苏木素伊红混合染色液(一步法)
苏木素伊红染色实验流程
苏木素伊红染色实验流程
选材料，这可得仔细挑。
咱们得找那些合适的组织标本，才能
进行后面的实验。
挑好后，咱们就得处理它们了，让它们的形态和
结构固定下来，这样才能看得更清楚。
染色啦！首先，咱们得把标本泡进苏木素染料里，这样细胞核
就能染上漂亮的蓝色。
等它们吸饱染料后，咱们再用水洗一洗，去
掉多余的染料，让细胞核的颜色更均匀。
接下来，就是给细胞质上色了。
这时候，咱们用伊红染料，把
细胞质染成红色。
跟蓝色的细胞核一对比，特别明显！染完色，再
洗一洗，去掉多余的染料，标本就准备好了。
最后一步，封片！咱们把标本固定在玻璃片上，再盖上一层薄
薄的封片剂，这样，细胞的样子就被永久地保存下来了。
以后想看，直接在显微镜下瞅一眼就行！
整个实验过程得特别小心，每个步骤都不能马虎。
只有这样，
咱们才能看到清晰、准确的染色效果，为医学研究提供有用的帮助。
常用染色步骤HE,马松,糖原
常用染色步骤HE,马松,糖原联系人:周昌斌137******** 133********苏木素伊红染色液一.苏木素伊红染色液套装组合:Harris苏木素染色液50ml水溶性伊红染色液50ml苏木素染色分化液50ml苏木素染色返兰液50ml概述:苏木素伊红染色是组织病理学经典的常规染色方法,历经上百年的应用历史至今仍无可替代。
因此,苏木素伊红染色是病理切片制作中极为重要的技术环节。
二.染色方法:1. 切片脱蜡二甲苯I 5分钟,2. 切片脱蜡二甲苯II 5分钟,3. 100%1、100%2、95%1、95%2、70%梯度乙醇各30,秒钟,4. 自来水流水冲洗1分钟,5. 苏木素染色5—8分钟(依染液新旧调整染色时间),6. 自来水流水冲洗1分钟,7. 进入分化液分化数秒钟,8. 自来水流水冲洗1分钟,9. 进入返兰液处理5—10秒钟,10. 自来水流水冲洗2分钟,11. 进入伊红染色液1-3分钟,12. 自来水冲洗30—60秒钟,13. 75%I、75%II乙醇脱水分色各10秒钟,14. 95%乙醇1、95%乙醇2各脱水10秒钟,15. 100%乙醇1、100%2脱水30-60秒钟,16. 二甲苯1、二甲苯2透明各1分钟,17. 中性树胶封固。
三.染色技术要点:苏木素染色液在静止由于时染液表面于空气中的氧分子接触极液体代表面水分蒸发会产生氧化作用并形成氧化膜。
因此,在使用前应使用滤纸吸附去除氧化膜以免污染切片。
一般情况下应建立良好的使用习惯,每隔2~3天将苏木素染液彻底过滤一次。
为保证HE切片的恒定染色质量建议每500ml苏木素染色液染1200~1500张切片为宜。
苏木素染色液在用于免疫组织化学染色的的复染时应注意调控染色时间,核染色过浅不易辨识组织结构而核染色过深则喧宾夺主,一般复染的时间应控在10-30秒以内。
此外,复染后的分化和返兰步骤不应省略否则将造成整张切片呈淡蓝色,使DAB呈现土黄色。
分化和返兰步骤是HE染色关键点,应在染色实践中依据分化液和返兰液的新旧调整分化和返兰的处理时间。
苏木素伊红混合染色液(一步法)
苏木素伊红混合染色液(一步法)简介：苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛。
苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。
在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。
在HE染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。
Leagene苏木素伊红混合染色液是把苏木素和伊红混合在一起，只需对细胞、组织等样本染色一次，既能使苏木素上色亦可使伊红上色的新型染色液，可用于染色样本的类型有石蜡切片、冰冻切片、血液涂片、培养细胞以及体液涂片(如宫颈粘液涂片、脑脊液涂片等)等，本产品尤其适用于血液涂片和体液涂片染色。
染色原理：1、细胞核染色的原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。
细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA 双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。
苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
2、细胞浆染色的原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。
细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。
当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。
伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。
3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。
在HE染色中常用盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。
(仅供参考)苏木素伊红染色液说明书
苏木素-伊红染色液（H-E）说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液（H-E）H&E Staining System【产品编号】HE-500ml,HE-1000ml,HE-2500ml【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml2500ml；伊红染色液500ml、1000ml 2500ml；返蓝染色液500ml、1000ml2500ml。
【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】苏木素-伊红染色液（H-E）由3部分组成：苏木素染色液、伊红染色液和返蓝染色液。
苏木素氧化后与金属媒染剂作用，可形成不可替代的细胞核颜料。
带有正电荷的苏木素-金属媒染剂复合体，易与细胞核内DNA上带负电荷的磷酸基团结合，因而使细胞核染色形成特定的蓝色。
伊红染色液是一种广泛用于组织学染色中与苏木素染色形成对比的染料（HE染色法）。
此染色法可观察到清晰的细胞结构。
样本中细胞核可经苏木素染色呈蓝色，细胞质经伊红染色呈粉红色。
伊红是一种阴离子染料，可将红细胞染成亮红色，同样也可对其他基本的细胞组分（细胞质，胶原及肌纤维）进行染色。
返蓝染色液为组织学染色试剂，可替代水洗，快速使核染色质和核膜显现蓝色。
由于其坚硬度和碱性，水冲洗后改变苏木素染核后的颜色。
使用BioGnost 返蓝染色液，粘附在玻片上的样本不会发生像使用其他返蓝染色液时发生降解。
【主要组成成分】苏木素：乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝；伊红：伊红、乙醇；返蓝染色液：碳酸锂。
【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C和+25°C 之间。
保持储存环境干燥，不要放置于寒冷的环境中，不要冷冻产品，避免直接阳光直射。
产品使用效期为2年，具体效期见标签。
【适用仪器】不适用【样本要求】使用合适的设备仪器收集组织样本，并标记清楚，根据操作说明进行实验。
为避免发生错误，染色及诊断过程最好由具相关专业知识的技术人员操作。
根据标准医疗诊断实验室标准镜检诊断。
石蜡切片(苏木精-伊红对染法)
石蜡切片制作(苏木精-伊红对染法)实验原理：石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。
苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。
这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。
经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
一、器材及试剂：1. 器材：切片刀，切片机，恒温箱，蜡杯，酒精灯，解剖刀，解剖剪，解剖盘，培养皿，镊子，单面刀片，毛笔，包埋盒，染色缸，盖玻片，载玻片，玻片盘，树胶，树胶瓶，显微镜，温度计，脸盆，水浴锅。
切片机，切片刀，温台，恒温箱，解剖刀，镊子，剪刀，解剖针，单面刀片，小台木，洒精灯，包埋纸盒，染色缸，烧杯，水盆，熔蜡炉，蜡杯。
2．试剂：中性福尔马林固定液、各种浓度的酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸酒精溶液，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。
卡诺（Carnoy）固定液，埃利希苏木精染液，1%伊红酒精溶液，1%盐酸乙醇液，各级酒精（30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%），二甲苯，甘油蛋白粘片剂，中性树胶。
3. 材料：鼠肝、肾、心肌、骨骼肌或其他组织、大豆或小麦、绿豆、洋葱、大蒜、蚕豆的根、茎、叶等。
二、实验原理：石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。
苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。
这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。
经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
三、试剂配法：1．中性甲醛固定液：甲醛（37%-40%，市售，本所购买即为此浓度）100mL磷酸氢二钠 6.5磷酸二氢钾（钠）4g双蒸水900mL2．苏木精、伊红染色液为碧云天产品3．1%盐酸乙醇液盐酸1份70%酒精100份4．甘油蛋白贴片剂：蛋白50 ml甘油50 ml水杨酸钠（防腐剂）1g配制时将鸡蛋一个打破入碗或杯中，去蛋黄留下蛋白，用玻棒调打成雪花状泡沫，然后用粗纸或双层纱布过滤到量筒中，经数小时或一夜，即可滤出透明蛋白液。
苏木素-伊红染色切片褪色的解决办法
（ 稿 日期 ：０ ０ ０ — ２ 收 ２ １－ ６ ０ ）
有机溶剂， 与水互不相溶， 因此需要借助乙醇使组织切片从无
水状态进入到 乙醇 中进行染色反应Ｉ ④放人 １０ 。 】 。 ０ ％乙醇 Ⅱ ５
ｍｎ ⑤放人 ９％乙醇 ５ｍｎ再放入 ８％ ７％７醇各 ５ｍｎ ｉ。 ５ ｉ， ０ 、０ － － ， ｉ，
水水洗是洗去未与组织 结合 的染液 ，将切片表面的浮色洗干
１～ ４ ， ２２ 盖玻片 自 ｈ 动脱落。②将带有组织的盖玻片用镊子整
齐地夹放在染 色架 ， 泡入二 甲苯 Ⅱ溶液 以浸过盖玻 片为宜 ， 时
间 ３ ～ ５ｍ ｎ 洗净黏附在组织上的 中性树胶 吸水 纸吸干 Ｏ ４ ｉ， 用 液体 。③放入 １０ ０ ％乙醇 Ｉ ｎ 由于二 甲苯属于非水性 的 ５ｍｉ，
不易脱落 ， 将其浸泡在二甲苯 Ｉ 溶液时 ， 放人 ３ ～ Ｏ℃烤箱内 ７４
陈旧褪色的石蜡切 片重染方法 ，通常都采 用酸性高锰 酸
钾氧化 、 酸氧化 漂白还原 法日 １ ％冰醋酸１ 高锰酸钾 、 草 和 ０ ３ ］ ， 草 酸氧化漂 白还原法会使组织略带 酸性 ， 破坏组 织正 常结构 ， 形 成空洞和脱落。１ ％冰醋酸脱色法通常需要 ２ ３ｂ作用 时间 ０ － ， 长， 不易掌握 。 笔者 经过 反复试 验证 明 Ｈ Ｅ染色 ，％盐 酸 乙醇分 色 和 １ １ ％氨水 溶液返蓝 ， 重染着色效 果理想 ， 苏木 素染 色后的 自来
３ 章克萍 ， 龙飞． 组织苏木素 一 伊红染 色的石蜡切片褪色后 还原 对 比染色 ． 实用临床医学 ， ０ ８ １ ９ ： ６ ２ ０ ， （ ） １．
来水流水 冲洗 １～ ０ ｉ。 ０２ ｎ ⑩蒸馏水过洗 １２ 。 ｍ ⑩放入 ８％、 ｓ ０ ７％乙醇各 ５ ｉ ⑩ ０ ％ ０ ｎ ｍ 。 ． 伊红乙醇溶液 ３５ ｉ ５ ￣ ｎ ｍ 伊红乙醇
小实验之苏木精伊红染色实验（HE）
小实验之苏木精伊红染色实验（HE）今天小笔为大家带来的是个小小的实验，虽然小，而且很多时候采用自动染色机能帮你实现，但是，原理及试剂的配置仍然是学习的要点哦，小白们还是要搞搞清楚哒~~~~所以，这主要是一篇戳原理的推文，嘿嘿原理H&E (hematoxylin-eosin staining)染色是较为成熟的实验技术，应用广泛，是组织学及病理学检查的基本方法。
针对的是石蜡切片的样本（注意哦，有的小伙伴会用冰冻切片的片子去做，这是不好的！因为冰冻切片一般较厚，会使得染色结果不能够判断，太厚了啦）苏木精染料呈碱性，能够把细胞核内染色质与胞浆内的核酸（称为嗜碱性部分）染为蓝紫色；而伊红为酸性的染料，能将嗜酸性部分比如细胞质核细胞外基质中的成分染为红色。
细胞核内DNA很容易与苏木精以离子键结合，使得细胞核被染为蓝色。
伊红在水中电离后带阴离子，可以与蛋白质结合，使得比如细胞浆、红细胞、结缔组织等染红色。
通过苏木精染色处理后，再利用伊红染胞浆，从而使得各组分呈现出鲜明的对比色，从而可以明确的看出各种组织的病变。
步骤1. 试剂配置：哈瑞（Harris）苏木素液A液：苏木素1 g 无水酒精10 mlB液：硫酸铝钾20 g 纯净水200 ml配制方法：称取KAlSO4·12 H2O 36.72 g及苏木素1 g，分别溶解后混合，加热煮沸后，徐徐加入红色氧化汞0.5 g，此时有大量气泡产生（故容器宜大，以防液体溢出），然后将染液迅速冷却，冷却后过滤。
每100 ml加入冰醋酸6 ml，并加入甘油（丙三醇）10 ml。
混匀后即可使用。
2. 染色步骤：1）取组织的石蜡切片，二甲苯脱蜡，经乙醇逐步脱水：二甲苯（I）5 min；二甲苯（II）5 min; 100％乙醇2 min；95％的乙醇1 min；80％乙醇1 min；75％乙醇1min；蒸馏水洗2 min （各两次，然后把水吸干）。
2）苏木素染色5 min，自来水冲洗（吸干水）。
苏木精-伊红染色使用说明
苏木精-伊红染色使用说明【试剂配制】苏木精染液苏木精配方很多，现介绍常用的是Harris苏木精染液。
苏木精1g95％乙醇溶液10ml钾矾或铵矾20g蒸馏水200ml氧化汞0.5g冰醋酸8.0ml先将苏木精溶于乙醇溶液。
钾矾加温溶解烧瓶后，将倒入，继续加热1min。
加热停止后，缓慢加入氧化汞0．5g，再继续加热煮沸1min。
迅速将烧瓶移人冰水内。
染液冷却呈深色时，加冰醋酸过滤后即可使用。
棕色磨口瓶保存。
室温保存2个月，4℃保存4个月左右。
1.0％伊红染液将1.0g水溶性伊红溶100ml蒸馏水中，每100ml伊红液中加0.2ml冰醋酸。
【实验步骤】(1)石蜡片经脱蜡、水化，单层细胞片经漂洗固定。
(2)苏木素染液染5～10min(染色时间与温度、染液成熟度有关)。
(3)自来水换数次，标本转为深蓝色。
(4)分色：浸入1％稀盐酸乙醇液(100ml 75％乙醇溶液中加1d盐酸)分色数秒钟至1min，脱去多余的蓝浮色，标本转为淡紫红色镜下呈紫红色，胞质无色或灰蓝色(后者为幼稚细胞)。
(5)蓝化：自来水浸洗10min或数小时，甚至更长，标本从淡紫红色转为鲜艳的浅蓝色。
注意：为缩短自来水浸洗时间，使苏木素更加显色，可将标本置淡氨水溶液(400ml自来水加氨水2滴)中10min，切片很快呈鲜艳的浅蓝色，经此处理的标本，要经自来水充分浸洗，否则会影响伊红染色。
(6)蒸馏水漂洗。
(7)伊红染液5～10min，进行对比染色。
(8)用蒸馏水洗去玻片的浮色,经70％、80％、90％梯度乙醇溶液脱水各一次，再分别经95％、100％乙醇溶液脱水各两次，每次1min。
(9)浸入二甲苯两次，每次1min。
中性树胶封片【注意事项】(1)Harris苏木精染液即配即用，不能久存，宜少量配用。
(2)HE染色时，除大批标本采取浸染外，一般以滴染为好。
染液反复使用而被水稀释,使特异性染色和染色速度下降。
(3)苏木精染液出现沉淀现象，是染液变质的一种指示，但滤液仍可使用一段时间。
医院常规苏木素-伊红(HE)染色操作规程
常规苏木素－伊红（HE）染色操作规程染色步骤：1、二甲苯Ⅰ：5－10min2、二甲苯Ⅱ：5－10min3、二甲苯Ⅲ：5－10min4、无水乙醇Ⅰ：1－3min5、无水乙醇Ⅱ：1－3min6、95%乙醇：1－3min7、80%乙醇:：1－3min8、水洗：1min9、苏木素：3－10min10、流水冲洗：1min11、酸乙醇分化：1－3S12、水洗：30S13、40%氨水或温水（40度左右）返蓝1min14、0.5%伊红液染色：1－3min15、水洗：10S16、80%乙醇：10S17、95%乙醇：1－3min18、无水乙醇Ⅰ：1－3min19、无水乙醇Ⅱ：1－3min20、二甲苯Ⅰ：3－5min21、二甲苯Ⅱ：3－5min22、二甲苯Ⅲ：3－5min中性树胶封固（湿封）以上1、2、3中二甲苯的作用：石蜡切片的常规染色必须先用二甲苯脱去切片中的石蜡，其作用是二甲苯可以溶解切片中的石蜡，以使染料易于进入细胞和组织，石蜡的存在妨碍水和染料进入细胞。
以上4、5、6、7中酒精的作用：酒精用于苏木素染色前由高浓度向低浓度逐渐下降处理切片，是为了洗脱用于脱蜡的二甲苯，使水能进入细胞和组织中，因为纯酒精可以中和二甲苯互溶，二甲苯经过二次纯酒精的洗涤，完全被除去，再经过95%、80%酒精使水分逐渐进入切片，以免引起细胞形太结构改变。
此时水洗作用：洗去未与切片结合的染液。
此时分化的作用：苏木素染色之后，用水洗去未结合在切片中的染液，但是在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用分化液0.5~1%盐酸酒精脱去，才能保证细胞核和细胞浆染色的分明，把这个过程称为染色的分化作用，因酸能破苏木素的醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。
此时水洗的作用：为了除去分化液和脱下的染料中止分化作用。
此时水洗的作用：用水洗去未结合的染液，以防止大量伊红染液进入脱水的酒精中。
以上16、17、18、19中酒精的作用：为二甲苯进入细胞创造条件，这时必须彻底脱水，否则二甲苯不能进入细胞组织切片透明度达不到光符显微镜观察时透光度的要求，在显微镜下能显示清晰的细胞和组织结构。
苏木伊红染色
（I9）无水酒精 I 1—2分钟
（20）无水酒精II l－2分钟
透明
（21）二甲苯I 5—10分钟
（22）二甲苯II 5—10分钟
可作透明度试验：在黑色背景下以光线照于切片如果见有乳白色斑片系脱水不足，需
再行脱水。
封固
（23）盖玻片下封固
4．分化十分重要。分化步骤的准确也是染色成败的关键，若分化失当则必然引起染色不匀或过淡，过深等现象，因此分化后一定要镜检，观察胞核是否清晰，胞浆呈淡白色。否则需再次分化，不然一旦复染后，组织会呈紫蓝色即“蓝盖红”现象。
5．还原液不宜过浓，若碱性太强易使组织脱落故以淡为宜。
6．伊红宜淡染，复染过深胞核会不清晰，影响镜检。
逐级降浓度酒精水化
（3）无水酒精I（变为不透明） 1－2分钟
（4）无水酒精II 1－2分钟
（5）95% 酒精 1－2分钟
（6）80% 酒精 1－2分钟
（7）自来水洗 片刻
染色
（8）蒸馏水 片刻
（9）苏木素液染核 10—15分钟ຫໍສະໝຸດ （10）自来水洗 片刻
（11）1%盐酸酒精分化 0.5—1分钟
结果：胞核呈蓝色，胞浆呈红色，红细胞呈桔红色，其它成分呈深浅不同红色。
二、染色过程中的加热
为了缩短某些程度的染色时间，通常可用加热的方法来实现。一般是将切片或涂片浸在染色液内，连同染色皿置于37℃或56℃温箱内至所需时间。
有的染色需用煮沸或近于煮沸的技术，可将染色液在试管内煮沸后倾在载玻片上；或在注满染液的载玻片下面直接加热，直接加热会因溶剂蒸发而使染色剂发生沉淀。这可在倾人染色剂以前在切片上覆盖一块方形滤纸束加以防止。染色完成后冲洗切片时可以很容易地除掉滤纸而又不会损伤切片。
组织学技术神经组织苏木精伊红染色法
组织学技术神经组织苏木精伊红染色法
常用的苏木精Hematoxylin)染液：Mayer苏木精、Ehrlich苏木精等
Ehrlich苏木精液：苏木精2克溶于无水
酒精100毫升，加蒸馏水100毫升、甘油100
毫升、钾明矾（硫酸铝钾）3克、冰醋酸10
毫升，溶液呈浅红色。
用数层纱布将瓶口盖住
（勿加盖），经6~8周成熟，溶液呈紫红色。
可长期保存。
方法：
⑴组织常规石蜡切片，展片，贴片，二甲苯脱蜡，经各级酒精下行至蒸馏水，
苏木精染色10~30分钟。
Zenker液固定的组织应加长染色时间。
⑵自来水洗去多余染料。
⑶入含0.5%盐酸70%酒精分色至核紫红色、细胞质无色。
⑷自来水冲洗或加几滴氨水碱化，细胞核呈蓝色。
⑸蒸馏水冲洗，去蜡掉碱性染料。
⑹入1%伊红水溶液10~30分钟。
⑺蒸馏水洗去多余的伊红染料。
快速经70%、80%、90%酒精。
⑻95%酒精分色至细胞质及结缔组织纤维呈桃红色。
⑼无水酒精脱水，二甲苯透明两次，中性树胶封固。
结果：
细胞核蓝至深蓝色；细胞质、胶原纤维、肌纤维及嗜酸性颗粒桃红色或浅红色。
对比鲜明。
(仅供参考)苏木素伊红染色液说明书
苏木素-伊红染色液（H-E）说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液（H-E）H&E Staining System【产品编号】HE-500ml,HE-1000ml,HE-2500ml【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml2500ml；伊红染色液500ml、1000ml 2500ml；返蓝染色液500ml、1000ml2500ml。
【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】苏木素-伊红染色液（H-E）由3部分组成：苏木素染色液、伊红染色液和返蓝染色液。
苏木素氧化后与金属媒染剂作用，可形成不可替代的细胞核颜料。
带有正电荷的苏木素-金属媒染剂复合体，易与细胞核内DNA上带负电荷的磷酸基团结合，因而使细胞核染色形成特定的蓝色。
伊红染色液是一种广泛用于组织学染色中与苏木素染色形成对比的染料（HE染色法）。
此染色法可观察到清晰的细胞结构。
样本中细胞核可经苏木素染色呈蓝色，细胞质经伊红染色呈粉红色。
伊红是一种阴离子染料，可将红细胞染成亮红色，同样也可对其他基本的细胞组分（细胞质，胶原及肌纤维）进行染色。
返蓝染色液为组织学染色试剂，可替代水洗，快速使核染色质和核膜显现蓝色。
由于其坚硬度和碱性，水冲洗后改变苏木素染核后的颜色。
使用BioGnost 返蓝染色液，粘附在玻片上的样本不会发生像使用其他返蓝染色液时发生降解。
【主要组成成分】苏木素：乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝；伊红：伊红、乙醇；返蓝染色液：碳酸锂。
【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C和+25°C 之间。
保持储存环境干燥，不要放置于寒冷的环境中，不要冷冻产品，避免直接阳光直射。
产品使用效期为2年，具体效期见标签。
【适用仪器】不适用【样本要求】使用合适的设备仪器收集组织样本，并标记清楚，根据操作说明进行实验。
为避免发生错误，染色及诊断过程最好由具相关专业知识的技术人员操作。
根据标准医疗诊断实验室标准镜检诊断。
苏木素-伊红染色液使用方法
苏木素-伊红染色液(H-E)说明书【产品名称】苏木素-伊红染色液(H-E）【型号】苏木素染色液分别为：Mayer型、改良Harris型、型改良Lillie-Mayer型；伊红染色液分别为：水溶型、醇溶型。
【包装规格】货号：DH0006单瓶包装规格分别为：100ml、250ml、500ml、5000ml；每套/盒包装规格分别为：2×100ml/盒、2×250ml/盒、2×500ml/盒、2×5000ml/盒。
【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。
【检验原理】苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合主要用于对细胞组织进行染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛，苏木素-伊红染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必不可少的最基本的染色方法，在病理诊断、教学与科研中广泛应用，具有重要价值，细胞中的细胞核是由酸性物质组成，它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强；细胞浆则相反，它所含的碱性物质与酸性染料(伊红)的亲和力较大。
因此细胞或组织切片经苏木素-伊红染色液染色后，细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色，细胞浆、肌纤维、胶元纤维等呈不同程度的红色，红细胞则呈橙红色。
【主要组成成分】试剂组成主要成分苏木素染色液(改良Lillie-Mayer)或苏木素染色液(改良Harris)或木素染色液(Mayer) 苏木色精伊红染色液(水溶)或伊红染色液(醇溶) 伊红【储存条件及有效期】5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为18个月，在有效期内的已开封染色建议在开封后6个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。
【样本要求】涂片和切片必须充分固定，石蜡切片要充分脱蜡。
【检验方法】l、石蜡切片于二甲苯I、II中脱蜡；2、经无水乙醇和95%乙醇，经8O%乙醇，自来水冲洗；3、苏木素染色液(改良Lillie-Mayer或改良Harris)染色，自来水洗；或苏木素染色液(Mayer)染色；4、苏木素染色后用l%盐酸乙醇溶液分化数秒(l%盐酸乙醇溶液配制：99m1 75%乙醇加1ml浓盐酸）；若用苏木素染色液(Mayer)染色后则不需分化；5、自来水冲洗返蓝；亦可用碳酸锂水溶液返蓝，自来水洗；6、入伊红染色液(水溶)染色，稍洗；若用伊红染液(醇溶），切片应先经80%乙醇脱水后，再入伊红染液(醇溶)染色(忌水洗）；7、95%乙醇I、II中调色；8、无水乙醇I、II中脱水，二甲苯I、II中透明；9、封片胶封片，镜检。
苏木素-伊红染色试剂盒使用说明书
注意：当跳过此步骤时，不使用二甲苯透明，酒精将会保存于组织切片上，导致伊红从切片 上流出。
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13 封片：中性树胶封片，自然风干或烤干，显微镜观察。
注意事项 HE 染色是一个对经验要求非常高的染色，上述实验流程中所提供的染色时间都是参考时间， 要根据实验原理，结合具体情况而定。
染色较弱是由于：1）组织切片过薄；2）染色时间不足；3）随后 95%酒精分化过度。 染色过度是由于：1）染液浓度较高（可能是由于过度蒸发）；2）组织切片过厚；3）染色时 间过长；4）随后 95%酒精分化不足。
伊红染色未分化（一种颜色）是由于： 1）固定不彻底； 2）过度染色，a）染色时间过长；b）染液浓度过高。
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4. 水洗：苏木素染色后，用水洗组织是非常重要的。这一步以及随后的水洗，可将多余的 染料，媒染剂等去除。适当的漂洗可以去除表面金属光泽，金属光泽可阻止苏木素的染色。 注意：跳过此步，将产生不好的结果，例如沉淀的形成，染液的稀释，表面金属光泽的存在。 5. 酸酒精：酸酒精分色剂 3~5sec。在苏木素染色方 注意：如果没有此步骤，组织切片将变为暗紫色。嗜酸结构，例如，胶原，将不会呈现明亮 的粉红色。组织结构之间将很难区分。很难对切片做出正确的判断。 分色过度可能是由于：1)酸浓度过高；2)脱色时间过长等。分色不足是由于：1)酸浓度过低； 2)脱色时间不足；3)在切片上有多余的蛋白或者明胶等。
结果 细胞核染为蓝色；细胞质染为红色。
温馨提示 1. 为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，戴手套等。 2. 试剂应保存于阴凉、干燥、通风良好的环境中。
储存温度 避光储存于室温。
包装清单 货号
HCY112A HCY112B
苏木素伊红染色一步法的研究及应用
苏木素伊红染色一步法的研究及应用
涂琦;刘勇;袁晟
【期刊名称】《江西医药》
【年(卷),期】2012(47)2
【摘要】目的研究苏木素伊红染色一步法及其在各种组织中的染色应用.方法应用不同的苏木素伊红染液配比对不同的组织进行染色,并与常规的HE染色方法进行比较.结果 Mayers苏木素液和水溶性伊红染色液按5:2的配比对各种组织染色效果最佳,与常规HE染色效果差距最小.结论苏木素伊红一步法可采用Mayers苏木素液和水溶性伊红染色液按5:2的配比.
【总页数】2页(P175-176)
【作者】涂琦;刘勇;袁晟
【作者单位】330006,南昌,江西省人民医院病理科;330006,南昌,江西省人民医院病理科;330006,南昌,江西省人民医院病理科
【正文语种】中文
【中图分类】R446.8
【相关文献】
1.人体组织胚胎学：实验组织切片荧光染色后再行苏木素-伊红染色的方法及体会[J], 段翠密
2.Leica自动染色盖片机应用于苏木素-伊红染色的体会 [J], 吴燕杏;韩福兰
3.苏木素-伊红组织染色在全自动组织切片染色机中的使用技巧 [J], 何杰
4.巴氏染色与苏木素-伊红染色在液基细胞涂片中应用研究 [J], 杨则高;谭少辉
5.介绍一种观察凋亡细胞形态学特征的染色方法--苏木素-伊红染色法(HE染色法) [J], 魏文科
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病理室常用试剂配制方法
苏木精染色液的配制
苏木精的氧化与下列因素有关： 苏木精染液PH值。染液偏碱性氧化快，中性时稍 慢，酸性时很慢，所以加酸时的苏木精染液可延 缓氧化。
氧化剂的量。加入人工氧化剂后苏木精可立即被 氧化成熟可用。自然氧化和供氧量有关。如靠近 阳光、染液通风、经常摇动等可加速氧化。
氧化时苏木精液的温度。用碘酸钠等作氧化剂时， 在常温下加入即可，而用氧化汞作氧化剂时，需 把苏木精液煮沸时加入才能放氧。
福尔马林的配制
日常工作中用于组织固定的10%福尔马林， 是由甲醛原液与蒸馏水1:9混合配制而成， 实际浓度含甲醛为4％。其固定液渗透能力 很强，固定均匀，对组织收缩小。
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苏木精染色液的配制
配制苏木精染液所需试剂的作用 ：
• 甘油：作为稳定剂，延缓苏木精染液蒸发，防止 苏木精过度氧化，延长苏木精液的使用期。
• 冰醋酸：可抵销氧化剂的氧化，使苏木精和苏木 红保持均衡。同时又可增加胞核的选择性染色， 使胞核染色质显示得清晰细致。
苏木精染色液的配制
改良Lillie-Mayen苏木素染液的配制：
苏木精染色液的配制
人工氧化：是指在配制苏木精染液时加入一 定量的氧化剂如氧化汞、碘酸钠等可立即 使苏木精氧化成苏木红。但要注意加入氧 化剂的量不能太多，不要使苏木精分子全 部氧化变成苏木红，否则，苏木精染液的 染色力减弱甚至失效。
苏木精染色液的配制
苏木精氧化剂中首选碘酸钠。其优点是在 室温下易溶于水，不需煮沸就能放氧。氧 化后，产生的碘化钠是无害的，染液的稳 定性好。而氧化汞需要在苏木精染液煮沸 时加入才能放氧，当开始放氧时又要立即 把染液置入冷水中终止放氧。随后苏木精 染液每天都会在液面形成一层金属膜，需 要把染液过滤后才能用以染色，而汞盐也 是一种毒性物质。
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苏木素伊红混合染色液(一步法)
货号：G4520
规格：100ml/500ml
保存：RT避光，12个月有效。
产品说明：
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛。
苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。
在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。
在HE染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。
苏木素伊红混合染色液是把苏木素和伊红混合在一起，只需对细胞、组织等样本染色一次，既能使苏木素上色亦可使伊红上色的新型染色液，可用于染色样本的类型有石蜡切片、冰冻切片、血液涂片、培养细胞以及体液涂片(如宫颈粘液涂片、脑脊液涂片等)等，本产品尤其适用于血液涂片和体液涂片染色。
自备材料：
1.盐酸乙醇分化液
2.蓝化液，如稀氨水、碳酸锂溶液等
3.系列乙醇
操作步骤(仅供参考)：
1.切片预处理：取血液涂片或体液涂片置于95%乙醇固定20-60s，用蒸馏水水洗10s。
2.苏木素伊红混合染色液滴染0.5~2min。
3.水洗10~20s。
4.用0.2%盐酸乙醇分化10s，水洗10s。
5.用0.1%碳酸锂水溶液返蓝10s，水洗10s。
6.封片，光学显微镜下观察、拍照。
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染色结果：
细胞核蓝色
细胞质红色
注意事项：
1.切片脱蜡应尽量干净。
系列乙醇应经常更换新液。
2.盐酸乙醇分化时间应根据细胞涂片的具体情况而定。
3.蓝化液常使用0.2～1%氨水或Scott促蓝液或0.1～1%碳酸锂溶液。
4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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