输血科操作规程

目录

1、输血前检测实验程序

２、改良低离子聚凝胺法实验操作规程

３、ABO 血型鉴定

4、Ｒｈ(D）血型鉴定

５、抗体筛选与鉴定试验

输血前检测实验程序

1、实验要求

血清与血浆都可以用于交叉实验与抗体检测，最好就是血清标本，标本使用限制在３天内,含有肝素等抗凝标本可以用凝血酶或硫酸鱼精蛋白处理使其凝集析出血清。允许通过静脉输液口采集标本,但必须丢弃受残留静脉输液影响得 5ml 标本。一般不允许使用溶血标本,对急性溶血性贫血与烧伤病人得溶血标本,在实验前后必须做溶血程度得比较。标本与输血申请单上得所有资料必须填写清楚并完全符合,否则应重抽标本。对所有用过得献血员与受血者标本必须在１-6℃冰箱至少保存 7 天,所有实验都必须保证观察与记录同时进行,且记录与资料都必须至少保存５年。

2、血型检测

要求完成病人ABO 正反定型、Rh（Ｄ)。

３、交叉试验

3、1 受血者交叉配血时所用得标本必须就是输血前 3 天之内得。

３、２配血时要逐项核对输血申请单、受血者与供血者血样,复查受血者与供血者ABO 血型(正、反定型),并常规检查患者 Rh(D)血型(急诊抢救患者紧急输血时Rh（D)检查除外）,正确无误时可进行交叉配血。

3、３凡就是输注全血、浓缩红细胞、红细胞悬液、洗涤红细胞、冰冻红细胞、浓缩红细胞、手工分离浓缩血小板等患者,应该进行交叉配血试验。机器单采浓缩血小板、冷沉淀、新鲜血浆应与 ABＯ血型同型输注。

3、4 按《全国临床检验操作规程》要求完成凝聚胺交叉试验与检测不完全抗体得交叉试验（聚凝胺法、抗人球蛋白法) 。除紧急输血与自身输血外,所有输入红细胞得其她制品均要求做血交叉试验。

3、５另外必须开展得试验有抗人球蛋白试验，抗体筛选实验。

改良低离子聚凝胺法实验操作规程

1、目得:减少交叉配血试验得假阳性。

2、适用范围:交叉配血、血型鉴定、抗体筛检血型血清学试验。

3、试剂来源:(台资）珠海贝索生物技术有限公司

4、采集与处理:

4、１静脉采血 3-4ｍl，并观察就是否溶血、乳糜血，如有此现象应再留标本并做记录。

4、2 检查留样试管、标签、标号、姓名、血型就是否齐全,如有遗漏应拒收。

4、3 将血标本试管放 37℃水浴中 10 分钟,离心。

5、标准操作：

5、1 主(次)管加入受（供)血者血清２滴,加供(受)血者 4%红细胞盐水悬液 1 滴。

5、2 各管加 LＩＭ0、8mｌ,混匀,静置１分钟,各管加Ｐolｙbrene Reａgen ｔ 1 滴，混匀，３０00转/分离心 1５秒,倒出上清液(残留约０、1ml),轻摇,肉眼可见明显得凝集状(如无凝集须重做），加假凝集清除液１滴于管底,轻摇,凝集 1 分钟内消失呈均匀混悬液,为阴性，凝集 1 分钟内不能被消除,即为阳性。

5、结论:

阳性表示受(供)血者血清中含供（受)者红细胞血型Ag 相应得 Aｂ(IgG、

ＩgＭ),供受血者不相容,阴性表示供受血者相容。

6、注意事项：

６、1 操作者须严格按照操作说明进行试验,红细胞浓度、血清滴量、反应时间、离心速度等均可影响试验结果。

6、２若为弱凝集结果，本试剂盒按下述试验操作方法,还可进一步提高试验灵敏度。试验操作方法如下:

６、2、1 检测管中加试验血清 2 滴,４%红细胞盐水悬液 1 滴。

6、２、2 加 LIM0、8ml,混匀,静置１分钟,各管加Ｐｏlｙbrene 2 滴混匀,300０转/分离心15 秒，倒出上清液(残留约 01mｌ) ,轻摇，肉眼可见明显得凝集状(如无凝集须重做） ,加假凝集清除液 1 滴于管底，轻摇,凝集 1 分钟内消失呈均匀混悬液,为阴性，凝集1分钟内不能被消除,即为阳性。

６、3 检测标本应为非抗凝血，如标本中含抗凝成分得含量过高明显干扰凝集反应,可适当调加 Promotｅｒ得滴量,以中与抗凝成分得干扰。

6、4 试验温度以20-30℃为宜,若为寒冷凝集,37℃水浴5分钟,在此温下观察,凝集消失,说明冷凝集素存在。

６、５肉眼直观判断得结果应确保与显微镜下观察结果一致，直观不能明确判断得可疑结果须镜检,镜下：阴性结果应该就是单个ＲBＣ均匀分布,有 RBＣ凝集状散在得即为弱阳性。

６、6 试验质量检验:取自身血清与自身红细胞用本试剂盒试验方法作自身阴性对照试验,取 IgＧ抗 D 血清与 RhD(+)ＲBＣ用本试剂盒试验方法作阳性对照实验,对照实验符合，试剂有效。

６、7 疑难结果以抗人球蛋白实验(AGT)作最终判断试验,试验操作参照经典ＡGT(在AGT中，加入本试剂盒中得LIM0、８ml 37℃孵育时间可缩短至 10 分钟)。６、８本试剂盒适宜大多数血型抗体得检测,但对ｋell 血型系统抗体（主要存在白种人群)检测效果较差,由于我国黄种人群中 kｅｌl 血型系统抗体阳性者罕见,因此适合在国内推广。可补充抗人球蛋白试验,以提高对kｅlｌ血型系统抗体得检出率。

ABO 血型鉴定

1、测定原理

根据红细胞上有或无Ａ抗原或／与 B 抗原,将血型分为 A 型、B 型、AB 型及O 型４种。可利用红细胞凝集试验,通过正、反定型准确鉴定 ABO 血型。所谓正定型，就是用已知抗—A 与抗—B 分型血清来测定红细胞上有无相应得 A 抗原或／与 B 抗原；所谓反定型,就是用已知Ａ细胞与Ｂ细胞来测定血清中有无相应得抗—A或/与抗—B。

2、标本种类及收集要求

2、1 受检者血清；

２、2 枸缘酸钠抗凝血或未稍取血，受检者血液制成 5 ％红细胞盐水悬液使用。２、3 标本出现中度溶血者,为不合格标本,不能用于检测。

3、操作步骤

3、1、试管法

3、1、１取洁净小试管(内径 10mｍ×６０mｍ)3 支,分别标明抗—Ａ、抗—B 与抗—A十Ｂ，用滴管分别加抗—A、抗—B 与抗—A 十 B 分型血清各ｌ滴（约50 ul)于试管底部,再以滴管分别加入受检者 5％红细胞盐水悬液１滴，混与。

3、1、２另取洁净小试管(内径10mｍ×60mm)3 支,分别标明A、B 与 O 细胞。用滴管分别加入受检者血清 l 滴于试管底部，再分别以滴管加入 A、B与O 型5%试剂红细胞悬液 l 滴,混与。

3、1、3 立即以 1000r／ｍin 离心 3 mｉn。

3、１、４将试管轻轻摇动,使沉于管底得红细胞浮起,先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。如内眼不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜检查。

３、1、5 观察结果时既要瞧有无凝集,更要注意凝集强度，此有助于 A、B 亚型、类 B 或cisAB 得发现。

３、１、6 凝集强度判断标准

4+ 红细胞凝集成一大块,血清清晰透明。

3+ 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。

２+ 红细胞凝块分散成许多小块,见到游离红细胞。

1＋肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞。

±镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。

MF 混合凝集外观（mixed ｆield)就是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。

-表示阴性,镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

3、2 玻片法