实验动物模型的制备

病理生理学实习指导一、缺氧模型的实验性复制㈠目的与原理通过给动物低氧环境，影响Hb的带氧能力及使组织不能利用氧等方法，复制不同类型缺氧模型，经呼吸、机能状态、皮肤粘膜颜色等指标，显示了其不同症状与特征，同时对复制模型的方法及原理又有大概的了解，有利于深入和研究各缺氧症的发生、发展和转归的规律。

㈡实验对象小白鼠。

㈢器材与药品缺氧瓶（装有管道瓶塞的250ml广口瓶），酒精灯，一氧化碳发生器，1ml注射器，5ml 和2ml刻度吸管，粗天平（附砝码），剪刀，普通镊。

钠石灰（氢氧化钠、氧化钙），甲酸，浓硫酸，0.125%氰化钾溶液，1%亚硝酸钠溶液，10%硫代硫酸钠溶液。

㈣步骤与观察表8-3-1观察指标呼吸机能状态皮肤粘膜颜色类型（频率、幅度）（活动度）––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––低张性缺氧一氧化碳中毒氰化钾中毒⒈低氧性缺氧⑴将小白鼠至于250ml广口瓶（内装钠石灰吸收二氧化碳）中观察上述指标。

⑵将瓶塞紧，同时记录时间，每5min重复观察上述指标一次（如有变化则随时记录）直到动物死亡为止。

⒉一氧化碳中毒性缺氧⑴如图8-3-1装好一氧化碳发生装置。

⑵将小白鼠一只放入瓶中，观察上述指标。

⑶取甲酸3ml放入试管内，加入浓硫酸2ml，塞紧。

如气泡产生较少，可用酒精灯加热，加速一氧化碳的产生（但不可过热以至液体连续沸腾，因一氧化碳产生过快，动物迅速死亡，血液颜色改变不明显）。

⑷在整个过程中，注意观察上述指标。

（注）：一氧化碳产生原理：H2SO4HCOOH CO↑+H2O△⒊氰化钾中毒性缺氧⑴称小白鼠体重，观察上述指标，预先准备1%亚硝酸钠及10%硫代硫酸钠各10ml·Kg-1，以备急救用。

硫氰酸酶（肝）图8-3-1 一氧化碳发生装置⑵腹腔注射0.125%氰化钾9ml·Kg -1，立即观察上述指标。

⑶待小白鼠出现共济失调或竖尾时，将准备好的急救药注入腹腔。

⑷重复步骤⑵，不予抢救。

⑸将三种缺氧实验动物尸体打开腹腔，比较血液或肝脏颜色。

附：硫代硫酸钠（Na 2S 2O 3）及亚硝酸钠（NaNO 2）急救机制Na 2S2O 3是一种氧化剂，能使血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，后者与氰酸根结合成氰化高铁血红蛋白，使细胞色素氧化酶解脱出来，从而恢复细胞的生物氧化功能。

Na 2S 2O 3在体内S 与HCN 结合变成无毒性的HCNS 由肾脏排出。

Na 2S 2O 3+CO 2+H 2O NaHCO 3+NaHSO 3+SHCN+S HCNS ㈤注意事项吸取硫酸与甲酸时，注意不要溅到衣服或皮肤上。

CO 中毒实验完毕后，及时处理CO 发生器内的残余物。

㈥思考题注射亚硝酸盐，所观察指标有改变，为什么？二、呼吸功能衰竭㈠目的与原理本实验通过复制呼吸功能衰竭的病理模型，观察血气和呼吸的变化，并分析其机制。

呼吸功能包括外呼吸、内呼吸和气体运输功能。

呼吸衰竭指的是由于外呼吸功能严重障碍，以致动脉血氧分压低于正常范围的病理过程。

肺通气障碍或／和肺换气功能障碍都可导致呼吸功能衰竭。

㈡实验对象健康成年兔。

㈢器材与药品兔手术台，哺乳动物手术器械一套，连接三通的动脉插管，二道生理记录仪，张力换能器，血气分析仪，输液装置。

20%氨基甲酸乙酯溶液，1%肝素生理盐水，生理盐水，10-3肾上腺素。

㈣步骤与观察⒈麻醉与固定取兔一只，称重，从耳缘静脉按5 ml·kg -1注射20%氨基甲酸乙酯溶液。

麻醉后将兔仰卧位固定于兔台上。

⒉颈部手术剪去颈部被毛，切开皮肤，分离皮下组织，作气管插管，再分离左侧颈总动脉，作动脉插管（插管内充满肝素生理盐水）。

分离右侧颈外静脉，作静脉插管，并与输液装置相连，缓慢输入生理盐水。

⒊血气分析用2ml注射器先抽取少许肝素，润湿注射器壁后推出，使注射器死腔和针头内充满肝素溶液，然后略松支动脉夹放血注许，冲去动脉插管内的肝素生理盐水，再用肝素处理过的注射器与动脉插管相连，让血液自动流入注射器内（切勿进入气泡），取血１ml，采血后迅速套上带软木塞的针头，作血气分析。

⒋呼吸运动的描记将张力换能器上的挂钩钩在兔剑突部位的皮肤上，调节挂钩与换能器敏感梁之间的牵引线，使张力适中，且牵引线须垂直。

将换能器与二道生理记录仪连接好。

二道生理记录仪的―时间常数‖置于DC，―滤波‖置于10Hz，灵敏度5mV/cm，走纸速度1mm/s。

描记一段正常呼吸曲线。

⒌复制窒息用弹簧夹将气管插管上所套橡皮管完全夹住，使动物处于完全窒息状态30s，取动脉血作血气分析并观察呼吸变化。

立即放开弹簧夹，等10min，待动物恢复正常。

⒍复制气胸于兔右胸第4~5肋间插入一16号针头造成右侧气胸，5min~10min时取动脉血作血气分析，同时观察呼吸变化。

用50ml注射器将胸腔内空气抽尽，拔出针头，等10min~20min,待动物呼吸恢复正常。

⒎复制肺水肿从颈外静脉快速（180滴~200滴／min）输入生理盐水（100ml·kg-1），滴注接近完毕时，立即向输液瓶内加入0.1%肾上腺素0.9ml·kg-1，输完全部液体，观察呼吸的变化，并作血气分析。

动物出现明显的血气变化及呼吸变化后，用止血钳夹住气管，处死动物，打开胸腔，在气管分叉处结扎气管以防止水肿液流出，在结扎处以上切断气管，小心将心脏及其血管分离，取出肺脏后用滤纸吸净肺表面，称重，计算肺系数。

正常肺系数为４~５。

肺系数＝Array观察肺脏体积、颜色的改变，并切开肺脏，观察有无泡沫样的液体流出。

㈤注意事项⒈取动脉血切忌与空气接触，如针管内有小气泡要立即排除。

⒉复制气胸后一定将胸腔内空气完全抽出。

⒊取肺脏时应避免损伤肺组织，并尽量减少对肺组织的挤压。

㈥思考题⒈实验中复制肺水肿的机制是什么？⒉实验中由气管插管中流出大量液体，而肺系数值增大并不明显应考虑哪些因素？附1：实验性肺水肿的其它复制方法⒈抬高兔台头端，用2ml注射器吸取10%葡萄糖溶液1ml~2ml，将针头插入缺管插管分叉处，缓慢注入气管，造成渗透性肺水肿，5min~10min后放平兔台，取动脉血作血气分析，并观察呼吸的变化。

⒉从耳缘静脉缓慢注入液体石蜡1ml或油酸0.06ml~0.08ml（用前经水浴加热至37℃左右），观察呼吸的变化，于注射后20min和40min时分别取血作血气分析。

三、急性右心衰竭病理模型制备㈠目的与原理本实验要求掌握急性右心衰竭模型的制备方法。

观察复制过程中机体出现的表现，理解其发生机制。

由耳缘静脉缓慢注入栓塞剂，经静脉回流至肺脏，并栓塞在肺循环，引起肺动脉高压，即右心室后负荷增加。

如再输入大量生理盐水，使回心血量大大增加，则在后负荷增加的基础上，又增加了前负荷，右心功能则急剧衰竭，症状加重，甚至有腹水，直至动物死亡。

㈡实验对象健康成年兔，2.5kg以上。

㈢器材与药品兔手术台，哺乳动物手术器械，中心静脉压测定装置，呼吸描记装置，心室插管，听诊器，注射器（20ml，5ml，1ml），二道生理记录仪与电刺激器（或MS302-PC型生物信号处理系统）。

20%氨基甲酸乙酯溶液，生理盐水，液体石蜡，2.5%尼可刹米，肝素溶液。

㈣步骤与观察二道生理记录仪⒈兔称重、麻醉固定，二道生理记录仪参数见附1。

⒉颈部剪毛，作正中切口，钝性分离颈部组织，作左侧颈总动脉插管（连接动脉压换能器）与气管插管（连接玛俐氏气鼓，并调节好玛俐氏气鼓与张力换能器的距离）。

⒊右侧颈外静脉插入导管至右心房或右心房口（5cm左右）。

通过输液管连上输液瓶和中心静脉压检压计，先使导管与输液瓶相通，保持静脉插管通畅。

或有多导仪实验组用经右侧颈外静脉插入心室插管至右心室（7cm左右），插管的同时开动多导仪描记压力曲线以观察是否插入了右心室，。

此组输液从耳缘静脉处。

⒋观察记录各项生理指标、心率、心音强度、肺部听诊（有无异常呼吸音）、动脉血压、中心静脉压（见附2）或右心室内压（包括收缩与舒张期压力）、循环时间（由耳缘静脉注射尼可刹米0.2ml·Kg-1，作标记，然后测量从标记到呼吸加深加快这段距离，根据走纸速度计算时间，即循环时间。

⒌用2ml注射器吸取液体石蜡，按0.5ml·Kg-1由耳缘静脉缓慢注射，同时密切观察中心静脉压（或右心室内压）、血压的变化。

如前者升高或后者下降则终止注射。

⒍复测记录4各项指标。

⒎待血压、呼吸稳定后，以60滴/min的速度输入生理盐水，直至血压降到8 kPa以下。

⒏复测记录4各项指标。

⒐动物死亡后，剖开胸、腹腔（注意不要损伤脏器与大血管），观察有无胸、腹水、肠系膜血管充盈与脏器水肿。

㈤注意事项1．液体石蜡注入速度要慢，否则易引起急性肺栓塞，很快死亡。

2．外加因素或试剂时均要做标记。

3．输入生理盐水过程中可适当加注些液体石蜡。

4．测量动脉血压、中心静脉压每次要观察与记录实验因素前与实验因素之后的数值。

㈥思考题本右心衰竭模型机体可出现哪几型缺氧表现？其机制是什么？四、失血性休克㈠实验目的1.复制兔失血性休克模型。

2.观察兔在失血性休克时的表现及微循环变化。

3.抢救失血性休克。

4.探讨失血性休克的发生机制。

㈡实验对象健康成年兔，体重2.5～3.0kg。

㈢器材与药品手术器械（手术刀，止血钳，眼科剪，眼科镊，手术镊等），输血输液装置，中心静脉压测试装置，微循环观察装置，气管插管，动脉套管，静脉导管，输尿管导管，记滴器，温度计，注射器（1ml，10ml，50ml）。

20％氨基甲酸乙酯溶液，生理盐水，微循环灌流液，0.3%肝素溶液。

㈣步骤与观察⒈取兔一只，称重后耳缘静脉麻醉。

⒉将麻醉的兔仰卧位固定在兔台上，行气管插管术、左侧颈总动脉和右侧颈外静脉插管术。

⒊经耳缘静脉注入0.3%肝素溶液（2 ml·kg -1）⒋将气管插管与呼吸描记装置连接。

⒌将动脉插管接上三通管，一侧与血压描记装置连接描记血压，另一侧连上放有肝素（约0.1g）的50ml注射器，并暂时夹闭导管，以备放血用。

6.将颈外静脉插管连接水减压计的细塑料导管（导管内充满含肝素生理盐水）。

导管的外端用三通管连上输液瓶和水减压计，用以测中心静脉压和输液。

在测压前，阻断减压计侧管，使导管与输液瓶相通，缓慢输入生理盐水（5滴~10滴／min），保持静脉通畅。

7.行输尿管插管术。

用记滴器记录每分钟排尿的滴数。

8.在右侧腹直肌外缘作长6cm纵行的中腹部切口，钝性分离肌肉，打开腹腔后，推开大网膜，找出一段游离度较大的小肠肠袢，轻轻从腹腔拉出，放置在微循环恒温灌流盒内，用显微镜观察肠系膜的微循环。

9.放血前观察动物的各项生理指标，包括一般情况、皮肤粘膜颜色、肛温、血压、呼吸、心率（快放记录纸）、中心静脉压、尿量、肠系膜微循环等，并作记录。