别测定663nm、645nm的OD值。
（3）计算：按照公式计算叶绿素a、叶绿素b、叶绿素a+b的浓度，再根据稀释倍数分别计算每克鲜重叶片中色素的含量。
（4）公式：ρa=12.7A663—2.69A645；
ρb=22.9A645—4.68A663；
ρ（a+b）=ρa+ρb =8.02A663 +20.21A645
注意：ρ代表叶绿素浓度，单位：mg/L 。
1.由于植物叶子中含有水分，故先用丙酮进行提取，以使色素提取液中丙酮的最终
浓度近似80% 。
2.由于叶绿素a、b的吸收峰很陡，仪器波长稍有变差，就会是结果产生很大的误
差，因此最好能用波长较正确的高级型分光光度剂。
测定植物叶绿素含量的方法
测定植物叶绿素含量的方法
植物叶绿素是一种广泛存在于植物、藻类和一些细菌中的绿色色素，能够在吸收光子的过程中将光能转化为化学能。
因此，测定植物叶绿素含量是衡量植物光合作用效率的重要指标之一。
1. 乙醇提取法
将待测叶片粉碎后加入适量的95%乙醇中，放置于暗处浸泡数小时或过夜，然后离心收集上清液。
测定上清液吸光度，通过比较不同波长下的吸光度值，可计算出叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量。
将待测叶片粉碎后加入1.5mL 80%乙醇和0.5mL 1mol/L HCl的混合液中，振荡10分钟后加入玻璃珠摇匀，含有叶绿素的乙醇溶液将变为红褐色。
用0.22µm微孔滤纸过滤，取上清液，用分光光度计测定吸光度值后计算叶绿素含量。
3. 醋酸铜法
将待测叶片加入0.05%醋酸铜溶液中，用滚轴摇匀10分钟后过滤，取上清液后测定吸光度并计算叶绿素含量。
4. 液相色谱法
将待测叶片加入甲醇或乙腈中，使用高效液相色谱仪分析样品中的叶绿素和类胡萝卜素含量。
这种方法需要更为精确的仪器和技术，但可以同时测定多种色素。
无论使用哪种方法测定植物叶绿素含量，都需要注意以下几点：
1. 样品采集应在相同的时间、地点和光照条件下进行，以保证结果可比性。
2. 需要控制乙醇、醋酸铜等试剂用量、摇匀时间和过滤条件等因素，以获得准确的结果。
3. 对于不同种类和部位的植物，可能需要针对性地选择不同的测定方法，并对结果进行修正和比较。
叶绿素SODMDAPOD硝酸还原酶等测定方法
叶绿素，SOD,MDA,POD,硝酸还原酶等测定方法1 叶绿素含量测定：80％的丙酮液的配制：4L丙酮 + 1L蒸馏水。
称0.5g左右的叶片放在50ml的离心管（做三个重复），加入25ml 浓度为80％的丙酮液，放在黑暗处浸提大约36小时后取出，稀释4倍后分别在波长663nm、645nm、652nm和470nm下测定光密度，以80％的丙酮液为空白。
（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》,P35～36）也可用95%乙醇溶液，在665、649、470nm处有最大吸收峰Ca=13.95D665-6.88D649Cb=24.96D649-7.32D665Cx.c=(1000D470-2.05Ca-114Cb)/2452 抗氧化酶活性的定：（2.5g样）0.05mol/L磷酸缓冲溶液 (PBS)（pH=7.8）溶液的配制：65.5506g Na2HPO4·12H2O + 2.65285g NaH2PO4·2H2O, 定容到4L。
（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》，P134）。
取低温保存的鲜样，称2g左右的叶片（或根）放在50ml的离心管，加入20ml浓度为0.05mol/L磷酸缓冲溶液（pH=7.8）（最好是较冷的磷酸缓冲溶液，防止研磨时温度过高使酶失活），研磨（用磨碎机磨），8000r/min的冷冻离心机下离心20分钟，上清液为粗酶液。
2.1丙二醛（MDA）的测定：20％三氯乙酸（TCA）溶液的配制：称200g三氯乙酸，用蒸馏水定容到1000ml。
（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》,P124）；0.5% 硫代巴比妥酸（TBA）溶液的配制：称5g硫代巴比妥酸（TBA）,用20％三氯乙酸（TCA）溶液溶解并定容到1000ml。
（参考陈建勋，王晓峰主编的《植物生理学实验指导》,P124）（先加少量的氢氧化钠1mol/L溶解）；0.5ml酶液（对照用0.5ml的0.05mol/L pH=7.8的磷酸缓冲液代替酶液）（做三个重复）+ 3mlTBA――振荡――沸水浴上反应30min――冷却（至少30min）――比色（OD600、OD532、OD450）。
叶绿素含量的测定
叶绿素含量的测定 Last updated at 10:00 am on 25th December 2020植物生理学实验报告实验题目：叶绿素含量的测定姓名班级学号一、实验原理和目的根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比。
叶绿素(丙酮)在652nm(混合）、663nm、645nm有最大吸收峰。
叶绿素(95%乙醇)在665nm、649nm，类胡萝卜素在470nm有最大吸收峰，根据在分光光度计下测定的吸光度，求得叶绿素的含量二、实验器具和步骤植物材料：女贞实验器具：分光光度计；电子天平；研钵；试管；小漏斗；滤纸；吸水纸；移液管；量筒；剪刀试剂： 95％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸钙粉步骤：1.称取剪碎的新鲜样品左右，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3～5ml 95％乙醇，研成均浆，继续研磨至组织变白。
静置3～5min2. 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到10ml试管中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
3.用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。
直至滤纸和残渣中无绿色为止。
最后用乙醇定容至10 ml ，摇匀4. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。
以95％乙醇为空白，在波长665nm、649nm、470nm下测定吸光度5. 计算公式：叶绿素的含量（mg/g）= (浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重。
Ca=－；Cb=－C=类单位：mg/L三、实验数据和作业2、计算叶绿素含量计算公式：叶绿素的含量（mg/g）= (浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重。
Ca=－；Cb=－C类=单位：mg/L由上面的公式进行代入计算，有：Ca=* Cb=* C类=（1000*）/245=则：叶绿素含量=（*10**1）/=四、数据分析实验中可能清洗研钵和滤纸不是特别干净可能造成误差五、思考题为什么提取叶绿素时干材料一定要用 80％的丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取？答：因为叶绿素存在于叶绿体内囊体上与其上的蛋白质组成色素蛋白复合体，要分离叶绿素和蛋白质必须有水，叶绿素的头部为极性的，有亲水性。
叶绿素含量测定
一、叶绿素提取方法（直接浸提法）（植物生理学实验技术，高俊凤主编，北京：高等教育出版社，2006）（1）取烤烟中部幼嫩叶片，去除叶脉后剪成0.2cm左右的细丝或小块混合均匀后，称取0.10~0.20g,放入50mL离心管中；（2）在离心管中加入0.5mL纯丙酮和10~15mL80%的丙酮,并仔细将粘附在瓶壁边缘的叶片碎末洗到丙酮溶液中去，盖上瓶塞，室温下置暗处浸提过夜，其间摇动3~4次；（3）次日取出离心管，观察叶组织己全部变白时，表示叶绿素已浸提干净，然后用80%丙酮定容至25mL刻度，过滤或离心（25°C,3~5min,12000r • mirfi）后,进行比色测定。
（4）比色测定：将叶绿体色素提取液倒入光径lcm的比色杯内，用分光光度计分别在波长645nm、663nm和652nm下测定吸光度，以80%丙酮为空白对照。
（5）按下列公式分别计算叶绿素3、b和叶绿素的总浓度（mg - L-1）Ca=12.72xA663-2.59xA645 （叶绿素 a 的浓度）Cb=22.88xA663-4.67xA645 （叶绿素 b 的浓度）C T二Ca+Cb 二20.29X A645+8.05X A663由于叶绿素a、b在652nm处的吸收峰相交，二者具有相同的比吸收系数（均为34.5）,也可以在此波长下测定一次吸光度（A652）而求出叶绿素含量：C _ 人52 X ]（6）求得色素浓度后再按下式计算组织中各色素含量（用mg・g】鲜重或干重表示）叶绿体色素含量＜mg g 1 FW）= 一xnFWxlOOO式中，C：叶绿体色素的浓度（mg • L-l）； FW:鲜重（g）；V T：提取液总体积（mL）； n：稀释倍数（在此处为1）。
二、丙酮乙醇混合液法（植物生理学实验技术，郝建军主编，辽宁科学技术出版社，2001年再版）1、将丙酮、无水乙醇按1:2体积混合成浸提液2、称取O.lg,剪成细丝置于盛混合液的试管中，加塞置于暗处，于室温（10~30°C ）条件下浸提，每个一定时间观察浸提情况，以材料完全变口为准。
植物叶绿素测定方法
植物叶绿素测定方法引言：叶绿素是植物叶片中的主要色素，它在光合作用过程中起到了至关重要的作用。
因此，测定叶绿素含量对于研究植物光合作用和生长发育具有重要意义。
本文将介绍一些常用的植物叶绿素测定方法。
一、光谱测定法光谱测定法是通过测量叶片在不同波长下的吸收光谱来间接测定叶绿素含量的方法。
该方法不需要破坏叶片结构，无需显微镜，操作简单，适用于大规模测量。
1.1超级连续光谱仪测定法该方法使用超级连续光谱仪，可以在380-780 nm范围内连续测量光谱，并通过计算吸收峰的面积或最大吸收波长的吸光度来间接测定叶绿素含量。
该方法的优点是快速、准确，并且可以同时测量多个样品。
1.2激光共振散射光谱法该方法使用激光共振散射光谱仪，通过测量散射光在不同波长下的强度，利用散射光和吸收光的关系来计算叶绿素含量。
该方法的优点是高灵敏度、高分辨率，适用于低浓度叶绿素的测定。
1.3荧光光谱法该方法通过测量叶片在受光照射下发出的荧光光谱来间接测定叶绿素含量。
荧光光谱主要包括叶绿素a的激发峰和荧光峰，通过计算两者的比值来推测叶绿素含量。
该方法的优点是快速、非破坏性，适用于大规模测量。
二、色素提取法色素提取法是将叶片中的叶绿素溶解出来，通过分光光度计测量溶液的吸光度来直接测定叶绿素含量的方法。
2.1乙醇提取法该方法将叶片粉碎并浸泡在乙醇中，使叶绿素从叶片中溶解出来，然后通过分光光度计测量乙醇溶液的吸光度。
该方法的优点是简单、易操作，并且适用于多种植物样品。
2.2丙酮提取法该方法将叶片粉碎并浸泡在丙酮中，丙酮具有更高的叶绿素提取效率，然后通过分光光度计测量丙酮溶液的吸光度。
该方法的优点是提取效率高，适用于含有较少叶绿素的样品。
2.3异丙醇提取法该方法将叶片粉碎并浸泡在异丙醇中，使叶绿素从叶片中溶解出来，然后通过分光光度计测量异丙醇溶液的吸光度。
该方法的优点是提取效率高，适用于含有较高叶绿素浓度的样品。
三、色谱测定法色谱测定法是通过将叶片样品中的叶绿素提取出来，并通过高效液相色谱仪进行分析来测定叶绿素含量的方法。
叶绿素含量测定方法
实验14 叶绿素a和b含量的测定（分光光度法）一、目的学会Chla、b含量的测定方法，了解叶片中Chla、b的含量。
二、材料用具及仪器药品菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml）、漏斗、滤纸、乙醇（95%）三、原理叶绿素a、b在波长方面的最大吸收峰位于665nm和649nm，同时在该波长时叶绿素a、b的比吸收系数K为已知，我们即可以根据Lambert Beer定律，列出浓度C与光密度D之间的关系式：D665=83.31Ca+18.60Cb (1)D649=24.54Ca+44.24 Cb (2)(1)(2)式中的D665、D649为叶绿素溶液在波长665nm和649nm时的光密度。
为叶绿素a、b的浓度、单位为每升克数。
82.04、9.27为叶绿素a、b在、在波长665nm时的比吸收系数。
16.75、45.6为叶绿素a、b在、在波长649nm时的比吸收系数。
解方程式(1)(2)，则得：CA=13.7 D665—5.76 D649 (3)CB=25.8 D649—7.6 D665 (4)G=CA+CB=6.10 D665+20.04 D649 (5)此时，G为总叶绿素浓度，CA、CB为叶绿素a、b浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算叶绿素a、b及总叶绿素的总含量。
四、方法步骤1．称取0.1克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇10ml共研磨成匀浆，再加5ml乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到25ml。
2．取一光径为1cm的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm和649nm波长测出该色素液的光密度。
计算结果：叶绿素a含量（mg/g. FW）=叶绿素b含量（mg/g.FW）=叶绿素总量（mg/g.FW）=五、实验报告计算所测植物材料的叶绿素含量。
六、思考题测定叶绿素a、b含量为什么要选用红光的波长？3. 2 叶绿体色素的含量测定原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
叶绿素含量测定
一、叶绿素提取方法（直接浸提法）（植物生理学实验技术，高俊凤主编，北京：高等教育出版社，2006）（1）取烤烟中部幼嫩叶片，去除叶脉后剪成0.2cm 左右的细丝或小块混合均匀后，称取0.10~0.20g ，放入50mL 离心管中；（2）在离心管中加入0.5mL 纯丙酮和10~15mL80%的丙酮，并仔细将粘附在瓶壁边缘的叶片碎末洗到丙酮溶液中去，盖上瓶塞，室温下置暗处浸提过夜，其间摇动3~4次；（3）次日取出离心管，观察叶组织已全部变白时，表示叶绿素已浸提干净，然后用80%丙酮定容至25mL 刻度，过滤或离心（25℃，3~5min,12000r ·min -1)后，进行比色测定。
（4）比色测定：将叶绿体色素提取液倒入光径1cm 的比色杯 内，用分光光度计分别在波长645nm 、663nm 和652nm 下测定吸光度，以80%丙酮为空白对照。
（5）按下列公式分别计算叶绿素a 、b 和叶绿素的总浓度（mg ·L -1) C a =12.72×A 663-2.59×A 645（叶绿素a 的浓度） C b =22.88×A 663-4.67×A 645（叶绿素b 的浓度） C T =C a +C b =20.29×A 645+8.05×A 663由于叶绿素a 、b 在652nm 处的吸收峰相交，二者具有相同的比吸收系数（均为34.5），也可以在此波长下测定一次吸光度（A 652）而求出叶绿素含量：5.341000652⨯=A C T（6）求得色素浓度后再按下式计算组织中各色素含量（用mg ·g -1鲜重或干重表示)n1000FW V C FW) g mg T1-⨯⨯⨯=⋅叶绿体色素含量（式中，C ：叶绿体色素的浓度（mg ·L-1)；FW:鲜重（g ）；V T ：提取液总体积（mL)；n ：稀释倍数（在此处为1）。
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叶绿素含量测定方法---丙酮法
由于微藻的生长周期比较复杂，包括无性繁殖阶段和有性繁殖阶段，其在不同阶段的生理形态不同，有时藻细胞会聚集在一起，以片状或团状形式存在，在显微镜下难以确定其所包含的细胞数量。
藻细胞中叶绿素的含量（特别是叶绿素a的含量）通常随与细胞的生长呈较好的线性关系，因此可通过测定藻细胞中叶绿素含量变化来反映微藻的生长情况。
叶绿素测定采用丙酮研磨提取法。
取适量藻液于10 mL离心管中在4000 rpm转速下离心10 min，弃去上清液，藻泥中加入适量的100 %的丙酮。
采用丙酮提取法时在试管研磨器中冰浴研磨5 min，4000 rpm离心后，上清液转入10 mL容量瓶中。
按上述方法对藻体沉淀进行萃取，直至藻体沉淀呈白色为止。
定容后，采用722S型可见分光光度计分别测定645 nm和663 nm下萃取液的吸光值，叶绿素含量用以下公式进行计算（Amon,1949）：
叶绿素a含量用以下公式进行计算：
Chlorophyll a (mg/L) = (12.7×A663 nm－2.69×A645 nm)×稀释倍数
叶绿素b含量用以下公式进行计算：
Chlorophyll b (mg/L) = (22.9×A645 nm－4.64×A663 nm)×稀释倍数
叶绿素总含量用以下公式进行计算：
Chlorophyll a＋b (mg/L) = (20.2×A645 nm＋8.02×A663 nm)×稀释倍数
由于丙酮的沸点较低，较高温度下挥发很快。
此外，叶绿素稳定性较差，见光易分解，因此，本实验中叶绿素的提取和测定均在低温黑暗条件下进行，以减少提取过程中的损失。
叶绿素提取方法
提取液：本试验用DMSO/80%丙酮(l/2，v/v)提取的叶绿素，谭桂英周百成底栖绿藻叶绿素的二甲基亚砜提取和测定法* 海洋与湖沼 1987 18（3）295--300.
一、直接浸提法：
1、准确量取10ml藻液,加到15ml离心管中，放在台式离心机离心，3500r/min （根据不同的藻选择不同那个的离心转速）离心5min倒上清；留藻泥。
随后在盛有藻泥的离心管中加入蒸馏水，与藻泥混匀后再次离心，目的是除去藻细胞表面的盐份，此清洗过程重复三次。
2、往藻泥中加二甲基亚砜3.33ml，65℃水浴9h，20h；
3、然后离心，将上清转移到10ml棕色瓶中，
4、添加6.67ml80%丙酮到离心管中，混匀，离心，再将上清转移到10ml棕色瓶中。
5、定容，待测。
二、研磨法;
1获取藻泥方法同直接浸提法，
2将藻泥转移到研钵中，加入少许碳酸钙和5mlDMSO/80%丙酮(l/2，v/v)，研磨5min，全部转移到15ml具塞离心管中，涮洗3次，
3离心，将上清转移到10ml棕色瓶中，
4定容，待测。
三、涡旋法:
1、获取藻泥方法同直接浸提法
2、往藻泥中加入0.2g石英砂和少许碳酸钙，然后添加1mlDMSO/80%丙酮(l/2，v/v)，
3、在涡旋器上涡旋2min，再添加3mlDMSO/80%丙酮(l/2，v/v)，混匀，
3500r/min离心5min，收集上清于10ml容量瓶，
4、重复步骤3两次
5、用DMSO/80%丙酮(l/2，v/v)定容到10 mL待测。
（1）预处理过程
每种分别取10ml藻液，置于离心管中，在4000r/min条件下离心7min.后弃去上清液，分别加入定量蒸馏水，混匀后再次离心。
此清洗过程重复三次。
后将离心后的藻泥移到25ml容量瓶中，分别加入4ml二甲基亚砜。
后置于恒温箱中60℃6h处理。
最后在8支容量瓶中分别加入16ml100%丙酮，处理一段时间后待测。
（2）测定
设置三组重复，用分光光度计分别测定每个藻种此三个重复在
470nm,645nm,663nm处的吸光度，记录数据。
（3）计算
按下列公式进行计算：
叶绿素a的浓度：Ca=12.21D663-2.81D645
叶绿素b的浓度：Cb=20.13D645-5.03D663
类胡萝卜素的浓度：Cx*c=(1000D470-3.27Ca-104Cb)/229
叶绿体色素含量（mg/g干重）=色素的浓度（C）*提取液体积*稀释倍数/样品干重。