植物组织蛋白质提取方法汇总

用200毫摩每升的tris-cl 和62.5毫摩每升的tris-cl,我们研究室一般用１００毫摩每升的tris-cl，pH 8.0 ．另外，最好加１５０毫摩每升的ＮaCl，用来分离以弱电荷结合到多糖上的蛋白。

2我提的蛋白难溶，请问怎么解决？1、请问这是为什么呢？怎么解决？

2、溶解时是先在100℃沸水浴后在涡旋吗？

3、涡旋时产生大量泡沫，对蛋白有影响吗？

4、是在常温溶解还是在4℃？或-20℃？

5、一般溶解需要多长时间？怎样才算溶解充分了？

我也是做植物叶片的，建议你可以用TCA-丙酮沉淀，方法如下：

1、在液氮中研磨叶片30min，加PVP，和石英砂

2、加入样品体积3倍的提取液(丙酮溶液1)在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃10000rpm以上1小时）弃上清。

3. 每份加入9ml丙酮溶液II，捣碎沉淀，常温振动混匀，-20℃沉淀1h；10000rpm，4℃离心15min，弃上清.

4. 每份加入9ml丙酮溶液II，常温振动混匀，-20℃沉淀1h；10000rpm，4℃离心15min，弃上清.

5. 每份加入9ml 80%丙酮溶液III, 常温振动混匀，-20℃沉淀1h, 10000rpm，4℃离心15min，弃上清6．干燥成硬块，磨成粉磨-20℃保存待用。

第二个问题：

37度水浴

第三个问题：

涡旋时产生大量泡沫，没有影响

第四个问题：

37度溶解

第五个问题

1个小时，中间混匀数次

出现这种情况是很正常的，要是全部都溶了倒是不太正常。用沉淀法浓缩蛋白都存在一个变性的问题，在具体的操作过程中，有一部分蛋白变性了，所以会不溶解。操作的时候尽量保持低温！

溶解的时候可以在常温下，蛋白变成粉末后，立即加1*SDS上样缓冲液，用加样器吹打，大约5分钟就好，可以用来进行下一步的实验了。也可以在4度溶解过夜。

涡旋时产生大量泡沫，个人认为影响不大

一般溶解半个小时就很充分了，但仍会有很多不溶物！可以离心弃掉！丙酮沉淀之后要干燥，这个过程一定不要时间太长，不然样品干燥得过了，就很难溶了。即使你加上了硫脲，高浓度尿素也不行。我的经验是只要半个小时左右就足够了，表面上看上去比较干就可以了。