过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒说明书 微量法
小鼠过氧化氢酶(CAT)ELISA检测试剂盒使用说明书
小鼠过氧化氢酶（CAT）ELISA检测试剂盒使用说明书小鼠过氧化氢酶（CAT）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被过氧化氢酶（CAT）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。
颜色的深浅和样品中的过氧化氢酶（CAT）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品活性。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。
试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。
严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。
全部液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒构成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无停止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、5、10、20、40、80U/ml 试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒说明书__ 微量法UPLC-MS-4547
过氧化氢（H2O2）含量检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-4547微量法规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体100mL×1瓶（自备）4℃保存试剂二粉剂×1瓶4℃保存试剂三液体6mL×1瓶4℃保存试剂四液体30mL×1瓶4℃保存标准品液体1mL×1支4℃保存溶液的配制：1、试剂一：丙酮自备。
2、试剂二：临用前加入3mL浓盐酸充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存。
3、标准品：1mmol/mL H2O2标准液。
产品说明：H2O2是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。
H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。
一方面，H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H2O2也是许多氧化应激反应中的关键调节因子。
H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收。
技术指标：最低检出限：0.0027μmol/mL线性范围：0.0195-3μmol/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、丙酮、浓盐酸、研钵/匀浆器和冰。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）细菌或细胞样本的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织样本的制备：称取约0.1g组织，加入1mL试剂一进行冰浴匀浆；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
土壤过氧化氢酶检测试剂盒说明书
货号: QS2937 规格：50管/24样土壤过氧化氢酶检测试剂盒说明书紫外分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：S-CAT是土壤微生物代谢的重要酶类，在H2O2清除系统中具有重要作用。
测定原理：H2O2在240nm下有特征吸收峰，通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化，即可反应S-CAT活性的高低。
自备实验用品及仪器：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水试剂组成和配制：试剂一：液体100μL×5瓶，4℃保存；临用前每瓶加入9.9mL蒸馏水充分溶解后待用；用不完的试剂4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入2mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存（如出现结晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用）；试剂三：液体6mL×1瓶，4℃保存。
样品处理：新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
注意：每个测定管要设一个无基质管，无土管只要做一管。
S-CAT活性计算：单位的定义：每天每g风干土样催化1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
计算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A无土管-A测定管+A无基质管)×V反总÷（ε×d）×106]÷W÷T=18.9×（A无土管-A测定管+A无基质管）V反总：反应体系总体积，1.145×10-3L；ε：过氧化氢摩尔消光系数，4.36×104L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm； T：反应时间，20 min=1/72d； W：样本质量，0.1g。
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人过氧化氢酶CAT定量检测试剂盒ELISA使用说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。
人过氧化氢酶（CAT）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书【试剂盒名称】人过氧化氢酶（CAT）定量检测试剂盒（ELISA）【试剂盒用途】定量检测人血清、血浆及相关液体样本中过氧化氢酶（CAT）的含量。
【检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。
将标准品、待测样本加入到预先包被人过氧化氢酶（CAT）多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。
依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人过氧化氢酶（CAT）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人过氧化氢酶（CAT）含量。
【试剂盒组成】1酶标包被板12孔×8条7底物夜A6mL2标准品：40ng/ml0.6mL8底物夜B6mL320倍浓缩洗涤液20mL9终止液6mL4标准品稀释液6mL10说明书1份5样本稀释液6mL11封板膜2张6酶标试剂6mL12密封袋1个备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：40、20、10、5、2.5、1.25ng/ml【需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸【操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。
4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。
过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书
过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书一、测定原理：过氧化氢酶(CAT)分解H2O2的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其变化量，可计算出CAT的活力。
试剂一(ml)二、试剂组成与配制：试剂一：液体100 ml×1瓶，4℃保存6个月。
试剂二：底物液体10 ml×1瓶，4℃保存6个月。
试剂三：显色粉剂×1瓶，4℃保存6个月。
加双蒸水至100 ml溶解，4℃保存1个月。
（如果底部有不溶粉末沉淀，直接取上清使用，不影响测定结果）试剂四：液体10 ml×1瓶，4℃保存6个月。
天冷时会凝固，临用前37℃水浴至透明方可使用。
三、组织样本的检测1、组织匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量(g)：体积(ml)=1：9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下，制备成10%的组织匀浆，2500转/分离心10分钟，取上清，再用生理盐水稀释成最佳取样浓度，待测(最佳取样浓度摸索减附录)。
2、操作表：混匀，波长405nm ，光径0.5cm ，双蒸水调零，测定各管吸光度值。
注：一般样本没有高脂等导致显著差异情况，对照管的样本更换成双蒸水，做1-2管对照即可。
如需做样本自身对照，则试剂盒所测定样本数量减至48样。
3.组织中CAT 活力的计算：（1）定义：每毫克组织蛋白每秒种分解1umol 的H2O2的量为一个活力单位。
（2）计算公式： )ml /mgprot (601271)OD -OD ()mgprot /U (CAT *待测样本蛋白浓度取样量值测定值对照活力组织匀浆中÷⨯⨯⨯=注：*271为斜率的倒数 （3）计算举例：取10%水稻叶片匀浆0.05ml 做CAT 检测，测得对照管吸光度为0.605，测定管吸光度为0.332，同时测得10%水稻叶片匀浆蛋白浓度为3.1303 mgprot/ml 。
则计算结果为：()/mgprotU 7351.101303.305.0601271332.0704.0)mgprot /U (CAT =÷⨯⨯⨯-=活力组织匀浆中注：1.测定血清和血浆时，如果样本不溶血，每批样本只需要随机挑2个样本做对照或者用双蒸水代替额样本做对照；如果样本溶血的话，必须每个样本都要做对照。
土壤过氧化氢酶(Solid-Catalase,S-CAT)试剂盒使用说明
土壤过氧化氢酶（Solid-Catalase，S-CAT）试剂盒使用说明微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC0105规格：100管/48样产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃保存；临用前加入29.7mL蒸馏水充分溶解后待用；用不完的试剂4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；试剂三：液体×1瓶，4℃保存。
产品说明：S-CAT是土壤微生物代谢的重要酶类，在H2O2清除系统中具有重要作用。
H2O2在240nm下有特征吸收峰，通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化，即可反应S-CAT活性的高低。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）和蒸馏水操作步骤：一、样品处理：新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。
二、测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至240nm，蒸馏水调零。
2、加样表试剂名称测定管无基质管无土管风干土样（g）0.030.03试剂一（μL）260260双蒸水（μL）26025℃振荡培养20min试剂二（μL）101010混匀8000g，25℃离心5min，取全部上清试剂三（μL）303030混匀，取200uL至微量石英比色皿或96孔板中，240nm处记录各管吸光值A。
注意：每个测定管要设一个无基质管，无土管只要做一管。
三、S-CAT活性计算：A、用微量石英比色皿测定的计算公式如下单位的定义：每天每g风干土样催化1μmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。
计算公式：S-CAT（μmol/d/g）＝[(A无土管-A测定管+A无基质管)×V反总÷（ε×d）×106]÷W÷T=16.5×（A无土管-A测定管+A无基质管）V反总：反应体系总体积，3×10-4L；ε：过氧化氢摩尔消光系数，4.36×104L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；T：反应时间，20min=1/72d；W：样本质量，0.03g。
CAT过氧化氢酶活性测定方法
CAT过氧化氢酶活性测定方法过氧化氢酶（catalase，CAT）是一种常见的酶，广泛存在于细胞质和线粒体中，能够催化过氧化氢分解为氧气和水。
CAT活性的测定是评价细胞氧化应激和抗氧化能力的重要方法之一、本文将介绍两种常用的CAT活性测定方法：碘化钾法和比色法。
1.碘化钾法：碘化钾法是利用过氧化氢在碱性条件下与碘离子反应生成氧气，然后通过滴定测定碘化钾的消耗量，间接测定CAT活性。
实验步骤如下：1）制备适量的超纯水溶解适量的碘化钾，并与浓度为0.1M的Na2CO3缓冲溶液混合，调整pH至10-112）将待测样品加入上述溶液中，使得总体积约为2mL。
3）在和样品相同条件下作空白对照实验。
4）加入10%的H2O2溶液激活酶，使得最后的浓度约为0.1%。
5）停止反应，一般方法是加入0.1M的硫酸停止酶促反应，使得酶催化生成的氧气转化为水。
6）滴定反应液中的I2溶液，直至反应液呈深蓝色为止。
7）计算CAT活性，根据滴定的I2溶液量计算反应液中过氧化氢含量，再用过氧化氢摩尔浓度除以单位时间，得到CAT的活性。
2.比色法：比色法是通过测量酶催化H2O2分解时产生的物质的吸光度或荧光强度变化来间接测定CAT活性。
实验步骤如下：1）将待测样品加入适量的酶活化缓冲液中。
2）加入适量的过氧化氢（一般浓度为10mM）。
3）在和样品相同条件下作空白对照实验。
4）置于适当的反应温度下孵育一段时间。
5）停止反应，一般方法是加入NaOH溶液，将反应液pH调至碱性，停止酶促反应。
6）测定反应液中的吸光度或荧光强度。
7）根据标准曲线计算CAT活性，通过反应液的吸光度/荧光强度与CAT活性的关系曲线，计算待测样品中CAT的活性。
总结：CAT活性的测定方法主要有碘化钾法和比色法，两种方法均是通过间接测定过氧化氢酶催化反应产物氧气的生成量来计算CAT活性。
碘化钾法利用滴定I2溶液的消耗量计算CAT活性，而比色法则通过测定酶催化反应产物的吸光度或荧光强度来计算CAT活性。
过氧化氢酶(CAT)酶活测定方法
过氧化氢酶酶活测定方法
一配溶液:
1. 1.5% NaBO3·4H2：
称取1.5g NaBO3·4H2O溶于100ml纯水
2. 0.067M 磷酸盐缓冲：
称取磷酸氢二钠 2.398g溶于100ml纯水，另称取磷酸二氢钠 1.05g 溶于100ml 纯水中，按配方配置成PH为6.8的PBS
3. 1M硫：
10.87ml浓硫酸加入200ml纯水中
4. 0.05M高锰：
0.79g高锰酸钾溶于100ml纯水中。
5. HCl溶液：调PH
二仪器：37°水浴箱，，滴定管，PH试纸，移液器，15ML的离心管，烧杯三步骤：
1.预先用HCL将pH调至6.8的1.5%NaBO3·4H2O 8mL加入含有1.5mL
0.067M ph6.8的磷酸盐缓冲液的烧杯中。
2.在37℃下保持20min后，实验组加入0.5ml酶，对照组加入等量的缓冲
液，混合摇匀。
3．5分钟后，加入到10ml1M硫酸中
4. 在烧瓶中用0.05M高锰酸钾滴定。
5. 结果表示为硼酸单位/每克酶
四计算公式：
酶活力=(V blank—V sample)×0.05×稀释倍数/(样品浓度×0.5) ×(1000/5min)×1000(U/g)。
实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定
实验九_过氧化氢酶(CAT)活性的测定一、实验目的1.了解过氧化氢酶的作用和测定方法。
二、实验原理过氧化氢酶(CAT)是一种广泛存在于生物体内的酶，其主要作用是催化过氧化氢(H2O2)分解为水(H2O)和氧(O2)，具有清除细胞内产生的过氧化氢的作用，从而保护细胞免受氧自由基的损伤。
测定过氧化氢酶活性的基本原理是利用过氧化氢酶催化过氧化氢分解的特性，测定其对过氧化氢的催化效率，从而求得过氧化氢酶的活性。
三、实验步骤1.将0.05 mL的0.1 mol/L H2O2加入到0.95 mL反应液中，混匀。
2.分别分装0.1 mL过氧化氢酶标准液A(1 U/mL)、待测样品液和纯水于三个小瓶中。
3.向3个小瓶中加入0.6 mL反应液，混匀后立即读取吸光度值。
4.将三个小瓶依次放入比色皿中，加入等体积的反应液，混匀。
5.在室温下，按照每分钟一次，共计计时5分钟，依次读取吸光度值。
6.根据吸光度值计算过氧化氢酶的活性。
四、实验注意事项1.使用新鲜的过氧化氢酶，避免长时间贮存或受热的过氧化氢酶，因其活性会降低。
2.必须按照比色皿上的顺序加入待测样品、过氧化氢酶标准液和纯水。
3.测定过氧化氢酶活性时，要注意比色皿内的反应物混匀程度和加液顺序。
4.读取吸光度时，要记录时间，使时间相同，以便计算活性值。
五、实验结果处理1.计算反应液的吸光度(OD)值。
2.计算酶活性的计算式为：CAT活性=(sample-Blank)/F/(T2-T1)其中，sample为待测样品的吸光度值；Blank为加入纯水的比色皿的吸光度值；F为稀释系数；T2-T1为反应时间，单位为分钟。
1.活性计算结果应该合理，符合实验要求。
2.实验结果能够表明过氧化氢酶的活性。
七、实验总结本次实验通过测定过氧化氢酶活性的方法，了解了测定过氧化氢酶活性的原理，熟悉了测定过氧化氢酶活性的步骤和操作方法。
同时，也掌握了计算过氧化氢酶活性的方法以及如何进行实验结果分析。
过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书
过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书一、测定原理：过氧化氢酶(CAT)分解H2O2的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其变化量，可计算出CAT的活力。
试剂一(ml)二、试剂组成与配制：试剂一：液体100 ml×1瓶，4℃保存6个月。
试剂二：底物液体10 ml×1瓶，4℃保存6个月。
试剂三：显色粉剂×1瓶，4℃保存6个月。
加双蒸水至100 ml溶解，4℃保存1个月。
（如果底部有不溶粉末沉淀，直接取上清使用，不影响测定结果）试剂四：液体10 ml×1瓶，4℃保存6个月。
天冷时会凝固，临用前37℃水浴至透明方可使用。
三、组织样本的检测1、组织匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量(g)：体积(ml)=1：9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下，制备成10%的组织匀浆，2500转/分离心10分钟，取上清，再用生理盐水稀释成最佳取样浓度，待测(最佳取样浓度摸索减附录)。
2、操作表：混匀，波长405nm ，光径0.5cm ，双蒸水调零，测定各管吸光度值。
注：一般样本没有高脂等导致显著差异情况，对照管的样本更换成双蒸水，做1-2管对照即可。
如需做样本自身对照，则试剂盒所测定样本数量减至48样。
3.组织中CAT 活力的计算：（1）定义：每毫克组织蛋白每秒种分解1umol 的H2O2的量为一个活力单位。
（2）计算公式： )ml /mgprot (601271)OD -OD ()mgprot /U (CAT *待测样本蛋白浓度取样量值测定值对照活力组织匀浆中÷⨯⨯⨯=注：*271为斜率的倒数 （3）计算举例：取10%水稻叶片匀浆0.05ml 做CAT 检测，测得对照管吸光度为0.605，测定管吸光度为0.332，同时测得10%水稻叶片匀浆蛋白浓度为3.1303 mgprot/ml 。
则计算结果为：()/mgprotU 7351.101303.305.0601271332.0704.0)mgprot /U (CAT =÷⨯⨯⨯-=活力组织匀浆中注：1.测定血清和血浆时，如果样本不溶血，每批样本只需要随机挑2个样本做对照或者用双蒸水代替额样本做对照；如果样本溶血的话，必须每个样本都要做对照。
(完整word版)过氧化氢酶CAT活性测定
过氧化氢酶活性测定------------紫外吸收法过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
一、原理】H 2O 2在240nm 波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(A 240)随反应时间而降低。
根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
【仪器与设备与试剂】 1、材料小麦叶片等。
2、仪器设备研钵；离心机；250ml 容量瓶；移液管（0.5ml 、2ml 各2支）；10ml 试管3支；恒温水浴；紫外分光光度计； 3、试剂0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）； 0.1mol/L H 2O 2（用0.1mol/L 高锰酸钾标定）。
【方法】 1.酶液提取：藻液接种后每隔1d ，取40ml 藻液（取时需摇匀），于4℃，于8 500 r/min （10 000g ）下离心10min 收集藻体，用0.1mol/L 、pH7.8磷酸钠缓冲液3mL 重悬浮，然后用冰浴超声破碎细胞，破碎液在4℃下10200 r/min 离心10min,上清液即为SOD 和CAT 粗酶液。
2.酶活性测定取10ml 试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表2-14-1顺序加入试剂。
表2-14-1 紫外吸收法测定H 2O 2样品液配置表管 号 S1 S2 S3 管号 S0 S1 S2 粗酶液(ml) 0.2 0.2 0.2 蒸馏水/ml 1.0 1.0 1.0 pH7.8磷酸(ml)1.51.51.5将S0号管在沸水浴煮1min 以杀死酶液，冷却。
然后将所有试管在25℃预热后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L 的H 2O 2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色皿中，240nm 下测定吸光度，每隔1min 读数1次，共测4min ，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。
3.结果计算：以每分钟A 240减少0.1的酶量为1个酶活单位（U ）。
G0105F 过氧化氢酶(CAT)说明书-分光法-48样
过氧化氢酶（Catalase，CAT）试剂盒说明书（货号：G0105F分光法48样）一、产品简介：过氧化氢酶(CAT，EC1.11.1.6)普遍存在于植物动物组织中，其活性与生物体的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系。
本试剂盒提供一种简单，灵敏，快速的测定方法，即CAT催化过氧化氢产生水与氧气，剩余的过氧化氢与一种新型显色探针显色，其在510nm处有最大吸收峰。
通过过氧化氢的减少量来计算样本中CAT酶的活力。
本试剂盒突出特点是从紫外波长（240nm：过氧化氢的检测波长）转换到可见波长（510nm）检测，无需使用石英比色皿或UV板。
而且由于过氧化氢极其不稳定，直接检测造成读值不稳定，且蛋白质等组分在此紫外波长下也有光吸收，影响结果精确性。
二、试剂盒组分与配制：试剂名称规格保存要求备注提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体60mL×1瓶4℃保存试剂二液体×1支4℃保存用前甩几下使试剂落入底部，取80μL至新EP管中，再加1.56mL蒸馏水混匀备用。
试剂三液体8mL×1瓶4℃保存试剂四液体15mL×1瓶4℃保存标准品液体1mL×1支4℃保存若重新做标曲，则用到该试剂三、所需的仪器和用品：分光光度计、1mL玻璃比色皿（光径1cm）、台式离心机、可调式移液器、研钵。
四、过氧化氢酶（CAT）活性测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、样本制备：①组织样本：称取约0.1g组织（水分充足的样本可取0.5g），加入1mL提取液，进行冰浴匀浆。
4℃×12000rpm离心10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。
②细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒（紫外微板法）
过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒（紫外微板法）过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外微板法)简介：过氧化氢酶(Catalase，CAT)又称触酶，是一类以铁卟啉为辅基的结合酶，由四个相同亚单位组成的四聚体酶，共含4分子的亚铁血红素作为辅基，分子量约为24KD。
CAT 能将细胞代谢产生的毒性物质过氧化氢迅速清除，可与GSH-Px 共同保护巯基酶、膜蛋白、过氧化氢解离。
Leagene 过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(紫外微板法)检测原理是血清或血浆等样品H 2O 2在240nm 处有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过H 2O 2，使待测溶液吸光度随反应时间而减少，通过紫外酶标仪测定240nm 处吸光度，该酶的检测对于研究植物代谢强度及抗旱、抗病能力有一定的价值。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、蒸馏水、生理盐水2、研钵或匀浆器3、离心管4、96孔板5、酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、配制CAT Assay buffer 工作液：按CAT Assay buffer(2.5×)：蒸馏水=的比例稀释，即获得CAT Assay buffer 工作液，4℃预冷，待用。
2、配制100mM H 2O 2基液：本试剂盒提供的H 2O 2基液中的H 2O 2浓度约为1M。
由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。
而计算出本试剂盒提供的H 2O 2基液中的H 2O 2的实际浓度。
然后再根据实际的过氧化氢浓度，配制100mMH 2O 2基液。
3、准备样品：①植物、动物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织(或动物组织)，清洗干净，擦干，切碎，编号名称TO1072100T Storage试剂(A):H 2O 2基液2×1ml RT 试剂(B):CAT Assay buffer(2.5×)500ml4℃避光使用说明书1份迅速称取，按样品：CAT Assay buffer工作液的比例，加入预冷的CAT Assay buffer工作液后匀浆或研磨，转移至15ml离心管。
过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒说明书__ 微量法UPLC-MS-4533
微量法过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：UPLC-MS-4533规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体110mL×1瓶4℃保存试剂一液体30mL×1瓶4℃保存试剂二液体110μL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂二：液体置于试剂瓶内EP管中，使用前需先离心。
2、检测工作液的配制：A.使用96孔UV板：取试剂二25μL中加入5mL试剂一，充分混匀，作为工作液（约26T），现用现配；也可根据样本量按比例配制（提供1个15mL空瓶）。
B.使用微量石英比色皿：取试剂二25μL中加入6.5mL试剂一，充分混匀，作为工作液（约34T），现用现配；也可根据样本量按比例配制（提供1个15mL空瓶）。
产品说明：CAT(EC1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。
H2O2在240nm下有特征吸收峰，CAT能够分解H2O2，使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞或组织样本的制备：a、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
草鱼过氧化氢酶(CAT)酶联免疫分析
草鱼过氧化氢酶（CAT）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T0.6 U/L -24U/L使用目的：本试剂盒用于测定草鱼血清、血浆及相关液体样本中过氧化氢酶（CAT）活性。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中草鱼过氧化氢酶（CAT）水平。
用纯化的草鱼过氧化氢酶（CAT）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入过氧化氢酶（CA T），再与HRP标记的过氧化氢酶（CA T）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的过氧化氢酶（CA T）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中草鱼过氧化氢酶（CA T）活性浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
CAT过氧化氢酶活性测定方法
1．2．2 CAT提取方法方法①：按文献[3]i己述的方法。
取花瓣1．00 g，加入少量石英砂、质量分数10％的PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，及i00 mg的CaCO3、2．O0 mL水，冰浴研磨；用50 mol／L pH 7．0 的磷酸缓冲液定容至10 mL；过滤；取滤液1．O0 mL，稀释lO、i00、200、500、1 000、2 000倍。
此为CAT粗酶提取液。
方法②：按文献[4]记述的方法。
取花瓣0．500 g，加入10ⅡlL质量分数10％的PVP，及少量石英砂、2 mmol／L的EDTA、2．5 mmol／L的DTT、体积分数0．5％的一巯基乙醇，冰浴研磨；6 000 r／min、4cC离心20 min；取上清液，稀释10、100、200、500、1 000、2 000倍。
此为CAT粗酶提取液。
1．2．3 CAT 活性测定方法方法①：文献[1]记述的碘量滴定法。
碘量法利用H20z能将KI中的I一氧化，生成Iz，以淀粉作为滴定终点指示剂，用硫代硫酸钠滴定，计算出生成Iz的量，再换算成所消耗Hz0z 的量。
方法②：文献[3]记述的紫外分光光度碘量法。
该方法利用I 在波长350 nm处有一个吸收高峰，吸光度与I 的含量成正比来计算生成Iz的量。
用UV一120光度计测定样品对波长为350 nm光线的吸光度(OD值，用“0D350”表示)。
方法③：直接紫外分光光度法。
该方法利用H2oz在波长294 nm处有一个吸收高峰[4]，吸光度与lH20 含量成正比来计算。
取CAT粗酶提取液1．00 mL，加入30~mol／L的H202 2．00ⅡlL，迅速混匀，用UV一120光度计测定反应开始后4 min内对波长294 nm光线的吸光度(用“OD ’表示)的数值变化AOD2g4。
以1．00 mL CAT粗酶提取液与2．00mL H20的混合液为空白对照。
CAT与H202反应只在前5 min内呈线性关系，因此要在酶加底物后的30 S内读出原始读数。
过氧化氢酶CAT活性测定
.过氧化氢酶活性测定 ------------ 紫外吸收法过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
一、原理】H2O2在 240nm 波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度 (A 240)随反应时间而降低。
根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
【仪器与设备与试剂】1、材料小麦叶片等。
2、仪器设备研钵；离心机； 250ml 容量瓶；移液管（ 0.5ml 、 2ml 各 2支）；10ml 试管 3支；恒温水浴；紫外分光光度计；3、试剂0.2mol/L pH7.8 磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；0.1mol/L H 2O2（用 0.1mol/L 高锰酸钾标定）。
【方法】1.酶液提取：藻液接种后每隔 1d，取 40ml 藻液（取时需摇匀），于 4℃，于 8 500 r/min （10 000g）下离心 10min 收集藻体，用 0.1mol/L 、pH7.8 磷酸钠缓冲液 3mL重悬浮，然后用冰浴超声破碎细胞，破碎液在 4℃下 10200 r/min 离心 10min, 上清液即为SOD 和 CAT粗酶液。
2.酶活性测定取10ml 试管 3支，其中 2支为样品测定管， 1支为空白管，按表 2-14-1 顺序加入试剂。
表2-14-1紫外吸收法测定H 2O2样品液配置表管号S1S2S3管号S0S1S2粗酶液 (ml)0.20.20.2蒸馏水1.0 1.0 1.0 /mlpH7.8 磷酸 (ml) 1.5 1.5 1.5将 S0号管在沸水浴煮 1min以杀死酶液，冷却。
然后将所有试管在25℃预热后 ,逐管加入 0.3ml 0.1mol/L 的 H O，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色皿中，240nm 下测定吸光度，22每隔 1min 读数 1次，共测 4min，待 3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。
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过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒说明书微量法
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC0205规格：100T/96S 产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体125μL×1瓶，4℃保存。
产品说明：
CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H 2O 2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。
H 2O 2在240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解H 2O 2，使反应溶液240nm 下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔（UV 板）、研钵、冰和蒸馏水操作步骤：一、粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备
收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至240nm，蒸馏水调零。
2、CAT 检测工作液的配制：用时在试剂二中加入25mL 试剂一，充分混匀，作为工作液。
3、测定前将CAT 检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min 以上。
4、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL 样本和190μL 工作液，立即混匀并计时，记录240nm 下初始吸光值A1和1min 后的吸光值A2。
计算ΔA＝A1-A2。
三、CAT 活性计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下1、血清（浆）CAT 活力的计算:
单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化1nmol H 2O 2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mL)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷V 样÷T=459×ΔA 2、组织、细菌或细胞中CAT 活力计算：（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟催化1nmol H 2O 2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 样)÷T=459×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织每分钟催化1nmol H 2O 2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（V 样÷V 样总×W）÷T=459×ΔA÷W （3）按细菌或细胞数量计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化1nmol H 2O 2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/104cell)＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（V 样÷V 样总×500）÷T =0.917×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4
L；ε：H 2O 2摩尔消光系数，4.36×104
L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500万；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
b.用96孔板测定的计算公式如下1、血清（浆）CAT 活力的计算:
单位的定义：每毫升血清（浆）在反应体系中每分钟催化1nmol H 2O 2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mL)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷V 样÷T=764.5×ΔA 2、组织、细菌或细胞中CAT 活力计算：（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol H 2O 2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(Cpr×V 样)÷T =764.5×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织在反应体系中每分钟催化1nmol H 2O 2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（V 样÷V 样总×W）÷T=764.5×ΔA÷W （3）按细菌或细胞数量计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1nmol H 2O 2降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/104
cell)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（V 样÷V 样总×500）÷T=1.529×ΔA V 反总：反应体系总体积，2×10-4
L；ε：H 2O 2摩尔消光系数，4.36×104
L /mol/cm；d：96孔板光径，0.6cm；V 样：加入样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；
W：样本鲜重，g；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，500万；
109
：单位换算系数，1mol=109
nmol。