总糖和还原糖的测定
实验四 还原糖和总糖的测定
·在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正 比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度 值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖 的含量。
· 由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子 水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
7
0.5
0.5
1.5
1.5
8
9
1.5
1 1
1.5
1.5
10
1
1
Байду номын сангаас
1.5
五、结果与计算：
计算出7、8号管光密度值平均值和9、10管光密度值的的平
均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式 计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。
六、思考题
3,5-二硝基水杨酸比色法是如何对总糖
进行测定的?
实验四 还原糖和总糖的测定
——3,5-二硝基水杨酸比色法
一、目的
掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测 定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是 还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽
糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度
定容至100mL 过 滤 取滤液10mL
定容至100mL
（3）显色和比色 取4支20mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入 待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。 加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
表2 样品还原糖测定
管 号 还原糖 待测液 （mL） 总糖待 测液 （mL） 蒸馏水 （mL） DNS （mL） 光密度值 （OD540nm） 查曲线 葡萄糖量 （mg）
DNS比色法测定还原糖和总糖
DNS⽐⾊法测定还原糖和总糖还原糖和总糖的测定(3,5-⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法)⼀、实验⽬的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习⽐⾊法测定还原糖的操作⽅法和分光光度计的使⽤⼆、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本⽅法。
还原糖是指含有⾃由醛基或酮基的糖类。
单糖都是还原糖，双糖和多糖不⼀定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是⾮还原糖。
利⽤各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。
对⾮还原性的双糖和多糖，可⽤酸⽔解法使其降解成还原性单糖进⾏测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，⽽氧化剂3,5-⼆硝基⽔杨酸则被还原为棕红⾊的3-氨基-5-硝基⽔杨酸。
在⼀定范围内，还原糖的量与棕红⾊物质颜⾊的深浅成正⽐关系，利⽤分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖⽔解为单糖时，每断裂⼀个糖苷键需加⼊⼀分⼦⽔，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。
三、实验材料和试剂1、实验材料⾯粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取80℃烘⾄恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于⼩烧杯中，加少量蒸馏⽔溶解后，转移到100ml容量瓶中，⽤蒸馏⽔定容⾄100ml，混匀，4℃冰箱中保存备⽤。
②3,5-⼆硝基⽔杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒⽯酸钾钠的热⽔溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏⽔定容⾄1000ml，贮于棕⾊瓶中备⽤。
③碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100ml蒸馏⽔中。
④酚酞指⽰剂：称取0.1g酚酞，溶于250ml 70%⼄醇中。
⑤6M HCl和6M NaOH各100ml。
四、实验器材具塞璃玻刻度试管：20ml×11 ⼤离⼼管：50ml×2烧杯：100ml×1 三⾓瓶：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；2ml×2；10ml×1恒温⽔浴锅沸⽔浴离⼼机扭⼒天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7⽀具塞刻度试管编号，按表1分别加⼊浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏⽔和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。
总糖和还原糖的测定
朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律
朗伯－比尔定律是比色分析旳基本原理， 这个定律是有色溶液对单色光旳吸收程度与 溶液及液层厚度间旳定量关系。此定律是由 朗伯定律和比尔定律归纳而得。
A或D=㏒I0/I
A或D＝光吸收或光密度
I0 ＝入射光强度 I ＝透射光强度
三、试剂和器材
试剂：
DNS试剂 葡萄糖原则溶液 ； 6M HCl；碘－碘化钾溶液； 6M NaOH；0.1% 酚酞指示剂。
材料
藕粉，玉米淀粉
器材
容量瓶,试管，移液管，量 筒，胶头滴管，漏斗
50℃水浴，沸水浴，分光 光度计等。
四、操作环节
1.葡萄糖原则曲线制作 2.还原糖旳提取
藕粉改为称1.0克，50℃水浴20min浸出， 水浴锅中进行 3.总糖旳水解及提取 玉米淀粉测总糖，沸水浴20min酸水解，电 磁炉中进行 4.样品含糖量旳测定
试验三 总糖和还原糖旳测定
——3,5二硝基水杨酸(DNS)法
一、目 旳
掌握还原糖和总糖旳测定原理 掌握分光光度计旳使用
二、原 理
还原糖：指具有自由醛基或酮基旳糖类
单糖: 不能被水解成更小分子旳糖,单糖都是还原糖 葡萄糖, 果糖
寡糖: 最主要旳是双糖：Maltose（麦芽糖 ）,Sucrose（蔗糖） Lactose（乳糖 ） 但Sucrose不是还原糖 多糖: 能水解成多种单糖分子,如淀粉,糖原和纤 维素
样品旳透射比或吸光度值。样品读数三遍，取平均值。 7).使用分光光度计时带测定样品、洗瓶、废液杯、笔和本。
移液器旳使用手法，两档位
吸液
放液
八、思索题
1.比色时为何要设计空白管？
实验一 总糖和还原糖的测定
实验一总糖和还原糖的测定（3，5-二硝基水杨酸法）171850044钱诗晨一、实验目的掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖的方法。
二、实验原理单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性，属于还原糖；而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。
利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。
还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸及其他产物，3，5-二硝基水杨酸（DNS）则被还原为红棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈橘红色，在540nm处一定浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量和总糖的含量。
三、实验器材1.面粉2.试管3.吸管4.水浴锅5.电炉6.紫外可见分光光度计7.PH试纸8.容量瓶9.量筒、研体、三角烧瓶、玻璃漏斗10.电子分析天平面粉里含多糖淀粉，遇碘变蓝四、实验试剂1.标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml）：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，溶于蒸馏水并定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。
2.3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂:将6.3gDNS和262ml2mol/L NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸甲钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml贮于棕色瓶中备用。
3.6mol/L HCl:取250ml浓HCl(35%~38%),用蒸馏水稀释到500ml。
4.6mol/L NaOH：称取24g NaOH溶于蒸馏水并稀释至100ml。
5.碘—碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
五、实验操作1.葡萄糖标准溶液曲线的制作取干净试管6支，按表7进行操作。
以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/ml）为横坐标作图得标准曲线2.样品中还原糖的提取和测定准确称取1.0g红薯粉，加蒸馏水约10ml，在研体中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30ml的蒸馏水冲洗研体2~3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
总糖和还原糖的测定
第三章 基础实验（一）糖化学实验一 总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂比色法目的要求掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。
实验原理将一定量的碱性酒石酸铜甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH + CuSO 4 = Cu(OH)2 + Na 2SO 4所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的酒石酸钾钠铜：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解，其反应如下：反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。
Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O K2Cu2Fe(CN)6 + 2KOH（氧化亚铜）（淡黄色）滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。
因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。
根据样液量可计算出还原糖含量。
试剂和器材一、试剂碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000ml。
碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000ml，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。
0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入1000ml容量瓶中，加入5ml浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000ml。
6mol/LHCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH：称取120gNaOH溶于500ml蒸馏水中。
南京大学生化实验一：总糖和还原糖含量的测定
总糖和还原糖含量的测定实验报告实验目的:植物体内的还原糖，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。
它们在植物体内的分布，不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。
还原糖还能形成其他物质如有机酸等。
此外，水果蔬菜中糖量的多少，也是坚定其品质的重要指标。
还原糖在有机体的代谢中起着重要的作用，其他碳水化合物，如淀粉蔗糖等，经水解也生成还原糖。
通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，练习比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的使用方法。
实验原理：1.还原糖还原糖是具有还原性的糖类的统称。
分子中含有游离醛基或者酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。
如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等。
2.美拉德反应美拉德反应广泛分布于食品工业中的非酶褐变反应：还原糖与氨基酸/蛋白质在加热时发生的一系列复杂反应，生成棕/黑色的大分子物质，同时还产生具有不同气味的中间体分子，包括还原酮、醛和杂环化合物，为食物提供诱人可口的风味和诱人的色泽。
3.还原糖的测定方法：3,5-二硝基水杨酸法在波长540nm下，一定浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，可利用标准曲线法测定样品中的还原糖含量。
利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量来对总糖进行测定。
mbert-Beer定律A=lg(I0/I)=lg（1/T）=KClA：吸光度I0：入射光强度I：透射光强度T：透光度（透射比）K：比例常数l：溶液厚度实验仪器，试剂与材料：1.实验仪器：UV2600紫外可见分光光度计2.实验试剂：（1）1.0mg/ml标准葡萄糖（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS试剂）（3）6mol/L HCl（张茜配置）（4）6mol/L NaOH（张茜配置）（5）碘-碘化钾溶液3.实验材料：市售面粉。
实验步骤：1.还原糖的提取准确称取0.20g面粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆。
，转入三角烧瓶中，用约30ml蒸馏水冲洗研钵2~3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
生化实验一 总糖和还原糖含量的测定
实验一总糖和还原糖含量的测定（3,5－二硝基水杨酸法）一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理:在NaOH存在的条件下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈棕红色，在540nm 波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。
葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即葡萄糖浓度为1.0mg/ml。
6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
0.1% 酚酞指示剂。
2、材料山芋淀粉四、器材723型分光光度计，分析天平，水浴锅，研钵，烧瓶，试管若干等。
五、操作1、葡萄糖标准曲线制作取干净试管6支，按表1进行操作。
以吸光值为纵坐标，各标准溶液的浓度（mg∕ml）为横坐标作图得标准曲线。
管号0 1 2 3 4 5试剂标准葡萄糖溶液∕ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水∕ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0DNS试剂∕ml 2 2 2 2 2 2沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温蒸馏水∕ml 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 葡萄糖含量∕mg 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0A540nm0 0.051 0.110 0.150 0.205 0.2532、样品中还原糖的提取与测定准确称取0.5g山芋淀粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30ml的蒸馏水冲洗研钵2-3次，洗出液转入三角烧瓶中。
总糖和还原糖的测定
待测样品的OD540平均值在标准曲线上 查出相应的糖含量。
朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律
朗伯－比尔定律是比色分析的基本原理， 这个定律是有色溶液对单色光的吸收程度与 溶液及液层厚度间的定量关系。此定律是由 朗伯定律和比尔定律归纳而得。
A或D=㏒I0/I
A或D＝光吸收或光密度
I0 ＝入射光强度 I ＝透射光强度
职责：实验台面物品整理归位，水池边 的蓝色垃圾桶清理干净，教室里所用仪 器电源插销拔掉，关窗，最后把垃圾袋 丢到厕所外的垃圾桶里。
重要通知
下周实验－－维生素C的定量测定 为开放、设计型实验，撰写小论文，
实验主题由各组自己拟定，可以以温度 为主题，也可以以浸泡时间为主题，等 等……请各组提前设计实验主题，自己 准备特需实验水果、蔬菜（颜色浅）， 实验室提供卷心菜和桔子。
样品的透射比或吸光度值。样品读数三遍，取平均值。 7).使用分光光度计时带测定样品、洗瓶、废液杯、笔和本。
移液器的使用手法，两档位
吸液
放液
八、思考题
1.比色时为什么要设计空白管？
2.比较费林试剂比色法与3,5-二硝基水杨酸比色法 测定可溶性淀粉中还原糖和第5、6组同学
酸水解法使没有还原性的双糖与多糖，彻 底水解成具有还原性的单糖，再进行测定，这 样就可以求样品中总糖的含量。
测定方法－比色法
OH NO 2
HOOC
+ 还原 糖
NO 2 (DNS)
OH NH2
HOOC
NO 2
（3－氨基 －5－硝基 水 杨酸 ） ?
黄色
棕红色
首先制作葡萄糖标准曲线，以标准葡萄 糖样品进行测定，以葡萄糖含量（mg）为 横坐标，OD540读数为纵坐标，绘制标准曲 线。
总糖和还原糖的测定──费林试剂比色法
实验一 总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂比色法目的要求掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。
实验原理将一定量的碱性酒石酸铜甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH + CuSO 4 = Cu(OH)2+ Na 2SO4所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的酒石酸钾钠铜：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解，其反应如下：反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。
Cu 2O + K 4Fe(CN)6 + H 2O K 2Cu 2Fe(CN)6 + 2KOH（氧化亚铜） （淡黄色）滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。
因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。
根据样液量可计算出还原糖含量。
2 O试剂和器材一、试剂碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000ml。
碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000ml，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。
0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入1000ml容量瓶中，加入5ml浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000ml。
6mol/LHCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH：称取120gNaOH溶于500ml蒸馏水中。
还原糖的测定方法还原糖和总糖的测定
还原糖的测定方法还原糖和总糖的测定还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关1系，利用分光光度计，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1( 实验材料小麦面粉;精密pH 试纸。
2( 主要仪器(1)具塞玻璃刻度试管:20mL×11(2)大离心管:50mL×2(3)烧杯:100mL×1(4)三角瓶:100mL×1(5)容量瓶:100mL×3(6)刻度吸管:1mL×1;2mL×2;10mL×1(7)恒温水浴锅(8)沸水浴(9)离心机(10)扭力天平(11)分光光度计3( 试剂(1)1mg/mL 葡萄糖标准液2准确称取80?烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4?冰箱中保存备用。
(2)3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
食品中总糖、还原糖的测定
食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定1安全性评估谨防试剂灼伤：加入碱性酒石酸铜甲乙液、20%氢氧化钠和2%盐酸试剂时，需佩戴一次性乳胶手套。
谨防玻璃割伤：使用前检查玻璃仪器外观完好无损，使用时注意轻拿轻放，清洗时，需佩戴防割手套。
谨防高温烫伤：滴定时，调节滴定管滴定速度的手需佩戴涂脂手套/一次性乳胶手套，且不裸露手腕皮肤，双手不碰及电陶炉表面。
2 目的规范食品中转化糖（总糖）、还原糖的检测流程，确保检测结果的准确性。
3 范围适用于各类食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定。
4 依据参照GB 5009.7 - 2016食品安全国家标准食品中还原糖的测定、GB 5009.8 - 2016食品安全国家标准食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定。
5 检测原理还原糖（直接滴定法）：试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以亚甲基蓝作指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用葡萄糖标准溶液标定），根据样品液消耗体积计算还原糖含量。
转化糖（总糖）（酸水解-莱茵-埃农氏法）：试样经除去蛋白质后，其中蔗糖经盐酸水解转化为还原糖，再按还原糖测定，根据样品液消耗体积计算转化糖（总糖）含量。
注：①为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，使之与Cu2O生成可溶性的无色络合物，而不再析出红色沉淀，其反应如下：Cu2O↓+K4Fe(CN)6+H2O=K2Cu2Fe(CN)6+2KOH②碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。
6 试剂和仪器：实验室三级用水6.1 试剂2 %盐酸溶液，20 %氢氧化钠溶液，碱性酒石酸铜溶液：碱性酒石酸铜甲液（以下简称A 液）（硫酸铜+亚甲基蓝）+碱性酒石酸铜乙液（以下简称B液）（酒石酸钾钠+氢氧化钠+亚铁氰化钾），乙酸锌溶液（219 g/L），亚铁氰化钾溶液（106 g/L），葡萄糖标准溶液。
实验2 还原糖及总糖的测定
基础生物化学实验-实验2 还原糖及总糖的测定实验2 还原糖及总糖的测定（3、5——二硝水杨酸比色法）目的和要求：掌握3、5-二硝基水杨酸比色法测定糖量的原理及方法。
熟悉722分光光度计基本工作原理和操作方法。
原理：各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。
在碱性条件下，还原糖与3、5—二硝基水杨酸共热，3、5—二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它物质。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，可在722型分光光度计540nm波长测定棕红色物质的消光值。
查标准曲线计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。
多糖水解时，在单糖残基上加了一分子水，因而在计算中须扣除已加入的水量，测得所得到的总糖量乘以0.9即为实际的总糖量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
试剂和材料：试剂（1）1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100ml分析纯葡萄糖（预先在105℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml容量瓶中，以蒸馏水定容到刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
（2）3、5—二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）；甲液——溶解6.9g结晶酚（苯酚）于15.2ml 10%NaOH中，并稀释至69ml，在此溶液中加入6.9g 亚硫酸氢钠。
乙液——称取22.5g酒石酸钾钠，加到300ml 10% NaOH中，再加入880ml 1%的3、5—二硝基水杨酸溶液。
将甲液和乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，放置7—10天使用。
（3）碘—碘化钾溶液（碘试剂）：称取5g碘和10g碘化钾，研匀后溶于100ml蒸馏水中。
（4）酚酞指示剂：称取0.1g酚酞溶于70%乙醇中。
（5）6 mol·L-1 HCl（6）6 mol·L-1NaOH（7）面粉2、器材大试管、大离心管、量筒、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、玻璃漏斗、滤纸、白瓷板、电热恒温水浴槽、低速台式离心机、天平、722型分光光度计。
还原糖和总糖的测定实验报告
还原糖和总糖的测定实验报告实验目的，通过化学方法测定食品中还原糖和总糖的含量，了解不同食品中糖的含量差异。
实验原理，还原糖是指能够还原铜离子的糖类物质，如葡萄糖、果糖等；总糖是指食品中所有的糖类物质的总和，包括还原糖和非还原糖。
在本实验中，我们将利用费林试剂将还原糖氧化成酸，然后用氢氧化钠将酸中和，再用硫酸将非还原糖氧化，最后用费林试剂滴定还原糖。
实验步骤：1. 样品制备，取不同食品样品，如蜂蜜、果酱等，分别称取适量样品。
2. 提取糖液，将样品加水稀释，加热至沸腾，过滤得到糖液。
3. 还原糖的测定，取一定量糖液，加入费林试剂，滴定至蓝色消失，记录滴定所需费林试剂的体积V1。
4. 总糖的测定，取一定量糖液，加入硫酸，再加入氢氧化钠，加热至沸腾，冷却后加入费林试剂，滴定至蓝色消失，记录滴定所需费林试剂的体积V2。
实验数据：样品 | V1（mL） | V2（mL） | 。
蜂蜜 | 12.3 | 15.6 | 。
果酱 | 8.7 | 10.5 | 。
实验结果：1. 蜂蜜中还原糖的含量为12.3mL，总糖的含量为15.6mL。
2. 果酱中还原糖的含量为8.7mL，总糖的含量为10.5mL。
实验分析：通过实验数据可以看出，蜂蜜的总糖含量明显高于果酱，说明蜂蜜中含有更多的糖类物质。
而果酱中的还原糖含量略高于蜂蜜，这可能是因为果酱中的果糖含量较高。
通过本实验，我们可以初步了解不同食品中糖的含量差异，为食品质量的评价提供了一定的依据。
实验结论：本实验通过测定不同食品中的还原糖和总糖含量，初步了解了食品中糖的含量差异。
蜂蜜中总糖含量明显高于果酱，而果酱中的还原糖含量略高于蜂蜜。
这为我们对食品质量的评价提供了一定的依据。
实验注意事项：1. 实验中需要注意操作的精确性，尤其是在滴定过程中需要小心操作，避免误差的产生。
2. 实验中的废液需要妥善处理，不可直接倒入下水道，以免对环境造成污染。
结语：通过本次实验，我们初步了解了食品中还原糖和总糖的测定方法，以及不同食品中糖的含量差异。
实验二、总糖和还原糖的测定
实验二、总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂热滴定法目的要求掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。
实验原理还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。
在碱性溶液中，还原糖能将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。
糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。
本实验采用费林试剂热滴定法。
费林试剂由甲、乙两种溶液组成。
甲液含硫酸铜和亚甲基蓝（氧化还原指示剂）；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
将一定量的甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH + CuSO4 = Cu(OH)2+ Na2SO4在碱性溶液中，所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的络合物酒石酸钾钠铜：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，其反应如下：反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。
Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O K2Cu2Fe(CN)6 + 2KOH滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。
因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。
根据样液量可计算出还原糖含量。
试剂和器材一、试剂费林试剂：甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000mL。
乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000mL，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。
0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入100 0mL容量瓶中，加入5mL浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000mL。
总糖和还原糖的测定
HO (mL)
标准葡萄糖 （mL）
总糖水解液(待测葡萄糖溶液） （mL）
铜试剂 （mL）
沸 水 浴 中 煮 沸 15 分 钟
空 白 试 验
1
2
4
2
2
4
标 准 试 验
1
1
1
4
2
1
1
4
总 糖 试验
1
2
4
2
2
4
2. 各试管冷却后，摇动试管，使试管底部的红色沉淀分散后倾入相应的三角瓶中； 3. 分别在每个试管中加入2mL 2％碘化钾溶液和2mL 1 mol/L HSO，以洗涤管中的残留物，并转入相应的三角瓶中，最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次； 4. 用0.005 mol/L Na2SO滴定至碘颜色接近消失时加入淀粉指示剂5滴，继续滴定至蓝色消失为止。 五、计算
+ CuO↓
CHOH
+
+
2
酒石酸甲钠
可溶性的氧化铜络合物
葡萄糖பைடு நூலகம்
酒石酸甲钠
葡萄糖酸
实验二 总糖和还原糖的测定 分别在每个试管中加入2mL 2％碘化钾溶液和2mL 1 mol/L H2SO4，以洗涤管中的残留物，并转入相应的三角瓶中，最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次； 实验二 总糖和还原糖的测定 005 mol/L硫代硫酸钠溶液、2%碘化钾溶液、 单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性，属于还原糖； 005 mol/L硫代硫酸钠溶液、2%碘化钾溶液、 而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。 试剂 铜试剂、0. 另取6个小三角烧瓶，按相应的试管顺序编号。 还原糖的测定方法多种，本实验采用间接滴定法。 005 mol/L硫代硫酸钠溶液、2%碘化钾溶液、 Cu2O + I2 + H Cu + I ¯+ H2 O Cu(OH)2 + H―C―OH ＝ H―C―O 分别在每个试管中加入2mL 2％碘化钾溶液和2mL 1 mol/L H2SO4，以洗涤管中的残留物，并转入相应的三角瓶中，最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次； 实验二 总糖和还原糖的测定 Cu2O + I2 + H Cu + I ¯+ H2 O Cu(OH)2 + H―C―OH ＝ H―C―O 在用碘化钾和硫酸洗涤试管时要洗净，否则会影响滴定结果的准确性。 （CHOH）4+ 2 H2O = 2 005 mol/L Na2S2O3滴定至碘颜色接近消失时加入淀粉指示剂5滴，继续滴定至蓝色消失为止。
还原糖和总糖的测定实验报告
还原糖和总糖的测定实验报告一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定原理和方法。
2、学会使用分光光度计进行定量分析。
3、熟悉实验操作过程，提高实验技能和数据处理能力。
二、实验原理1、还原糖的测定还原糖含有游离的醛基或酮基，在碱性条件下，能将斐林试剂中的Cu²⁺还原为 Cu₂O 沉淀，而斐林试剂是由质量浓度为 01g/mL 的NaOH 溶液和质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液混合而成。
产生的Cu₂O 沉淀的量与还原糖的含量成正比。
通过用标准葡萄糖溶液标定斐林试剂，再用标定后的斐林试剂测定样品中的还原糖含量。
2、总糖的测定总糖包括还原糖和非还原糖。
先将非还原糖通过酸水解的方法转化为还原糖，再用斐林试剂法测定总糖含量。
水解后测定的总还原糖量减去水解前样品中还原糖的含量，即可得到样品中非还原糖的含量。
三、实验材料与仪器1、材料苹果、葡萄糖标准溶液（1mg/mL）、3mol/L HCl 溶液、10% NaOH 溶液、斐林试剂甲液（质量浓度为 01g/mL 的 NaOH 溶液）、斐林试剂乙液（质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液）。
2、仪器电子天平、恒温水浴锅、容量瓶（100mL、500mL）、移液管（1mL、2mL、5mL、10mL）、锥形瓶（250mL）、碱式滴定管、分光光度计。
四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制（1）取 6 支 25mL 具塞刻度试管，编号 0、1、2、3、4、5，分别加入 0、02、04、06、08、10mL 葡萄糖标准溶液。
（2）向各试管中分别加入蒸馏水，使总体积均为 10mL。
（3）在各试管中分别加入 2mL 斐林试剂甲液，摇匀，再加入 2mL 斐林试剂乙液，摇匀。
（4）将试管置于沸水浴中加热 2min，取出后用流水冷却至室温。
（5）以 0 号试管为空白对照，在 590nm 波长下，用分光光度计测定各试管中溶液的吸光度值。
（6）以葡萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
还原糖和总糖的测定实验报告
还原糖和总糖的测定实验报告实验目的，通过化学方法测定食品中的还原糖和总糖含量，了解食品中糖类成分的含量和比例。
实验原理，还原糖是指具有还原性的单糖和部分醛酮糖，如葡萄糖、果糖等。
总糖是指所有糖类的总和，包括还原糖和非还原糖。
测定还原糖的方法主要是费林试剂法，利用还原糖与费林试剂发生还原反应生成蓝色络合物，通过比色测定还原糖的含量；而测定总糖的方法主要是硫酸-酚试剂法，利用总糖与硫酸-酚试剂在酸性条件下发生酚酞反应生成红色络合物，通过比色测定总糖的含量。
实验步骤：1. 样品制备，取适量食品样品，经过粉碎、过筛等处理，制备成均匀的样品。
2. 还原糖测定，取一定量的样品溶液，加入费林试剂，经过恒温水浴反应，测定吸光度，并通过标准曲线计算出还原糖的含量。
3. 总糖测定，取一定量的样品溶液，加入硫酸-酚试剂，经过恒温水浴反应，测定吸光度，并通过标准曲线计算出总糖的含量。
实验结果：经过实验测定，样品A的还原糖含量为10g/100g，总糖含量为15g/100g；样品B的还原糖含量为8g/100g，总糖含量为12g/100g。
实验结论：通过本次实验，我们成功测定了食品样品中的还原糖和总糖含量，了解了食品中糖类成分的含量和比例。
实验结果显示，样品A的还原糖和总糖含量均高于样品B，说明样品A中糖类成分更为丰富。
这对于食品质量的评价和改进具有一定的指导意义。
实验总结：本次实验通过费林试剂法和硫酸-酚试剂法测定了食品样品中的还原糖和总糖含量，实验结果准确可靠。
实验过程中，我们严格按照实验步骤操作，保证了实验数据的可靠性。
通过本次实验，我们不仅掌握了测定还原糖和总糖含量的方法，也增加了对食品中糖类成分的认识，为日常生活中的食品选择和饮食健康提供了参考依据。
在今后的实验中，我们将继续加强实验操作的规范性和数据的准确性，不断提高实验技能和科研能力，为食品质量和食品安全做出更大的贡献。
总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定──3,5－二硝基水杨酸法目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色试剂和器材一、试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。
葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为2.0mg/ml。
6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
0.1% 酚酞指示剂。
二、材料藕粉，小麦淀粉或玉米淀粉。
三、器材723PC、S22型分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。
一、葡萄糖标准曲线制作取5支15mm×180mm试管，按下表加入2.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
管号葡萄糖标准液蒸馏水葡萄糖含量OD540 /ml /ml /mg0 1 00.210.80.42 0.4 0.6 0.83 0.6 0.4 1.24 0.8 0.2 1.65 1 0 2操作方法在上述试管中分别加入DNS试剂2.0ml，于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9.0ml，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。
以1.0ml蒸馏水代替葡萄糖标准液按同样显色操作为空白调零点。
以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
实验一还原糖和总糖含量的测定
实验一还原糖和总糖含量的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）一．目的1.掌握还原糖定量测定的基本原理；2.学习比色定糖法的基本操作；3.熟悉分光光度计的使用方法。
二．原理在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量。
三．仪器.试剂和材料1.仪器：（1）25ml刻度试管（2）玻璃漏斗（3）三角瓶（4）100ml容量瓶3个（5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml）（6）恒温水浴（7）沸水浴（8）电子天平（9）分光光度计2.试剂；（1）1mg/ml葡萄糖标准液（2）3,5-二硝基水杨酸试剂（3）碘碘化钾溶液（4）酚酞指示剂（5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH3.材料：食用面粉四．操作步骤将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。
在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度。
以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线。
2.样品中还原糖和总糖含量的测定（1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出。
过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉。
放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min。
待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂。
以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。
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总糖和还原糖的测定——斐林试剂热滴定法
发布时间：2013-7-1 11:01:32
实验原理
还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。
在碱性溶液中，还原糖能将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。
糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。
直接滴定法即斐林试剂热滴定法。
斐林试剂由甲溶液和乙溶液组成。
甲溶液含硫酸铜和亚甲基蓝（氧化还原指示剂）；乙溶液含氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
将一定量的甲溶液和乙溶液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH+CuSO4=Cu（OH）2+NaSO4。
在碱性溶液中，所生成的氢氧化铜沉淀于酒石酸钠反应，生成可溶性的酒石酸钾钠铜络合物。
在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀。
反应生成的氧化亚铜沉淀于斐林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。
滴定时以亚甲基蓝为氧化还原指示剂。
因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。
根据样液量可计算出还原糖含量。
实验材料
藕粉、淀粉
实验器材
试管3.0×20cm（×1）、移液管5ml（×2）、烧杯100ml（×1）、250ml锥形瓶、调温电炉、滴定管25ml （×1）、电子天平等。
试剂
1、斐林试剂
甲液：称取15g硫酸铜及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水并稀释到1000ml。
乙液：称取50g酒石酸钾钠及75gNaOH，溶于蒸馏水中，在加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000ml，储存于具橡皮塞玻璃瓶中。
2、0.1%葡萄糖标准溶液：称取1g经98-100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入1000ml容量瓶中，加入5ml浓HCL（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000ml。
3、6mol/L HCL：取250ml浓HCL（35%-38%）用蒸馏水稀释到500ml。
4、碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于蒸馏水中，定容至100ml。
5、6mol/L NaOH：称取120gNaOH，溶于蒸馏水中，定容至500ml。
6、0.1%酚酞指示剂。
实验方法
1、样品中还原糖的提取：准确称取1g藕粉，放入100ml烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加入约40ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20分钟，不时搅拌，使还原糖浸出。
过滤，将滤液全部收集到50ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。
2、样品中总糖的水解及提取：准确称取1g淀粉，放入大试管中，然后加入10ml 6mol/L HCL和15ml蒸馏水，在沸水浴中加热0.5小时，取出1-2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。
如已水解
完全，则不呈现蓝色。
水解毕。
冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6mol/L NaOH溶液中和至溶液呈为红色，然后定容到100ml，过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。
3、空白滴定：准确吸取斐林试剂甲液和乙液各250ml锥形瓶中，加蒸馏水10ml。
从滴定管滴加约9ml葡萄糖标准溶液，加热使其在2分钟内沸腾，准确沸腾30秒，趁热以每2秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点。
记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。
平行操作3次，取其平均值。
4、样品糖的定量测定：
样品溶液预测定：吸取斐林试剂甲液及乙液各5ml，置于250ml锥形瓶中，加蒸馏水10ml，加热使其在2分钟内沸腾，准确沸腾30秒，趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，滴定时要保持溶液呈沸腾状态。
待溶液由蓝色变浅时，以每2秒1滴的速度滴定，直至溶液的蓝色刚好褪去为终点。
记录样品溶液消耗的体积。
样品溶液测定：吸取斐林试剂甲液及乙液各5ml，置于锥形瓶中，加蒸馏水10ml，加玻璃珠3粒，从滴定管中加入比于测试样品溶液消耗的总体积少1ml的样品溶液，加热使其在2分钟内沸腾，准确沸腾30秒，趁热以每2秒1滴的速度继续滴加样液，直至蓝色刚好褪去为终点。
记录消耗样品溶液的总体积。
平行操作3次，取其平均值。
5、结果处理。