培养基配制及消毒与灭菌及LB培养基制备资料讲解
实验二.培养基的配制及灭菌
实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。
4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。
培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。
为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。
基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。
在配制母液时应注意防止沉淀产生。
绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。
各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。
通常使用的浓度单位是mg/L。
配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。
灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。
培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。
培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。
灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。
（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
培养基配置和灭菌的注意事项
培养基配置和灭菌的注意事项一、培养基配置1.选用适当的培养基组成：根据实验的需要选择适当的培养基成分，包括碳源、氮源、矿质盐、维生素等。
根据不同微生物的要求，可以选择不同的培养基，如富集培养基、选择性培养基等。
2.正确计量和混合培养基成分：根据实验需要和比例，精确地称取和混合培养基成分。
注意避免污染和交叉污染，使用干燥器、称重纸和清洁器具等进行操作。
3.正确调节培养基的pH值：根据不同微生物的偏好，调节培养基的pH值。
使用pH计和相应的酸碱溶液进行调节，确保培养基的pH值符合微生物的需求。
4.加热溶解和固化培养基：将培养基成分加入适量的蒸馏水中，加热搅拌溶解，然后分装到培养皿或试管中。
对于固化培养基，需要加入适量的琼脂或琼脂糖，在混合均匀后加热至溶解，然后分装到培养皿或试管中。
二、培养基灭菌1.选择合适的灭菌方法：有常见的三种灭菌方法，包括热处理（如蒸汽灭菌、热风灭菌）、化学灭菌和滤器灭菌。
根据实验需求和培养基的性质选择合适的灭菌方法。
2.准备合适的灭菌器具：根据实验需求和培养基的量，选择合适的灭菌器具，如蒸馏锅、高压灭菌器、紫外线灭菌箱等。
3.正确操作灭菌设备：根据灭菌设备的说明和操作指南，正确操作和调节灭菌设备。
4.合理选择灭菌时间和温度：根据不同培养基的特性和实验需求，合理选择灭菌时间和温度。
通常情况下，蒸汽灭菌的时间为15-30分钟，温度为121摄氏度；热风灭菌的时间为1-2小时，温度为160摄氏度。
5.注意灭菌后的处理：在灭菌后，及时关闭灭菌设备，避免灭菌后的污染。
将培养基冷却后，进行温度验证，然后保存在合适的温度和条件下。
实验室常用培养基配方及制备方法
实验室常用培养基配方及制备方法实验室中常用的培养基有很多种，不同的培养基适用于不同类型的微生物，如细菌、真菌或细胞系等。
下面将介绍几种常用培养基的配方及制备方法。
1. LB培养基（Luria-Bertani培养基）LB培养基常用于大肠杆菌等细菌的培养。
其配方如下：- Tryptone：10g/L- Yeast extract：5g/L-NaCl：10g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至7.0。
用自动过滤器过滤液体得到无菌的LB培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
2. Sabouraud葡萄汁蘑菇培养基Sabouraud培养基常用于真菌的培养。
其配方如下：- Peptone：10g/L- Dextrose：40g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至5.6、用自动过滤器过滤液体得到无菌的Sabouraud培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
3. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle Medium）DMEM培养基常用于细胞系的培养。
其配方如下：-DMEM粉：每升DMEM培养基50g-细胞因子或血清等:根据实验要求添加将DMEM粉溶解于适量蒸馏水中，并根据实验要求添加适量的细胞因子或血清。
调节pH至7.2-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的DMEM 培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
4.M9液体培养基M9液体培养基是一种常用于细菌的最小培养基，适用于检验细菌的营养需求。
其配方如下：-Na2HPO4：6g/L-KH2PO4:3g/L-NaCl:0.5g/L-NH4Cl:1g/L-MgSO4·7H2O:0.1g/L-CaCl2:0.01g/L将上述成分完全溶解于适量蒸馏水中，调节pH至7.0-7.4、用自动过滤器过滤液体得到无菌的M9液体培养基。
分装后在121℃高压灭菌器中高压灭菌20分钟即可。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告培养基的制备与灭菌实验报告引言：在微生物学研究中，培养基是不可或缺的工具。
培养基的制备和灭菌是保证实验结果准确性和可重复性的重要步骤。
本实验旨在探究培养基的制备方法和灭菌技术的应用。
一、培养基的制备1.1 选择合适的培养基成分培养基的成分根据微生物的需求而定。
常见的培养基成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
在制备培养基时，需根据所研究的微生物特性选择合适的成分。
1.2 制备培养基的步骤制备培养基的步骤主要包括称量、溶解、调pH、加热消毒和装瓶。
首先，按照配方称取所需成分，并逐一溶解于适量的蒸馏水中。
随后，根据微生物的需求，调节溶液的pH值。
最后，将溶液装入试管或培养皿中，并加热消毒。
二、灭菌技术的应用2.1 灭菌的目的灭菌是指将培养基、培养器具和实验室环境中的微生物杀灭或去除的过程。
灭菌的目的是为了避免外来微生物的污染，确保实验结果的准确性。
2.2 常用的灭菌方法常用的灭菌方法包括高温灭菌、化学灭菌和紫外线灭菌。
高温灭菌是指将培养基或器具在高温条件下进行加热消毒，常用的方法有烘箱灭菌和压力灭菌。
化学灭菌则是通过使用化学物质如酒精、乙醛等来杀灭微生物。
紫外线灭菌则是利用紫外线的辐射杀灭微生物。
2.3 实验中的灭菌操作在实验中，常用的灭菌操作包括培养基灭菌、器具灭菌和工作台灭菌。
培养基灭菌是将制备好的培养基加热消毒，以杀灭其中的微生物。
器具灭菌则是通过高温、化学物质或紫外线对实验器具进行消毒。
工作台灭菌则是通过紫外线辐射对实验台面进行灭菌处理。
结论：培养基的制备和灭菌是微生物学研究中的重要环节。
正确的培养基制备和灭菌操作可以确保实验结果的准确性和可重复性。
通过本实验，我们学习了培养基的制备方法和常用的灭菌技术，为今后的微生物实验打下了基础。
参考文献：[1] 陈晓玲, 赵莉, 邱晓红, 等. 基础微生物学实验教程[M]. 2版. 北京: 高等教育出版社, 2017.[2] 郭燕妮, 张晓红. 微生物学实验指导[M]. 北京: 高等教育出版社, 2019.。
培养基配方及配制方法
培养基配方及配制方法培养基是一种用于寄养和培养细胞、微生物、组织等生物体的基质。
其配方的选择和配制方法对于不同的生物体和研究目的有很大的差异。
以下是一般常用的培养基配方及简单的配制方法：1. LB培养基（Luria-Bertani）LB培养基是常见的用于大肠杆菌等细菌的培养基，其配方包括：- 1% 蛋白胨（tryptone）: 添加营养源和能量- 0.5% 酵母粉（yeast extract）: 提供维生素和生长因子-1%NaCl（氯化钠）:调节渗透压-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法：将蛋白胨、酵母粉和NaCl加入蒸馏水中，调整pH至7.0，将混合液体加热至溶解，过滤杂质，如需固化则加入1.5%的琼脂。
2. YPD培养基（Yeast extract-Peptone-Dextrose）YPD培养基常用于酵母菌的培养，其配方包括：- 1% 酵母提取物（yeast extract）: 提供维生素和生长因子- 2% 蛋白胨（peptone）: 为细菌提供碳源和能量- 2% 葡萄糖（dextrose）: 为细菌提供碳源和能量-蒸馏水:使混合液体稀释至所需体积配制方法：将酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖加入蒸馏水中，调整pH至7.0，将混合液体加热至溶解，过滤杂质，如需固化则加入2%的琼脂。
3. DMEM培养基（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）DMEM培养基是常用的哺乳动物细胞培养基，其配方包括：-10%胎牛血清（FBS）:提供生长因子和营养物质- 1% 青霉素-链霉素溶液（Penicillin-Streptomycin Solution）: 防止细菌污染- 1% L-谷氨酰胺（L-Glutamine）: 提供细胞代谢所需的基础物质-DMEM基础培养液:包括氨基酸、维生素等成分-蒸馏水：使混合液体稀释至所需体积配制方法：将胎牛血清、青霉素-链霉素溶液、L-谷氨酰胺和DMEM基础培养液加入蒸馏水中，调整pH值至7.4，混合均匀即可。
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告实验目的，掌握培养基的制备方法和灭菌技术，保证培养基无菌，为微生物实验提供良好的生长条件。
一、培养基的制备。
1.1 培养基的组成。
培养基是微生物生长和繁殖的营养物质，通常包括碳源、氮源、矿物质盐和生长因子等。
根据不同微生物的需求，培养基的组成也有所不同。
1.2 制备步骤。
（1）称取适量的葡萄糖、蛋白胨、氯化钠等原料；（2）加入适量的蒸馏水，搅拌均匀；（3）调节pH值，通常为7.0-7.2；（4）分装至试管或培养皿中，加入琼脂（如需要固体培养基）；（5）高压蒸汽灭菌15分钟。
二、培养基的灭菌实验。
2.1 灭菌方法。
培养基的灭菌是为了保证培养基中无菌，通常采用高压蒸汽灭菌法。
在高压下，微生物及其孢子、病毒等能够被有效杀灭。
2.2 实验步骤。
（1）将制备好的培养基分装至试管或培养皿中；（2）密封好容器，放入高压灭菌锅中；（3）加水至适当高度，密封锅盖；（4）加热至121摄氏度，压力达到1.05kg/cm2后开始计时，持续15分钟；（5）关火，等待冷却后取出培养基。
实验结果，经过高压蒸汽灭菌处理后，培养基中无任何微生物生长。
证明培养基已达到无菌状态，可以用于微生物的培养和实验。
结论，通过本次实验，我们掌握了培养基的制备方法和灭菌技术，为后续的微生物实验提供了良好的条件。
同时，也加深了对无菌技术的理解和应用。
参考文献：[1] 陈华. 微生物学实验指导. 北京，高等教育出版社, 2015.[2] 王明. 实验室微生物学. 上海，上海科学技术出版社, 2018.以上为培养基的制备与灭菌实验报告。
（文档结束）。
培养基配置与灭菌
培养基粉末、琼脂、蔗糖、95% 酒精、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。
植物细胞工程原理与技术实验
操作步骤：
1、称量药品 据配方要求，用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量放同一烧杯
中，或根据购买的培养基粉末说明称取一定的量，放入一边备用，并用粗天平称 取蔗糖、琼脂放在一边备用。 2、将1中称好的琼脂加培养基体积一半的蒸馏水，放入微波炉中加热并不断搅拌， 直至煮沸溶解呈透明状，再停止加热。 3、将1中所取的各种物质(包括蔗糖)，加入煮好的琼脂中，加入相应的激素，再 加水至总体积，搅拌均匀，配成培养基。 4、用1N的氢氧化钠或盐酸，滴入3中的培养基里，每次只滴几滴，滴后搅拌均匀， 并用pH试纸测其pH值，直到将培养基的pH值调到6.0左右。 5、将配好的培养基，分装到三角瓶中，并用封口膜封好，瓶壁写上号码。
培养基配制：
1、按照要求称量药品 2、加热，完全溶解 3、混合均匀 4、定容，调pH值 5、分装 6、灭菌
植物细胞工程原理与技术实验
植物细胞工程原理与技术实验
配制培养基的目的 是什么？
培养基配制注意事项：
1、称量要准确 2、pH值要合理 3、标记好名称，日期，浓度
植物细胞工程原理与技术实验
器皿及药品等
植物细胞工程原理与技术实验 Nhomakorabea培养基配制：
基本培养基有7种母液，即大量元素母液、微量 元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、 肌醇母液、生长调节物质母液。 基本培养基的配制方法有三种： 一 是可以将培养基的每种成分配成单一化合物 的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使 用； 二 是配成几种不同的混合液，这样在大量配制 同一种培养基时更省时、省力。 植物细三胞工从程原公理司与技购术买实验培养基混合粉末。
培养基的配制与灭菌技术
培养基的配制与灭菌技术⼀、培养基的配制与灭菌技术培养基是将微⽣物⽣长繁殖所需要的各种营养物质，⽤⼈⼯的⽅法配制⽽成的⽤于培养微⽣物的营养基质。
培养基种类很多，不同的微⽣物所需培养基不同。
就培养基中营养物质的来源可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。
按培养基特殊⽤途可分加富培养基，选择培养基、鉴别培养基。
按培养基制成后的物理状态可分为固体培养基，液体培养基和半固体培养基。
固体培养基是在液体培养基中加⼊1.5 %-2.0 %琼脂作凝固剂; 半固体培养基则加⼊0.5 %-0.8 %的琼脂。
⼀般培养基除含有⼤量⽔分外, 还含有碳素、氮素、⽆机盐类和维⽣素等。
此外, 由于徽⽣物⽣长繁殖必须在最适的酸碱度范围内, 才能表现出最⼤的⽣命活⼒, 因此应根据不同种类的徽⽣物. 将培养基调节到⼀定的pH值范围。
培养基配制后还必须进⾏灭菌, 灭菌是指杀死或消灭所有微⽣物, 包括营养体、孢⼦和芽孢。
灭菌的⽅法很多，可分为物理⽅法与化学⽅法两⼤类。
物理⽅法包括湿热灭菌、⼲热灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等; 化学⽅法主要是利⽤化学药品对接种室空间、⽤具和其它物体表⾯进⾏灭菌与消毒。
消毒⼀般是指消灭有害微⽣物的营养体和病原菌。
(⼀) 培养基的配制⽅法⼀般培养基的配制⽅法如下 (各种天然培养基的配制⽅法略有不同)：l. 按照配⽅的组分及⽤量先分别称量并配成液体；2. 根据要求调到⼀定的酸碱度(pH值)；3. 若要制成固体则加⼊2%琼脂并加热融化；4. 根据需要的数量分装⼊试管或三⾓瓶中, 加上棉塞或盖上纱布；5. 包扎好灭菌后备⽤。
配制斜⾯培养基的⼀般操作步骤为：称量→溶解→调pH值→加琼脂→过滤→分装→加棉塞→包扎→灭菌→摆斜⾯→⽆菌检查。
(图9-7)(⼆) 培养基及常⽤器⽫的灭菌培养微⽣物常⽤的玻璃器具主要有试管、三⾓瓶、培养⽫、吸管等, 在使⽤前必须先进⾏灭菌, 使容器中不含任何杂菌；培养微⽣物⽤的营养基质(培养基), 在接⼊纯种前也必须先⾏灭菌, 使培养基呈⽆菌状态。
培养基的配制及灭菌
.培育基的配制及灭菌一．实验目的1.三角瓶，培育皿，试剂瓶，试管，枪尖盒等仪器的冲洗。
2.三角瓶棉塞的制作，三角瓶，吸管，培育皿，试剂瓶，试管，枪尖盒的包装与灭菌。
3.高温蒸汽灭菌原理的学习。
4.LB 和 MacConkey培育基的制作与灭菌。
二．实验原理1.高温灭菌的原理：因为培育基配置过程中并不是是无菌操作，所以要经过立刻灭菌来防备配制过程中混入的杂菌利用培育基中的营养物质进行生殖进而损坏培育基的性能。
高压蒸汽灭菌是生物试验应用最广，成效最好的一种湿热灭菌法。
在密闭的蒸锅内，此中的蒸汽不可以外溢，压力不停上涨，使水的沸点不停提升，进而锅内温度也随之增添。
在 0.1MPa的压力下，锅内温度达 121℃。
在此蒸汽温度下，能够很快杀死各样细菌及其高度耐热的芽孢。
注意：①使用高压蒸汽灭菌前必定要完好清除锅内空气，使锅内所有是水蒸气，灭菌才能完全。
不然在同一压力下，锅内实质温度和理想温度就会有差距，不可以达到最好灭菌成效。
②在使用灭菌锅前切勿忘掉加水，水加至与三角搁架相平，以防灭菌锅烧干而惹起炸裂事故。
③使用完后要等到压力降为零再翻开锅盖，不然会因为锅内外压力不均衡而致使棉塞蹦出造成污染，也简单损害到操作者。
2.培育基的配置原理：微生物的生长依靠于可利用的营养物质和适合的生长环境。
培育基是用于培育，转移，储存微生物的固体，半固体或液体的营养物质。
培育基中含有微生物所需的所有营养物质，包含碳源、氮源、能源、无机盐、水分和生长因子。
适合的 pH对微生物的生长是必不行少的。
培育基的物理状态有三种：液体、半固体和固体。
这些培育基的主要差别是在固体和半固体培育基里面加了固化剂------琼脂。
当将琼脂加入溶液中时，在98℃能消融成有必定粘性的液体。
并在42℃凝结。
琼脂拥有的特征有：不易被微生物降解；靠近无色等。
关于固体培育基需要加入琼脂量约为 1.4%~1.6%，半固体培育基加入约 0.6%~0.8%。
培育基在配制过程中简单遇到污染，所以一定进行灭菌，同时不可以将培育基中的营养物质损坏。
微生物实验05培养基的制备和消毒灭菌资料.
一、培养基的制备： （一）目的要求：
➢ 学习掌握配置培养基的一般方法、步骤和原理。
（二）原理：
培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢 产物所需的各种营养物质，用人工方法配制而 成的一种基质。它包括碳源、氮源、生长因子、 无机盐和水等营养要素。
由于不同微生物细胞组成不同，因而所需 营养基质不同，为了分离、培养和鉴定不同的 微生物，必须根据其需要，配制合适的培养基。
2.器材：
试管、烧杯、三角瓶、量筒、玻璃棒、铁架台、漏 斗、天平、牛角匙、高压锅、微波炉、 pH试纸 （5.5-9.0）、棉花、纱布、线绳、聚丙烯袋等。
（四）步骤：
斜面培养基制作：
➢ 计算 称量 过滤（可省略）
制作） 包扎
无菌检查
加热溶化 分装 灭菌
调PH 加塞（附棉塞 摆斜面
1.称量 按照培养基配方，准确称量各成份放于
培养基的制备原则：
1.根据不同微生物的营养需要配置不同的培养基。
细菌 牛肉膏蛋白胨 放线菌 高氏1号 真菌 查氏、马丁氏 各类M 土豆葡萄糖
2.调配好培养基营养成分的浓度和比例。 3.控制微生物的培养条件（渗透压、pH、氧化还原
电位等）
（三）器材：
1.药品和试剂：
葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、可溶性淀粉、琼脂、 NaCl、K2HPO4、 KH2PO4、 KNO3、MgSO4、 FeSO4、孟加拉红、1mol/L NaOH、
二、消毒灭菌：
➢ 物理法：加热、过滤、照射
加热
灼烧 干热 湿热
高压 间歇 煮沸
➢ 化学法：化学药品
（一）目的要求：
1.了解干热灭菌、高压蒸汽灭菌和紫外线灭菌的 原理及应用范围。
2.掌握干热灭菌、高压蒸汽灭菌和紫外线灭菌的 技术。
实验3 培养基的配制及消毒灭菌
实验3 培养基的配制及消毒灭菌第一讲、培养基的配制一、实验目的和内容目的：学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤。
内容：1．牛肉膏蛋白陈培养基的配制。
2．高氏1号培养基的配制。
3．马丁氏培养基的配制。
二、实验材料和用具牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO3、NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O。
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布、漏斗、漏斗架、胶管、止水夹等。
三、操作步骤（一）牛肉膏蛋白胨培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，琼脂15～20g，水1000mL，PH7.4～7.61．称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放入热水中，牛肉膏使与称量纸分离，立即取出纸片。
蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
2．加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。
3．调pH 检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。
若偏碱，则用lmol/L HCl进行调节。
pH的调节通常放在加琼脂之前。
应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
4．过滤液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利培养的观察。
但是供一般使用的培养基，这步可省略。
5．分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。
实验一、培养基制备与消毒灭菌资料
培养基
（2）半固体培养基 加入凝固剂。琼脂加入量0.2～0.5% 作用：观察细菌的运动状况。
（3）液体培养基 不加凝固剂 用于发酵业。液体培养。
（1）基础培养基
概念：含有微生物生长繁殖所需的基本营养物质。 用于普通微生物培养。
细菌通用培养基——牛肉膏蛋白胨培养基。 真菌通用培养基——马铃薯蔗糖培养基。
消毒与灭菌
消毒：应用理化方法杀灭部分微生物（主要是病 原微生物）。
灭菌：应用理化方法杀灭物体上所有微生物。
一、加热高温灭菌
消毒与灭菌
1.干热灭菌
类
▲火焰烧灼灭菌
▲热空气灭菌
2.湿热灭菌
▲常压蒸汽灭菌
▲高压蒸汽灭菌
型
▲煮沸法灭菌
▲超高温灭菌
二、紫外线灭菌
三、过滤灭菌
四、化学药剂的消毒与灭菌
消毒与灭菌
配制原则
根据营养不同配制不同培养基 注意各种营养物质的浓度及配比 调节适宜的pH值 考虑加生长因子 培养基应物美价廉 灭菌处理
培养基
培养基分类： 1 根据化学组成分类
（1）天然培养基 （2）合成培养基 （3）半合成培养基
培养基
（1）天然培养基：
完全用天然物质或其浸出汁配制。成分不确定。 如肉汁、豆芽汁、牛乳、土豆汁是天然营养原料。 酸奶、饮料酒、腐乳、酱类的发酵生产。 优点：配制方便，成本较低，营养丰富。生产上用 缺点：成分不确定。
利用温度的灭菌方法
消毒与灭菌
高温灭菌：蛋白质凝固变性，酶失活。
干热灭菌
火焰灭菌
高 温
烘箱内干燥热空气灭菌
灭
菌
巴斯德消毒法
湿热灭菌
间歇灭菌法 高压蒸汽灭菌法
1 干热灭菌(dry heat sterilization)
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一、实验目的
1 了解培养基的种类、掌握培养基的配制、 分装方法和灭菌前的准备工作；高压灭菌 的原理、使用范围和注意事项。
2 明确培养基的配制原理。 3 通过对LB培养基的配制，掌握配制培养基
的一般方法和步骤。
• 培养基是人工地将多种物质按各种微 生物生长的需要配制而成的一种混合 营养基质，用以培养或分离各种微生 物。因此，营养基质应当有微生物所 能利用的营养成分（包括碳源、氮源、 能源、无机盐、生长因素）和水。根 据微生物的种类和实验目的不同，培 养基也有不同的种类和配制方法。
• 由于这种培养基多用于培养细菌，因 此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性 或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
• LB培养基的配方如下：酵母提取物 5g、蛋白胨 10g、NaCl 5g、琼 脂 15～20g、水 1000mL、pH 7.4～ 7.6
三、实验器材
• 酵母提取物，蛋白胨， NaCl，琼脂； 1mol/L NaOH， 1mol/L HCl；试管，三角 烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器， 天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸 （pH 5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔， 麻绳，纱布等。
6.包扎
• 加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛 皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳 扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。三角烧瓶 加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容 易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、日期。
7．灭菌
• 将上述培养基以1.05kg/cm2（15磅/英寸2），121.3℃， 20分钟高压蒸汽灭菌。如因特殊情况不能及时灭菌，则应 放入冰箱内暂存。
按成分的不同分类
1．天然培养基:主要成分是复杂的天然有机物质， 如马铃薯、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等。 这些复杂天然有机物质的成分不完全了解，每次 所用的原料，其中各成分的数量也不恒定。这类 培养基是实验室常用的培养基，例如牛肉膏蛋白 胨培养基、马铃薯培养基等。
2．合成培养基:用化学成分完全了解的纯试剂配制 而成的培养基，如高氏1号培养基，查氏培养基等。 一般用于营养代谢、分类鉴定、菌种选育、遗传 分析等。
四、实验步骤
1．称量
• 按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、 NaCl放入烧杯中。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅 速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种 药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品， 瓶盖也不要盖错。
2．溶化
• 在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀， 然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补 充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的 琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过 程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足 所失的水分。
4．分装
• (1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。
• (2)固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后 制成斜面，分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一 半为宜。
• (3)半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂 直待凝。
5．加塞
• 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞， 以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良 好的通气性能。
8．搁置斜面
• 将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试 管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以 不超过试管总长的一半为宜。
9．无菌检查
• 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养 24～48小时，以检查灭菌是否彻底。
五、实、能源、无机盐及生长因子的来源 • （2） 使用高压灭菌锅的注意事项 2 思考 • （1）培养基配好后，为什么摇立即灭菌？ • （2）为什么配置培养基时要注意各营养成
• 3．鉴别培养基:是一类含有某种特定化合物或试 剂的培养基。某种微生物在这种培养基上培养后， 它所产生的某种代谢产物与这种特定的化合物或 试剂能发生某种明显的特征性反应，根据这一特 征性反应可以将某种微生物与其他种微生物区别 开来。主要用于不同类型微生物的快速鉴定，如 用来检查细菌能否产生硫化氢的醋酸铅培养基。
3．调pH
• 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值， 如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH， 边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。 反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头， 以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。对 于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度 计进行（使用方法，可参考有关说明书）。
• 4．选择培养基:利用微生物对某种或某些化学物 质的敏感性不同，在培养基中加入这类物质，抑 制不需要的微生物生长，而利于所需分离的微生 物生长，从而达到分离或鉴别某种微生物的目的， 如分离真菌的马丁氏培养基。既有选择作用又有 鉴别作用的培养基，如鉴别肠道杆菌的远藤氏培 养基等。
二、基本原理
• LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细 菌基础培养基，有时又称为普通培养基。 它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl。碳源 和能源：酵母提取物，氮源：磷酸盐、蛋 白胨，无机盐：NaCl。在配制固体培养基 时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在 常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时 在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化， 以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常 不被微生物分解利用。
按培养基的用途分类
• 1．基础培养基:含有一般细菌生长繁殖需 要的基本的营养物质。最常用的基础培养 基是上面提及的天然培养基中的牛肉膏蛋 白胨培养基。这种培养基可作为一些特殊 培养基的基础成分。
• 2．营养培养基（加富培养基）:在基础培 养基中加入某些特殊营养物质，如血液、 血清、酵母浸膏或生长因子等。用以培养 对营养要求高的微生物，如培养百日咳杆 菌需要含有血液的培养基。