乳腺癌中比较基因组杂交研究的进展

（收稿日期：２００７旬３－２９）
（本文编辑：常秀青）
乳腺癌中比较基因组杂交研究的进展
高玉霞牛昀 吕淑华
近年来，随着比较基因组杂交（ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ｃＧＨ）技术在研究肿瘤相关染色体异常方面的 应用…，已发现乳腺癌发生、发展不同时期存在非随机性染 色体基因组ＤＮＡ拷贝数改变，而不同类型的肿瘤在基因组 异常方面又存在很大的异质性旧ｏ；利用芯片．ｃＧＨ技术的高 分辨率还能鉴别肿瘤的不同亚型口１。这些研究成果为进一 步探讨乳腺癌发病机制，为基因分Baidu Nhomakorabea提供了分子基础，也为 易感基因筛选提供了定位资料，进而指导基因治疗。
ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｎｔ＿４ ｉｎ ｕｒｅａｌ ｍｅｌａ血ｍａ． Ｉｎｖｅｓｔ ０ｐｈｔｌｌａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ， ２００１，４２（７）：１４２２一１４２８．
［３０］Ｌａａｋｋｏｎｅｎ Ｐ，Ｐｏｒｋｋａ Ｋ，Ｈｏｆｆ抽ａｎ ＪＡ，ｅｔ ａ１．Ａ ｔｕｍｏｒ－ｈｏｍｉｎｇ ｐ。ｐｔｉｄｅ ｗｉｔｈ ａ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｓｐｅｃｉ６ｃｉｔｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｖｅｓｓｅｌｓ． Ｎａｔ Ｍｅｄ，２００２，８（７）：７５ｌ彳５５．
ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｐａｔｉｅｍｓ ｗｉ山ｍｅｓｏｔｈｅｌｉａｌ ｓａｒｃｏｍａｓ ａｎｄ ａｌｖｅｏｌａｒ ｒｈａｂｄｏｍｖｏｓａｒｃｏｍａｓ． Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌ，２００４，２５（６）： １６０９．１６１４，
［２７］Ｓｈｉｒａｋａｗａ Ｋ，ｗａｋａｓｕ西Ｈ，Ｈｅｉｋｅ Ｙ，ｅｔ ａＩ．Ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｉｃ ｍｉｍｉｃｒｙ ａｎｄ ｐｓｅｕｄｏ—ｃｏｍｅｄｏ ｆｏｒＩｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｂＩ它ａｓｔ ｃａＩｌｃ盯． Ｉｎｔ Ｊ ＣａＩ化ｅｒ．
另外，经研究发现的不典型小叶增生和小叶原位癌共有 的基因组改变，如１６ｑ２１一ｑ２３．１的共缺失等，可以解释在细 胞异常增生过程中小叶肿瘤的生成一一。
二、明确各种类型乳腺癌的染色体异常及其相关基因 ｃＧＨ技术能快速、准确地分析各种类型乳腺癌相关基 因的扩增和缺失，提供了一个新的检测ＤＮＡ拷贝数变化的 标尺。对于ＤｃＩｓ的研究证实了许多染色体异常，包括已被 熟知的１ｑ、６ｑ、８ｑ、１７ｑ、１９ｑ、２０ｑ和ｘｑ的遗传物质获得以及 ８ｐ、１３ｑ、１６ｑ、１７ｐ和２２ｑ缺失，其中大部分与在ＩＤｃ中所证 实的一致。Ｈｗａｎｇ等旧。的ｃＧＨ研究在验证这一结论的同时 还有新发现，如８ｐ缺失主要有两种形式：整臂缺失和部分区 域缺失。在纯ＤＣＩｓ中，８ｐ缺失主要表现为整臂缺失，有 ８ｐ２１一ｐｔｅｒ远端缺失的病例均显示８ｐ１１一ｐ１２的增益。还观察 到不同组织学分级的ＤｃＩｓ有不同的基因组改变：分级低的 ＤｃＩｓ显示较高频率的１６ｑ和１７ｐ缺失，检测到的８ｐ缺失为 部分染色体臂的丢失同时伴有近端增益区。相反，分级较高
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的ＤＣＩｓ则显示更多的１７ｑ增益和８ｐ缺失（６５％为整臂缺 失）。并且ＤｃＩｓ中１４ｑ缺失比ＩＤｃ常见。
一项微阵列ｃＧＨ研究显示原发性乳腺癌的基因组ＤＮＡ 拷贝数改变常见于８ｑ１１一ｑｔｅｌ、１ｑ２１一ｑｔｅｌ、１７ｑ１１一ｑ１２和１１ｑ１３ 的增益以及１６ｑ１２·ｑｔｅｌ、１１ｐｔｅｌ－ｐ１５．５、１ｐ３６·ｐｔｅｌ、１７ｐ１１．２一
ｕＭＫｌ和ｃ—ＭＹｃ５个基因位点上有共同扩增。以上研究结 果为用细胞系研究乳腺癌提供了一个ＤＮＡ拷贝数变化的数 据库来源。
三、揭示乳腺癌恶性转变的进展途径 用ｃＧＨ分析有助于推测乳腺癌发展过程中不同的分子 通路，进一步确定基因型和临床病理学特征之间的关系。病 理学家提出的乳腺癌线性发展模型随着ＣＧＨ的应用也得到
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ｐａｔｔｅｍｓ：ａｎ ａｎｉｍａｌ既ｐｅＩｉｍｅｎｔ ｓｔｕｄｙ ｉｎ ｔ１１ｅ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ．Ｊ Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ ｃｌｉｎ ｏｎｃｏｌ，２００７ Ｊｕｎ １６，［Ｅｐｕｂ ａｌｌｅａｄ ０ｆ陋ｍ］， ［２６］ｓｕｎ Ｂ，ｚｈａｎｇ ｓ，ｚｈａ０ ｘ， ｅｔ ａｌ， Ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｉｃ ｍｉｍｉｃｒｙ ｉｓ
基金项目：国家自然科学基金资助项目（３０４７１９６７） 作者单位：３０００６０天津医科大学附属肿瘤医院乳腺病理研究室 教育部乳腺癌防治重点实验室天津市肿瘤防治重点实验室（高玉 霞、牛昀）；天津市中医药大学第二附属医院病理科（吕淑华） 通信作者：牛昀（Ｅ—ｍａｉｌ：ｙｕｎｎｉｕ２０００＠１２６．ｃｏｍ）
了进一步研究结果Ｍ’“。但Ｋｕｕｋａｓｊ柳ｉ等Ｈ ｏ在部分病例中 经只检测到ＤＣＩＳ和ＩＤｃ惟一的共同改变区（１７ｑ２１．ｑ２３增 益区），而其他ＤＮＡ拷贝数改变只存在于其中一种病变中，
因此提出ＤｃＩｓ—ＩＤｃ的线性发展模型还缺乏充足的证据。 ｘｑ增益很少发生于ＩＤｃ，但在纯ＤｃＩｓ（６／９）中发现了ｘｑ的 增益，可能的原因为：该特定的遗传改变可促进导管内成分 的生长，而阻碍浸润成分生长。如果ＤＣＩＳ和ＩＤＣ有共同的 克隆来源，ｘｑ的增益在乳腺癌的晚期阶段则不是必需的。 相反，如果ＤＣＩｓ不是ＩＤｃ的前驱病变，那么就可以解释ｘｑ 增益多存在于ＤｃＩｓ中而很少存在于ＩＤｃ中的现象，进一步 说踞两种病变克隆来源的多样化和随后各自独立发展的 过程。
ａｎｄ ｔｕｍｏｕ卜ｃｅＵ ｐｌ踮ｔｉｃｉｔｙ： ｌｅｓｓｏｎｓ ｆｒｏｍ ｍｄａｎｏｍａ． Ｎａｔ Ｒｅｖ ＣａＩｌｃｅｒ，２００３，３（６）：４１１．４２１． ［３３］Ｒｕｆ ｗ，ｓｅｆｔｏｒ ＥＡ，Ｐｅｔｒｏｖａｎ ＲＪ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｆｆｂｒｅｎｔｉａｌ ｍｌｅ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｆａｃｔｏｒ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎｈｉＫｔｏｆｓ ｌ ａｎｄ ２ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｉｃ ｍｉｍｉｃｒｙ．ＣａＩｌｃｅｒ Ｒｅｓ，２００３，６３（１７）：５３８ｌ－５３８９．
ｓｈａｄｅｏ和Ｌａｍ¨纠首次用ｃＧＨ研究乳腺癌模型细胞系 （ＭＣＦ．７、ＢＴ＿４７４、Ｔ＿４７Ｄ、ＭＤＡＭＢ－２３１、ＳＫ—ＢＲ一３、ＵＡＣＣ一８９３ 和ｚＲ．７５－３０）的基因组情况，观察到７５个高水平增益区、４８ 个缺失区以及各区的变化范围；还观测到ｌｐ、８ｑ、９ｐ、１１ ｑ、 １５ｑ、１７ｑ和２０ｑ上ＤＮＡ拷贝数的多级改变以及７个细胞系 共同的染色体改变；提出全基因组定位还能实现相同生物学 通路中多种成分ＤＮＡ拷贝数的状态评定。通过对６０个与 表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ，ＨＥＲ２、ＨＥＲ３和ＨＥＲ４）有关的基 因位点的研究，发现了细胞系间共有的多基因ＤＮＡ拷贝数 改变，如在ｕＡｃｃ－８９３、ｚＲ－７５－３０、ＢＴ４７４和ｓＫ－ＢＲ．３细胞系 中均能观察到ＥＲＢＢ２基因的高度扩增。另外，观察到与 ＥＧＦＲ相关的基因改变，如ＲＥＣＱＬ５、Ｈ３Ｆ３Ｂ和ＧＲＢ２的扩增 以及其他频繁改变的基因位点（如ｃ—ＭＹＣ、ＬＩＭＫｌ、ＰＲＣＫＡ、 ＣＨＮ２、ＥＲＢＢ２、ＰＹＫ２、ＭＡＰ２Ｋ３和ＰＬＧｌ），同时发现Ｔ＿４７Ｄ、 ＢＴ４７４和ＳＫ—ＢＲ＿３细胞系在ＭＡＰ２Ｋ６、ＣＨＮ２、ＰＲＫＣＡ、
一、与乳腺之癌前病变有关的染色体异常改变 乳腺癌前病变的病变基因组ＤＮＡ已经发生了遗传性改 变。ＣＧＨ研究为乳腺导管原位癌（ＤｃＩｓ）是癌前病变的理论 提供了有力证据。在某种程度上讲，ＤｃＩｓ的ＤＮＡ拷贝数改 变提示基因组的不稳定性最大可能发生于浸润性表型迹象 出现之前。Ｋｕｕｋａｓｊ帅ｉ等Ｍｏ的研究显示ＤｃＩｓ中存在许多染 色体异常，如１ ｑ、８ｑ１３·ｑｔｅｒ的增益和８ｐ１２一ｐｔｅｒ、１ｌｑｌ４·ｑｔｅｒ、 １７ｐ、１４ｑ２３一ｑｔｅｒ的缺失，这与在浸润性导管癌（ＩＤＣ）中所证 实的一致。 近几年的ｃＧＨ研究表明，柱状细胞病变与不典型导管 上皮增生、低级别ＤｃＩｓ有相似的分子遗传学特点，且三种病 变常常并存于同一乳腺，提示柱状细胞病变可能是低级别 ＤｃＩｓ／ＩＤｃ的前驱病变。Ｓｉｍｐｓｏｎ等Ｋ１用ＣＧＨ分析了５５个 柱状细胞病变，其中４４个病变均存在不同程度的ＤＮＡ拷贝 数改变，１５ ｑ、１６ｐ、１９的扩增和１６ｑ、１７ｐ、ｘ的丢失最常见。
［３１］ｚｈａｎｇ ｓ，Ｇｕｏ Ｈ，ｚｈａＩｌｇ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｍｉｃｒｏｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｐａｔｔｅｍｓ ｉｎ ｄｉ娲ｒｅｎｔ ｓｔａｇｅｓ ０ｆ ｍｅｌａｎｏｍａ ｇｒｏｗｔｌｌ．Ｏｎｃｏｌ Ｒｅｐ，２（）（）６（１），１５：
１５－２０． ［３２］Ｈｅｎｄｄｘ ＭＪ，ＳｅＲｏｒ ＥＡ，Ｈｅｓｓ ＡＲ，ｅｔ ａ１． Ｖ龋ｃｕｌｏｇｅｎｉｃ ｍｉｍｉｃｒｙ
万方数据
与伴随的ＤｃＩＳ和ＩＤｃ进行比较发现，柱状细胞病变与低级 别ＤＣＩＳ／ＩＤＣ的遗传特征有部分一致性。此外，柱状细胞病 变形态学分类级别的递增与其遗传水平不稳定性的增加一 致，从而提示柱状细胞病变遗传水平的不稳定性与其增生的 程度以及细胞结构异型性的程度有关。还有学者用ｃＧＨ研 究了均伴有顶质分泌的乳腺导管上皮过度增生、ＤｃＩＳ以及 浸润性大汗腺癌三种病变的基因组情况，发现三组病变在 ＤＮＡ遗传性改变上有相当大的重叠，如２ｑ、１ｐ的增益以及 ２２ｑ、１７ｑ、１２ｑ和１６ｑ的缺失等，提示伴有顶质分泌的上皮增 生可能是克隆陛增生。但是这些改变也常见于无顶质分泌 的乳腺癌，进而提示伴有顶质分泌的上皮增生不是大汗腺癌 的惟一前驱病变忡ｏ。
ｐ１２和８ｐｔｅｌ．ｐ２２的缺失旧ｏ。Ｖ蹦ｌａ等¨０‘分析了４７例均暴
露于放射性尘埃地区的绝经前乳腺癌，在＞１０％的样本中探 测到１５２个ＤＮＡ拷贝数的改变，如最常见的８ｑ１３．２（４９％）、 ｌｐ２１．１（３６％）和８ｑ２４．２１（３６％）增益区以及１ｐ３６．２２ （２６％）、１７ｐ１３．２（２６％）和８ｐ２３．３（２３％）缺失区，还观察 到ＨＥＲ２扩增（９／４７）。此外，常见扩增的ＢＡｃ还包括已知 癌基因ｃ—ｍｙｃ（８ｑ２４．２１）和细胞周期蛋白（ｃｙｃｌｉｎ）Ｄｌ （１１ｑ１３．３），进一步显示了微阵列ｃＧＨ的高度敏感性。该学 者还观察到含有靶基因重复出现的ＤＮＡ异常改变区包括 ３ｑ２５．３１、６ｑ２６、７ｑ３６．３、１３ｑ３２．２和１６ｐ１１．２增益区以及１７ 号染色体缺失区；并发现了７个未曾报道过的、来自２２号染 色体的重复性缺失，其潜在的靶基因有ＫＲＥＭＥＮｌ （２２ｑ１２．１），系ｗｎｔ信号通路的成员。因此，该研究所显示 的基因组改变提供了与放射有关的乳腺癌“分子指纹”。新 近有报道双侧乳腺癌常见的基因组ＤＮＡ拷贝数改变为ｘ， １７ｑ，Ｘｑ，８ｑ，１４ｑｌｌ－２１，１７ｑ２２－ｑｔｅｒ扩增和８ｐ缺失¨“。
在ＢＲｃＡｌ和ＢＲｃＡ２基因突变的遗传性乳腺癌ｃＧＨ研 究方面，几乎均能检测到这两个基因的杂合子丢失和ＨＥＲ２ 低频表达，同时发现ｃｙｃｌｉｎ（Ａ、Ｂ１、Ｅ）和ｓＫＰ２的表达与 ＢＲｃＡｌ表型相关，而ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１和ｐ２７的表达与ＢＲｃＡ２表型 的乳腺癌有关¨…。一项新的ＣＧＨ研究表明，家族性乳腺癌 有８ｐ１１－１２共同扩增区，且该区与瞄＿６７、ｃｙｃｌｉｎ Ｅ的表达以 及家族性乳腺癌的不良预后有关ⅢＪ。以往对该扩增区特征 性的染色体结构和功能基因（如ｚＮＦ７０３／ＦＵｌ４２９９，ｓＰＦＨ２／ ｃ８０以，ＢＲＦ２和ＲＡＢｌｌ丌Ｐ）等的研究在散发性乳腺癌中有 许多报道，但在家族性乳腺癌尚属首次。另有学者发现家族 性乳腺癌中还存在不常见的ＰＡＬＢ２突变以及１８ｑ的 缺失㈣。
２００２，９９（６）：８２１＿８２８． ［２８］ Ｈｗｕ ｗＪ． Ｎｅｗ 印ｐｍａｃｈｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ
ｍｅｌａｎ蚴ａ：ｔｈａｌｉｄｏｆｎｉｄｅ ａｒＩｄ ｔｅｍｏｚｄｏｍｉｄｅ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０００，１４（１２ ｓｕｐｐｌ １３）：２５－２８． ［２９］Ｃｌａ删ｓ Ｒ， ｓｃｈａｌｋｗ玎ｋ Ｌ， Ｒｕｉｔｅｒ ＤＪ， ｅｔ ａ１．Ｌａｃｋ ｏｆ ｌｙｍｐｈａｎ舀ｏｇｅｎｅｓｉｓ ｄｅｓｐｉｔｅ ｃｏｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ－ｃ ａ１１ｄ ｉｔｓ