ALDH基因多态性检测
09 ALDH2基因检测标准操作流程
乙醛脱氢酶多态性检测标准操作规程一、检验目的为保证本实验室检测乙醛脱氢酶基因型时DNA提取、PCR扩增及扩增产物杂交、显色、芯片扫描实验操作的标准化，确保检测结果的准确性、重复性，制定本规程。
二、适用范围适用于血液样本基因组DNA的提取、PCR扩增、杂交显色及报告。
三、方法原理采用基因芯片技术，测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。
当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG,与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列，据此可重组出靶核酸的序列. 乙醛脱氢酶2（ALDH2）在硝酸甘油的代谢过程中发挥着重要的作用，是硝酸甘油的有效代谢物一氧化氮形成的关键，除此之外，还与酒精在人体内的分解代谢有关。
ALDH2（Glu504Lys）基因突变使乙醛脱氢酶活性也降低10倍以上，使酒精在体内从乙醇→乙醛→乙酸→水、二氧化碳的代谢过程受阻，大量乙醛滞留在体内，给身体造成伤害。
除了损伤肝脏导致脂肪肝、肝硬化，甚至肝癌外，还与食道癌、口咽癌和胃癌、冠心病、心肌梗死等风险相关。
通过对ALDH2基因的检测，将为硝酸甘油的用药、饮酒指导及相关高风险疾病的预测提供有效的参考依据。
四、性能指标1. 最低检出限：20ng。
2. 准确度：以3种ALDH2（Glu504Lys）基因型的DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别；以10份企业标化的阴性质控品进行平行两次检测，结果一致且均为阴性；以浓度为8ng/ul的基因组DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别。
2. 精密度：以3种ALDH2（Glu504Lys）基因型的DNA样品分别对同一批试剂盒平行检测20次，每天4次，分为5天，检测结果一致。
五、标本收集1. 标本类型：静脉血的全血标本作为检测标本(抗凝剂为EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准)。
ALDH2基因分型与临床应用
ALDH2基因分型与临床应用ALDH2基因分型与临床应用引言：ALDH2（Aldehyde Dehydrogenase 2）基因是编码酶的基因，该酶主要负责醛类物质的代谢，包括乙醛的代谢。
ALDH2基因在人体中呈现多态性，根据其多态性的表现形式，可以将人群分为不同的基因型。
不同的ALDH2基因分型与临床应用相关性的研究使得我们对该基因的了解更加全面，在临床诊断和治疗中有着重要的意义。
本文将从ALDH2基因的分型与临床应用方面进行详细阐述。
1.ALDH2基因的多态性1.1 ALDH2基因的发现1.2 ALDH2基因的结构与功能1.3 ALDH2基因的遗传模式2.ALDH2基因分型的方法2.1 DNA测序分析2.2 PCR-RFLP法2.3 其他分子生物学方法3.ALDH2基因的主要分型3.1 ALDH21型（正常基因型）3.2 ALDH22型（缺陷基因型）3.3 ALDH23型（其他变异基因型）4.ALDH2基因分型与酒精代谢能力的关系4.1 酒精代谢能力的差异4.2 酒精相关疾病的发生风险4.3 酒精相关疾病的治疗和预防5.ALDH2基因分型与药物代谢的关系5.1 酮康唑（Ketoconazole）的临床应用5.2 樟脑（Camphor）的代谢过程5.3 其他药物的代谢与ALDH2基因分型的关联6.ALDH2基因分型在临床应用中的意义6.1 个体药物治疗的个性化6.2 酒精依赖症的防治6.3 其他与酒精和药物代谢相关的临床研究结语：通过对ALDH2基因分型与临床应用的综合研究，我们深入了解了ALDH2基因在人体中的作用和与相关疾病的关系。
ALDH2基因分型的检测和分析可以为临床诊断和个体化治疗提供重要依据。
未来，我们可以进一步探索ALDH2基因分型在其他领域的应用价值。
附件：本文档涉及的附件具体内容可参考所述研究论文或相关数据分析报告。
法律名词及注释：1.可选性：在合同、法律文件等文件中，指特定条款或规定不能被视为具有强制性，而仅是供各方选择使用的内容。
ALDH2基因多态性检测
ALDH2基因多态性检测项目简介：ALDH ( aldehyde dehydrogenase gene ) 人类乙醛脱氢酶，是一种四联体蛋白，催化乙醛和其他脂肪族醛氧化。
目前已发现ALDH 有19 种同工酶，主要有ALDH1～4 四种，其中ALDH2最为重要。
在肝和胃中具有很高的表达量，是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。
ALDH2基因位于人类第12号染色体，由于ALDH2 基因存在G1510A 多态性，导致氨基酸序列第487位上的谷氨酸被赖氨酸所替换( Glu487 Lys)，其中具有催化活性的野生型称为G等位基因(ALDH2*1)，催化能力失活的变异型称为 A 等位基因(ALDH2*2)。
在亚洲的黄种人群中， ALDH2*2是频率最高且最重要的突变型。
临床用药医生应考虑的因素：ALDH2基因突变致乙醛脱氢酶活性下降引起的临床表现：1、ALDH2与硝酸甘油治疗：硝酸甘油是治疗心绞痛的经典药物，研究发现硝酸甘油的舒血管作用是通过释放一氧化氮（NO）所介导。
但临床上部分病人舌下含服硝酸甘油不能迅速有效地缓解心绞痛，使心肌严重缺血加重。
近来发现， ALDH2与硝酸甘油转化为NO密切相关。
有研究表明，ALDH2*1基因型的患者硝酸甘油治疗心绞痛的疗效明显优于ALDH2*2患者，且前者迅速起效率也明显高于后者。
2、ALDH2与酒精性疾病：乙醛脱氢酶( aldehyde dehydrogenase, ALDH)和乙醇脱氢酶( alcohol dehydrogenase, ADH) 在人体内共同组成了人乙醇脱氢酶系, 负责催化人体的乙醇分解代谢。
ALDH2在肝和胃中具有很高的表达量，是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。
研究发现，突变型基因ALDH2*2的存在能导致ALDH2活力的严重缺失，并与过度饮酒导致的酒精依赖、酒精性中毒、酒精性肝病、消化道癌症等疾病之间存在深刻的联系。
过度的饮酒行为，不仅使ALDH2*2 携带者对酒精产生依赖，还可能引起肝癌等的酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)。
ALDH2基因多态性
•王焱等在发现，ALDH2基因野生型急性心肌梗死患者的血浆中ALDH2活性水平与心肌梗死面积程负相
关，提示血浆ALDH2活性水平越低，心肌梗死面积越大，心功能越差。 •王振军等研究结果显示：ALDH2缺失型会通过增加体内的氧化应激加重高血压，成为高血压的危险因
素。
ALDH2与糖尿病的关系
• 过量的饮酒和高脂饮食是当前不良习惯的主要特征，极易造成摄入量超标，使得人患肥胖、糖尿病等 代谢综合征的几率增高。 • Murata等发现ALDH2基因多态性影响2型糖尿病患者的血糖。
• Hao等通过对821例阿尔兹海默病患者和1380例符合条件的健康对照组进行 分析，发现ALDH2*2/*1基因型的患者患阿尔茨海默病的风险增加。 • 毛跟年等发现：人类神经tau统、调控神经细胞生长发育的功能，并在神经 系统的形成和轴突的通讯传导中起着至关重要的作用。而乙醛可能使tau分 子错折叠而产生超磷酸化，导致tau蛋白分子的聚集，形成配对螺旋样纤维， 从而诱发老年痴呆在病理学上的一种基本病变。
目录
• ALDH2简介 • 指导健康饮酒 • 合理服用硝酸甘油 • 重大疾病的提示
ALDH2简介
• ALDH2全长43438bp,共有13个外显子。在外显子12处发 生点突变，使正常的等位基因ALDH2*1/*1（G/G）变为 ALDH2*2/*1（G/A）或ALDH2*2/*2（A/A），从而使 ALDH2酶的活性降低或者失活。 • ALDH2各基因型的酶活性及中国人群频率分布如下表；
• 结论：乙醛脱氢酶基因多态性检测在指导健康饮酒、硝 酸甘油合理用药、提示重大疾病的高危频向等方面具有 重要临床意义。
口腔鳞状细胞癌
食管癌
胃癌
肠癌
ALDH2与心血管疾病的关系
乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因多态性与酒精相关疾病的研究进展
•综述与讲座•乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因多态性与酒精相关疾病的研究进展邱礼佳！,林贞葵！，陈慧怡！,李金花！,林梦琴!,梁少明！,刘伟"综述，郑桓！校审(1.肇庆医学高等专科学校，广东肇庆526000；2.6圳友一生物科技有限公司，广东深圳518115)摘要：酒与人类的生活密不可分，个体对酒精的敏感程度与其体内酒精代谢酶的活性有关即遗传基因有关*人体内乙醛脱氢酶2(ALDH2)的活性与人体饮酒后出现的各种不适症状之间存在关联*本文综述了乙醛脱氢酶2基因性及其相关疾病的发生机制*关键词：基因多态性；乙醛脱氢酶2(ALDH2)"疾病中图分类号:R446.1,R446.7文献标识码:A文章编号：1674-1129(2020)04-0611-04DOI:10.3969/j.issn.1674-1129.2020.04.002酒在中国人的宴席上有不可替代的作用,酒与人们的日常生活难解难分&适量的饮酒有助于促进人体新陈代谢，传承我国优良的酒文化&但现代人因学习压力或工作压力较大，不少人存在长期过度的酗酒或酒精依赖行，酒精有系的疾病发病率较叫等倒利用糖缺失性转铁蛋(CDT)、CDT/转铁蛋白(TRF)比助酒精性的8但人在2因性酒精的些疾病的发生。
人体饮酒，乙醇通过口腔、食道、胃肠道吸收,90%的过的吸收,过的代谢进入人体*卵的10%的乙醇则通过人体的呼吸作用、体代谢或其它方式排出身体[3]o1。
1ALDH21.1ALDH2的结构和存在部位人体内最常见的乙醛脱氢酶包括四种同工酶，即ALDH1-ALDH4,分不体上的因所编码。
ALDH2编码基因位于12号染色体(12q24.2),■有的因性叫ALDH2是一体，由基金项目:肇庆医学高等专科学校2019年度学生科技活动基金项目，编号2019XS04、2019XS05;广东省医学科研基金项目，编号A2018561作者简介:邱礼佳，男，199.年生。
硝酸甘油疗效基因检测
硝酸甘油疗效基因检测：ALDH2基因多态性硝酸甘油是治疗心绞痛的一线药物，一般来说在舌下含服5-10分钟之内症状缓解。
但中国汉族人含服硝酸甘油无效比例高达25%以上。
这主要是由于线粒体乙醛脱氢酶（ALDH2）基因突变而引起，对于携带该基因有突变的个体不应该把硝酸甘油当做救命药品。
因此通过检测ALDH2的基因型，可预知硝酸甘油的疗效。
另外，饮酒脸红的人也是因为此酶活性的降低或缺失，不能将酒精充分代谢，导致乙醛在肝脏内大量累积，引起酒精中毒，并且此类人群若服用硝酸甘油的效果可能不好甚至无效。
ALDH2是体内催化硝酸甘油生物转化的主要途径，其酯酶活性可以通过将硝酸甘油脱硝形成一氧化氮扩血管。
ALDH2第12个外显子发生一个碱基替换，即G突变为A，使其编码的蛋白质第504位氨基酸残基由谷氨酸转换为赖氨酸(Glu504Lys)，导致酶活性降低或缺失，使硝酸甘油无法产生一氧化氮，难以发挥药效。
rs671G突变为A对应的基因型分别为ALDH2*1/1，ALDH2*1/2，ALDH2*2/2。
突变型酶Lys504对硝酸甘油的催化活性较野生型Glu504严重下降，ALDH2*2/2 是ALDH2*1/1活性的 6–7%，ALDH2*1/2 是ALDH2*1/1活性的 8–15%。
在亚洲人群中，30%-50%的个体都携带有ALDH2*2突变。
因此，今后医生在临床使用硝酸甘油的过程中，建议先检测病人的ALDH2基因型，减少用药无效导致的意外死亡。
图1：冠心病示意图图2：ALDH2*2服药无效率占42.4% ，ALDH2*1携带者仅仅14.9%5 温馨提示：如果您有ALDH2基因突变，硝酸甘油对您无效，您需要改服其他药物，方案如下：硝酸异山梨酯（消心痛）舌下含服，或交替使用中成药麝香保心丸、速效救心丸或复方丹滴丸舌下含化。
如为了预防心绞痛发作，还可交替选用硝酸异山梨酯缓释胶囊（长效异乐定）每次1粒（50mg），一日一次口服。
09 ALDH2基因检测标准操作流程
乙醛脱氢酶多态性检测标准操作规程一、检验目的为保证本实验室检测乙醛脱氢酶基因型时DNA提取、PCR扩增及扩增产物杂交、显色、芯片扫描实验操作的标准化，确保检测结果的准确性、重复性，制定本规程。
二、适用范围适用于血液样本基因组DNA的提取、PCR扩增、杂交显色及报告。
三、方法原理采用基因芯片技术，测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。
当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG,与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列，据此可重组出靶核酸的序列. 乙醛脱氢酶2（ALDH2）在硝酸甘油的代谢过程中发挥着重要的作用，是硝酸甘油的有效代谢物一氧化氮形成的关键，除此之外，还与酒精在人体内的分解代谢有关。
ALDH2（Glu504Lys）基因突变使乙醛脱氢酶活性也降低10倍以上，使酒精在体内从乙醇→乙醛→乙酸→水、二氧化碳的代谢过程受阻，大量乙醛滞留在体内，给身体造成伤害。
除了损伤肝脏导致脂肪肝、肝硬化，甚至肝癌外，还与食道癌、口咽癌和胃癌、冠心病、心肌梗死等风险相关。
通过对ALDH2基因的检测，将为硝酸甘油的用药、饮酒指导及相关高风险疾病的预测提供有效的参考依据。
四、性能指标1. 最低检出限：20ng。
2. 准确度：以3种ALDH2（Glu504Lys）基因型的DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别；以10份企业标化的阴性质控品进行平行两次检测，结果一致且均为阴性；以浓度为8ng/ul的基因组DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别。
2. 精密度：以3种ALDH2（Glu504Lys）基因型的DNA样品分别对同一批试剂盒平行检测20次，每天4次，分为5天，检测结果一致。
五、标本收集1. 标本类型：静脉血的全血标本作为检测标本(抗凝剂为EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准)。
人乙醛脱氢酶2 (ALDH2)多态性分析
对已知基因 DNA 片段再进行PCR特异扩增；
特异的引物配对可以扩增出某一特异基因型的片 段，根据扩增出来的DNA条带大小的差异，可以 分析基因型（纯合型、杂合型）
ALDH2引物
AL1 5’-TAG GAC ACT CAC AGT TTT CACAT C-3’ (78bp) AL2 5’-CTC TCA CAG TTT TCA CTT T-3’ (73bp) AL3 5’-AAG ATG TCG GGG AGT GG-3’
• 凝胶结构均匀，孔径较大， 可用来分离酶的复合物、核 酸、病毒等大分子物质。
• 透明度较好，可直接或干燥 成薄膜后进行染色。
• 不吸收紫外光，可直接利用 紫外光吸收法作定量测定
• 有热可逆性
缺点
• 机械强度差，易破碎，浓度 不能太低。
• 易被细菌污染，不易保存， 临用前配制。
• 琼脂糖支持层上的区带易于 扩散，电泳后必须立即固定 染色。
➢ 引物浓度0.1-0.5 mol/L，浓度过高易导致模 板与引物错配，反应特异性下降
➢ Taq DNA聚合酶0.5-2.5 U/50 l，酶量增加使 反应特异性下降;酶量过少影响反应产量
➢ 四种dNTP浓度应相等 ➢ Mg2+ 是DNA聚合酶的激活剂，0.5 ～2.5mmol/L
基于PCR的扩增产物长度多态性 （PCR-APLP）
综合实验二
人乙醛脱氢酶2 (ALDH2)多态性分析
---PCR-APLP以及PCR 产物电泳鉴定及结果分析
综合实验
（一） 基因组抽提
（二） PCR-APLP
（三）
PCR产物电泳鉴 定及结果分析
高分辨熔解曲线分析技术检测ALDH2和ADH1B基因多态性
论著 基础研究高分辨熔解曲线分析技术检测A L D H２和A D H１B基因多态性∗姜树朋,童永清,赵㊀锐,李㊀艳ә(武汉大学人民医院检验科,武汉４３００６０)㊀㊀摘㊀要:目的㊀建立高分辨率熔解曲线分析体系检测乙醛脱氢酶Ｇ２(A L D H２)和乙醇脱氢酶Ｇ１B(A D H１B)基因多态性.方法㊀针对A L D H２和A D H１B基因序列设计短片段引物,在核酸扩增后,使用E v aG r e e n染料分析不同聚合酶链反应(P C R)产物,并与S a n g e r测序法相比较.结果㊀采用高分辨熔解曲线(H R M)法在同一程序下,９０m i n内即可成功检测出A L D H２r s６７１和A D H１Br s１２２９９８４各种基因型,且其结果与S a n g e r测序一致.结论㊀采用H R M法检测A L D H２和A D H１B基因多态性快速简单㊁经济有效,值得推广.关键词:高分辨熔解曲线;㊀乙醇脱氢酶Ｇ１B;㊀乙醛脱氢酶Ｇ２;㊀单核苷酸多态性D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７３Ｇ４１３０．２０１８．１３．００１中图法分类号:R７３５文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０１８)１３Ｇ１５３７Ｇ０３文献标识码:AH i g h r e s o l u t i o nm e l t i n g a n a l y s i s f o r d e t e c t i o no fA L D H２a n dA D H１B g e n e p o l y m o r p h i s m s∗J I A N GS h u p e n g,T O N GY o n g q i n g,Z HA OR u i,L IY a nә(D e p a r t m e n t o f C l i n i c a lL a b o r a t o r y,R e n m i nH o s p i t a l o f W u h a nU n i v e r s i t y,W u h a n,H u b e i４３００６０,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e㊀T o e s t a b l i s h t h e s y s t e mo f h i g h r e s o l u t i o nm e l t i n g f o r d e t e c t i o n o f a l d e h y d e d e h y d r oＧg e n a s e２(A L D H２)a n d a l c o h o l d e h y d r o g e n a s eＧ１B(A D H１B)g e n e p o l y m o r p h i s m s．M e t h o d s㊀T h e s h o r t p r i mＧe r sw e r e d e s i g n e d f o rA L D H２a n dA D H１B g e n e．D i f f e r e n t PC R p r o d u c t sw e r e a n a l y z e du s i n g E v aG r e e nd y e s a f t e r a m p l i f i c a t i o n,w h i c hw e r e c o n f i r m e db y S a n g e r s e q u e n c i n g．R e s u l t s㊀T h e g e n o t y p e s o fA LD H２r s６７１a n d A D H１Br s１２２９９８４w e r es u c c e s s f u l l y d e t e c t e d i nt h e s a m e p r o c e d u r eb y H R M w i t h i n９０m i n,a n d t h e r e s u l t s w e r e c o n s i s t e n tw i t hS a n g e r s e q u e n c i n g．C o n c l u s i o n㊀T h e a s s a y o fH R Mi s s i m p l e,r a p i d,c o s tＧe f f e c t i v e,a n d r eＧl i a b l e f o r t h ed e t e c t i o no fA L D H２a n dA D H１B p o l y m o r p h i s ma n d i t i sw o r t h y t ob e p o p u l a r i z e d．K e y w o r d s:h i g hＧr e s o l u t i o n m e l t i n g;㊀a l c o h o ld e h y d r o g e n a s eＧ１B;㊀a l d e h y d ed e h y d r o g e n a s e２;㊀s i n g l e n u c l e o t i d e p o l y m o r p h i s m㊀㊀单核苷酸多态性(S N P)作为第三代D N A遗传标记,是指在基因组水平上由单个碱基的变异所引起的D N A序列多态性,包括单个碱基的转换或颠换和单个碱基的插入或缺失.S N P在群体中的发生频率不小于１％,占所有已知多态性的９０％以上.S N P标记可用于高危群体的发现㊁疾病相关基因的鉴定㊁药物的设计和测试等,是人类基因组计划走向应用的重要步骤.乙醇脱氢酶Ｇ１B(A D H１B)和乙醛脱氢酶Ｇ２(A L D H２)是编码酒精代谢相关酶基因中的关键基因,其主要单核苷酸多态性分别r s１２２９９８４㊁r s６７１[１],对应这变异为A D H１Bc．１５１０G＞A和A L D H２c．１４３A＞G.S N P检测方法众多,如限制性片段长度多态性Ｇ聚合酶链反应(P C RＧR F L P)㊁等位基因特异性P C R(A SＧP C R)㊁高分辨熔解曲线(H R M)分析㊁T a qＧM a n探针技术㊁S a n g e r测序等.本研究拟建立H R M 法检测A D H１B r s１２２９９８４㊁A L D H２r s６７１基因多态性.１㊀材料与方法１．１㊀材料㊀采集５８例健康人群者外周血２m L,乙二胺四乙酸二钾(E D T AＧK２)抗凝,保存于－２０ħ冰箱备用.１．２㊀仪器与试剂㊀本研究使用所用主要试剂为外周血D N A提取试剂盒(上海星耀医学公司),E v a G r e e n 试剂盒(北京天根公司);主要仪器为S m a r tL a b A s sＧi s tＧ３２核酸提取仪(上海星耀医学公司),N a n o D r o p ２０００C超微量分光光度计(美国T h e r m oF i s h e r公司),L i g h t C y c l e r４８０荧光定量P C R仪(瑞士R o c h e 公司).１．３㊀方法１．３．１㊀D N A提取㊀按照上海星耀医学公司外周血７３５１国际检验医学杂志２０１８年７月第３９卷第１３期㊀I n t J L a bM e d,J u l y２０１８,V o l．３９,N o．１３∗基金项目:国家重点临床专科建设项目(财社ʌ２０１０ɔ３０５号).㊀㊀作者简介:姜树朋,男,技师,主要从事临床分子诊断技术研究.㊀ә㊀通信作者,EＧm a i l:y a n l i t f１１２０＠１６３．c o m.㊀㊀本文引用格式:姜树朋,童永清,赵锐,等．高分辨熔解曲线分析技术检测A L D H２和A D H１B基因多态性[J]．国际检验医学杂志,２０１８,３９(１３):１５３７Ｇ１５３９．D N A提取试剂盒说明书进行D N A提取,并使用N a n o D r o p２０００C超微量分光光度计测定患者样本D N A浓度和O D２６０/２８０值,确保D N A提取质量.１．３．２㊀扩增原理㊀不同D N A分子的片段长度㊁G C 含量㊁碱基分布等是不同的,任何双链D N A分子在加热变性时都会有其相对独特的熔解曲线形状和熔解温度[２].H R M技术的基本原理就是在P C R反应之前加入饱和染料,在P C R反应之后进行升温变性,随着温度的升高,D N A熔解,插入D N A双链中的染料被释放,荧光信号下降,根据熔解曲线的不同来鉴别不同标本基因型,由于较高的温度均一性(即孔间差异小于０．１ħ)和温度分辨率(即每步最小升温幅度０．０２ħ)使分辨精度可以达到对单个碱基差异的区分,可有效检测单核苷酸多态性[３].１．３．３㊀引物设计㊀根据N C B IG e n B a n k收录的A LＧD H２r６７１和A D H１B r s１２２９９８４序列,采用P r i m e３．０设计短序列引物,并于在线工具P r i m e rB l a s t验证引物,由大连宝生物工程公司合成的引物,引物序列见表１.表１㊀㊀A L D H２r s６７１与A D H１Br s１２２９９８４H R M基因分型引物序列引物名称引物序列熔链温度(ħ)产物大小(b p) A L D H２r s６７１前引物５ᶄＧG G A G T T G G GC G A G T AC G GＧ３ᶄ５９．７５６２后引物５ᶄＧC A G G T CC C AC A CT C AC A G T T TＧ３ᶄ６０．１３A D H１Br s１２２９９８４前引物５ᶄＧG G G A T T A G T A G CA A A A C CC T CA A AＧ３ᶄ５８．９９１７６后引物５ᶄＧC A CC A G G T T G C CA C T A A CC A CＧ３ᶄ６１．４２１．３．４㊀检测体系㊀经条件优化本研究扩增体系确定如下:E v a G r e e n M i x１０．０μL,无核酶水７．６μL, D N A１．０μL(约３０n g),前引物和后引物均为０．７μL (１０μm o l/L).将上述体系L i g h t C y c l e r４８０荧光定量P C R仪中进行扩增,条件为９５ħ变性５m i n后进行P C R循环,P C R循环参数为９５ħ１０s,６０ħ１０s,７２ħ１０s,共４５个循环;扩增结束后进入H R M程序:９５ħ１m i n,４０ħ１m i n,６５ħ以０．０２ħ/s温度速率升至９５ħ,最后４０ħ冷却１０s.１．３．５㊀验证㊀S a n g e r测序法通常作为检测基因多态性的金标准,以本研究建立的H R M法和测序法平行检测５８例样本,比较A L D H２㊁A D H１B基因型的结果进行正确性验证.２㊀结㊀㊀果２．１㊀A L D H２和A D H１B分型结果㊀当L i g h t C y c l e r ４８０P C R仪程序运行结束后,采用L i g h t C y c l e r ４８０S c a n n i n g M o d u l e软件中的G e n e S c a n n i n g模块分析, A L D H２㊁A D H１B基因多态性分型结果的原始曲线与导数曲线见图１~４.图１㊀㊀A L D H２基因多态性分型结果的原始曲线２．２㊀A L D H２和A D H１B分型验证㊀在５８例样本中,H R M法检测出A L D H２G G型３０例,A G型２４例,A A型４例;A D H１B A A型２９例,A G型２６例,G G型３例,与D N A测序法完全符合.采用已建立H R M法重复３次测定各种型别同一浓度的模板D N A,检测结果均相同.证实本研究建立的H R M法可用于检测A L D H２㊁A D H１B基因多态性.㊀㊀注:曲线１为A L D H２杂合子A G型,曲线２为A L D H２野生纯合子G G型,曲线３为A L D H２突变纯合子A A型图２㊀㊀A L D H２基因多态性分型结果的导数曲线图３㊀㊀A D H１B基因多态性分型结果的原始曲线注:曲线１为A D H１B杂合子A G型,曲线２为A D H１B突变纯合子A A型,曲线３为A D H１B野生纯合子G G型图４㊀㊀A D H１B基因多态性分型结果的导数曲线８３５１ 国际检验医学杂志２０１８年７月第３９卷第１３期㊀I n t J L a bM e d,J u l y２０１８,V o l．３９,N o．１３３㊀讨㊀㊀论㊀㊀乙醇及其代谢产物乙醛可以通过多种途径损害肝脏正常的结构与功能,引起酒精性肝炎㊁酒精性肝硬化甚至肝癌[４Ｇ５].乙醇脱氢酶(A D H)介导的氧化途径是乙醇代谢为乙醛的主要途径,在肝脏中Ⅰ型A D H活性最高,对乙醇氧化起着主要作用[６].当其βＧ亚基编码基因A D H１B发生变异,即A D H１B∗１等位基因发生c．１４３G＞A变异,形成A D H１B∗２等位基因,乙醇脱氢酶活性增高,导致乙醇代谢为乙醛的进程加快.A D H１B基因位于染色体色４q２１Ｇ２３处,第３号外显子r s１２２９９８４(c．１４３G＞A)是其最常见的遗传变异.在东亚人群中,A D H１B∗２等位基因(即A等位基因)比例特别高,在我国浙江地区A D H１B∗２等位基因频率可达９８．５％[７].乙醛脱氢酶(A L D H)是机体内源性或外源性乙醛氧化的关键酶,最常见的A L D H有４种,即A L D H１~A L D H４,其中只有A LＧD H２位于肝细胞的线粒体中,对乙醛氧化的K m值最小[８Ｇ９].A L D H２由A L D H２基因编码,当其编码基因发生变异,即A L D H２∗１等位基因发生c．１５１０G＞A 变异,形成A L D H２∗２等位基因,乙醛脱氢酶活性降低,导致乙醛代谢减慢,造成乙醛在体内堆积,从而发生亚洲人脸红综合征[９Ｇ１０].A L D H２基因位于染色体１２q２４．２处,第１２外显子r s６７１是最重要的遗传变异.在东亚人群中,A L D H２∗２等位基因(即A等位基因)可达４０％以上[８].在本研究中采用H R M法在同一程序下,９０m i n 内即可成功检测出A L D H２r s６７１和A D H１B r s１２２９９８４各种基因型,且其结果与S a n g e r测序一致.H R M能够区分D N A序列中单个碱基变化(除了第三类S N P,G/C或者A/T),采用相对廉价的饱和染料E v a G r e e n在P C R反应结束后就可以直接进行熔解曲线反应分析,全程闭管检测,与T a q M a n探针法相比节约了大量检测费用[１１],是一种经济省时高效的基因多态性检测方法.但是H R M仍有应用局限性,只有P C R产物为小片段时,H R M检测的敏感性和特异性才能达到１００％,因此对H R M引物设计要求比普通P C R相对较高.H R M检测精确性受不同D N A浓度的影响[１２],所以必须要求起始模板量一致,同时H R M分析依赖饱和染料和具有精密控温能力的仪器才能实现准确检测.当待研究D N A序列的目标S N P位点由于受到同一扩增片段中的相邻突变位点或者S N P位点的干扰时,可能会导致H R M分型的失败.因此,采用高灵敏的H R M技术检测时,必须了解待研究D N A序列的目标S N P和附近可能存在突变位点或其他S N P位点具体情况.４㊀结㊀㊀论㊀㊀本研究中采用H R M法检测A L D H２和A D H１B 基因多态性快速简单㊁经济有效,为H R M技术的临床应用及大规模筛选A L D H２和A D H１B相关疾病易感人群奠定基础.参考文献[１]L IH,B O R I N S K A Y AS,Y O S H I MU R A K,e t a l．R e f i n e d g e o g r a p h i cd i s t r i b u t i o no f t h eo r i e n t a lA L D H２∗５０４L y s(n e e４８７L y s)v a r i a n t[J]．A n n H u m G e n e,２００９,７３(３):３３５Ｇ３４５．[２]M E H R O T R A M,P A T E L K P．H i g hＧr e s o l u t i o n m e l t c u r v e a n a l y s i s i n c a n c e rm u t a t i o n s c r e e n[J]．M e t h M o l eB i o,２０１６,１３９２(１):６３Ｇ６９．[３]V O S S E N R H,A T E N E,R O O SA,e t a l．H i g hＧr e s o l u t i o n m e l t i n g a n a l y s i s(H R MA):m o r e t h a n j u s t s e q u e n c ev a r iＧa n t s c r e e n i n g[J]．H u m M u t a,２００９,３０(６):８６０Ｇ８６６．[４]S O R E N S E N TI,O R H O L M M,B E N T S E N K D,e ta l．P r o s p e c t i v e e v a l u a t i o no f a l c o h o l a b u s e a n d a l c o h o l i c l i v e r i n j u r y i n m e na s p r e d i c t o r so fd e v e l o p m e n to fc i r r h o s i s．[J]．L a n c e t,１９８４,２(８３９７):２４１Ｇ２４４．[５]C HA N GIC,HU A N GSF,C H E NPJ,e t a l．T h e h e p a t iＧt i s v i r a l s t a t u s i n p a t i e n t sw i t hh e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a:a s t u d y o f３８４３p a t i e n t s f r o m T a i w a n l i v e r c a n c e rn e t w o r k [J]．M e d i c i n e,２０１６,９５(１５):３２８４．[６]G R O P P IA,B E G U E R E TJ,I R O N A．I m p r o v e d m e t h o d s f o r g e n o t y p e d e t e r m i n a t i o no f h u m a n a l c o h o l d e h y d r o g e nＧa s e(A D H)a tA D H２a n dA D H３l o c i b y u s i n gp o l y m e rＧa s ec h a i nr e a c t i o nＧd i r e c t e d m u t a g e n e s i s[J]．C l i n C h e m,１９９０,３６(１０):１７６５Ｇ１７６８．[７]Y IP,H O N GS,Q IX,e t a l．T h eA D H１BA r g４７H i s p o l yＧm o r p h i s mi ne a s tA s i a n p o p u l a t i o n s a n de x p a n s i o no f r i c e d o m e s t i c a t i o n i nh i s t o r y[J]．B M CB i o,２０１０,１０(１):１Ｇ８．[８]C R A B B D W,E D E N B E R G H J,B O S R O N W F,e ta l．G e n o t y p e s f o r a l d e h y d ed e h y d r o g e n a s ed e f i c i e n c y a n da lＧc o h o l s e n s i t i v i t y．T h e i n a c t i v eA L D H２(２)a l l e l e i sd o m iＧn a n t[J]．JC l i n I n v e s t,１９８９,８３(１):３１４Ｇ３１６．[９]P E N G GS,C H E N Y C,WA N G M F,e t a l．A L D H２∗２b u t n o tA D H１B∗２i sac a u s a t i v ev a r i a n t g e n ea l l e l e f o rA s i a na l c o h o l f l u s h i n g a f t e r a l o wＧd o s e c h a l l e n g e:c o r r e l aＧt i o no ft h e p h a r m a c o k i n e t i ca n d p h a r m a c o d y n a m i cf i n dＧi n g s[J]．P h a r m G e n o,２０１４,２４(１２):６０７Ｇ６１７．[１０]Z HA O Y,WA N G C．G l u５０４L y ss i n g l en u c l e o t i d e p o l yＧm o r p h i s mo f a l d e h y d e d e h y d r o g e n a s e２g e n e a n d t h e r i s k o f h u m a nd i s e a s e s[J]．B i o M e dR e s I n t e r,２０１５,２０(１５):１７４０５０．[１１]Z HA N GL,C U IG,L IZ,e t a l．C o m p a r i s o no fh i g hＧr e s oＧl u t i o nm e l t i n g a n a l y s i s,T a q M a nA l l e l i c d i s c r i m i n a t i o n a sＧs a y,a n ds a n g e r s e q u e n c i n g f o rC l o p i d o g r e l e f f i c a c yg e n oＧt y p i n g i nr o u t i n em o l e c u l a rd i a g n o s t i c s[J]．J M o l eD i a g,２０１３,１５(５):６００Ｇ６０６．[１２]E B I L IH,I L Y A S M．H i g hr e s o l u t i o nm e l t a n a l y s i s,D N A t e m p l a t e q u a n t i t y d i s p a r i t i e s a n d r e s u l t r e l i a b i l i t y[J]．C l i n L a b o r,２０１５,６１(１/２):１５５Ｇ１５９．(收稿日期:２０１７Ｇ１１Ｇ２５㊀修回日期:２０１８Ｇ０２Ｇ２１)９３５１国际检验医学杂志２０１８年７月第３９卷第１３期㊀I n t J L a bM e d,J u l y２０１８,V o l．３９,N o．１３。
药物代谢酶和药物作用靶点基因检测项目列举
药物代谢酶和药物作用靶点基因检测项目列举1. 药物代谢酶与转运体基因多态性检测1.1 ALDH2*2多态性检测线粒体乙醛脱氢酶2（ALDH2）同时具有乙醛脱氢酶和酯酶活性，参与乙醇、硝酸甘油等药物的代谢。
ALDH2代谢活化硝酸甘油成其活性代谢产物一氧化氮。
ALDH2*2（Glu504Lys，rs671）多态导致所编码蛋白质504位谷氨酸被赖氨酸所取代，携带突变等位基因（ALDH2*2）的个体ALDH2酶活性下降，杂合子个体酶活性仅为野生型个体的10％，突变纯合子个体酶活性缺失。
因此，携带ALDH2*2等位基因的个体酒精代谢能力下降，少量饮酒即出现脸红、心跳加速等不适；代谢硝酸甘油的能力下降，硝酸甘油抗心肌缺血的效应减弱。
亚洲人群中ALDH2*2等位基因的携带率为30~50％。
携带ALDH2*2等位基因的心绞痛患者应尽可能改用其他急救药物，避免硝酸甘油含服无效。
1.2 CYP2C9*3多态性检测CYP2C9是细胞色素P450酶（CYP）第二亚家族中的重要成员，占肝微粒体P450蛋白总量的20％。
CYP2C9参与抗凝血药、抗惊厥药、降糖药、非甾体类解热镇痛抗炎药、抗高血压药以及利尿药等多种药物的羟化代谢，其中华法林、甲苯磺丁脲和苯妥因均为治疗指数较窄的药物。
CYP2C9活性变化可导致这些药物体内浓度出现较大变化，甚至导致严重药物不良反应的发生。
CYPC2C9*2（rs1799853，C430T，Arg144Cys）和CYP2C9*3（rs1057910，A1075C，Ile359Leu）均导致CYP2C9酶活性降低，CYP2C9*3纯合子个体酶活性仅为该位点野生型纯合子基因型个体（携带CYP2C9*1或Arg144/Ile359等位基因）的4~6％。
中国人群中CYPC2C9*2的频率为0％，CYPC2C9*3的频率为3％。
CYP2C9遗传多态性导致其酶活性变化，从而导致药物代谢种族和个体差异现象。
华法林是临床上常用的抗凝药物，是深静脉血栓、心房纤颤、心脏瓣膜置换术和肺栓塞等疾病的一线用药，其临床疗效和不良反应存在很大的个体差异，血药浓度过高或敏感性增加可导致严重出血事件。
ALDH2基因多态性
• 结论：乙醛脱氢酶基因多态性检测在指导健康饮酒、硝 酸甘油合理用药、提示重大疾病的高危频向等方面具有 重要临床意义。
乙醛脱氢酶活性降低，易引起 体内乙醛蓄积，造成机体损伤。 硝酸酯酶活性降低，无法生成
用药建议
限制饮酒、慎重使用无 水乙醇注射液。
硝酸甘油
具有扩张血管的代谢产物NO，
换药（速效救心丸等）
从而失效。
ALDH2基因多态性与疾病风险
ALDH2与肝脏损伤
•乙醛易与多种蛋白质进行共价结合，损害许多酶的催化功能，进而改变脏器的功能和结构。
•王焱等在发现，ALDH2基因野生型急性心肌梗死患者的血浆中ALDH2活性水平与心肌梗死面积程负相
关，提示血浆ALDH2活性水平越低，心肌梗死面积越大，心功能越差。 •王振军等研究结果显示：ALDH2缺失型会通过增加体内的氧化应激加重高血压，成为高血压的危险因
素。
ALDH2与糖尿病的关系
• 过量的饮酒和高脂饮食是当前不良习惯的主要特征，极易造成摄入量超标，使得人患肥胖、糖尿病等 代谢综合征的几率增高。 • Murata等发现ALDH2基因多态性影响2型糖尿病患者的血糖。
口腔鳞状细胞癌
食管癌
胃癌
肠癌
ALDH2与心血管疾病的关系
•ALDH2在心血管疾病的发生、发展过程中发挥重要作用。 •ALDH2与NO的产生有关，舒张血管，改善缺血区的血供。
aldh2基因多态性在相关癌症中的风险评估
国际检验医学杂志2019年第40卷 ZⅡ
高、特异性强 且 操 作 简 便,因 此 在 呼 吸 道 病 原 体 检 测 中具有巨大 应 用 优 势,而 多 重 实 时 荧 光 定 量 PCR 不 仅包含以上 特 点,还 有 成 本 低 廉 的 优 点,兼 具 实 时 荧 光定量 PCR 和多重 PCR 的 优 点,在 一 个 反 应 体 系 中 即可同时实现定量检测和 高 通 量 检 测 的 目 的,多 重 荧 光定量 PCR 已成为近 年 来 呼 吸 道 病 原 体 检 测 的 研 究 热点。 6 16SrRNA 基因测序
[5] 孙红妹.肺 炎 支 原 体 感 染 的 实 验 室 诊 断 [J].实 用 儿 科 临 床 杂 志 ,2007,22(4):245-248.
[6] KawanamiT,FukudaK,YateraK,etal.Ahighersignificance of an-aerobes:the clone library analysis of bacterial pleurisy [J].Chest,2011,139(3):600-608.
LAMP 技术是一 种 基 于 链 置 换 酶 扩 增 核 酸 的 等 温扩增技术,能够特异、高效、快速地扩增 DNA,适宜 病原体的快速分子生物学诊断。其特征在于为靶基 因的6个区域设计4对特异性引物,利用链置换 DNA 聚合酶在恒温条件下(65 ℃ 左 右)经 过 非 循 环 起 始 阶 段、环扩增阶段、循环延伸 阶 段,形 成 了 一 系 列 具 有 多 个靶 DNA 反向重 复 序 列 串 联 的 不 同 大 小 的 产 物,整 个过程15~60 min即 可 完 成。 从 痰 液 标 本 处 理 到 报 告 结 果 全 过 程 仅 需 2h,与 传 统 痰 培 养 法 比 较 ,大 幅 缩 短了检验周期。该方法具 有 特 异 性 和 敏 感 性 高、检 测 方法简便快 速、污 染 少、自 动 化 程 度 高、试 剂 耗 量 低、 病原体覆盖面广等优点,具 备 了 对 呼 吸 道 感 染 性 疾 病 的快速诊断能力。但恒温 扩 增 芯 片 法 只 针 对 13 种 病 原体的检测,往往会遗漏一 些 少 见 致 病 性 病 原 体 的 检 出,比如而恒温扩增芯片技 术 没 有 涉 及 阴 沟 肠 杆 菌 及 真菌,即使检 测 结 果 为 阴 性,也 不 能 排 除 阴 沟 肠 杆 菌 ·综 述·
基因多态性检测方法
基因多态性检测方法
基因多态性指的是一个基因可以有不同的变异形式，这些变异可以在个体或人群中存在不同的频率。
基因多态性检测方法用于确定个体或人群中某个基因的多态性情况。
一种常用的基因多态性检测方法是基于PCR（聚合酶链式反应）的基因型分析。
这种方法通过扩增目标基因的特定区域，然后使用各种分析技术（如限制性片段长度多态性、单核苷酸多态性分析）来确定基因的多态性。
另一种常用的基因多态性检测方法是基于DNA测序的方法。
这种方法使用高通量测序技术对基因组进行测序，并通过比对分析得出目标基因的变异情况。
除了PCR和测序方法，还有其他一些方法可以用于基因多态性检测，例如蛋白质电泳、DNA微阵列芯片、基因芯片等。
基因多态性检测方法可以应用于各种研究领域，如遗传病风险评估、药物疗效预测、人类起源和进化研究等。
基因芯片法检测浙江省部分汉族人群乙醛脱氢酶2基因多态性
基因芯片法检测浙江省部分汉族人群乙醛脱氢酶2基因多态性目的了解浙江省部分汉族人群乙醛脱氢酶2（ALDH2）基因多态性分布频率?方法在浙江省地区收集1370例汉族人血液标本，对其ALDH2基因12号外显子的特定片段进行特异性扩增，应用基因芯片法判定基因型?结果ALDH2变异型等位基因在浙江省部分汉族人群中的分布频率为44.5%；此人群的ALDH2基因型频率分布与上海人群之间的差异不存在统计学意义，而与洛阳人群之间存在统计学意义?结论浙江省部分汉族人群ALDH2基因变异型有将近一半，表明此人群中ALDH2酶活性缺乏者占近半数；中国汉族人群的ALDH2基因多态性似存在南北地区差异?标签：基因芯片；乙醛脱氢酶2；基因多态性（2014）01_0008_0304Gene Polymorphism of Aldehyde Dehydrogenase 2 （ALDH2）Detecting by Gene Chip in Part of the Han Population in Zhejiang Province.LV Yuan_dong，HU Xi_lian，TAO Ping_hua，et al. Zhejiang Provincial Key lab of Geriatrics，Zhejiang 310013，China[Abstract] Objective To investigate the ALDH2 gene polymorphism in part of Han population in Zhejiang province.Methods With 1370 blood samples of Han populationin Zhejiang province，the specific fragment of ALDH2 gene exon 12 were amplified using gene chip technique to judge the genotypes.Results The frequency distribution of ALDH2 mutant alleles was 44.5% in Han population of Zhejiang province.There was no statistical differences between the distributions of ALDH2 genotyp efrequencies of the population in Zhejiang province compared with that in Shangh ai district；while there was a difference when compared to the population of Luo yang population.Conclusions The percentage of ALDH2 gene variant in Han population of Zhejiang province was nearly half，which showed that the percentage of people lacking ALDH2 enzyme activity was nearly half；and there was a regional difference of ALDH2 gene polymorphism between north and south in Chinese Han population.[Key words] Gene chip；Aldehyde dehydrogenase 2；Gene polymorphism乙醛脱氢酶（aldehyde dehydrogenases，ALDH ）是一组NAD（P）+依赖性酶，广泛参与由体内乙醇?氨基酸?生物胺?维生素?类固醇及脂质的代谢过程中产生的醛类物质的氧化反应，成为相应的羧酸，对减轻醛类物质对机体的毒性作用具有重要意义[1]?ALDH有19种同工酶，其中以位于线粒体内的ALDH2活性最强，在清除体内醛类物质中起主要作用[2]?ALDH2的活性变化与ALDH2基因多态性有关，突变的等位基因形成人群中三种基因型：具有正常催化活性的ALDH2野生纯合子型（ALDH2*1/*1）；活性下降的ALDH2突变杂合子型（ALDH2*1/*2）；活性丧失的ALDH2突变纯合子型（ALDH2*2/*2）?国内外研究发现ALDH2基因多态性在不同人种和地区有不同的频率分布，其与心血管疾病?癌症和药物代谢等各方面均存在很大的关联性，因此对我国汉族人群ALDH2基因多态性的研究具有一定的重要性?1 资料和方法1.1 一般资料：所有标本来自本院体检和住院病例，且均为汉族人?其中男974例，年龄19～79（49.30±9.86）岁；女396例，年龄15～79（49.81±10.64）岁，人群之间无血缘关系?每人抽取2ml外周静脉血，EDTA_NA2抗凝，储存于4℃冰箱中?1.2 实验方法及仪器：试剂采用上海百傲生物科技有限公司生产的试剂盒?仪器包括：BaiO BR_526_24全自动杂交仪?BaiO生物芯片识读仪?BioRadC1000 Thermal Cycler PCR仪?Eppendorf Centrifuge 5418和Eppendorf Centrifuge 5415R高速离心机?按血液基因组DNA提取试剂盒使用说明书来提取和纯化DNA；将提取的1μl DNA加入扩增液后放入PCR仪中，按下列条件扩增：50℃5min，94℃5min，94℃25s，60℃25s，72℃30s，35个循环；将PCR产物放入BaiO杂交显色试剂盒，放入杂交仪中，运行杂交程序，反应结束后，取出芯片；将芯片放入生物芯片识读仪中，用BaiO基因芯片图像分析软件V2.0进行图像扫描与数据分析，输出检测结果?1.3 统计学处理：采用SPSS 19.0软件进行统计学分析?计数资料用百分比表示，率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义?基因型分布采用Hardy_Weinberg 平衡定律，P>0.05为符合遗传平衡?2 结果2.1 ALDH2基因型种类：检测出ALDH2基因型有3种：ALDH2*1/*1型?ALDH2*1/*2型和ALDH2*2/*2型?2.2 ALDH2基因型在年龄和性别上的分布：浙江省汉族人群ALDH2基因野生型分布频率为55.5%，变异型分布频率为44.5%?ALDH2基因型在性别和年龄分布上均无统计学意义（P>0.05），见表1?2.4 Hardy_Weinberg平衡定律：ALDH2基因第12号外显子504位点基因型分布符合Hardy_Weinberg平衡定律，χ2=1.92，P>0.05?3 讨论近年来，对ALDH2的研究越来越广泛，国内外的研究表明ALDH2的基因多态性有民族?种族性差异，东方人中ALDH2变异者较为普遍，而在白人和黑人中很少见[3]?曹西蓉等[4]在中国五个民族的研究结果中发现中国汉族和其他少数民族间存在ALDH2基因型分布的显著差异性?在中国上海和洛阳汉族人群的研究中也发现不同地区的汉族人群ALDH2存在一定的差异性[5，6]?本文的研究结果发现浙江省部分汉族人群的ALDH2基因型频率分布与上海汉族人群之间的差异无统计学意义，而与洛阳汉族人群之间存在统计学差异?可见中国南北地区的汉族人群其ALDH2基因型频率分布存在地域性的差异?最新的单因素和多因素的荟萃回归分析结果表明ALDH2基因多态性与亚洲人群的冠心病和心肌梗死的风险增加密切相关[7]?Xu F等[8]的研究发现：ALDH2突变型有更高的心肌梗死率和糖尿病的发病率；ALDH2突变型可能是中国汉族人群心肌梗死的独立危险因素；并表明ALDH2基因多态性与心肌梗死的发病相关，但与冠状动脉病变程度并无明显的关系?ALDH2突变型人群心肌梗死的发病率更是明显高于正常人群[9]?动物实验[10]也证明ALDH2体内的高表达能减轻心力衰竭小鼠心功能的恶化（显著增加EF和FS值）?抑制心梗受损区域心肌细胞的凋亡?同时抑制心肌细胞内p53蛋白的表达?王洪巨等[11]的研究证实，乙醇激动ALDH2表达增高后可发挥抗心肌细胞凋亡作用?Budas等[12]也证实外源性ALDH2激动剂ALDA_1可产生心肌保护作用，抑制心肌细胞的凋亡?Li Y等[13]发现舌下含服硝酸甘油对部分心绞痛无效的患者ALDH2基因突变是主因?段富交等[14]发现ALDH2的变异基因型能够增加中国人群食管癌患病的风险?郭李柯等[15]认为ALDH2是口腔鳞状细胞癌的易患因素?ALDH2基因型与心血管疾病?癌症和药物代谢等各方面的研究均存在很大的关联性，而我国汉族人群ALDH2的基因型存在普遍的变异性?本研究结果显示浙江省汉族人群ALDH2基因变异型分布频率为44.5%，表明此人群中ALDH2酶活性缺乏者占近半数，因此在今后对该类人群无论从某些药物的应用上，还是在心血管病和某些癌症等疾病的研究中都有重要的启示性?参考文献[1]Daiber A，Wenzel P，Oelze M，et al. Mitochondrial aldehyde dehydrogenase （ALDH_2）—maker of and marker for nitrate tolerance in response to nitroglycerin treatment[J]. Chem Biol Interact，2009，178（1-3）：40-47.[2]罗怀容，张亚平.乙醛脱氢酶2（ALDH2）基因研究进展及其与饮酒行为的关系[J].遗传，2004，26（2）：263-266.[3]Yokoyama A，Muramatsu T，Omori T，et al. Alcohol and aldehyde dehydrogenasegene polymorphisms and oropharyngolaryngeal，esophageal and stomach cancers inJapanese alcoholics[J]. Carcinogenesis，2001，22（3）：433-439.[4]曹西蓉，吴德生.中国五个民族人群样本中酒精代谢相关酶基因多态型分布比较[J].卫生研究，2002，31（3）：156-159.[5]张竹梅，刘茶珍，边建超，等.洛阳市汉族群体ADH2和ALDH2的基因多态性研究[J].遗传，2002，24（5）：532-536.[6]Muramatsu T，Wang ZC，Fang YR，et al. Alcohol and aldehyde dehydrogenase genotypes and drinking behavior of Chinese living in Shanghai [J]. Hum Genet，1995，96（2）：151-154.[7]Wang Q，Zhou S，Wang L，et al. ALDH2 rs671 Polymorphism and coronary heartdisease risk among Asian populations：a meta_analysis and meta_regression[J].DNA Cell Biol，2013，32（7）：393-399.[8]Xu F，Chen YG，Geng YJ，et al. The polymorphism in acetaldehyde dehydrogenase 2 gene，causing a substitution of Glu>Lys（504），is not associated with coronary atherosclerosis severity in Han Chinese[J]. Tohoku J Exp Med，2007，213（3）：215-220.[9]Jo SA，Kim EK，Park MH，et al. A Glu487Lys polymorphism in the gene for mitochondrial aldehyde dehydrogenase 2 is associated with myocardial infarction in elderly Korean men[J]. Clin Chim Acta，2007，382（1_2）：43-47.[10]徐丹令，孙爱军，王时俊，等.乙醛脱氢酶2在大鼠心肌缺氧损伤中的抗凋亡作用[J].中国病理生理杂志，2006，22（4）：683-686.[11]王洪巨，康品方，叶红伟，等.乙醛脱氢酶2在糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的抗凋亡作用[J].南方医科大学学报，2012，32（3）：345-349.[12]Budas GR，Disatnik MH，Mochly_Rosen D. Aldehyde dehydrogenase 2 in cardiacprotection：a new therapeutic target[J]. Trends Cardiovasc Med，2009，19（5）：158-164.[13]Li Y，Zhang D，Jin W，et al. Mitochondrial aldehyde dehydrogenase_2（ALDH2）Glu504Lys polymorphism contributes to the variation in efficacy of sublingual nitroglycerin[J]. J Clin Invest，2006，116（2）：506-511.[14]段富交，宋春花，崔姝沥，等.ADH1B与ALDH_2基因多态性与中国人群食管癌发病风险的Meta分析[J].卫生研究，2012，41（5）：723-729.[15]郭李柯，张超贤，郭晓凤，等.乙醛脱氢酶2?细胞色素P4502E1_RsaI基因多态性和饮酒与口腔鳞状细胞癌发病风险的关系[J].中国医学科学院学报，2012，34（4）：390-395.。
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ALDH2基因多态性检测
项目简介：ALDH ( aldehyde dehydrogenase gene ) 人类乙醛脱氢酶，是一种四
联体蛋白，催化乙醛和其他脂肪族醛氧化。
目前已发现ALDH 有19 种同工酶，主要有ALDH1～4 四种，其中ALDH2最为重要。
在肝和胃中具有很高的表达量，是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。
ALDH2基因位于人类第12号染色体，由于ALDH2 基因存在G1510A 多态性，导致氨基酸序列第487位上的谷氨酸被赖氨酸所替换( Glu487 Lys)，其中具有催化活性的野生型称为G等位基因(ALDH2*1)，催化能力失活的变异型称为 A 等位基因(ALDH2*2)。
在亚洲的黄种人群中， ALDH2*2是频率最高且最重要的突变型。
临床用药医生应考虑的因素：
ALDH2基因突变致乙醛脱氢酶活性下降引起的临床表现：
1、ALDH2与硝酸甘油治疗：硝酸甘油是治疗心绞痛的经典药物，研究发现硝酸甘油的舒血管作用是通过释放一氧化氮（NO）所介导。
但临床上部分病人舌下含服硝酸甘油不能迅速有效地缓解心绞痛，使心肌严重缺血加重。
近来发现， ALDH2与硝酸甘油转化为NO密
切相关。
有研究表明，ALDH2*1基因型的患者硝酸甘油治疗心绞痛的疗效明显优于ALDH2*2患者，且前者迅速起效率也明显高于后者。
2、ALDH2与酒精性疾病：乙醛脱氢酶( aldehyde dehydrogenase, ALDH)和乙醇脱氢酶( alcohol dehydrogenase, ADH) 在人体内共同组成了人乙醇脱氢酶系, 负责催化人体的乙醇分解代谢。
ALDH2在肝和胃中具有很高的表达量，是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。
研究发现，突变型基因ALDH2*2的存在能导致ALDH2活力的严重缺失，并与过度饮酒导致的酒精依赖、酒精性中毒、酒精性肝病、消化道癌症等疾病之间存在深刻的联系。
过度的饮酒行为，不仅使ALDH2*2 携带者对酒精产生依赖，还可能引起肝癌等的酒精性肝病(alcoholic liver disease，ALD)。
ALD是长期、大量饮酒所引起的肝脏病变，已成为现代社会的主要健康隐忧之一。
研究显示，携带ALDH2 变异基因型者大量饮酒将显著增加患肝癌的危险性。
虽然摄入人体的乙醇有90 %以上是在肝脏内完成代谢过程的，但其在摄入过程中与消化道上皮细胞的直接接触也不容忽视。
在饮酒人群中，尤其是重度饮酒者，由于其上消化道长期地与大量酒精直接接触，该区域出现癌变(食道癌、口咽癌等)的几率较高。
研究发现，ALDH2*2突变与饮酒人群患消化道癌的风险之间具有明显的联系。
此外，ALDH2*2显性突变与胃癌的易感性也存在一定的联系。
由此可见，ALDH2*2突变是增加区域性癌化几率的重要因素之一。
ALDH2基因多态性检测标本采集及出报告时间：病人抽静脉血2ml（用
EDTA-K2抗凝）送检验科分子生物诊断室，4个工作日出报告。
电话：8801063 手机：余宗涛65327 高波 64444
ALDH2基因多态性检测临床意义：
1、指导临床硝酸甘油的个体化差异用药剂量：虽然硝酸甘油是心绞痛急性发作的常规首选药物，但该药的临床疗效常因人而异。
中国汉族人群中，硝酸甘油含服无效的比例高达25%以上。
复旦大学、瑞金医院、华山医院等的一项研究显示：部分国人服用硝酸甘油治疗心绞痛无效的原因为线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因发生突变。
ALDH2*2携带者服用硝酸甘油无效风险大幅增加；ALDH2*2携带者在中国约占30-50%，比重大；建议患者在使用硝酸甘油前进行ALDH2基因检测，ALDH2*2携带者建议慎用或不用硝酸甘油，改用其它药物。
2、ALDH2与酒精代谢：①ALDH2异常的饮酒者与正常人群相比，其发生肝癌的风险是正常人的3倍以上；②乙肝病毒携带者，如果又正好是ALDH2异常，其饮酒发生肝癌的危险性将升高52.17倍；③持续的过量饮酒导致肾的代谢压力过大，残留的酒精附着在肾细胞上，致使大量肾细胞处于休眠状态，会导致肾功能下降。
3、ALDH2与消化系统疾病：ALDH2异常的饮酒者与正常人群相比，其发生食道癌的风险是正常人的12.95倍，出现口腔癌的风险则为11.72倍。
4、ALDH2与心血管系统疾病：ALDH2异常的冠心病患者，发生心肌梗死的相对风险也为ALDH2正常的3.42倍。
5、ALDH2与内分泌系统疾病：ALDH2异常的人发生II型糖尿病的风险是正常人的6.08倍。