酯酶同工酶
5种家蚕不同龄期酯酶同工酶的比较研究
安徽农业科学 ，ｏｒａ ｏ Ａ ｈｉ ． ｃ．Ｏ６ ３ （１ ：５０ ５ １ Ｊｕｎｌ ｆ ｎｕ Ａ Ｓｉ Ｏ ，４ ２ ）５７ —５７ ２
责任编辑
罗芸
责任校对 罗芸
５种 家蚕 不 同龄 期 酯 酶 同工 酶 的 比较研 究
吴三桥， 锐 （西 资 生 重 实 室陕 汉 ２０ 丁 陕 省 源 物 点 验 ，西 中７０） ３０
同工酶分析是研究昆虫遗传变异 、 物种进化及种属鉴定 的重要手段。它的合成主要受遗传基因控制， 具有一定的遗 传稳定性 ， 可作为遗传特性的生化标记； 亲缘关系越近的种
类， 其酶谱相似性 越大ｌ 。国内外许 多研 究者 在利用 同工酶 １ Ｊ 研 究生 物的地 理分 布及起 源 、 种属 间 的亲缘 关 系 、 品种群 的 分类 、 传变异 、 遗 远缘 杂 交 、 杂种 优势 利用 等 方 面 ， 获得 了一
定 的进 展。Ｍｌｓ ｉ
于一０ ２ ℃冰箱 中预 冷 ３ 后 迅速取 出于冰浴 下加 样 品提 取液 ｈ ２ ， 浆 ， 浆 液 移 入 １５ｍ 高 速 离 心 管 中 ， 滴 匀 匀 ． ｌ ４℃ １ ０ ００ ２
ｒ ｉ ／ ｎ ａ ｒ 离心 ８ ｉ， ｎ所得上清液于 一 ０ ｍ ２ ℃冰箱中冷冻保存备用。
１２３ ＥＴ同工酶 电泳 。采用 聚丙 烯 酰胺 凝胶 垂 直夹 芯 式 ．． Ｓ
电泳法 ， 不连续电泳。凝胶的制备参照文献［ ］略有修改 。 ９，
实验采用 Ｔ＝６ 、Ｈ＝８９的分 离 胶 和 Ｔ＝２ ５ 、Ｈ＝６ ８ ％ ｐ ． ．％ ｐ ．
的浓缩胶 ， 加样 ２ ｌ ０ 。恒流 加 ｍ ， ｍ Ａ 电泳 ５ ６ ， ～ 溴酚 蓝 为指 ｈ
检索表 。Ｂｒｃｅ Ｔ ｈ ｔａ 利 用 同工酶 电泳 编 制 了实蝇 科 ｅｏ ｒ ｅ ｒ ｄ ｌｈ ｐ ｉ ｅ ｉ Ｔｐｒｉ ｅ ９ 绕实蝇 Ｒａ ｌｉ的幼虫 和蛹的 同工酶 电泳 ｅｈｔａ 的 种 ｉ ｄ ｈｇｅｓ ｏｔ 检索表 ｌ。邓 晓峰 等利用 酶 电泳探 讨 了斑 潜蝇 分类 鉴 定技 ２ 术 。李静 等利用 同种 方法 研究 了酯 酶 同工 酶在 半翅 目昆 ３ Ｊ 虫 中的分类 学 价值 。。杨 贵 军等也 对 不 同发育 阶段 的多 毛 ４ Ｊ 宽 漠甲体内的酯酶 同工酶进行 了比较 研究 ＿。 ５ Ｊ 家蚕 （ ６ ｏ Ｌ ｎｅｓ作 为分 类 学上 的一 个 物种 ， １ ｒ ｉ ａｕ） ｍ ／ ｎ 地 理上分 中国系统 、 本 系统 、 洲 系统和 亚热 带及 热带 系 日 欧 统等４ 大系 统 ， ５０多个 品 种 ， 有 ０ 其生 态 和 经济 性状 各 具 特 征 。 目 有关家蚕 的同工酶研 究未见 报道 。因此 ， ６ Ｊ 前 笔者 采 用垂直板 聚丙烯酰 胺凝 胶 电泳 技术 对 ５ 种家 蚕 不同 发育 阶 段 的酯 酶同工酶谱进行 了 比较分析 ， 以期探讨 家蚕不 同龄 期 酯 酶同工酶的变化规律 ， 及其在 家蚕分 类学 上的研究 利用 价 值， 为家蚕的进一 步研究提供一 定的理论依 据 。
磷酸二酯酶的同工酶
磷酸二酯酶的同工酶磷酸二酯酶（phosphodiesterase，简称PDE）是一类酶，它能够催化磷酸二酯键的水解反应。
磷酸二酯酶在细胞中起着重要的调节作用，参与多种生物过程的调控，如细胞信号转导、代谢调节等。
由于磷酸二酯酶的同工酶在结构和功能上存在差异，因此研究其同工酶对于深入理解细胞调控机制具有重要意义。
磷酸二酯酶的同工酶可以根据其底物的特异性进行分类。
常见的有cAMP特异性磷酸二酯酶（PDE4、PDE7等）和cGMP特异性磷酸二酯酶（PDE5、PDE6等）。
这些同工酶在底物特异性上存在差异，因此对细胞内信号分子cAMP和cGMP的水解具有特异性，从而对细胞信号转导通路产生不同的调控效应。
以cAMP特异性磷酸二酯酶（PDE4）为例，它是一类重要的同工酶，在细胞信号转导中起着关键的调节作用。
PDE4能够水解细胞内的cAMP，降低其浓度，从而影响cAMP介导的信号传递。
cAMP是一种重要的第二信使，参与多种生理过程的调控，如细胞增殖、分化、凋亡等。
PDE4的活性调节了细胞内cAMP水平的动态平衡，从而影响细胞功能的调节。
PDE4在多种细胞类型中广泛表达，包括神经元、肌肉细胞、免疫细胞等。
研究发现，PDE4的异常活性与多种疾病的发生和发展密切相关。
例如，PDE4在中枢神经系统中的高表达与精神类疾病（如抑郁症、焦虑症等）的发生有关。
因此，研究PDE4的调节机制和开发PDE4选择性抑制剂，对于治疗这些疾病具有重要的临床意义。
除了cAMP特异性磷酸二酯酶，cGMP特异性磷酸二酯酶也是研究的热点之一。
cGMP特异性磷酸二酯酶能够水解细胞内的cGMP，从而调节细胞信号转导通路。
cGMP作为重要的第二信使，参与多种生理过程的调控，如血管舒张、细胞增殖、神经传导等。
因此，cGMP特异性磷酸二酯酶的调节对于维持细胞内cGMP水平的平衡具有重要作用。
磷酸二酯酶的同工酶不仅在底物特异性上存在差异，其结构和功能上也有所不同。
荞麦酯酶同工酶研究
Ａ ｓ ａ ｔＴ ｅｅｔ ａｅｉ ｚｍ ｆｗ ｎｙｆｕ ｏｌ ｔ ｎ ｆ ｕｔ ａ ｄｂ ｃｗ ｅｔ Ｆ ｅ ｕｅｔｍ ａ ｄＦ ｔｔｒ ｂ ｔ ｃ ：ｈ ｓ ｒｓ ｏｙ ｅｏ ｅｔ－ ｒ ｌ ｃｉ ｓ ｌｖｔ ｕ ｋ ｈ ａ（ ．ｓ ｌ ｕ ｎ ．ａａｉ ｒ ｅ ｓ ｔ ｏ ｃ ｅ ｏ ｏｃ ｉ ｅ ｃ ｎ —
第３ ０卷
第 ６期
２ １ 年 ６月 ０１
种
子
（ ｅｄ Ｓｅ ）
荞 麦 酯 酶 同 工酶 研 究
张 以忠 张 ， 云 邓 琳琼 蹇 ， ， 黎 游 ， 萍 胥献 宇 ， （． 节学 院环 境与 生命 科学 系 ， 贵州 毕 节 ５ １０ ； １毕 ５ ７０ ２ 毕节 学 院岩溶 山区生态 建设 研究 所 ， 贵 州 毕 节 ５ １０ ） ． ５ ７０
（ ． ｅ ａ ｍ ｎ ｏ ｎ ｉ ｎ ｅ ｔ ｎ ｉ ｃｅ ｃ ，ｉｅＵ ｉｅｓｙ Ｂｊ ｕｚｏ ５ ７ ０，ｈｎ ； １ Ｄ ｐ ｒ ｅ ｔ ｆ ｖ ｏ ｍ ｎ ａ ｄＬｆ Ｓ ｉ ｅ Ｂｊ ｎｖｒ ｔ， ｉｅＧ ｉ ｕ５ ０ Ｃ ｉａ ｔ Ｅ ｒ ｅ ｎ ｉ ｉ ｉ ｈ １
２ Ｉｓ ｔｔ ｏ ｃｌｇ ａ Ｃ ｎｔ ｃｉ ｆ ａｓ Ｍｏ ｎａ ｒａ Ｂｊ ｎ ｅ ｉ ， ｉｅＧ ｉ ｏ ５ ７ ０， ｈｎ ） ．ｎｔｕｅ ｆ ｏ ｉ ｌ ｏ ｓ ｕｔ ｎｏ ｒ ｕ ｔ ｎＡ ｅ ， ｉｅＵ ｉ ｒ ｔ Ｂｊ ｕｚ ｕ５ ０ Ｃ ｉａ ｉ Ｅ ｏｃ ｒ ｏ Ｋ ｔ ｉ ｉ ｖｓ意（ ２ ｉ） ， 自 约 ０ ｎ 后 用 来 ａ ｒ 水冲洗 ， 拍照后放人 ７ 的乙酸中保存 。 ％
１ ３ 数 据分 析方 法 ．
本研究采用系统聚类法 ， 首先将各样本看成一类 ， 有酶带数计为 １无酶带计为 ０ 使用 ｓ Ｓ １ １ ， ， Ｐ ｓ１． 分析 软件 ， 利用欧氏距离计算样品间距离 ， 用最短距离法计 算类群间距离， 按系统 聚类分析方法对 收集 系进行聚
过氧化物酶和酯酶同工酶
过氧化物酶和酯酶同工酶过氧化物酶和酯酶同工酶是两种常见的酶类，它们之所以被称为“同工酶”，是因为它们在酶学特性上相似，并且具有相同的催化能力。
然而，这两种酶在生化学结构、生理生化功能、催化机理等方面也存在着一些区别。
了解它们的区别和联系有助于我们更深入地研究其在生命活动中的作用和应用。
过氧化物酶是一种广泛存在于生物体内的酶类，它可以催化过氧化物的分解，同时将有害的氧自由基转化为无害的水和氧气。
过氧化物酶的分子结构主要由四个亚基组成，每个亚基都包含一个五配位的铁原子和一个蛋白质分子，其中铁原子是过氧化物酶催化作用的关键所在。
过氧化物酶在生物体中具有重要的生理生化功能，在人类身体中可以清除有害氧自由基，促进身体健康。
酯酶同工酶是另一种常见的酶类，它能够催化酯水解反应，将酯分子水解成酸和醇。
酯酶同工酶广泛存在于细胞质和细胞膜上，其分子量一般在30-100kDa之间，结构复杂。
酯酶同工酶在生物体中具有重要的生理生化功能，例如参与食物消化、维持神经递质平衡、调节胆固醇代谢等。
虽然过氧化物酶和酯酶同工酶在催化方式上有所不同，但是它们都具有类似的酶学特征，如对温度、酸碱度等条件的敏感性，对催化剂和底物的选择性等，这些都是由酶分子的结构和催化机理所决定的。
此外，过氧化物酶和酯酶同工酶在实际应用中也有很多相似之处，例如用于环境监测、药物化学和生物工程等领域。
总之，过氧化物酶和酯酶同工酶是两种重要的酶类，它们在生物体内分别发挥着不同的生理生化功能，同时具有相似的酶学特征和应用价值。
我们需要加强对这两种酶的研究和应用，探索它们在生命科学、医药和环境保护等领域中的新型应用前景。
酯酶同工酶标记鉴定加拿大披碱草和老芒麦的杂种后代纯度研究
收稿 日期 ：ｏ ７ －０ ２０ ７３
基金项 目： 绿色农业发展关键技术 集成研究与产 业化示 范（ 目编号 ： 项 ２０ ０ ０ ） 加拿大披碱草与老芒 麦的杂种 Ｆ 代 的遗 传特性 ０６２１ ； ２ 研究（ 目编号 ： Ｎ０ ５２ ） 项 Ｑ ００ ２ 。 作者简介 ： 李景环 （ ９２一） 女 ， １７ ， 在读博 士研究 生 ， 讲师 ， 主要从事分 子 生物学 ， 遗传学等 的教学与科研工作 。
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问题探讨
李景环 等 ： 酯酶同工酶标记鉴定加拿大披碱草和老芒麦 杂种后代 的纯度研究
酯 酶 同工 酶 标 记 鉴定 加 拿 大 披 碱 草 和 老 芒 麦 的 杂 种后 代 纯 度研 究
李 景环 。 云锦凤 王树彦 郭利 军 高晓波 孟 庆 臣 － 一 ， ， ， ， （． １ 内蒙 古农 业 大学生 态环 境学 院 ， 呼和 浩特 ００ １ ； １０９
表 １ 供 试材料及 其基本情 况
蛋 白质和酶都是生物体遗传物质染色体结构基因 Ｄ Ａ的初级 或次 级产物 ， 以看 作 是结 构基 因 的一种 Ｎ 可
外 部标记 物 。不 同种 及不 同变 种 的生 物不但 外部 形态 有 差异 ， 由于其 结构基 因的差 别 ， 表 达产物 酶和 蛋 白 其
和 目标 性 状 植 物 的检 测 。
关键词 ： 加拿大披碱草 ； 老芒麦 ；杂种 Ｆ 、Ｆ ； 。 酯酶 同工酶
中图 分 类 号 ： ￥ １ ５２ 文 献标 志码 ： Ａ 文 章 编 号 ： １０ －７ ５ ２ ０ ） １ ）５ｏ ０ １ ０ （０ ７ １ ７ ＿２ ４
供试材料为选 自内蒙古农业大学牧草试验站的加 拿 大 披 碱 草 （ ｌ ｕ ａ ｄｎｉ 和 老 芒 麦 Ｅｙ ｓ ｎ ｅｓ ） ｍ ｃ ｓ （ ．ｉｉｃｓ Ｅ ｓ ｒ ｕ）及其 杂种 Ｆ 、２具 体表 １ ｂｉ １Ｆ ， 。
青岛市19个樱花品种的酯酶同工酶鉴定
ｒｔ ｍ ｅｉ ｅａ ｅ ｉｈ ｔ Ａｖ ｒ ｇ ）ｍ ｅｈ ｄ １ ｅ ａ ｕ ｕｔｖ ｒ ｒ ｉｉｅ ｔ ＷＯ ｇ ｏ ｐ ａ ｅ ｎ ｔ ｅｃ ａ ｉｔ ｒｓｉｓ ｃ ｔ ｏ ． Ｃ ｒ ｓ ｓｃ ｌｉａ ｓｗｅ ｅｄ ｖｄ ｄｉ ｏ ｔ ｒ ｕ ｓｂ ｓ ｄ ｏ ｈ ｈ ｒｃｅ ｉｔ ９ ｎ ｃ
Ａｂ ｔａ ｔＰｈ ｌ ｇ ｎ ｔ ｅａ ｉｎ ｈ ｐｉ ｅ ｔ ｉａｉ ｎ ａ ｄ ｃａ ｓｆ ａｉｎ ｏ ９ Ｃ ｒ ｓ ｓｃ ｌ ｖ ｒ ｎ Ｑｉｇ ａ ｒ ｓｒ ｃ ： ｙｏ ｅ ｅ ｉ ｒｌｔｏ ｓ ｉ ｄ ｎ ｉ ｃ ｔ ｎ ｌｓ ｉｉ ｔｏ ｆ１ ｅ ａ ｕ ｕ ｔ ａ ｓｉ ｎ ｄ ｏｗｅ ｅ ｃ ｆ ｏ ｃ ｉ
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西＝ 林 学 院 学 报 ２ ０ ， ３ ３ ： ０ ４ Ｉ Ｅ ０ ８ ２ （） ４ ￣ ３
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＮｏ ｔ ｗｅ ｔ ｒ ｓｒ ｉｅｓｔ ｏ ｒ ａ ｒｈ ｓ ｅｔｙ Ｕｎｖ ｒｉ ｏ Ｆｏ ｙ
青 岛市 ９个樱 花 品种 的 酯酶 同工 酶 鉴 定
析 ， 出反 映 各品 种 问亲缘 关 系的树 状聚 类 图。聚 类结果 以花 的重瓣 性将 １ 得 ９个樱 花 品种 分为 两 大
几种小麦雄性不育系及其保持系、恢复系的酯酶同工酶比较
几种小麦雄性不育系及其保持系、恢复系的酯酶同工酶比较的
报告，600字
本报告旨在比较不同雄性不育系、保持系和恢复系小麦的酯酶同工酶。
小麦雄性不育系是一种植物受到基因突变影响，使它们表现出雄性不育的现象。
小麦雄性不育系的保持系和恢复系对于改良小麦多样性及改善稳产量具有重要作用。
这些不同系分别具有不同的酶活性，有利于小麦栽培区获得较高的产量。
要比较上述不同系的酯酶同工酶活性，需首先收集不同系的小麦组织样品，然后通过诱导技术，将它们的酶体提取到单个溶质中，以提高其可分离的效率。
所提取的酶体需要连续打液体中离心，以分离出酵母质酶，蛋白质酶和核酸酶，然后再用到酯酶同工酶的实验中。
最后，可以通过检测实验中生成的产物，以及参照物的比较，来准确地测定不同系小麦中酯酶同工酶的活性。
综上所述，通过分析不同小麦雄性不育系、保持系和恢复系的酯酶同工酶活性，可以便于更好地应用这些类型的小麦来改良栽培区的小麦多样性及改善其稳定性。
酯酶同工酶的一种新染色法的初步研究
Ｚ ０ Ｇａ Ｉ Ｎ Ｆ ｎ２ Ｃ Ｏ Ｙ ｎ ＨＡ ｎ ，Ｑ Ａ ａ ｇ ， Ａ ｏ ｇ—ｃ ａ ｇ ｈ ｎ
ＪＡＮＧ Ｄ ａ Ｉ ｉｎ—ｆｎ ｅ ｇ ．Ｃ ＨＥＮＧ Ｇ ｏ—ｄ ｎ ＩＭｉ ｇ—ｚ ｕ ，Ｌ ａ ｕ ｏ ｇ ，Ｌ ｎ ｈ ＩＸｉｏ—ｙ ｕ
ｎ ｐ ｔ 。 Ｔｈ ｎ ｔ ｅ ｎ ｐ ｔ 。 ｃ ｎ ｒａ ｔｗｉｈ ＫＭ ｎ ｅ ｕ ｔｎ ｎ ｔ ｅ ｃ ｌｒ ｄ ｕ ｓａｎ ｅ ｗｈ ｃ ａ ｓａ ｎ 小ｅ ｈｈ １ ｅ ｈ ｈ １ ａ ｅ ｅ ｔ ｈ Ｏ４ ｒｓ ｌｉｇ ｉ ｈ 。ｏ ｅ ｓ ｂ ｔ ｃ ｉｈ ｃ ｎ ｔ ｉ
摘要 ： 酯酶可将 一 醋酸萘 酯和 １一 ３ 醋酸萘酯水解 生成醋酸和萘 酚， 利用 Ｋ ｔ Ｍｔ 可与 萘酚反应生成有色物 Ｏ
质 的性 质 可 对 醇 酶 同工 酶 进 行 染 色 。
关 键 词 ： 酶同工酶 ； 酸萘醢 ； Ｍｎ ．染 色法 醢 醋 Ｋ Ｏ；
中 图分 类 号 ：９６５ Ｑ４．
第 ３期
赵 赣等 ： 酯酶 同工 酶 的一 种 新 染 色 法 的 初 步 研究
・３ ｌ・ ８
１２ 仪 器 设 备 ．
研钵 ， 电泳仪 与 电泳槽 ， 冰箱 ， 离心机 ， 量加样 器 。 微
１ ３ 实 验 试 剂 ．
Ａ ｒ Ｂｓ 上海化 学试剂公 司产 品 ，Ｅ Ｅ 为上海前 进 试剂 厂 产 品， 一醋 酸荼 酯 为上海 青 浦合 ｃ 与 ｉ为 ＴＭ Ｄ
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第２ ４卷 第 ３期
２０ ０ ２年 ６月
江 西农业 大学学 报 （ 自然科学版 ）
Ａｅａ Ａｇ ｉｕｔ ｒｅ Ｕｎ ｖ ｒ ｉ ｔ ｉｎ ｘｅ ｓ ｔ ｒ Ｘ ａ ｉ ｓ ａ ｉ Ｊａ ｇ ｉｎ ｉ ｃ ｕ ｅ ｔ ｓ ｓ
山东省35个黑灰色平菇菌株的酯酶同工酶分析
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
山 东 农 业 科 学 ２ ０ ， ８～１ ０ ８４： ０
Ｓ ａ ｄｎ ｇｉ ｌ ｒｌ ｃ ｎ ｅ ｈ ｎ ｏｇＡ ｒ ｕｔ ａ Ｓ ｉ ｃｓ ｃ ｕ ｅ
山东省 ３ 个黑灰色平菇菌株的酯酶同工酶分析 ５
李 瑾 ， 宫志 远 ， 鹏 飞 ， 海 霞 ， 玲 ， 淑 芳 任 任 曲 于
ｂ ｈｏｉ ９ａ ｄ１ ｔ ｉ ｐｅｅｔ ｙＱｎｆｎ ａ ｍ ｓ ｗ ｒ ｙ ｒ ｔ ｉｓ ｙＣ ａｊ９ ｎ ｓ ａｎ ｒ ｒｓｎｅ ｂ ｉｇ ｇ５ ｔ ｔ ｏｔ ｅｅｈ ｂ ｄｓ ａｎ． ６ ｒ ｓｅ ｄ ｅ １ ｈ ８ ｉ ｒ
Ｋｅ ｒ ｓ Ｃｕ ｔ ａｅ ｙ ｔｒ ｍｕ ｈ ｏ ｍ ； ｔｒ ｓ ｓ ｚ ｍｅ； ｕｓｅ ｎ ｌｓｓ ｙ ｗｏ ｄ ｌｉ ｔ ｄ ｏ ｓｅ ｓ ｒ ｖ Ｅｓｅ ａ ｅ ｉｏ ｙ Ｃｌ ｔｒ ａ ａｙ ｉ
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Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｅｓｅ ａ ｅ ｉｏ ｙ ｎ ｌ ｓｓｗａ ｓ ｄ ｔ ｔｄ ５ ｃ ｍｍｅ ｃａ ｔａ ｎ ｆｏ ｓｅ ｓ ｒ ｏ Ｔｈ ｅ ｓｒ ｃ ｔｒ ｓ ｓ ｚ ｍｅ ａ ａｙ ｉ ｓｕ ｅ ｏ ｓｕ ｙ ３ ｏ ｒ ｉｌｓｒ ｉ ｓｏ ｙ ｔｒｍｕ ｈ ｏ ｍ． ｅｒ — ｓ ｉ ｈ ｗｅ ｈ ｔｔ ｅｅ ｗａ ｒ ａ ｉｅ ｓｔ ａ ｎ ｕ ｔｖ ｔｄ ｏ ｓｅ ｓ ｒ ｏ ｕ ｔ ｓ ｏ ｄ ｔａ ｒ ｓ ｇ ｅ ｔ ｄ ｖ ｒｉ ｓ ｈ ｙ ｍｏ ｇ ｃ ｌｉａｅ ｙ ｔ ｒ ｍｕ ｈ ｏ ｍ． ３ ｙ ｇａ ｔ ｐ ｓ ｗｅ ｅ ｏ ０ ｚ ｍｏ ｍ ｙ ｅ ｒ ｂ－ ｒ ｓｒ ｅ ｎ ａｌｔ ｓｅ ｔａ ｎ ． ｆｅ ｅ ｅ ｆｓｒ ｉ ｓ ｗｅ ｅ ｅ ｐ ｅ ｓ ｄ ｉ ｈｅｒｒ ｓ ｅ ｔｖ ｈ ｒ ｃｅ ｓｉ ｙ ｇ ａ ． ｅ ｖ ｄ ｉ ｌ ｅ ｔｄ ｓｒ ｉ ｓ Ｄｉ ｒｎｃ ｓｏ ｔａｎ ｒ ｘ ｒ ｓｅ ｎ ｔ ｉ ｅ ｐ ｃｉｅ ｃ ａ ａ ｔｒ ｔ ｚ ｍｏ ｍｓ ｉ ｃ ｒ Ａｎ ｅ ｒｓ ｌｓｏ ｌ ｓｅ ｎ ｌｓｓａ ０％ ｓｍｉ ｒｔ ｅ ｅ ｈ ｗｅ ａ ｌ ｅ ｔ ｄ ｓｒ ｉ ｏ ｌ ｅ ｃｕ ｔｒ ｄ ｉ ｔ ｄ ｔ ｅ ｕ ｔ ｆｃｕ ｔｒａ ａ ｙ ｉ ｔ ｈ ７ ｉ ｌｉ ｙ ｌｖ ｌｓ ｏ ｄ ｔ ｔａｌｔ ｓｅ ｔａｎｓｃ ｕｄ ｂ ｌ ｓｅ ｅ ｎ ｏ ａ ｈ ｆ ｕ ｏ ｐ ｔ ａ ｓｓｒ ｉ ｓｒ ｐ ｅ ｅ ｔｄ ｂ ｉｅ ｇ ２ ８， ｔａｎ ｅ ｒ ｓ ｎｅ ０ ２ —４， ｔａ ｎ ｅ ｒ ｓ ｎ ｅ ｏ ｒｇ ｕ ｓ， ｔｉ ｔａｎ ｅ ｒ ｓ ｎｅ ｙ Ｈｅｆｎ ６ ４ ｓｒ ｉ ｓｒ ｐ ｅ ｅ ｔｄ ｂｙ２ ０ ｒ ｈ ７ ｓｒ ｉ ｓｒ ｐ ｅ ｅ ｔｄ
酯酶同工酶
酯酶同工酶的醋酸萘酯-铁氰化钾染色法的研究摘要：酯酶可将＠-醋酸萘酯和ß-醋酸萘酯水解生成醋酸和萘酚，利用萘酚能与铁氰化钾反应生成有色物质萘醌的性质可对电泳凝胶上的酯酶同工酶进行染色。
关键词：酯酶同工酶；醋酸萘酯；铁氰化钾；染色法经典的酯酶同工酶的染色方法的原理是，酯酶催化醋酸萘酯水解产生萘酚，而萘酚可与坚牢蓝反应生成蓝紫色物质，因而在电泳后的凝胶上含有酯酶同工酶的地方可以染出蓝紫色的酶带。
经过摸索，本文介绍一种新的酯酶同工酶的染色方法———醋酸萘酯N 铁氰化钾染色法，其原理是酯酶催化醋酸萘酯水解产生萘酚，而萘酚可被铁氰化钾氧化成萘醌，因而在电泳后的凝胶上含有酯酶同工酶的地方可以染出酶带。
一 材料与方法1.1实验材料以新鲜的肉鸡肝脏为材料。
1.2试剂Acr 为广东省汕头化学试剂厂产品，Bis 、坚牢蓝RR 盐为上海化学试剂公司产品，TEMED 为上海前进试剂厂产品，溴酚蓝为上海试剂三厂产品，＠-醋酸萘酯为上海青浦合成试剂厂产品，ß-醋酸萘酯为上海试剂一厂产品， Tris,HCL,NaCL,2Na HP 4o ,磷酸二氢钠，三氯醋酸，乙醇，甘油，丙酮，丙酮、铁氰化钾、过硫酸铵等均为国产分析纯。
1.3仪器设备研钵、电泳仪与电泳槽、冰箱、离心机、微量加样器、恒温水浴锅、染色盒、67$紫外光栅分光光度计等。
1.4实验方法（1）样品制备：取一定量的新鲜鸡肝，按一定比例加入8*9:1的磷酸缓冲液后进行研磨，经4000r/min,15min 离心后取上清液，置于1?冰箱中保存备用。
（2）酯酶活力的测定：参照禹邦超等人的方法进行。
（3）聚丙烯酰胺凝胶电泳：参照赵永芳的方法进行。
（4）酯酶同工酶的染色方法有：经典法：（即醋酸萘酯-固蓝RR 盐染色法）染色液：称取ß-醋酸萘酯与＠-醋酸萘酯、坚牢蓝RR 各200mg ，分别用10mL 丙酮溶解后，混合，再用磷酸缓冲液定容至200mL 。
实验十 同工酶分析
实验四同工酶分析同工酶概述酶是以蛋白质为主要成分的生物催化剂。
在生物体内，有一些酶催化相同的反应，但其结构不同。
它们对底物的浓度、pH、温度等的最适要求不同，酶活力的调控反应及其所在的细胞分布也不一样。
把催化相同反应而结构和理化性质不同的酶的分子类型称为同工酶（isozyme）。
同工酶概念的提出，揭示了不同生物、同一生物不同器官和不同组织起源的酶可作用于同一底物，催化相同的反应，但在其他性质方面可以不尽相同。
大量研究表明，同工酶在生物界是广泛存在的。
在动植物和微生物体中、同一物种的不同个体、同一个体的不同器官、组织和细胞、同一细胞的不同部位、生长发育的不同阶段、不同的代谢条件下，都有不同的同工酶分布。
现在已发现的酶中，有一半以上的酶已经发现有同工酶存在。
可以进行同工酶分析的酶已有100多种。
不同同工酶可以根据电泳迁移率予以区别和编号，以向阳极方向泳动最快的编为同工酶1。
从分子结构上看，同工酶的形成有以下学说或原因：（一）亚单位结构学说亚单位结构学说是研究同工酶理论并对作用机理阐述的较为透彻的学说之一。
该学说认为同工酶是由不同亚基按不同方式结合而成的。
这个学说有广泛的实验证据。
如已经证明乳酸脱氢酶（LDH）是由A、B两个亚基，按不同比例结合成的四聚体，所以有5种同工酶：LDH1（A4）、LDH2（A3B1）、LDH3（A2B2）、LDH4（A1B3）、LDH5（B4）。
（二）不同基因编码由不同的基因或等位基因编码会形成一级结构完全不同或有个别氨基酸残基不同的多肽链。
因而产生同工酶。
由不同基因引起的同工酶存在于同一物种的所有个体中，而由等位基因引起的同工酶以一定比率存在于同一族中。
（三）单一亚单位聚合程度不同有些同工酶的亚单位是完全相同的，如胆碱脂酶（ChE），但不同的酶分子中，亚基数目不同，这就形成分子量不同的5种同工酶。
经研究发现，目前发现的100多种同工酶，其组成比例不同，但以单体（26%）、二聚体（52%）、四聚体（20%）较多，三聚体极少。
18个灵芝菌种的酯酶同工酶分析
ｌ ｌ １ 供试 灵芝 菌种 ＿＿
１赤芝 ）２ 信州灵 芝 ）３赤 芝 １ ）４韩 芝 ）５赤 芝 １ ）６ 日本 红芝 ） ７ 京 大灵 芝 ）８ 黑 芝 ） ９ （ 、（ 、（ ２号 、（ 、（ ｏ、（ 、（ 、（ 、
（ｔ Ｆ本平 芝 Ｒ１ 、０ 韩 国灵芝 Ｈ１ 、 １ 仙芝 ） １ （ 芝 ） １ （ ）１ （ ） １（ 、２ 甜 、３ 园芝 ） １ （ 、 ４ 日本 赤 芝 Ｃ ） １ （ 芝 ） １ （ １ 、５ 紫 、６ 大仙 ８ ３ 、 ７ 白芝 ） １ （ 芝 ） 以上 菌种 除信 州灵 芝 、 大灵芝 、 ２）１（ 、８血 。 京 日本平芝 、 国灵芝 、 韩 日本赤芝 购 自中国农业
实验 ， 对 它们 作 了聚类 统 计 分析 。分 析 结 果表 明 ： 相似 水 平 为 ５ 时供试 茼株 聚 合 为 ６ 并 在 Ｏ
类： １ 第 类包括以韩芝为代表的 ７个茵株 ； ２ 第 类包括 以赤芝 为代表 的 ５个茼株 ３类包括 第
紫芝和 黑芝 ； ４类 为血芝 和京 大灵 芝 ； ５类为 白芝 ； ６类 为 日本 赤 芝。 聚类 分析 结果 与 第 第 第
维普资讯
№ ． ６
陕西科技大学学报
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ Ｓ ＨＡＡＮＸＩＵＮＩ ＶＥＲＳ ＴＹ ＯＦ Ｓ ＥＮＣＥ ８ Ｉ ＣＩ ＬＴＥＣＨ ＮＯＩＯＧＹ
Ｄｅ ．２ ０６ ｃ ０
Ｖｏ ． ４ １２
・６ ・ ５
文 章 编 号 ：０ ０ ５ １ （０ ６０ － ０ ６ －０ １０ － ８ １２ ０ ）６ － ０ ５ ５
１ 灵 芝 菌 种 的酯 酶 同工 酶 分 析 ８个
秦俊哲 ， 姚艳芳 ， 伟 孙
酯酶同工酶电泳技术
酯酶同工酶电泳酯酶是催化酯类化合物水解的酶系，目前已发现的酯酶至少有20种。
植物酯酶同工酶的分离技术多采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，主要操作步骤介绍如下。
一、试剂按表1配制贮液和工作溶液---表1 贮液和工作溶液配制用量注：贮液放在冰箱中一般可保存1～2月，3号贮液只能保存1周。
Acr=丙烯酰胺，Bis=甲叉双丙烯酰胺，TEMED=四甲基乙二胺，Tris=三羟甲基氨基乙烷。
二、制胶1、由于电泳槽的构造因厂家不同而有所差异，可按电泳槽所附说明书组装好胶板。
2、按上表配制好分离胶工作液，快速混匀，立即用带长针头的注射器吸取一定量的胶液，沿着玻璃板壁加入胶板间，至板顶3cm即可；然后沿着玻璃板壁缓慢加入3～5mm蒸馏水层。
刚加水时看出有界面，后逐渐消失；等到再看到界面时表明凝胶已经聚合（一般约30分钟）；再静置30分钟使聚合完全。
3、用注射器吸去分离胶上的水层，用滤纸条吸去残留的水液。
按上表配制好浓缩胶工作液，快速混匀，立即用带长针头的注射器吸取一定量的胶液，沿着玻璃板壁加入胶板间以冲洗分离胶的顶部。
迅速吸出，立即灌注浓缩胶，当灌至凹型玻璃口3mm处停灌，立即插入样品梳，使凝胶液面高出玻璃1～2mm。
然后在距日光灯管10cm处照射进行光聚合。
当看到浓缩胶显乳白色（一般6～7分钟），表明聚合开始。
继续半小时，使聚合完全。
三、电泳1、样品提取取烟苗0.2克，加0.5毫升提取缓冲液（含0.075M Tris-HCl，pH7.5，0.01M KCl，0.01M MgCl，0.001EDTA，5%蔗糖，0.1%巯基乙醇，5%PVP-2聚乙烯基吡咯烷酮），冰块上研磨成匀浆，低温下12000rpm离心15分钟，取上清液置于冰箱中备用。
提取缓冲液种类较多，这里介绍的提取缓冲液本实验室曾采用过，可据需要参看其他提取方法。
2、点样拔出样品梳，吸取样品槽中的水分。
用微量移液器加入适量样品液（一般50微升左右）。
用移液器缓慢加入电极缓冲液，以覆盖样品。
北虫草不同菌株酯酶同工酶谱的比较分析
文 章 编 号 １０ － ３ ７ ２ １ ）５ Ｏ Ｏ — ２ ００ ８ ５ （０ Ｏ 一 Ｏ ９ ０ １
１ ． 酶 源提 取 ．１ ２
分 别 取 上 述北 虫 草 新 鲜 子 实 体适 量 ，加 液
氮 反 复研 磨 成 粉 ， 分装 入 １ Ｌ离 心 管 中。ຫໍສະໝຸດ 种样 品加 磷 酸 一 ．ｍ ５ 每
和育种提供 依据。
收 稿 日期 ：０ １ ０ — ０一 稿 ；０ １０ — ２修 改 稿 。 ２１－３２ ２ １－ ５ １
ｅ ｉ ａ ｌ ｍｏ ａ ４ ＠ １ ．ｏｎ － ｎ ｉ ： ｎ ０ ０８ ６３ｃ ｉ
５ｍＬ丙 酮 中 ， 加 固 兰 Ｒ 再 Ｒ染 色 剂 ， 始 染 色 时 ， 染 色 剂 加 开 把
入 １ ｏ Ｌ染 色缓 冲液 中 。３ ℃染 色 １ ￣ ０ ｉ ； 酸脱 色 固定 。 ０ｍ ２ ０２ ｒｎ醋 ａ １２ 数 据 处理 酯 酶 同 工 酶相 对 迁 移 率 （ ，： ｒ Ｘ Ｘ ．． ４ Ｒ）Ｒ ＝
理睁
． ． 生 ５３６ 抓 好 食 用 菌专 业 合 作 社 建 设 ２ １ 年 在 全 市 开 展 食 ０１ 按上述补贴外 ， 在基 础设 施 、 地 等 方 面 给 予 优 惠 ； 是 鼓 励 用 三
基 地 发 展 ， 合 作 社 （ 业 ） 用 菌 基地 发 展 达 １０万 袋 以 上 对 企 食 ０
化
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用菌专业合作社“ 优争先” 动 ， 进食用菌专业 合作社 的 创 活 促
发 展 。 着重 引导 食 用 菌 专 业 合 作 社 在 产 品 加工 、 牌 注册 、 品 市
的 每 年 给予 适 当 的补 助 ； 四是 鼓 励 品 牌 申报 和 商 标 注 册 ， 合 对 作 社 申报 无 公 害 农 产 品 和 绿 色食 品 以及 品 牌 申报 和商 标 注 册
酯酶同工酶在玉米不同世代中的差异分析
中 ， 均 每 个 位 点 的 等位 基 因数 为 １３ 多 态 位 点 的 百 分 数 Ｐ ３ ， 态 位 点 的 平 均 等 位 基 因 数 Ａｐ ． 代 平 ．， 一３ 多 Ａ ｏ ＝２ 早 系 、 代 系 和 晚 代 系 间差 异 显 著 ， 中 有其 特 征 谱 带 ， 带 位 置 ， 色 深 浅 都 存 在 差 异 ． 同 世 代 的 特 征 带 差 异 明 酶 染 不 显 ， 作 为 世 代 分类 及 鉴定 的 补充 ． 带数 量 在 中代 系 （ 交 种 除 外 ） 明显 增 加 ， 晚 代 系又 有一 定 的 减 少 ． 可 酶 单 有 到
第３ ２卷
第 ２期
延
边
大
学
农
学
学
报
２１ ０ Ｏ年 Ｏ ６月
Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｒｃ ｌｕ ａ ｃｅ ｃ ｎ ｉｎ Ｕ ｎｖ ｒｉｙ ｏ ｒ ａ ｆＡｇ ｉｕ ｔ ｒ ｌ ｉｎ ｅ Ｙａ ｂａ ｉｅ ｓｔ Ｓ
Ｖｏ ． ２ ． １３ ＮＯ ２ Ｊｎ ００ ｕ ．２ １
酯酶 同工 酶在 玉 米不 同世 代 中的差 异分 析
２ ）试 剂 三 羟 基 氨 基 甲 烷 （ ｉ） Ｎ， 一 亚 甲 基 双 丙 烯 酰ｃ） 盐 ＨＣ ） 四
（ ＭＥ ） 溴 酚蓝 、 固牢 蓝 Ｒ ＴＥ Ｄ 、 坚 Ｒ盐等 ．
１ ３ 酯 酶 电 泳 方 法 ．
１ ）制 样及 提取
关键 词 ： 米 ； 酶 ； 玉 酯 同工 酶 ； 因频 率 基
中 图分 类号 ：￥ １ ５３ 文 献标 识码 ：Ａ 文章 编 号 ：１ Ｏ —７ ９ （ ０ ０ ０ —０ ３ － ０ ０ ４ ９９ ２ １ ） ２ １８ ５
同工 酶 （ｓ ｚｍｅ一 词是 Ｍａｋ ｒ 和 Ｍｏｌｒ １ ５ Ｉｏｙ ） ｒ ｅｔ ｌ 于 ９ ７年提 出来 的［ ， ｅ １ 同工 酶是 指具 有 相同催 化 功能 而化 ］
四种蚂蚁酯酶同工酶分析
四种蚂蚁酯酶同工酶分析摘要:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对膜翅目蚁科4种蚂蚁的酯酶同工酶进行了比较研究｡经比较分析发现4种蚂蚁的酯酶同工酶酶谱带清晰､稳定性好､差异显著,显示出各自的特征酶带,可以用它作为遗传标志反映种群基因结构的变化和种内､种间的亲缘关系｡关键词:聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE);蚁科;同工酶;酯酶同工酶Analysis of the Esterase Isozyme in Four Species of AntsAbstract: The esterase isozymes of four species of ants(Hymenoptera:Formicidae) were studied by polyacrylamide gel electrophoresis. The results showed that the zymograms of esterase isozymes in four species ants were in significant difference. The zymograms were very clear and stable. It indicated that they could be as a genetic marker to identify the variation of genomic structure in species and their genetic relationship.Key words: polyacrylamide gel electrophoresis(PAGE); ants; isozyme; esterase isozyme自从Hunter和Markert创立了同工酶酶谱(zymogram)技术以来,同工酶的研究得到了很大的发展,酶谱的变化已作为鉴定物种､研究分类与进化､遗传与变异的重要指标｡同工酶电泳技术具有客观､恒定､精确的优点[1]｡酯酶同工酶是目前应用最多的酶类,酯酶(Esterase,E.C.3.1.1,简称EST)是具有多态性的一组同工酶,是生物体内广泛存在的水解酶类,是由染色体上不同的基因或共显性等位基因译制的,是直接的基因产物,在种属鉴定和遗传变异的研究中具有重要作用｡研究结果证明,酯酶同工酶谱带丰富清晰,在不同物种间差异明显,可以有效地区分不同物种[2]｡同工酶电泳技术已广泛应用于昆虫纲多个类群(如双翅目､鳞翅目､同翅目､鞘翅目､半翅目､膜翅目等)的分类学研究中｡并已证明对同工酶酶谱资料的分析在鉴定种类､确定亲缘关系､区分近缘种､姐妹以及解决类群的分类地位争端方面具有重要意义和应用价值[3]｡但目前把同工酶电泳技术应用于膜翅目蚁科进行研究的报道相对较少,徐畅等[4]对此进行了研究,结果表明利用同工酶电泳技术进行蚁科种类的分类研究是可行的;李绍文等[5]研究表明蚁科总科昆虫同其他总科昆虫的酯酶同工酶基因差异显著;Heinz等[6]的研究发现细胸蚁属类群的酯酶同工酶种间表现出一些差异;张家萍[7]研究了切叶蚁亚科与蚁亚科6属8种昆虫的酯酶同工酶酶谱,并进行了聚类分析｡本文对切叶蚁亚科和伪切叶蚁亚科的2属4种蚂蚁的酯酶同工酶进行比较研究,旨在从分子水平对膜翅目蚁科物种的分类进行试验探究｡1材料和方法1.1材料的种类及来源所用蚂蚁材料为2007年5月采自河南商丘市郊区｡供试材料种类､地点见表1｡1.2仪器DYC—24B型垂直电泳槽(北京六一仪器厂);DYY—5型稳压稳流电泳仪(北京六一仪器厂);GL—20G—II高速台式冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂);500 μL欧林巴斯数码相机(日本);FA2004电子天平(北京六一仪器厂);微量进样器20 μL､100 μL和1 000 μL(上海安亭微量进样器厂)｡1.3试验药品及试剂配制A液:丙烯酰胺Acr30 g,双丙烯酰胺Bis0.2g,加水至100 mL;B液:丙烯酰胺Acr30 g,双丙烯酰胺Bis 0.8 g,加水至100 mL;C液:1 mol/L盐酸48mL,Tris 33.6 g,TEMED 230 μL,加水定容到100mL,pH值为8.9;D液:1 mol/L盐酸48 mL,Tris5.98g,TEMED 460 μL,加水定容到100 mL,pH值为6.8;E液:过硫酸铵5g加水至50 mL;电极缓冲液:Tris 6 g,Gly 28.8 g加水至1 000 mL;溴酚蓝指示剂:甘油0.8 mL,pH值为6.8的D液1 mL,5%的溴酚蓝2滴;研磨液:0.1 mol/L盐酸89.4 mL,Tris 1.211 4 g,加水至200 mL,pH值为7.2;染液[8]:取醋酸-1-奈酯､醋酸-2-奈酯各100 mg,溶于10 mL丙酮;坚牢蓝RR盐200 mg,溶于10 mL丙酮,混合后,再加pH值为7.2的Tris-盐酸缓冲液定容到200 mL,现配现用｡2试验步骤2.1样品的制备称取活体蚂蚁各0.2 g用液氮速冻,置于预冷的研磨器中,分别加预冷的pH值为7.2的Tris-HCl缓冲液2 mL,在冰浴中研磨｡将研磨后的混合液在4℃下12 000 r/min离心15 min,上清液保存待用｡2.2凝胶制备按表2的配方配制分离胶,快速混匀｡用注射器灌胶(不要有气泡),并在凝胶顶部加少量水(一般为5 mL)以隔绝空气,使胶面平整,室温静置约1 h,凝胶聚合反应完成后,去除上层水层｡然后按表2配方制备浓缩胶,快速混匀,加入分离胶上端,同时迅速插入合适的样品梳,静置聚合,约40~60 min后,轻轻取出梳齿待用｡凝胶配方见表2｡2.3点样用微量进样器取40 μL样品和20 μL溴酚蓝指示剂(预冷的)混匀,再取混合液15 μL加入样品槽中｡再用电极缓冲液(用时稀释10倍)注满样品槽,并使上槽液浸没胶板,即可进行电泳｡2.4电泳电泳时上槽电极接负极,下槽电极接正极｡电泳槽置于4℃的冰箱中｡开始电压为100V｡待溴酚蓝指示剂进入分离胶后调电压为150V｡电泳时间为6~7 h｡电泳完毕从槽中取下玻璃板用蒸馏水冲洗干净,再取出胶板｡2.5染色固定将配好的染液经过滤后,把剥取好的凝胶移入其中,37℃保温,10 min开始显色,直至出现清晰的棕红色酶带｡当出现棕红色的酶带时,迅速倾出染液,用pH值4.7的乙酸缓冲液漂洗,再保存于7%的固定液中,置于冰箱中保存｡2.6凝胶计算和拍照使用米尺或游标卡尺分别量取样品迁移距离和溴酚蓝指示染色迁移距离,进行分析｡使用数码相机对固定好的凝胶进行拍照,然后置于冰箱保存｡2.7酶谱记录酶谱记录包括溴酚蓝指示剂染料迁移距离､酶带的数目及迁移距离,测量时计数应以酶带的中部为准｡同一样品中不同酶带的相对强弱(酶带的宽度､染色强度)也应记述｡记录的酶谱可直接用于分析亚科､属及种间差异｡电泳图谱中,不同样品迁移距离之差小于0.5 mm即可看作是同一位置的酶带｡各酶带的相对迁移率(Relative mobility,Rm)是以指示剂溴酚蓝在每次电泳时移动的距离(Xf)为标准计算的｡若某一条酶带从负极向正极移动的距离为X,则该酶带的相对迁移率:Rm= Xi / XfRm值一般在0~1之间,是不同胶板之间比较的关键,其差异反映了同工酶分子量或所带电荷的差异,是遗传变异直接在电泳图谱上的表现｡2.8聚类分析将所测得的各酶带的迁移率直接输入SPSS 17.0软件,采用欧式距离系数,运用类平均法进行聚类分析｡3结果与分析本试验采用PAGE法对蚁科四种昆虫的EST同工酶进行了研究,对不同亚科､属､种间的EST同工酶进行了比较分析｡主要以各种蚂蚁所呈现的同工酶谱带作为基础,进一步测定各酶带的相对迁移率,从而比较不同分类阶元之间的差异｡根据酶带迁移率(Rm)的不同,将蚂蚁EST同工酶谱划分为3个区域:(1)Rm值为0.00~0.30,划为EST-1区;(2)Rm值为0.30~0.60,划为EST-2区;(2)Rm值为0.70~0.90,划为EST-3区｡4种蚂蚁的酯酶同工酶酶谱见图1｡4种蚂蚁酯酶同工酶酶谱各带的相对迁移率见表3｡3.14种蚂蚁酯酶同工酶的比较3.1.1切叶蚁亚科切叶蚁亚科分析了铺道蚁属的铺道蚁和沃尔什氏铺道蚁｡2种蚂蚁的EST同工酶酶谱及各酶带的迁移率(Rm值)见表3､图1｡(1)铺道蚁Tetramorium caespitum(L),共有6条酶带,EST-1区为0条,EST-2区4条,EST-3区2条｡EST-2区中4条酶带染色最深,较宽,且分带明显,酶活性最强;后2条酶带染色较浅,酶活性较弱｡(2)沃尔什氏铺道蚁Tetramorium walshi (Forel),共有5条酶带,EST-1区为0条,EST-2区4条,EST-3区2条｡EST-2区中4条酶带染色最深,较宽,且分带明显,酶活性最强;后1条酶带染色较浅,酶活性较弱｡3.1.2伪切叶蚁亚科伪切叶蚁亚科分析了细长蚁属的飘细长蚁和黑细长蚁｡2种蚂蚁的EST同工酶酶谱及各酶带的迁移率(Rm值)见表3､图1｡(3)飘细长蚁Tetraponnera allaborans(Walker),共有1条酶带,EST-1区为0条,EST-2区1条,EST-3区0条｡EST-2区中1条酶带染色较深,较宽,且分带明显,酶活性较强｡(4)黑细长蚁Tetraponnera nigra(Jerdon),共有2条酶带,EST-1区为1条,EST-2区1条,EST-3区0条｡EST-1区的1条酶带染色浅,酶活性较弱;EST-2区中1条酶带染色较深,较宽,且分带明显,酶活性较强｡3.2聚类分析利用各4个种每一条酶带的迁移率Rm值,在SPSS软件中采用欧式距离对上述4种蚂蚁进行聚类分析｡聚类结果显示,铺道蚁属的铺道蚁和沃尔什氏铺道蚁首先聚在一起,说明这2个种关系较近;细长蚁属的飘细长蚁和黑细长蚁也聚在了一起,说明这2个种的亲缘关系较近｡最后,切叶蚁亚科和伪切叶蚁亚科的相聚,说明这2个亚科或这2个属的关系较近｡综上,聚类图直观的显示了这4种蚂蚁的关系,与形态学分类基本一致｡4种蚂蚁的相关系数及聚类结果如表4､图2所示｡综上所述,无论从酯酶同工酶酶谱带颜色的深浅､条数､Rm值及聚类分析,均可以得出:铺道蚁属与细长蚁属之间的差异非常显著,几乎不存在相似性,说明两属之间的亲缘关系相对较远;而同一属内不同种之间虽然有一定的差异,但也存在很大的相似性,说明铺道蚁和沃尔什氏铺道蚁之间､黑细长蚁和飘细长蚁之间的亲缘关系相对较近｡4讨论4.1酯酶同工酶的分类价值4.1.1酯酶同工酶蚁科不同亚科级之间或不同属之间的差异本文研究的蚁科2个不同亚科的2个不同属,即切叶蚁亚科的铺道蚁属和伪切叶蚁亚科的飘细长蚁属｡酯酶同工酶在亚科､属等高级､中级阶元中的差异较大,从酶带数量上来看,切叶蚁亚科或铺道蚁属的相对较多,有5~6条酶带;伪切叶蚁亚科或细长蚁属酶带数量相对较少,仅1~2条酶带｡从酶活性上来看,在所研究的酶谱中,切叶蚁亚科或铺道蚁属酶活性较强,伪切叶蚁亚科或细长蚁属相对较弱｡因此,铺道蚁属与细长蚁属2属之间的差异非常显著｡4.1.2酯酶同工酶在同一属内不同种之间的差异切叶蚁亚科铺道蚁属研究了2种蚂蚁即铺道蚁和沃尔什氏铺道蚁;伪切叶蚁亚科飘细长蚁属研究了2种蚂蚁即飘细长蚁和黑细长蚁｡从以上这4种蚂蚁酯酶同工酶酶谱带结果可以看出,同属种间酯酶酶谱差异较小,其相似性也大于异属种间的酶谱相似性,酶谱差异大小与形态变化一致,这是由于在低级阶元中,EST同工酶位点独立进化的时间相对较短,很少或不受平行或趋同等进化现象的影响,因此它们之间的差异与分化时间成正比｡在低级阶元内EST同工酶酶谱的差异和相似是真实的,与系统发育关系是一致的,因而应用于分类上是可靠的｡4.2同工酶电泳分析方法用于昆虫分类的局限性同工酶方法的优点主要体现在试验取材和操作简单易行､结果可比性､可重复性强,并通过酶谱分析可直接获得类群的遗传信息,区分近缘种和阐明类群间的亲缘关系等特点｡但此法仍有一定局限性[7]:一是取样的局限性｡由于同工酶分析方法是建立在居群遗传学概念的基础上的,要求取样越多越好,通常每个居群取样不应少于20个个体,而且要使用新鲜活材料才能保持所有酶的活性,这就要求高效率的采集和迅速把新鲜材料运送到实验室,这对于研究分布广,在交通不便地区､零星分布､个体较少的种类来说取材会遇到一些困难｡二是电泳检测能力的局限性｡目前电泳方法只能测定结构基因编码的可溶性酶和蛋白质,另外,因大约有30%的氨基酸的替代物没有电荷上的不同,电泳后可能没有被区分出来,因此,电泳方法有一定的局限性｡三是研究阶元的局限性｡同工酶电泳一般最适合于研究种下阶元､同属种及近缘属,因为同工酶电泳研究是以相同等位基因的比较为基础的｡酯酶同工酶是水解酯键的一组酶,在昆虫体内不仅含量丰富,而且组成复杂,这组酶既受到DNA不同位点的控制,同时又受到同一位点不同等位基因的控制,因而表现的酶很复杂｡参考文献:[1] 齐宝瑛,郑哲民.昆虫学研究中酯酶同工酶电泳及PCR-RAPD技术的应用[J]. 内蒙古师范大学学报(自然科学版),2002,31(3):252-261.[2] 郭晓霞,郑哲民,于广志.酯酶同工酶多态性及其在昆虫分类学中的应用价值[J]. 昆虫知识,2000,37(6):371-374.[3] 白海艳,史丽,铁军.酯酶同工酶电泳技术在昆虫分类学中的应用[J]. 晋东南师范专科学校学报,2004,21(5):38.[4] 徐畅,王辉,沈聆苏,等.蚂蚁酯酶同工酶的比较研究[J].林业科学研究,1992,5(1):22-25.[5] 李绍文,孟玉萍,张宗炳,等. 膜翅目昆虫酯酶同工酶的比较研究[J]. 昆虫学报,1987,30(3):266-271.[6] HEINZE J,BUSCHINGER A. 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5种贵州野生鱼类酯酶同工酶的多态性研究
ｇｎｔ ｉｅ８ｉ ｈ ｉ ｅｏ ［ ］ Ｍａ ｍ ｅ ｏ ，１９ ，４ ｅｅｉ ｍａ ｒ ｎ ｔｅｐｇｇｎｍｅ Ｊ ． ｍ Ｇ ｎｍｅ ９ ３ ｃ ｋ
（ ）４ ９— ３ ． ８ ：２ ４ ４
空间 ； 白猪为 高度多 态 来自 明该 位点 在 大 白猪 中 的 大 说
遗传变异性大。在 Ｐ 和 Ｐ 位点上， ２ ３ 两个群体中的多 态性都不高， 主要是由于本试验中只检测到了 ２ 个等 位基 因的存在 ， 这可能与这 ２个 位点在 这两个 品种 中
作者简介 ： 李
敏（ ９Ｏ ， ， １５ 一） 女 重庆綦江人 ， 副教授 ， 主要从 事水产
动物学研究工作 。Ｔ ｌ（ ８ １ ８ ９０ ５；Ｅ—ｍ ｉ ｗ ｘ４ ９ １６ ｅ： ０５ ） ２ ８０ ａｌ ｗ ３ １ ＠ ２ ． ：
（ 上接 第 ６ ７页）
为保 种群 ， 遗传组 成相 对单一 ， 以基 因平 均杂合 度 所 较低 ； 大 白猪 为 引人 品种 ， 而 遗传 基 础 比较 丰 富 ， 基
异性就越大 ， 有较 大 的选择 潜 力 。本研 究 表 明 ， 并 在 Ｐ 位点上 ， １ 小梅 山猪 为 中度 多态 ， 明有较 高 的选 择 表
因杂合度高， 所以遗传杂合度在一定程度上比较准 确地 反 映了不 同群体 的 品种 特性 。
3个不同种源地三叶青酯酶同工酶比较研究
Ｋ ｅ ｒ ：Ｒａ ／ ｅｒｓｉｎ ￣； ｒｖｎ ｎ ｅ ｅ ｔｒｓ ｓｚｍｅ ｙ ｗｏ ｄｓ ｄ ｘＴ ｔａｔ ｕ ｐ ｏ ｅ ａ ｃ ； ｓｅａｅｉｏｙ ｇ
三 叶青 （ ａｉ Ｔ ｔ ｓｇ ｅ为葡 萄科 崖爬藤 属 Ｒ ｄｘ ｅ ａｔ ｍａ） ｒ ｉ
征， 分析 各 种 源之 间 的亲 缘 关 系 ， 以期 为 湘西 三 叶
关键词 ： 三叶青； 种源地； 酯酶同工酶
中图 分 类 号 ： ２２ １ Ｒ ８． ７ 文 献标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０６００ （００２—０４０ １０—６Ｘ ２ １）１０３—３
Ｃｏ ｐ ｒ ｓ ｎ ｔ ｅ ｔ ｒ ｓ ｓ ｚ ｍ ｅ ｉ ｄ ｘ Ｔｅｒ ｔ ｍ ａ ｉｏ ｂｅ ｗｅ ｎ Ｅｓ ｅ ａ ｅ Ｉ ｏ ｙ ｎ Ｒａ ／ ｔａｓｉ ｇｍａｅ
湖南农业科学
２ １ ，２ ）３ ～ ６ ０ ０ （ １ ：４ ３
Ｈｕ ａ ｇｉｕｔｒｌ ｃ ｎｅ ｎｎＡ ｒ ｌ ａ ｉ ｃｓ ｃ ｕ Ｓｅ
３个不 同种源地三叶青酯酶同工酶 比较研究
袁 带秀 ， 侯 娟
（ 首大 学 医学院 ， 南 吉首 ４ ６ ０ ） 吉 湖 １００
摘 要： 采用聚丙烯酰胺垂直平板不连续凝胶 电泳技术 ， 对湖南湘西 ３ 不 同种源地 的三叶青的酯酶 同工酶进行 了 比较分析。 个
ｐ ｏ ｅ ａ ｃ ｓｗｅ ｅ ａ ｏｌｗｓ ｔ ｅ Ｒａ ／ ｅ ｒｓ ｉｍａ ｒ ｍ ｅ Ｘｉｏ ｏ ｅ ｉ ａ ｅｗａ ］ ｓ ｒｗ ｔ ａ ｏ Ｚ ｏ ｄ ｇ ｉｏ ｒ ｖ ｎ ｎ ｅ ｒ ｓｆ ｌ ｏ ： ｈ ｄｘ Ｔ ｔ ｔ ａ ｇ ｅｆ ｏ ｔ ａ ｍａ ｒ ｌ ｇ ｓｃ ｏ ｅ ｉ ｔ ｔｆ ｍ ｈ ｕ ａ ｘａ ， ｈ ｖｌ ｈｈ ｒ ｎ ａ ｄｆ ｆ ｗ ｔ ｈ ｔｆ ｍ Ｙｏ ｇ ｈ ｎ ｎ ａ ｏ ｉ ｈｔ ａ ｒ ｒ ｏ ｎ ｓｕ ．
酯酶同工酶电泳技术
酯酶同工酶电泳技术酯酶同工酶电泳酯酶是催化酯类化合物水解的酶系，目前已发现的酯酶至少有20种。
植物酯酶同工酶的分离技术多采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，主要操作步骤介绍如下。
一、试剂按表1配制贮液和工作溶液---表1 贮液和工作溶液配制用量注：贮液放在冰箱中一般可保存1～2月，3号贮液只能保存1周。
Acr=丙烯酰胺，Bis=甲叉双丙烯酰胺，TEMED=四甲基乙二胺，Tris=三羟甲基氨基乙烷。
二、制胶1、由于电泳槽的构造因厂家不同而有所差异，可按电泳槽所附说明书组装好胶板。
2、按上表配制好分离胶工作液，快速混匀，立即用带长针头的注射器吸取一定量的胶液，沿着玻璃板壁加入胶板间，至板顶3cm即可；然后沿着玻璃板壁缓慢加入3～5mm蒸馏水层。
刚加水时看出有界面，后逐渐消失；等到再看到界面时表明凝胶已经聚合（一般约30分钟）；再静置30分钟使聚合完全。
3、用注射器吸去分离胶上的水层，用滤纸条吸去残留的水液。
按上表配制好浓缩胶工作液，快速混匀，立即用带长针头的注射器吸取一定量的胶液，沿着玻璃板壁加入胶板间以冲洗分离胶的顶部。
迅速吸出，立即灌注浓缩胶，当灌至凹型玻璃口3mm处停灌，立即插入样品梳，使凝胶液面高出玻璃1～2mm。
然后在距日光灯管10cm处照射进行光聚合。
当看到浓缩胶显乳白色（一般6～7分钟），表明聚合开始。
继续半小时，使聚合完全。
三、电泳1、样品提取取烟苗0.2克，加0.5毫升提取缓冲液（含0.075M Tris-HCl，pH7.5，0.01M KCl，0.01M MgCl，0.001EDTA，5%蔗糖，0.1%巯基乙醇，5%PVP-2聚乙烯基吡咯烷酮），冰块上研磨成匀浆，低温下12000rpm离心15分钟，取上清液置于冰箱中备用。
提取缓冲液种类较多，这里介绍的提取缓冲液本实验室曾采用过，可据需要参看其他提取方法。
2、点样拔出样品梳，吸取样品槽中的水分。
用微量移液器加入适量样品液（一般50微升左右）。
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酯酶同工酶的醋酸萘酯-铁氰化钾染色法的研究
摘要：酯酶可将＠-醋酸萘酯和ß-醋酸萘酯水解生成醋酸和萘酚，利用萘酚能与铁氰化钾反应生成有色物质萘醌的性质可对电泳凝胶上的酯酶同工酶进行染色。
关键词：酯酶同工酶；醋酸萘酯；铁氰化钾；染色法
经典的酯酶同工酶的染色方法的原理是，酯酶催化醋酸萘酯水解产生萘酚，而萘酚可与坚牢蓝反应生成蓝紫色物质，因而在电泳后的凝胶上含有酯酶同工酶的地方可以染出蓝紫色的酶带。
经过摸索，本文介绍一种新的酯酶同工酶的染色方法———醋酸萘酯N 铁氰化钾染色法，其原理是酯酶催化醋酸萘酯水解产生萘酚，而萘酚可被铁氰化钾氧化成萘醌，因而在电泳后的凝胶上含有酯酶同工酶的地方可以染出酶带。
一 材料与方法
1.1实验材料
以新鲜的肉鸡肝脏为材料。
1.2试剂
Acr 为广东省汕头化学试剂厂产品，Bis 、坚牢蓝RR 盐为上海化学试剂公司产品，TEMED 为上海前进试剂厂产品，溴酚蓝为上海试剂三厂产品，＠-醋酸萘酯为上海青浦合成试剂厂产品，ß-醋酸萘酯为上海试剂一厂产品， Tris,HCL,NaCL,2Na HP 4o ,磷酸二氢钠，三氯醋酸，乙醇，甘油，丙酮，丙酮、铁氰化钾、过硫酸铵等均为国产分析纯。
1.3仪器设备
研钵、电泳仪与电泳槽、冰箱、离心机、微量加样器、恒温水浴锅、染色盒、67$紫外光栅分光光度计等。
1.4实验方法
（1）样品制备：取一定量的新鲜鸡肝，按一定比例加入8*9:1的磷酸缓冲液后进行研磨，经4000r/min,15min 离心后取上清液，置于1?冰箱中保存备用。
（2）酯酶活力的测定：参照禹邦超等人的方法进行。
（3）聚丙烯酰胺凝胶电泳：参照赵永芳的方法进行。
（4）酯酶同工酶的染色方法有：
经典法：（即醋酸萘酯-固蓝RR 盐染色法）染色液：称取ß-醋酸萘酯与＠-醋酸萘酯、坚牢蓝RR 各200mg ，分别用10mL 丙酮溶解后，混合，再用磷酸缓冲液定容至200mL 。
电泳后，将凝胶条浸入染色液中，于37摄氏度保温直至酶带出现。
染色新法（即醋酸萘酯B 铁氰化钾染色法）染色液G ：仅将经典法染色液中的坚牢蓝RR 除去；染色液B ：4%的铁氰化钾溶液。
电泳后将凝胶条浸入染色液A 中，于37摄氏度保温2min 后弃去染色液A ，用蒸馏水稍加漂洗，再用染色液B 染色，直至显出酶带。
二 结果与讨论
电泳前，将完整的一块凝胶按计划等分为$部份，每部份都按相同的酶活力梯度进行点样。
电泳结束后，将该凝胶按计划等分切为2块凝胶。
1块用经典法进行染色，1块用染色新法进行染色
通过观察实验现象，我们发现这2种染色方法所得的酶谱是相同的。
前文已再次证实鸡
肝中所含蛋白质的种类是很丰富的，这表明酯酶同工酶的这2种染色方法具有相同的专一性。
从图中可以看到，经典法染色易导致背景太暗，给观察酶谱易带来不便，而染色新法的染色背景则较清晰，对酶带的观察不易受到干扰。
从我们所做的实验来看，如果点样量太小，样品的酶活力太低，则染色新法中的快带不易被染出（资料未列出）。
前人在用荧光素双乙酸为底物新建立的灵敏度很高的酯酶同工酶的染色法中也证明，只有在一定的点样量范围内，快带才能被观察到。
所以，我们建议在使用染色新法时要注意样品中酯酶的总活力不能太低，可以在本文图示的酶活力范围内选择使用。
染色新法显带要慢些，在按方法所述加入铁氰化钾溶液后，4min时即染出慢带，至6min 时慢带即较明显，而快带则在8min时可显出，并随时间延长而更加明显。
而经典法显带要快些。
经典法所显酶带可在蒸馏水中于室温下保存达8个月之久而不褪色，染色新法所显酶带在铁氰化钾溶液中于室温下可保存8个月而不褪色，且带不扩散。
由此可见，染色新法可以用价廉易得的铁氰化钾代替较贵的坚牢蓝，并且在一定条件下可以得出与经典法同样的酶谱，故可以在教学与科研工作中发挥其一定的作用。
前人曾就经典法中＠-醋酸萘酯与ß-醋酸萘酯的单独使用及混合使用的效果进行过比较性研究，认为将这2种醋酸萘酯混合使用的效果更好。
我们在用经典法进行实验时也发现混合使用这2种醋酸萘酯染出的酶带更便于观察，故我们采用混合使用这&种醋酸萘酯来进行实验。
目前普遍研究的酯酶其实属于酶组织化学家所称之非特异性酯酶，亦即广义上的酯酶，包括羧酸酯酶（即B-酯酶）、芳基酯酶（即A-酯酶）、乙酰酯酶（即-酯酶）、乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶以及酯酶等。
这类酶对＠-醋酸萘酯和ß-醋酸萘酯都有相同强度的作用，广泛存在于各种生物之中。
前人在研究亚洲玉米螟的酯酶同工酶谱带时发现，当分别用胆碱酯酶的专一性抑制剂毒扁豆碱或羧酸酯酶的专一性抑制剂TPP（磷酸三苯酯）处理电泳后的凝胶板后，再进行染色，所得酶谱均较不使用这些抑制剂时所得酶谱要少了一些酶带。
类似的现象在油菜的酯酶同工酶中也观察到了。
这些资料说明，前人用催化水解＠-醋酸萘酯与ß-醋酸萘酯这一共性来定义广义的酯酶有其合理性，但同时也表明不同的酯酶同工酶也会有其特殊性质。
o染色法，但其染色效果要逊于本文的染前面曾经摸索过酯酶同工酶的醋酸萘酯-KMn
4
色新法。
酯酶同工酶的染色方法运用较广，在生物的抗药性机理研究、遗传育种、致毒机理研究、致病机理研究、物种起源关系探索、杂种优势预测等研究工作中均发挥着重要作用。
可见，在基因表达产生的生命状态的直接体现者———蛋白质的结构与功能逐渐成为当前研究阶段中的重点与热的时候，同工酶染色方法的研究在有关酶的功能研究方面仍将发挥其独特的积极作用。
故作者做此摸索。
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