各种缓冲液的配制方法-

创作编号：

GB8878185555334563BT9125XW

创作者：凤呜大王*

各种缓冲液的配制方法

Na2HPO4-柠檬酸钠缓冲液

Na2HPO4。2H2O，分子量=178.05 0.2mol/L溶液含35.61g/L 柠檬酸. H2O，分子量=210.14 0.1mol/L溶液含21.01g/L

2

柠檬酸钠. 2H2O，分子量=294.12；0.1mol/L溶液含29.4 g/L

NaAC.3 H2O,分子量=136.09 0.2mol/L溶液含27.22g/L

（1）醋酸盐溶液的配制：

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.6)

取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml，再加水稀释至250ml,即得。

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.7)

取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后，加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸60～80ml，至溶液从蓝色转变为纯绿色，再加水稀释至1000ml，即得。

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH3.8)

取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加水稀释至1000ml，即得。

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH4.5)

取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml,即得。

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH4.6)

取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解，用冰醋酸调节pH值至4.6，再加水稀释至100ml，即得。

醋酸－醋酸钠缓冲液(pH6.0)

取醋酸钠54.6g，加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后，加水稀释至500ml，即得。

用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lg[C(NaAc)/C(HAc)]（在此，C(HAc)指醋酸的浓度，C(NaAc)指醋酸钠的浓度,Ka是醋酸的解离常数=1.8*10-5（1.8乘10的-5次方），PKa=-lgKa=4.75，将PH=5.5代入，可得C(NaAc)/C(HAc)=5.6 通常我们配制时会使C(HAc)=0.1mol/L，或是C(HAc)=0.2mol/L等。若是配制C(HAc)=0.1mol/L，则C(NaAc)=0.56mol/L 称量醋酸钠固体质量为82*0.56=46克量取冰醋酸体积为0.1*1000/17.5=5.7mL。将称好的醋酸钠和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、搅拌均匀即可。当然若想配制其它的浓度，也可照公式计算即可，通常缓冲溶液不能配的太稀，否则缓冲能力要下降，太浓的话又浪费试剂。

0.2mol/L苯二甲酸氢钾溶液：称取在硫酸干燥器中干燥过24小时的苯二甲酸氢钾20.44g溶于水中，稀释至500ml。

Na2HPO4 .2 H2O ,分子量=178.05，0.2mol/L溶液含35.61g/L

NaH2PO4 . 2 H2O ,分子量=156.03，0.2mol/L溶液含31.21g/L

NaH2PO4 . H2O,分子量=138.03，0.2mol/L溶液含27.6g/L

Na2HPO4 .12 H2O,,分子量=358.22，0.2mol/L溶液含71.64g/L

磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法

0.01M PBS

PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH 7.2)

PBS缓冲液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L

称7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4，溶于800 ml 蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1 L。保存于4℃冰箱中即可。

需要注意的是，通常所说的浓度0.01 M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非Na 离子或K 离子的浓度，Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。

母液的配制：

0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水

0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水

各种浓度PB(pH=7.4)的配制：

先配0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4，81ml 0.2mol/L 的Na2HPO4, 即可。

然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：

0.1M PB（PH=7.4）：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。

0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。

0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml 即可。

若需要NaCl的话，加入NaCl 至0.9%（g/100ml）即可。

另：其它各种另PH值的0.2M PB（100ml)配方：

pH 0.2M NaH2PO4（ml）0.2M Na2HPO4（ml）

5.7 93.5

6.5

5.8 92 8

5.9 90 10

6.0 8

7.7 12.3

6.1 85 15

6.2 81.5 18.5

6.3 7

7.5 22.5

6.4 73.5 26.5

6.5 68.5 31.5

6.6 62.5 3

7.5

6.7 56.5 43.5

6.8 51 49

6.9 45 55

7.0 38 62

7.1 33 67

7.2 28 72

7.3 23 77

7.4 19ml 81ml

7.5 16 84

7.6 13 87

7.7 10.5 90.5

7.8 8.5 91.5

7.9 7 93

8.0 5.3 94.7

0.01M 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法

称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中，用HCl 调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或4℃冰箱中。