奴卡菌的新鉴定方法和程序200792055103902

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图 1 奴卡菌鉴定程序
表 2 奴卡菌的药敏试验类型
菌种 新奴卡菌 新奴卡菌 新奴卡菌 、皮奴卡菌
结果 SSSS SRSS RRSS
N. brevicatena 皮奴卡菌 ,星形奴卡菌 4 巴西奴卡菌 ,假巴西奴卡菌 ,星形奴卡菌 1/ 6 , 豚鼠皮炎奴卡菌 豚鼠皮炎奴卡菌 ,星形奴卡菌 1 或 4 N. transvalensis ,星形奴卡菌 4 N. transvalensis ,星形奴卡菌 4
101 琼脂混浊试验 :接种 2 滴菌液于 7 H11 平板 ,35 ℃温 育 7d ,如接种处周围出现乳白样混浊为阳性 (最好观察平板 底部) 。
菌种
硫酸酯 酶 (7d)
新奴卡菌
+ (89)
星型奴卡菌 1 -
星型奴卡菌 6 -
星型奴卡菌 4 -
皮奴卡菌
-
豚鼠皮炎奴卡菌 -
巴西奴卡菌 -
假巴西奴卡菌 -
乙酰胺 (5d)
- (88) - (60) + -
明胶液 化 (7d)
+ (83) +
表 1 奴卡菌的生化反应
35 ℃/ 45 ℃ 生长一致
(3d)
7
H11 变浊 7 (d)
glu
- (95) -
+
gly -
-
-
+
+
+ (60) -
+
+ (90)
-
-
+
+
+
+ (94) +
+
- (88) -
+
+
-
-
+
+
-
-
+Leabharlann Baidu
+
API20C 同化试验 (4～7d)
gal
nag
Ino
ado
-
-
-
-
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+ (63) -
-
-
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-
-
+
-
-
-
+ (63) -
-
-
- (75) +
+
-
+
+
+
-
+
+
+
-
t re - (80) + - (94) + (50) + +
N. transvalensis -
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-
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-
+
+
+
+
-
+
-
N. brevicatena -
51 乙酰胺利用试验 :将菌液接种于乙酰胺斜面 ,于 35 ℃ 温育 7d 。斜面由淡黄橙色变为鲜明粉色为阳性 。
61 枸橼酸盐利用试验 : 将菌液接种于枸橼酸盐斜面 , 35 ℃温育 7d ,如斜面呈蓝色为阳性 。
71 明胶液化试验 :将菌液用白金针刺入明胶营养培基 内 ,35 ℃温育 7 d 。取出放 4 ℃15 min ,反复摇动试管至 45°, 观察有无液化的明胶流动 。
RSSR RRSR
SSSR
SRSR RRRR SRRR
注 :抗菌药物的顺序为庆大霉素 、托布霉素 、阿米卡星 、红霉素
二 、奴卡菌的生化反应 ,见表 1 。 三 、奴卡菌的药敏试验类型 ,见表 2 。 四 、结合奴卡菌的药敏试验和生化反应而提出的鉴定程
序 ,见图 1 。
参考文献
1 Kiska DL , Hicks K , Petlit DJ . Identification of medically relevant Nocardia species wit h an abbreviated battery of tests. J Clin Microbiol ,2002 ,40 :134621351. (收稿日期 :2004203215)
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+
注 :葡萄糖 :glu ,甘油 :gly ,半乳糖 :gal , N 乙酰2D2葡萄糖胺 :nag , 肌醇 :ino , 侧金盏花醇 :ado , 菌藻糖 :tre ; ( ) 内数字为阳性或阴性的 %
作者单位 :300270 天津市大港医院检验科 (孙慧芳) ; 天津市公 安医院检验科 (王金良)
(本文编辑 :毛家都)
·消息·
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2002 年 Kiska 等[1 ]提出了结合应用药敏试验 ,生化反应 和 Biomeriex 公司的酵母菌鉴定用 API20C AU X 系统鉴定 8 种与医学相关的奴卡菌 ,并经 75 株标准株和临床株验证 ,可 全部正确鉴定 。
一 、试验方法 11 试验用 015 麦氏单位菌悬液的制备 : 挑取生长旺盛 的菌落多个 ,混悬于含蒸馏水的试管内 ,试管中含直径 1mm 的玻璃珠 。将试管在旋涡混匀器上振荡 ,尽量制成均匀悬 液 。浊度应达 015 麦氏单位 ,另制备 2 U 备用 。 21 药敏试验 :将 015 麦氏单位的菌液接种于 MH 琼脂 培基 , 约 10min 后 加 药 敏 纸 片 : 庆 大 霉 素 10μg , 妥 布 霉 素 10μg ,阿米卡星 30μg , 红 霉 素 15μg , 环 丙 沙 星 5μg , 温 育 于 35 ℃经 72h 。判定耐药的标准为 :庆大霉素抑菌环 ≤15mm , 妥布霉素 ≤20mm ,阿米卡星 ≤20mm ,红霉素 ≤30mm ,环丙
沙星 ≤35mm 。 31API20C AU X 系统的应用 :依说明书将 210 麦氏单位
的菌悬液分别加入系统的个孔内 ,温育于 35 ℃经 7d 。为防 止干燥应在装置内加无菌的湿纸 。观察结果时与对照孔比 较 ,记录糖的同化能力 。
41 溶菌酶抵抗试验 : 在甘油肉汤和含 50μg/ ml 溶菌酶 的甘油肉汤内各接种 4 滴 015 麦氏单位菌液 ,温育 35 ℃观察 7d 。如两管生长情况相同 ,判为溶菌酶抵抗阳性 。
今国内第一套从法学 、临床医学 、管理学系统讨论医疗纠纷 与防范的多媒体教材 。本套教材适合各医院管理人员和临 床医生学习 。
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8145 ℃和 35 ℃生长试验 。将菌液接种羊血平板 2 个 , 分别温育于 45 ℃和 35 ℃经 3d 。如两者生长程度一致为同等 生长 。
91 硫酸芳胺酶试验 :将菌液接种于 01003mol/ L 硫酸芳 胺酶液体培基内 ,温育于 37 ℃经 7d 。加 6 滴 2 mol/ L 碳酸 钠 ,如整个培基变为红色为阳性 。
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中华检验医学杂志 2004 年 12 月第 27 卷第 12 期 Chin J Lab Med ,December 2004 , Vol 27 , No112
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中华检验医学杂志 2004 年 12 月第 27 卷第 12 期 Chin J Lab Med ,December 2004 , Vol 27 , No112
·专题笔谈·
奴卡菌的新鉴定方法和程序
孙慧芳 王金良
奴卡菌属于放线菌属 ,可引起人的奴卡菌病 ,如类似肺 结核的原发性奴卡菌感染 、肺炎 ,偶可引起脑膜炎 、脑脓肿 , 扩散性腹膜炎和足菌肿 ( mycetoma) 。在感染的脓肿和排液 中可见到黄色 、暗红色或黑色小颗粒 。在显微镜下检查可见 此小颗粒由分叉的菌丝组成 ,颗粒周围的菌丝呈棒状 ;但在 痰或脑脊液标本中则见不到此种颗粒 ,只能见到革兰阳性的 分叉或杆状杆菌 。经抗酸染色 ,疑似该菌感染并不困难 ,但 将其鉴定到种则颇困难 。如今 ,与感染人有关的奴卡菌已有 10 种 ,仅星形奴卡菌复合群即分为 6 种 ,故传统的鉴定方法 已不能满足临床需要 。