ELISA检测梅毒螺旋体抗体影响因素探讨

合集下载

酶联免疫吸附法检测梅毒抗体假阳性产生的原因探讨

酶联免疫吸附法检测梅毒抗体假阳性产生的原因探讨发表时间：2018-03-01T15:54:05.010Z 来源：《中国蒙医药》2017年第17期作者：贺安[导读] 为了提高梅毒检测的准确性，采用TPPA法结合临床表现和病史验证ELISA筛查阳性标本，并进一步证实WB方法的结果。

郴州市第一人民医院湖南郴州 423000【摘要】目的：采用ELISA法检测梅毒抗体的假阳性结果，提高梅毒检测的准确性。

方法：酶联免疫吸附剂（ELISA）检测患者血清，通过梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验（TPPA）和westernblot（WB）试验验证阳性标本，制定出消除假阳性结果的措施。

结果：ELISA发现313例阳性病例，193例为老年人（60岁以上），120例为中青年（20岁到60岁）。

在老年组，TPPA方法确诊186例阳性病例，假阳性率为3.63%（7/193）。

WB方法确认181例阳性，假阳性率为6.22%（12/193），WB法与TPPA法无统计学差异。

在中青年组，TPPA确认了117例阳性病例，假阳性率为2.5%（3/120）。

WB确认113阳性，假阳性率为5.83%（7/120），WB法与TPPA法无统计学差异。

结论：为了提高梅毒检测的准确性，采用TPPA法结合临床表现和病史验证ELISA筛查阳性标本，并进一步证实WB方法的结果。

【关键词】酶联免疫吸附法；检测梅毒抗体假阳性；原因探析梅毒是梅毒螺旋体亚种之一，是一种古老的、性传播的疾病，但对全身各脏器有伤害，会造成人体组织损伤和病理改变，导致功能紊乱。

近年来，梅毒发病率呈上升趋势。

梅毒血清检测呈阳性，有些是梅毒感染，但有一部分没有诊断梅毒的依据。

据报道，梅毒血清学检测的假阳性率为3.08%。

梅毒检测结果正确与否是一个非常敏感的医学和社会问题，对患者及其家庭的稳定性有很大的影响。

梅毒的临床诊断主要根据临床症状和梅毒血清学试验。

梅毒螺旋体抗体血清学试验分为两大类型，一大类型为非特异性检测梅毒螺旋体抗体，如快速血浆反应素试验（RPR），甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）等等，主要用于梅毒筛查和治疗效果；另一大类型为特异性检测梅毒螺旋体抗体，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）和免疫印迹试验，荧光抗体的梅毒测试（FTA-ABS）吸收。

ELISA试剂盒试验的影响因素

ELISA试剂盒试验的影响因素
ELISA试剂盒，即酶联免疫法。

ELISA法具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点，并具有操作简便、无放射性危害的优点，因而多年来广泛应用于各高校、医院、血站和科研机构的实验室中。

影响ELISA实验的因素：
我们技术人员通过几年的实验观察，认为影响ELISA实验的因素有如下三方面：
一、试剂盒
1、抗原、抗体活性对效价的影响：主要是试剂中抗体（或抗原）的效价降低或失活，结果不易判断。

再有ELISA试剂盒灵敏度高，对杂质的反应灵敏度也高，实验中空白对照OD值偏高或假阳性；
2、酶结合物浓度过高，也会导致OD值假性增高。

二、试验仪器
1、加样器是否经过校正，酶免测定血清用血量很少，如手工加样器的性能不好，吸取样品不，会使结果忽高忽低；
2、每次洗板前，应检查洗板机针孔有无堵塞。

三、操作
1、检测前先将试剂盒从冰箱取出置室温平衡20min后使用，试剂用完及时放回冰箱冷藏，以免造成试验结果假性降低；
2、加样时注意勿触及包被板底部，以免擦伤包被物使抗体（抗原）脱落而影响实验结果的准确性；
3、洗涤不充分，会使结果假性增高，过分洗涤呈假阴性；
4、比色时应保持包被孔底部无异物、无水汽，特别是冬季板从37℃水浴箱取出时，底部留有水汽，应将板底擦干后进行比色，水汽或孔内气泡也会使OD值升高；
5、抗原与抗体反应达到平衡，依赖于温度与时间。

温度高于45℃易引起失活及标记物脱落，温度低于4℃，影响反应速度。

总之，由于ELISA试剂盒实验的影响因素较多，在实际工作中操作规范、仔细，避免和排除各种因素的影响，使之得到准确可靠的检验结果。

ELISA测定结果的影响因素及其排除方法

【专家讲座】EL ISA 测定结果的影响因素及其排除方法候小玲1,孙圣明2作者单位:1.湖南省石门县人民医院检验科415300;2.湖南省常德市第三人民医院检验科415000作者简介:候小玲(19562),女,湖南石门人,主管检验师。

研究方向:免疫学检验。

【主题词】　酶联免疫吸附测定方法【中图分类号】　R 446.63 【文献标识码】　A 【文章编号】　100926647(2007)1623712202 目前酶联免疫吸附试验(Enzym e 2L inked I mm uno so rbent A ssay ,EL ISA ,简称酶免)是临床实验室最常用的一种标记免疫方法。

EL ISA 在基础研究和常规的临床实验室中有着广泛的适用性,具有操作简便,灵敏度较高,试剂成本低,环保,适于大批量人群抗原抗体筛查等优点,已广泛应用于肝炎病毒,艾滋病毒筛查,癌胚抗原,甲胎蛋白和激素等项目的检测。

但EL ISA 法测定结果的影响因素较多,影响因素主要有:(1)试剂因素;(2)标本因素;(3)实验原理或操作方法;(4)环境因素等。

因此在临床检验工作中,除正常反应外,还常会出现一些假阳性和假阴性等异常结果。

总结如下。

1　试剂因素试剂质量是影响检测结果的直接因素,对于生产厂家出品的试剂盒,其抗原抗体的纯度,标准品定值的准确性,抗体的亲和力、滴度和特异性,标记物的比活性或免疫活性等[1],均对测定结果产生直接影响。

还有试剂盒的稳定有效期,运输条件及储存方式等也均会对结果产生一定程度影响。

在EL ISA 试剂盒中阴性对照的质量也显得尤为重要,当阴性对照吸光度(OD 值)较高,夹心法易产生假阴性,而竞争抑制法易产生假阳性。

还有竞争抑制法中,EL ISA 检测结果与实验用中和抗原浓度和含量有极大关系[2],这也最为我们所忽视。

中和抗原必须严格滴定,如果中和抗原浓度过高,试剂盒敏感性下降,检出率低,假阴性增多[2]。

试剂盒整体上,试剂灵敏度主要取决于抗体亲和常数(K 值)和抗体的滴度,还取决于标准曲线的斜率和零标准管的重复性两个因素[1]。

ELISA法检测的影响因素及其对策

ELISA法检测的影响因素及其对策酶联免疫吸附试验(ELISA)是目前临床实验室检测免疫学指标最受欢迎、应用范围最广泛的方法之一，广泛应用于乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病以及结核等传染类疾病的诊断及激素的检测，具有灵敏度高、特异性强、快速简便、重复性好、成本低、环保且适合大批量人群筛查等优点，虽然操作简单，但是一些影响因素不容小觑，临床待检标本常受溶血、黄疸、脂浊、类风湿因子、高浓度非特异性免疫球蛋白、药物、血液抗凝剂及细菌污染等因素的影响，导致检测结果判断错误。

酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是一种特殊的试剂分析方法，在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术，其试剂易于保存、结果判断较为客观，是目前实验室检测抗原抗体最经济、最普遍的试验诊断方法。

其原理是将抗原(抗体)结合到固相载体表面，再将待测抗体(抗原)、酶标抗原(抗体)与固相抗原(抗体)结合形成免疫复合物，经洗涤使免疫复合物与待测抗体(抗原)呈比例，加入酶反应底物使其与固相上的酶反应变色，根据颜色做定性或定量分析，得出检测结果。

ELISA 法步骤包括标本的采集、保存、加样、温育、洗板、显色、比色以及结果判断，临床采集待检样本过程中常出现溶血、黄疸、脂浊，类风湿因子、高浓度非特异性免疫球蛋白、药物及血液抗凝剂等亦对结果产生一定影响。

虽然操作简单，但还是需要注意一些因素的影响，试剂的选择、正确的操作、优良的仪器都与检测结果密切相关。

本文根据样本的影响因素及操作流程中可能出现的相关问题展开笔述，对ELISA法检测的影响因素及相应对策作一综述，希望提高ELISA法检测的准确性。

1 样本的影响因素临床采取空腹抽取静脉血清作为ELISA 检测标本，标本采集过程中很多因素可能导致检测结果不准确，如溶血、脂浊、类风湿因子、甲胎蛋白、高浓度非特异性免疫球蛋白、药物、血液抗凝剂及细菌污染等。

ELISA检测梅毒螺旋体抗体的结果不确定度评定

比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。但ＰＲＬ分泌不稳定，情绪、运动、性交、饥饿及进食均可影响其分泌。根据其特点，ＰＲＬ明显升高者，一次检查即可确定，而ＰＲＬ轻度升高者不可轻易诊断为高泌乳素血症。ＴＳＨ在女性不孕症中的作用也不可忽视。ＴＳＨ是分子量大约为２８０００道尔顿的糖蛋白，由垂体前叶的嗜碱细胞所
表１１０６例女性不孕症患者血清６项激素含量（ ± ）项目ａＳＨ（ｍＩＵ／Ｌ）ＬＨ（ＩＵ／Ｌ）ＦＳＨ（ＩＵ／Ｌ）ＰＲＬ（ｉｒｇ／ｈａ）正组月组月组
－
－
—
—
８２４－－ — —
志２０１３年第２６卷第６期ＪｏｆＲａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２０１３，２６（６
２９．５岁（为月经正常组）；月经紊乱１０３例，年龄（２２—３９）岁，平均３１．８岁（为月经紊乱组）。
ＬＨ和ＰＲＬ的代谢，引起月经紊乱、失调，严重者可致闭经ｊ。月经紊乱组与正常对照组比较，其ＴＳＨ升高有统计
学意义（Ｐ＜０．０５）。
Ｅ２（ｐｍｏＶＬ）
Ｔ（ｎｍｏｌ／Ｌ）
１２８．９５４－３７．２５１１９．５８－４４４．２５７９．２５－４４９．４４２．０６±１．２５２．１１±１．３８１．９８－１４．３３

影响ELISA实验因素阐述

影响ELISA试验因素叙述酶联免疫吸附试验（Enzyme—Linked ImmunosorbentAssays,ELISA）以来，由于ELISA具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点，使其得到快速的发展和广泛应用。

尽管早期的ELISA由于特异性不足高而阻碍了其在实际中应用的步调，但随着方法的不绝改进、料子的不绝更新，尤其是采用基因工程方法制备包被抗原，采用针对某一抗原表位的单克隆抗体进行阻断ELISA试验，都大大提高了ELISA的特异性，加之电脑化程度高的ELISA检测仪的使用，使ELISA更为简便应用和标准化，从而使其成为广泛应用的检测方法之一、基本原理：ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会转变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。

此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。

滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，显现颜色反应。

因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。

此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定，这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来，使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。

一、试剂的影响因素：应选用有国家批准文号，质量靠得住的产品，不能图便宜，忽视质量保证。

试剂应妥当保管于4℃冰箱内，在使用时先平衡至室温，不同批号的试剂组分不宜交叉使用。

试剂开启后要在一周内用完，剩余的试剂下次用时应先检查是否变质，显色剂如被污染变色将造成全部显色，导致错误结果。

过期的试剂不宜再用，若别无选择，应做好双份质控品的监测，确保结果的可靠性。

二、影响因素：酶联免疫（ELISA）是目前检验科常用的免疫学检测方法之一，其操作简单，无须特殊设备，使其在各级医院都有应用。

但是，假如忽视了影响其结果的因素，难免会造成假阴性或假阳性，因此，了解影响试验的因素，减少过错事故的发生是极其必需的。

ELISA检测的影响因素的分析

ELISA检测的影响因素的分析【关键词】 ELISA检测；影响因素；分析ELISA即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。

Engvall 和Perlmann于1971年最先应用该法进行了IgG定量测定，并命名为“enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)”。

由于ELISA方法灵敏，特异性强不需要特殊设备，所以被广泛应用于各种抗原和抗体测定［1］。

如乙肝、丙肝抗体等等。

但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在临床检验中除正常反应外，有时常可见到一些错误结果（即假阳性或假阴性结果）。

本文就ELISA检测的影响因素做如下讨论。

1 标本的影响1.1 溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易产生假阳性可能是溶血血清中含有过氧化酶物质（红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素），在洗涤过程中往往难以完全洗脱，它可使H2O2释放出原生态氧(O)，从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质，即显蓝色，产生假阳性［2］。

所以严重溶血标本禁用。

1.2 标本受细菌污染因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。

1.3 标本保存不当在冰箱中保存过久的标本，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、造成假阳性；为克服上述干扰，ELISA测定的血清标本宜为新鲜采集；如不能立即测定，5 d内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存；冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。

1.4 塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性最好使用真空采血管；并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。

1.5 标本凝固不全在工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清。

利用ELISA检测梅毒结果分析

梅毒是由苍白密螺旋体的苍白亚种即梅毒螺旋体（ｒｐｎｍａｐｌｄｍ，Ｐ所引起的一种古老的性ｔｏｅａｉｕＴ）ｅｌ
传播疾病，国２我０世纪６０年代已基本消灭，０年８代起又死灰复燃，呈逐年增多之势 … 。选择简且
泰
山
医
学
院
学
报
ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＴＳＡＩＨＡＮＭＥＤＩＡＬＣＬＣＯＬＥＧＥＶｏ．Ｎｏ２２１１３１．００
利用ＥＩＡ检测梅毒结果分析ＬＳ
石娜
（山医学院附属泰山医院，泰山东泰安
２１０７００）
关键词：梅毒；酶联免疫吸附实验；明胶颗粒凝集实验中图分类号：４６文献标识码：文章编号：０４７１（０００１４ｏＲ４Ｂ１０－１５２１）２４＿１
对于梅毒的检测，许多医疗单位仍采用ＴＵＴＲＳ这种非特异性梅毒螺旋体抗原血清学试验进行初筛，由于这种方法检测的是病人血清或血浆中的抗心磷脂抗体，对于其他一些非梅毒患者如红斑狼疮等自身免疫性疾病容易产生生物学假阳性Ｊ。
测血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。利用抗原的不同特性，合使用可得到更高的敏感性和特异性。联综上所述，ＰＥＩＡ法敏感性高，异性好，Ｔ —ＬＳ特操作简便，断结果客观准确，其他方法更科学、判较更规范，可应用于卫生检验和血液中心的自动化检测系统，是筛查和检测梅毒的首选方法。

浅谈ELISA的影响因素

浅谈ELISA的影响因素ELISA即酶联免疫吸附试验,ELISA是一种敏感性高、重复性好的固相酶联免疫测定广泛用于各种抗原抗体的检测,但影响因素较多,有时易出现假阳性或假阴性,本文重点针对内源性、外源性因素对ELISA测定结果的影响进行探讨。

标签：酶联免疫吸附试验(ELISA);测定结果;影响因素如今病毒性疾病的诊断主要依赖对其抗原、抗体的检测。

而检测方法大多采用酶联免疫吸附试验(ELISA),如何保证实验结果的准确性,现结合自己的实际工作经验,总结了下列影响因素,希望对检验工作者有所帮助。

1内源性干扰因素1.1类风湿因子(RF)在类风湿患者、其他自身免疫性疾病及正常人的血清中,常含有较高或不同浓度的RF,RF一般为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。

用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可以充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标抗体结合,表现出假阳性反应。

1.2补体补体易激活C1q起到铰链作用,结果易出现假阳性。

1.3嗜异性抗体人类血清中含有天然的嗜异性抗体,将ELISA系统中一抗和二抗连接起来,造成假阳性。

1.4自身抗体由于B细胞的超反应性,患者血清中常出现一些自身抗体,能与靶抗原结合形成复合物。

1.5溶菌酶可致假阳性。

2外源性干扰因素2.1标本溶血,分离不完全、加有血球。

2.2标本被细菌污染。

2.3标本储存时间过长。

2.4标本凝固不全。

2.5冰冻保存标本反复冻融。

2.6试剂在室温下平衡<30分钟,配洗液的水不符合要求。

2.7加样速度过快,加样时加在孔壁上或产生气泡。

2.8温育时关键因素之一,尽量选择温度低的,温育时间长的试剂盒。

2.9洗涤要彻底。

2.10双波长比色可减少容器上的划痕和指印等造成的光干扰。

2.11试剂质量的影响。

选用高质量的试剂是保证结果准确的关键因素之一。

3高值鉤状效应(HOOK效应)在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时出现钩状效应。

过量抗原分别和固相抗体和酶标抗体结合,而不再形成“夹心复合物”类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同,如按常规法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应,因为标准曲线到达高峰后钩状弯落。

影响ELISA试验结果操作的因素总结

影响ELISA试验结果操作的因素总结操作的影响因素酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)是一种特别的试剂分析方法，在免疫酶技术的基础上进展起来的一种新型的免疫测定技术，其试剂易于保存、结果推断较为客观，是目前试验室检测抗原抗体*经济、*普遍的试验诊断方法。

影响ELISA试验结果操作的因素总结如下：1 、试剂的预备试剂的质量如抗原抗体的纯度及亲和力、标记物的比活性、滴度及特异性等直接影响检测结果，为保证检测质量，全部试剂必需经国家食品药品监督管理总局注册批准、批检测合格，临床评估特异性、敏感性、稳定性较高且在有效期内才有使用价值。

不同厂家试剂敏感性、特异性不尽相同，有报道不同厂家酶标板孔间 A 值差大小可达 15%，标记酶的活性及显色液的稳定性也相差较大，所以合理有效的试剂选择尤为重要，对 ELISA 试剂盒应正确选择，定期评价并建立科学的接收标准，结合常规血液筛查状况，对实际的均一性、适用性、稳定性，选出灵敏度、特异度及精密性合适的试剂保证检测结果的精确。

有报道不同厂家-IgG 配制成的抗 HCV-cAg 酶结合物溶液对检测结果有区分，配制抗 HCV-cAg 酶结合物溶液前应检测小鼠-IgG 与产品的适配性。

其次试剂盒的储存方式、运输条件及有效期均为影响检测结果的重要因素，试剂盒一般2~8℃冰箱保存，留意不要紧贴冰箱储存室后壁以防止试剂冻结失效，可避开使用时试剂受温差影响导致酶标板上凝集小水珠及反应消失温差而影响抗原抗体的反应。

使用前需将试剂盒放置37℃恒温箱温育30min，且不同厂家、不同批号的试剂不能混合使用。

剩余试剂应准时放入干燥剂密封保存在2~8℃冰箱，试剂打开后一周内有效，同时留意做好室内质检，确保试验结果的牢靠性。

不同方法学的检验试剂会使乙肝两对半结果消失不同，如临床操作中电化学检测 HBsAg 呈阳性，而采纳 ELISA 检测则呈阴性，此外，使用单抗或多抗试剂对检测结果同样造成肯定的影响。

环境温、湿度对梅毒患者梅毒螺旋体抗体高通量ELISA检测预期值的影响

环境温、湿度对梅毒患者梅毒螺旋体抗体高通量ELISA检测预期值的影响摘要：目的分析环境温、湿度对梅毒患者梅毒螺旋体抗体高通量ELISA检测预期值产生的影响。

方法分别用Freedom evolzyer 和Add care ELISA 600的高通量ELISA的检测系统做检测，以我院收治的43例梅毒患者的病毒样本做研究分析。

结果环境条件为18-22℃的温度；30％-39％、20％-29％的湿度，检测值同预期值比较，差异不大（P＞0.05），统计学意义不存在；环境条件为13～17℃、8～12℃的温度；10％-19％的湿度，检测值同预期值比较，差异明显（P<0.05），统计学意义存在。

环境的湿度和温度都对质控值会产生影响，影响差异存在统计学意义（P<0.05）。

结论湿度相同，温度与质控值为正比例关系；温度相同，湿度与质控值为负相关的关系。

关键词：环境温度；湿度；梅毒螺旋体抗体；高通量；ELISA检测本文就梅毒患者以高通量ELISA方式检测梅毒螺旋体抗体预期值受到检测当下环境的温度和湿度影响研究，做简要报道：1、资料与方法1.1基础资料2015年级4月到2016年4月期间，以我院收治的43例梅毒患者的病毒样本做研究分析。

分别用Add care ELISA 600（以下称SB1）和Freedom evolzyer（以下称SB2）的高通量ELISA的检测系统做检测，主要对梅毒螺旋体弱阳性质控值（S/CO）做数据性分析。

1.2方法检测仪器是中国烟台艾德康医疗设备有限公司（SB1）；高通量比较系统来自瑞士（SB2）；检测用试剂用中国厦门英科新创生物技术有限公司，0.5NCU/ml是抗体定值弱阳性质控品浓度；中国北京康彻斯坦生物技术有限公司，抗体定值弱阳性质控品浓度分别是L0.5NCU／mL与1 NCU／m。

具体方法，以临床实验室标准协会所指定相关标准为准，将检测温度设定在18℃到22℃之间，湿度设施在20%到40%，验证两种高通量的检测系统性能，具体验证指标有精密度、CUTOFF值、灵敏度。

浅谈影响ELISA结果因素分析

浅谈影响ELISA结果因素分析ELISA法即酶联免疫吸附测定法，该方法的检测原理主要是通过待测物和酶连接，使得抗原与抗体发生特异反应，通过观察底物和酶颜色的变化得出检测结果，ELISA法根据种类和变化能够分成双抗体夹心法、间接法、竞争法以及捕获法，其中双抗体夹心法主要用于抗原的检测，间接法主要用于抗体的检测，竞争法可用于抗原与抗体的检测，捕获法则用于测定血清中某种抗体亚型的成分[1]。

酶联免疫吸附测定法具有灵敏性高以及特异性高的特点，在临床上应用十分广泛，发挥出十分积极的临床价值，然而存在诸多因素诸如试剂、标本、操作方法以及环境等方面会影响检测结果的准确性，本文主要对影响ELISA结果因素进行分析，并给出针对性的解决措施，具体信息如下。

1 试剂方面的因素ELISA法的检测结果直接受到试剂质量优劣的影响，试剂盒的生产厂家和质量、标记物的免疫活性、抗原抗体的纯度、试剂是否有效与试剂的储存方式等方面均会对ELISA法的检测结果有程度不一的影响[2]。

为避免上述情况影响检测结果的准确性，①在检测过程中需要确保ELISA 试剂盒中阴性对照的质量，从而避免假阴性与假阳性的出现；②抗原的中和必须准确滴定，防止由于抗原浓度过低或者过高影响试剂盒的敏感性而导致假阴现象的发生；③重视试剂的质量，给予完善的室内质控与定期开展室间质量评估；④根据试剂盒的开封时间与保存的状况来实施全点定标，进而保障检测结果的准确性；⑤有研究显示ELISA法的检测结果不准确很大程度上是受到试剂质量的影响，因此生产厂家必须重视试剂的质量，有必要时可通过人新鲜标本方法学来评估试剂的质量。

2 标本方面的因素实验标本对ELISA法的检测结果也具有很大的影响[3]，主要包括内源性与外源性物质干扰。

内源性物质干扰主要包括药物、嗜异性抗体、人抗动物抗体、代谢产物、类风湿因子以及补体等，然而在ELISA法的检测过程中可通过下述方法处理标本来降低内源性物质干扰：①通过将抗原结合片段取代免疫球蛋白（IgG），将结晶片段（即Fc片段）消除，这样能够很大程度降低类风湿因子、嗜异性抗体以及人抗动物抗体对检测结果的干扰；②通过热处理的手段（56℃处理30min，63℃处理10min）与应用乙二胺四乙酸（EDTA）对标本进行稀释与2一巯基乙醇对标本进行稀释，以降低补体与类风湿因子对检测结果的干扰；③在标本中添加阻断剂如10％正常人血清和1％正常动物血清；④若检查发现标本中存在血红蛋白、胆红素以及血脂等成分时，必须重新采血检查[4]。

ELISA法在诊断梅毒螺旋体感染中的临床检验效果及准确度探讨

ELISA法在诊断梅毒螺旋体感染中的临床检验效果及准确度探讨我们需要了解ELISA法在梅毒螺旋体感染的临床检验效果。

ELISA法全称酶联免疫吸附试验，是一种用于检测抗体或抗原的常见实验室方法。

在梅毒检测中，ELISA法常用于检测梅毒螺旋体的抗体，帮助医生进行梅毒的诊断。

ELISA法的检测结果快速、准确，可以在短时间内得到。

ELISA法对于多种不同类型的梅毒螺旋体抗体具有很好的特异性和灵敏度，可以有效地检测出患者体内的抗体水平。

ELISA法在梅毒螺旋体感染的临床检验中具有良好的效果，可以为医生提供准确的诊断依据。

我们来探讨ELISA法在梅毒螺旋体感染的准确度。

准确度是指检测方法能够准确地反映出受检测物的含量或存在情况，是评价检测方法优劣的重要指标之一。

对于梅毒的诊断，准确度尤为重要。

研究表明，ELISA法在梅毒螺旋体感染中具有较高的准确度。

其特异性和灵敏度都较高，能够有效地避免假阴性和假阳性的情况发生。

ELISA法的结果稳定可靠，不受外界因素的干扰，能够保证患者的诊断结果准确无误。

ELISA法在梅毒螺旋体感染的准确度方面表现出色，对于梅毒的诊断具有较高的可靠性。

ELISA法在诊断梅毒螺旋体感染中具有良好的临床检验效果和较高的准确度。

通过对患者体内的抗体水平进行测定，ELISA法能够有效地帮助医生进行梅毒的诊断，为患者提供及时的治疗。

ELISA法的准确度高，能够避免因为检测结果不准确而导致的误诊误治情况发生。

ELISA法在梅毒的诊断中具有重要的临床应用价值，值得在临床实践中进一步推广和应用。

希望通过本文的探讨，能够为梅毒的诊断和治疗提供一定的参考和帮助，为梅毒的预防和控制做出贡献。

ELISA法测梅毒抗体假阳性原因分析及对策_吴香华

在气道反应性测定中脉冲振荡技术的临床应用朱红波江苏常州第一人民医院肺功能室，江苏常州213003【摘要】目的探讨脉冲振荡技术（impulse oscillation system，IOS）在气道反应性测定中的诊断价值。

方法将笔者所在医院收治的65例支气管激发试验结果为阳性表现的患者设为实验组，并选择正常健康体检患者50例作为对照组，两组患者均应用脉冲振荡法进行检查，并对检查指标进行对比及相关性分析。

结果两组患者检查结果比较，各项情况均有明显差异，有统计学意义（P＜0．05）。

结论IOS与常规肺功能检查方法在气道反应性测定中具有很好的相关性，IOS对气道高反应性疾病如支气管哮喘的诊断有较高的临床应用价值。

【关键词】脉冲振荡；肺功能doi：10．3969/j．issn．1004－7484（x）．2012．12．058文章编号：1004－7484（2012）－12－4922－01脉冲振荡技术现今已经广泛地应用于临床，此技术具有对患者无创伤、操作方便等特点，此技术对疾病严重患者、幼儿、高龄患者尤其适宜［1］。

笔者对脉冲振荡技术（impulse oscillation system，IOS）在气道反应性测定中的诊断价值进行探讨研究，将笔者所在医院收治的65例支气管激发试验结果为阳性表现的患者设为实验组，并选择正常健康体检患者50例作为对照组，两组患者均应用脉冲振荡法进行检查，并对检查指标进行对比及相关性分析。

总结如下。

1对象和方法1．1对象笔者所在医院收治65例支气管激发试验结果为阳性表现的患者，设为实验组患者，其中男45例，女20例，年龄22－67，中位（43．4ʃ11．6）岁。

并选择正常健康体检患者50例作为对照组，30例患者为男性，女20例，年龄25－65，平均（35．4ʃ12．2）岁。

所有患者在进行实验前均停止应用激素类药物12h，并均排除妊娠、甲亢、高血压、大动脉瘤等疾病情况。

1．2实验方法实验应用肺功能仪对两组患者进行检测，实验仪器为耶格公司提供，对两组患者的呼吸道阻力进行测定，测定的项目有电抗（X5）、周边气道阻力（R5一R20）、中心气道阻力（R20）、总气道阻力（R5）、呼吸总阻抗（Z5）、共振频率（RF）等项目。

酶联免疫吸附法检测梅毒抗体假阳性产生的原因

解放军304医院皮肤科邹先彪：梅毒血清学试验有两类，一类是非特异性试验，包括RPR、VDRL、USR和TRUST。由于其采用的是非密螺旋体抗原（即正常牛心脂质）测定患者血清中的反应素，反应素也可在某些非梅毒患者及正常人血清中出现，故可呈生物学假阳性。另一类是特异性试验，包括TPELISA、TPHA、TPPA、FTABS、金标免疫层析法及免疫印迹试验，其采用Nichols株螺旋体或纯化的、基因重组的梅毒螺旋体抗原测定血清中的特异性抗体。试验的特异性可达到99%左右，但不能绝对排除假阳性。目前国内最常用的梅毒血清学初筛试验是以心拟脂为抗原的非特异性梅毒血清学试验，目前主要有TRUST和RPR，其所检测的抗体并非抗梅毒螺旋体抗体，而是梅毒螺旋体感染人体以后分解破坏人体组织，其分解产物释放到血液中，使人体产生抗体。分解释放的产物即是心拟脂，所产生的抗体即是反应素。据文献记载，除梅毒外尚有其他一些感染和免疫性疾病也可使人体组织受损释放心拟脂到血液中，使人体产生反应素，而使RPR或TRUST出现生物学假阳性反应。并将生物学假阳性反应分为急性和慢性两种。急性生物学假阳性反应见于病毒性疾病，如风疹、麻疹、水痘、传染性单核细胞增多症、病毒性肝炎;其他如疟疾、活动性肺结核、丝虫病、鼠咬热、回归热、钩端螺旋体病等，多于6个月内消失。慢性生物学假阳性反应常见于麻风、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、干燥综合征、桥本甲状腺炎、结节性多动脉炎、风湿性心脏病以及海洛因吸毒成瘾者等，反应持续时间可长达数年或终身。生物学假阳性反应的RPR或TRUST定量滴度一般≤1:8，而未经治疗的二期显发梅毒RPR或TRUST定量滴度一般≥1:16。 TPHA等特异性梅毒血清试验假阳性的主要原因有自身免疫病、皮肤病、心血管病、麻风、热性病、老年人、莱姆病、地方性密螺旋体病等因素。为正确判断检测结果是否为假阳性反应，往往需要医生的综合判断分析，如详细询问患者有无不洁性生活史、性病史、流产史、抗梅治疗史；还要认真查体，注意患者是否有梅毒体征；是否为老年人。资料显示老年人梅毒血清学特异性试验假阳性率偏高。

ELISA法检测梅毒螺旋体抗体前带现象1例分析

荣盛生物药业有限公司，号２０１０）ＴＰ批０９１１；ＰＡ试剂盒（ｔＥ本富士瑞必欧株式会社，号Ｖ９３４。所有试剂均在有效期批Ｎ００）内。仪器为ＥＯＩ全自动酶免分析仪。ＶＬＳ１３检测方法．ＥＩＡ试验：无菌生理盐水将标本按１２ＬＳ用：，
现代中西医结合杂志ＭｏｅｎＪｕｎｌｏｎｅｒｔｄＴａｉｏａｉｅｅａｄＷｅｔｒｄｃｎ００Ｄｅ，１３ｄｒｏｒａｆＩｔｇａｅｒｄｔｎｌｎｓｎｓｅｎＭｅｉｉｅ２１ｃ９（４）ｉＣｈ
‘４７４１‘
ＥＩＡ法检测梅毒螺旋体抗体前带现象１例分析ＬＳ
阳性。
３讨论
１６：４阴性，：２阳性。１３未致敏粒子１加阴性，敏粒子１６０：致：４
原ｃ，标抗原＋待测抗体＋酶标抗原Ｄ，这４种结合物酶在
中，只有Ｂ结合物才是要测定的目的结合物。如果在反应体
２结果
１１标本来源．
该血清标本来源于本院门诊部就诊的１名
２１ＥＩＡ试验．ＬＳ
原倍血清的梅毒螺旋体抗体结果为阴性，
５２岁男性患者，床表现符合Ｉ梅毒诊断标准。临期１２试剂及仪器梅毒螺旋体抗体ＥＩＡ试剂盒（京金．ＬＳ北

Elisa影响因素及措施整理

Elisa影响因素及措施整理一、①一般检测试剂盒或检测试剂从冷藏或冷冻状态拿到室温使用需先在室温下平衡30~60 min，各试剂在使用前充分混匀。

②酶标仪测定结果，准确性决定于ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质量和软件的算法。

二、操作不当导致1、加样多、操作持续时间长，尤其是环境温度高时会导致个板孔间反应进程差异；2、除包被外，都宜采取45°加样，且要避免加到侧壁上；3、加样器不稳定、枪头不均一、试剂溅出、操作习惯不好等造成空间加样量不均一会对结果造成较大影响。

4、孵育时间过长，会导致非特异性反应增强；5、显色和终止加液时应避免气泡产生，以免影响检测读数；6、酶标板不宜叠放以减少受热不均，可采取水浴；7、贴密封膜，防止污物浸入和液体蒸发。

8、Elisa实验用的各试剂都要妥善配置和保存、避免污染，不合格的蒸馏水都可导致空白值或背景值升高。

三、检测样品处理不当引起溶血或污染1、血清或血浆标本分离不好或发生溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色；2、待检标本污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应；3、在冰箱中保存过久的标本，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、造成假阳性；4、标本凝固不完全：血液通常在采集后半小时后开始凝固，18～24h完全凝固。

如果在血液未凝固时即离心分离血清，则可因纤维蛋白原非特异吸附于微孔而造成假阳性结果。

为了缩短标本处理时间，可以在离心前将血液标本置于温箱中温育或者采用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂以加速血清的分离。

5、标本的反复冻融会因其所产生的机械剪切力对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，使抗体效价跌落从而引起假阴性结果，所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测，宜少量分装冻存。

此外，标本在冻存时会因蛋白质局部浓缩，分布不均，因此重新融解的标本必须混匀，但不要进行剧烈振荡，反复颠倒即可，产生泡沫或样品的过度混合将引起血清蛋白的变性。