胎儿非整倍体产前筛查原则
孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断技术规范(2016版)
附件1孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断技术规范孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断是应用高通量基因测序等分子遗传技术检测孕期母体外周血中胎儿游离DNA片段，以评估胎儿常见染色体非整倍体异常风险。
为规范该类技术的临床应用，制订本规范。
本规范主要包括开展孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断技术的基本要求、适用范围、临床服务流程、检测技术流程以及质量控制指标等内容。
第一部分基本要求一、机构要求（一）开展孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断的医疗机构应当获得产前诊断技术类《母婴保健技术服务执业许可证》。
（二）开展孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断采血服务的医疗机构(以下简称采血机构)应当为有资质的产前筛查或产前诊断机构。
开展采血服务的产前筛查机构须与产前诊断机构建立合作关系，并向省级卫生计生行政部门备案。
（三）开展孕妇外周血胎儿游离DNA实验室检测的医疗机构（以下简称检测机构）应当具备临床基因扩增检验实验室资质，严格遵守《医疗机构临床实验室管理办法》、《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》等相关规定，相应检验项目应当接受国家卫生计生委临床检验中心组织的室间质量评价。
二、人员要求（一）从事孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断的专业技术人员应当按照《产前诊断技术管理办法》要求取得相应资质。
（二）从事孕妇外周血胎儿游离DNA产前检测的实验室人员应当经过省级以上卫生计生行政部门组织的临床基因扩增检验技术培训，并获得培训合格证书。
三、设备试剂要求（一）在具备细胞遗传学实验诊断设备的基础上，同时具备开展孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断相应的主要设备，包括DNA提取设备、PCR仪、高通量基因测序仪或其他分子检测设备等。
设备的种类、数量应当与实际开展检测项目及检测量相匹配。
（二）设备、试剂和数据分析软件应当符合《医疗器械监督管理条例》和《医疗器械注册管理办法》等相关规定，经过食品药品监督管理部门批准注册。
非整倍体染色体异常的筛查方法
非整倍体染色体异常的筛查方法1. 羊水穿刺（Amniocentesis）羊水穿刺是一种常用的筛查方法，通常在妊娠16-20周进行。
该方法通过向子宫注射麻醉剂，然后用细针穿刺羊水囊，从中获取胎儿细胞。
这些细胞可以用于进行染色体分析，以检测是否存在非整倍体染色体异常。
尽管羊水穿刺是一种较为准确的筛查方法，但也存在一定的风险，如感染或羊水泄漏。
2. 绒毛活检（Chorionic Villus Sampling，CVS）绒毛活检是另一种常用的筛查方法，通常在妊娠10-13周进行。
该方法通过从胎盘绒毛组织中取样，获取胎儿细胞进行染色体分析。
绒毛活检的优点是早期进行，可以提供更早的结果，但也存在一定的风险，如出血或感染。
3. 无创产前基因检测（Non-Invasive Prenatal Testing，NIPT）无创产前基因检测是一种新兴的筛查方法，通过采集孕妇的血液样本，分离其中的胎儿DNA进行分析，以检测是否存在非整倍体染色体异常。
相比于传统的羊水穿刺和绒毛活检，无创产前基因检测无需穿刺取样，风险更低，同时准确率也较高。
然而，由于技术和费用的限制，无创产前基因检测目前主要用于高风险孕妇的筛查。
4. 超声筛查超声筛查是一种常规的产前筛查方法，通过使用超声波探测器对胎儿进行检查，以观察其身体结构和发育情况。
虽然超声筛查不能直接检测染色体异常，但它可以发现一些与非整倍体染色体异常有关的异常体征，如颈部透明带增厚、心脏缺陷等。
当超声筛查结果异常时，进一步的染色体检测方法如羊水穿刺或绒毛活检可以进行以确认是否存在非整倍体染色体异常。
5. 家族史和个人特征除了上述的筛查方法，了解家族史和个人特征也可以提供一些线索，帮助确定是否需要进一步进行染色体异常的筛查。
一些染色体异常如唐氏综合征和爱德华氏综合征具有明显的家族遗传性，如果有家族史，则需要密切关注和进行进一步的筛查。
非整倍体染色体异常的筛查方法有多种选择，包括羊水穿刺、绒毛活检、无创产前基因检测、超声筛查以及家族史和个人特征的观察。
非整倍体染色体异常的筛查方法
非整倍体染色体异常的筛查方法非整倍体染色体异常是指个体染色体数目的异常，通常由于发生了染色体缺失、增加或重排等突变导致。
这种异常在人类中较为常见，可以引起多种遗传病和发育异常。
因此，对非整倍体染色体异常的筛查非常重要，可提供早期诊断和干预的机会，有助于改善患者的生活质量。
一、无创产前筛查无创产前筛查是一种非侵入性的筛查方法，通过检测孕妇的血液样本来评估胎儿是否存在非整倍体染色体异常。
这种方法无需取胎儿组织或羊水样本，相对安全且无痛苦，广泛应用于产前筛查中。
无创产前筛查主要通过检测胎儿游离DNA中的染色体异常标志物来进行，如胎儿染色体三体综合征（Down综合征）常见的三体综合征标志物为孕妇血浆中游离DNA中的胎儿染色体21号染色体的片段。
二、羊水穿刺羊水穿刺是一种有创的筛查方法，通过将细针插入孕妇腹部、子宫和羊水囊，取得羊水样本进行检测。
该方法可以提供准确的染色体分析结果，能够明确诊断是否存在非整倍体染色体异常。
然而，由于该方法有一定的风险，如感染、流产等，一般只在无创产前筛查结果阳性或高风险的情况下才会选择进行。
三、绒毛活检绒毛活检是一种有创的筛查方法，通过取得胎儿绒毛组织样本进行检测。
该方法可以提供准确的染色体分析结果，并且可以早期进行，通常在怀孕8-12周进行。
绒毛活检的风险相对较低，但仍存在一定的流产风险，因此一般只在无创产前筛查结果阳性或高风险的情况下才会选择进行。
四、胎盘活检胎盘活检是一种有创的筛查方法，通过取得胎盘组织样本进行检测。
该方法可以提供准确的染色体分析结果，并且可以早期进行，通常在怀孕10-12周进行。
胎盘活检的风险较低，但仍存在一定的流产风险，因此一般只在无创产前筛查结果阳性或高风险的情况下才会选择进行。
五、胎儿超声检查胎儿超声检查是一种无创的筛查方法，通过超声波检查胎儿的形态和结构来评估是否存在非整倍体染色体异常。
该方法可以观察胎儿的脊柱、四肢、头部等部位，判断是否存在明显的异常。
无创性胎儿常见染色体非整倍体筛查与结果分析
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中图分类号 ： Ｒ ５ ９ ６ ． １
文献标 志码 ： Ａ
文章编 号 ： １ ０ ０ ２ － ２ ６ ６ Ｘ（ ２ ０ １ ７ ） ２ ０ － ０ ０ ０ １ － ０ ４
山东 医药 ２ ０ １ ７年 第 ５ ７卷第 ２ Ｏ期
荧光定量PCR用于胎儿非整倍体的产前快速诊断
·综述·《中国产前诊断杂志（电子版）》 ２０１０年第２卷第４期荧光定量ＰＣＲ用于胎儿非整倍体的产前快速诊断苗明珠 综述 孙丽洲 审校（南京医科大学第一附属医院妇产科，江苏南京 ２１００３６）【摘要】 染色体非整倍体异常是人类最常见的一类染色体数目异常。
目前，这类异常尚缺乏有效的治疗方法，因此产前诊断对预防此类缺陷儿的出生具有至关重要的作用。
细胞遗传学核型分析是诊断胎儿非整倍体异常的金标准，但诊断周期较长。
随着分子生物学的发展，荧光定量聚合酶链反应（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＱＦ ＰＣＲ）等技术逐渐用于胎儿非整倍体异常的产前快速诊断。
本文就ＱＦ ＰＣＲ技术在胎儿非整倍体产前快速诊断中的应用做一综述。
【关键词】 非整倍体；产前诊断；荧光定量聚合酶链反应犚犪狆犻犱犘狉犲狀犪狋犪犾犇犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犉犲狋犪犾犃狀犲狌狆犾狅犻犱狔犫狔犙狌犪狀狋犻狋犪狋犻狏犲犉犾狌狅狉犲狊犮犲狀狋犘犆犚 犕犻犪狅犕犻狀犵狕犺狌，犛狌狀犔犻 狕犺狅狌 ．（犜犺犲犉犻狉狊狋犃犳犳犻犾犻犪狋犲犱犎狅狊狆犻狋犪犾狑犻狋犺犖犪狀犼犻狀犵犕犲犱犻犮犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犑犻犪狀犵狊狌２１００３６，犆犺犻狀犪）【犃犫狊狋狉犪犮狋】 Ｉｎｈｕｍａｎ，ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙｉｓｔｈｅｍｏｓｔｃｏｍｍｏｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌｎｕｍｅｒｉｃａｌａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ．Ｔｏｐｒｅｖｅｎｔｔｈｅｓｅｄｅｆｅｃｔｅｄｆｅｔｕｓｅｓｂｏｒｎ，ｐｒｅｎａｔａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅ，ｂｅｃａｕｓｅｏｆｔｈｅｌａｃｋｏｆｅｆｆｅｃｔｉｖｅｔｈｅｒａｐｙｆｏｒｓｕｃｈｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃｋａｒｙｏｔｙｐｉｎｇｉｓｔｈｅｇｏｌｄｓｔａｎｄａｒｄｏｆａｎｅｕｐｌｏｉｄｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｂｕｔｉｔｒｅｑｕｉｒｅｓａｌｅｎｇｔｈｙｒｅｐｏｒｔｉｎｇｔｉｍｅａｆｔｅｒｓａｍｐｌｉｎｇ．Ｗｉｔｈｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙ，ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＱＦ ＰＣＲ）ｂｅｕｓｅｄｔｏｒａｐｉｄａｎｅｕｐｌｏｉｄｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（ＲＡＤ）ｇｒａｄｕａｌｌｙ．ＴｈｉｓｒｅｖｉｅｗｉｓａｂｏｕｔｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＱＦ ＰＣＲｏｎＲＡＤ．【犓犲狔狑狅狉犱狊】 Ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ；ＰｒｅｎａｔａｌＤｉａｇｎｏｓｉｓ；ＱＦ ＰＣＲ通讯作者：孙丽洲．Ｅ ｍａｉｌ：ｌｉｚｈｏｕ＿ｓｕｎ１２１＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ基金项目：卫生部科研基金资助项目（ＷＫＪ２００７ ３ ００１） 非整倍体异常是人类最常见的一类染色体数目异常，其中最常见的为三体征，常见染色体三体综合征的发病率为１∶４００［１］。
孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查实验室技术【专家共识】
孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查实验室技术【专家共识】孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查（non-invasive prenatal testing，NIPT）是应用高通量基因测序等分子生物学技术检测孕妇外周血中胎儿游离DNA片段，以评估胎儿常见染色体非整倍体（T21、T18、T13）风险的一种产前筛查方式[1,2,3,4]。
相对于传统的孕妇外周血血清学筛查，NIPT具有高检出率及低假阳性率的优点[5,6,7]。
随着技术的快速发展，NIPT的临床应用日益增加，其临床适用范围参见《孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断技术规范》（国卫办妇幼发[2016]45号附件1）[8]。
为规范NIPT的应用，国家卫健委临床检验中心产前筛查与诊断实验室室间质评专家委员会《产前筛查与诊断实验室技术专家共识》专家组进行充分讨论，制订本共识对NIPT 实验室技术的临床应用作出要求和建议。
本共识着重在质量管理与质量控制等方面进行详细描述，并将随着技术的发展持续更新以满足临床需求。
一、实验室总体要求开展NIPT检测的实验室在机构要求、实验室资质、设备试剂要求、质量管理及工作要求等方面必须符合《医疗机构临床实验室管理办法》（卫医发[2006]73号）、《孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断技术规范》（国卫办妇幼发[2016]45号附件1）、《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》（卫办医疗政发[2010]194号）等相关规定。
（一）人员资质要求从事孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断的专业技术人员应当按照《产前诊断技术管理办法》要求取得相应资质；从事孕妇外周血胎儿游离DNA产前检测的实验室人员应当经过省级及以上卫生行政部门组织的临床基因扩增检验技术培训，并获得培训合格证书。
实验室审核NIPT检测结果的专业技术人员需具有中级及以上专业技术职称。
临床报告必须由产前诊断机构中具备产前诊断资质的副高及以上职称临床医师审核签发。
NIPT胎儿DNA分数的检测方法
仅孕妇血样即可
准确性太低
Thanks
间的复杂关系，构建一个多元回归模型，即SeqFF模型，可以准确计算胎儿分数。
染色体区段的选择不包括性染色体，也不包括13、18、21号染色体。
SeqFF模型
短片段率：小于150bp的cffDNA数量除
以小于600bp的cffDNA数量
SeqFF模型
首先将各常染色体按照每50kb分割成区
间窗口，称为bin，计算出每个bin的短
16~21周
侵入性，有一定的流产风险
因素中，染色体非整倍体异常
脐静脉血穿刺
20~28周
侵入性，有一定的流产风险
10~12周（早期）
5％的假阳性率；
16周左右（中期）
20%~40％的漏诊率
占据主要地位，占染色体异常
血清学筛查
出生人口的95%。
基因异常占一小部分。
颈项透明带NT检测
11~14周
无创产前 DNA筛查
管家基因代表母体血中总的游离DNA来进行定量。
利用ddPCR的方法来定量Y染色体上的基因，相对于传统
的QPCR技术而言，具有更为准确，灵敏度更高等优点。
基于二代测序的Y定量
Y染色体序列浓度与常染色体序列浓度之比用于测定胎儿DNA分数。在NIPT使用大规模平行测序的情况
下，Y染色体上所有序列读取的比例可以翻译为胎儿DNA片段。
通过36个已知胎儿分数的样本，寻找SR与胎儿分数
通过以上方程 ，测量新的37个样本的SR，计算
的相关性，胎儿分数由Y染色体定量的方法测定。找
胎儿浓度，并与Y染色体的方法进行对比，两个
到的线性方程为：y=0.064X+0.5794，R=0.827
产前检查——产前无创DNA检测技术
产前无创DNA检测技术入驻安琪儿随着高科技的发展，在医学领域，六盘水安琪儿妇产医院引进了胎儿畸形排查的新技术“产前无创DNA检测”，随着高科技术的引进，满足广大因不同原因怀上畸形宝宝的孕妈妈解决了难题。
产前无创DNA检测技术在六盘水也仅有两家医院拥有，而安琪儿妇产医院就是其中一家，什么是无创DNA产前检测？无创DNA产前检测技术是一项新型的、针对胎儿染色体非整倍体疾病的产前检测新技术。
该技术仅需抽取孕妇静脉血，即可判断胎儿是否患有唐氏综合征（T21）、爱德华氏综合征（T18）、帕陶氏综合征（T13）三大染色体非整倍体疾病。
业内专家在2012年召开的专家座谈会上，明确将该技术定位为“近似于产前诊断水平的”、“目标疾病指向精确”的产前筛查技术。
产前无创DNA检测检查时间超声检查是孕期监测胎儿发育、评估胎儿主要脏器异常与否的常规和重要手段，孕妇在整个怀孕期间至少应进行三次超声检查。
第一次超声检查：孕11-13+6周，确定胎儿个数、胎儿孕周，排除较大的胎儿畸形（如无脑儿等），胎儿颈项透明带（NT）检测也在此阶段进行。
第二次超声检查：孕18-24周，排除胎儿大多数畸形，俗称“大排畸”，如四肢畸形、心脏畸形、脑畸形等。
第三次超声检查：孕32-36周，测定胎儿的各种径线，评估胎儿的体重及发育状况。
无创DNA产前检测的筛查项目血清学筛查：血清学筛查通过抽取孕妇的静脉血，检测母亲血清中甲型胎儿蛋白(AFP)、非结合雌素三醇（uE3）以及绒毛膜促性腺激素(HCG)的浓度，结合孕妇的预产期、年龄、抽血时的孕周和体重计算胎儿罹患染色体疾病的“风险系数”。
根据“风险系数”的高低，分为“高风险”孕妇和“低风险”孕妇。
早孕期血清学筛查：孕9-13+6周，检测母血清中的PAPP-A、freeβ、HCG水平；中孕期血清学筛查：孕15-21+6周，根据筛查指标的不同，分为二联筛查、三联筛查和四联筛查。
三、四联筛查为主要的筛查项目：中孕期血清学三联筛查：筛查母血清中的AFP、freeβ、HCG、uE3水平；中孕期血清学四联筛查：筛查母血清中的AFP、freeβ、HCG、uE3、Inhibin-A水平；目前血清学筛查的项目主要涉及21三体综合征和18三体综合征，对其他染色体疾病无法检测。
非侵入性产前诊断——母体血中胎儿DNA检测
酸盐转化能 降解样本 中９ ％的Ｄ Ａ ５ Ｎ 核苷 酸分子 。
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ACOGSMFM实践指南：胎儿非整倍体筛查
ACOG/SMFM实践指南：胎儿非整倍体筛查产前遗传学筛查的目的是评估患者孕育遗传病胎儿的风险是否增加。
而产前诊断的目的是尽可能确定胎儿是否患有某种特定遗传病。
非整倍体产前筛查的目标是评估孕妇怀有某种常见非整倍体胎儿的风险。
这与遗传病的产前诊断不同，诊断是分析胎儿染色体是否存在数目异常、缺失、重复，或检测胎儿DNA，以确定胎儿是否存在某种特定遗传病。
筛查检测的目的各不相同，每一种方法提供的信息量和准确性各异，因此需要医务人员进行复杂的咨询，患者做出复杂的决定。
没有一种筛查方法在所有检测特点上优于其他筛查方法，都有各自的优势和劣势。
妇产科医生不仅要准备告知非整倍体风险，也要告知现有筛查方法的优点、风险及局限性。
非整倍体筛查应当经过知情选择，该选择要适合患者的临床情况、价值观、利益和目的。
本指南的目的是介绍现有胎儿非整倍体筛查方法的已知信息，回顾它们的优点、准确性和局限性。
附表1：根据足月时母亲年龄的染色体异常风险。
附表2：常见非整倍体筛查方法的特点、优点和缺点。
附表3：非整倍体超声标记物的处理。
背景大约150名活产儿中有1名存在染色体异常，孕周越小患病率越高。
胎儿非整倍体发生率随母亲年龄增加而增高（表1），其他危险因素包括既往孕有非整倍胎儿或畸形胎儿。
常染色体三体是最常见的非整倍体异常，其中21-三体最常见。
最常见的性染色体非整倍体是Klinefelter综合征（47,XXY），唯一可存活的单体是Turner综合征（45,X0）。
总体而言，非整倍体筛查识别了两组个体：1）筛查阳性，孕有非整倍体胎儿的风险较高；2）筛查阴性，孕有所评估非整倍体胎儿的风险较低。
应当向筛查阳性的孕妇提供产前诊断这一选择，并告知筛查隐形的孕妇存在残余风险。
筛查阴性不应再采用其他非整倍体筛查方法，但筛查阴性的妇女如果之后有新的发现（例如胎儿超声异常或发现非整倍体指标），仍可选择进行诊断。
现有的非整倍体筛查方法包括早孕期筛查、三联、四联与五联筛查；胎儿游离DNA；超声筛查。
双胎妊娠染色体非整倍体产前筛查及诊断
双胎妊娠染色体非整倍体产前筛查及诊断SOGC;石晓梅【期刊名称】《中国产前诊断杂志（电子版）》【年(卷),期】2013(005)003【总页数】10页(P47-56)【作者】SOGC;石晓梅【作者单位】【正文语种】中文自从20世纪80年代以后，在加拿大和其他发展国家多胎妊娠的发生率大幅度的增加。
在1995～2004年期间，多胎妊娠的出生率从2.2%稳定增长到3.0%［1］。
主要的2个原因是妇女生育年龄普遍提高、辅助生殖技术的普及与不规范的卵巢刺激。
合子性质反映了胎儿的遗传同一性，而绒毛膜性指的是胎盘的分布。
在单合子双胎中，单个受精卵在多次卵裂后分裂成2个独立的个体，几乎所有这样的双胎基因完全相同，因此性别是一样的。
在极少数情况下，由于基因突变或染色体不分离可引起单合子双胎基因不一致，引起双胎表型和染色体不一致［2］。
当2个独立的卵母细胞同时受精时，形成双合子双胎，这种双胎遗传基因是截然不同的，而且染色体也常常不一致。
单合子双胎的发生率非常稳定，约为4／1000。
辅助生殖技术使单合子双胎的发生率增加了2～12倍［3-5］，具体机制尚不清楚［6］。
双合子双胎的发生率随着孕妇年龄、种族及不孕治疗（机制等同于母体血清卵泡雌激素水平的升高）的影响变化很大。
总的来说，约66%的双胎妊娠为双合子双胎，33%为单合子双胎。
双胎绒毛膜性质的确定至关重要，在第一孕期评估准确率最佳。
孕早期超声诊断双胎绒毛膜性的准确性达到96%～100%，孕中期则明显降低，约为80%［7-9］。
绒毛膜性决定双胎的妊娠结局［10］，主要源于其胎盘血管吻合引起的并发症，如双胎输血综合征等。
所有双合子双胎均为双绒毛膜，而单合子双胎根据胚芽分裂的时间不同可以是双绒毛膜性（约占33%）或单绒毛膜性（约占66%）［11］。
绒毛膜性可以通过超声确定，但是合子性并不能完全通过绒毛膜性来推断确定。
同性别的双绒毛膜双胎，通过分子遗传学技术（微卫星或单核酸多态性等技术）可确定其合子性质［12］。
游离DNA产前筛查技术规范标准
附件1孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断技术规范孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断是应用高通量基因测序等分子遗传技术检测孕期母体外周血中胎儿游离DNA片段，以评估胎儿常见染色体非整倍体异常风险。
为规范该类技术的临床应用，制订本规范。
本规范主要包括开展孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断技术的基本要求、适用范围、临床服务流程、检测技术流程以及质量控制指标等内容。
第一部分基本要求一、机构要求（一）开展孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断的医疗机构应当获得产前诊断技术类《母婴保健技术服务执业许可证》。
（二）开展孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断采血服务的医疗机构(以下简称采血机构)应当为有资质的产前筛查或产前诊断机构。
开展采血服务的产前筛查机构须与产前诊断机构建立合作关系，并向省级卫生计生行政部门备案。
（三）开展孕妇外周血胎儿游离DNA实验室检测的医疗机构（以下简称检测机构）应当具备临床基因扩增检验实验室资质，严格遵守《医疗机构临床实验室管理办法》、《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》等相关规定，相应检验项目应当接受国家卫生计生委临床检验中心组织的室间质量评价。
二、人员要求（一）从事孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断的专业技术人员应当按照《产前诊断技术管理办法》要求取得相应资质。
（二）从事孕妇外周血胎儿游离DNA产前检测的实验室人员应当经过省级以上卫生计生行政部门组织的临床基因扩增检验技术培训，并获得培训合格证书。
三、设备试剂要求（一）在具备细胞遗传学实验诊断设备的基础上，同时具备开展孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断相应的主要设备，包括DNA提取设备、PCR仪、高通量基因测序仪或其他分子检测设备等。
设备的种类、数量应当与实际开展检测项目及检测量相匹配。
（二）设备、试剂和数据分析软件应当符合《医疗器械监督管理条例》和《医疗器械注册管理办法》等相关规定，经过食品药品监督管理部门批准注册。
孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断技术规范
附件1孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断技术规范孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断是应用高通量基因测序等分子遗传技术检测孕期母体外周血中胎儿游离DNA片段，以评估胎儿常见染色体非整倍体异常风险。
为规范该类技术的临床应用，制订本规范。
本规范主要包括开展孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断技术的基本要求、适用范围、临床服务流程、检测技术流程以及质量控制指标等内容。
第一部分基本要求一、机构要求（一）开展孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断的医疗机构应当获得产前诊断技术类《母婴保健技术服务执业许可证》。
（二）开展孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断采血服务的医疗机构(以下简称采血机构)应当为有资质的产前筛查或产前诊断机构。
开展采血服务的产前筛查机构须与产前诊断机构建立合作关系，并向省级卫生计生行政部门备案。
（三）开展孕妇外周血胎儿游离DNA实验室检测的医疗机构（以下简称检测机构）应当具备临床基因扩增检验实验室资质，严格遵守《医疗机构临床实验室管理办法》、《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》等相关规定，相应检验项目应当接受国家卫生计生委临床检验中心组织的室间质量评价。
二、人员要求（一）从事孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断的专业技术人员应当按照《产前诊断技术管理办法》要求取得相应资质。
（二）从事孕妇外周血胎儿游离DNA产前检测的实验室人员应当经过省级以上卫生计生行政部门组织的临床基因扩增检验技术培训，并获得培训合格证书。
三、设备试剂要求（一）在具备细胞遗传学实验诊断设备的基础上，同时具备开展孕妇外周血胎儿游离DNA产前筛查与诊断相应的主要设备，包括DNA提取设备、PCR仪、高通量基因测序仪或其他分子检测设备等。
设备的种类、数量应当与实际开展检测项目及检测量相匹配。
（二）设备、试剂和数据分析软件应当符合《医疗器械监督管理条例》和《医疗器械注册管理办法》等相关规定，经过食品药品监督管理部门批准注册。
无创产前筛查对胎儿染色体非整倍体检出的临床价值
无创产前筛查对胎儿染色体非整倍体检出的临床价值周慕平，刘娜，文君，黄艳，邓礼元*（邵阳市妇幼保健院检验科，湖南邵阳422000）摘要：目的探究无创产前筛查对胎儿染色体非整倍体检出的临床价值。
方法选取2017年6月至2019年6月某院产科收治的产前检查孕妇102例作为研究对象，统一应用无创产前DNA检测技术采集母体外周血进行无创产前筛查，系统评估胎儿染色体非整倍体疾病患病风险率。
针对高风险筛查结果孕妇采取分析染色体核型方式，研究无创产前筛查对胎儿染色体非整倍体疾病的诊断价值。
结果对纳入研究102例孕妇进行外周血检测，共102份标本，NIPT检测显示性染色体非整倍异常16例。
经咨询发现，16例孕妇均自愿接受检测，其中NIPT与染色体核型分析结果一致6例，包括（45，X）3例；（46，XXX）1例；（46，XX）1例；（47，XXY）1例。
检测显示高风险8例，检出阳性率7.84%。
染色体核型分析结果等同于无创产前筛查检测结果。
结论针对胎儿染色体非整倍体疾病产前筛查应用无创产前DNA检测具有重要临床价值，由于该检测技术敏感性较高，因此，具有较高的准确性，且为无创操作，对孕妇及胎儿的伤害较小，是提高生育质量的重要技术。
关键词：无创产前筛查；基因检测；胎儿染色体非整倍体；染色体核型染色体非整倍体疾病是染色体数目异常（增多或减少）而引发的非单倍体整数倍疾病[1]，目前，尚无特异性治疗方案，因此，需在孕早期产检进行诊断方能降低缺陷胎儿出生率，同时，减轻患病家庭的经济负担，提升生育质量[2]。
近年来，无创产前筛查（NIPT）作为新型胎儿染色体疾病检测技术应用于产前检测领域，相较于传统的脐血穿刺、羊水穿刺、胎儿组织活检、绒毛活检等检查手段更具权威性，且安全性高，通过高通量测序技术检测产前孕妇外周血中胎儿游离DNA（cell free fetal DNA，cffDNA），使产前筛查、诊断体系更加完整，进一步优化产前检测技术，提升产前检测整体质量[3]。
无创DNA产前检测技术
无创DNA产前检测技术无创DNA产前检测，又称为无创产前DNA检测、无创胎儿染色体非整倍体检测等。
根据国际权威学术组织美国妇产科医师学院委员会，无创产前DNA检测（Non-invasive Prenatal Testing）是应用最广泛的技术名称。
无创DNA产前检测技术仅需采取孕妇静脉血，利用新一代DNA测序技术对母体外周血浆中的游离DNA 片段（包含胎儿游离DNA）进行测序，并将测序结果进行生物信息分析，可以从中得到胎儿的遗传信息，从而检测胎儿是否患三大染色体疾病。
一、理论依据母体血浆中含有胎儿游离DNA，为该项目提供现实依据。
胎儿染色体异常会带来母体中DNA含量微量变化，通过深度测序及生物信息可分析检测到该变化，为项目提供理论依据。
新一代高通量测序、信息分析平台为深度挖掘母体血浆中胎儿游离DNA信息提供技术依据。
二、研究进展作为一种对胎儿染色体非整倍体筛查手段，无创产前DNA测试，使用来自于孕妇血浆的无细胞胎儿DNA进行检测。
这些DNA 学术上也被称为循环游离胎儿DNA，浓度约3-13%，被认为主要来自胎盘，并在分娩后数小时内从母体血液中清除。
无创产前DNA 分析已在临床上用于胎儿非整倍体风险检测。
1969年首次报道发现母体外周血中存在胎儿细胞，经过几十年研究发现其含量极低且存在时间较长，这些特点使其在产前诊断领域的应用受到较大的限制。
1997年香港中文大学卢煜明 (Dennis Lo) 教授发现母体外周血浆中存在游离胎儿DNA ，随孕周增加稳定存在，且随孕妇分娩快速消失，可以作为非创伤性产前诊断的理想材料。
母体外周血浆中胎儿游离DNA含量大概占全部游离DNA的3-13%，也有不同研究认为其含量稍高。
由于大量来源于母体背景的游离DNA影响，需要选择超级灵敏的新一代分子生物学技术才可以在大数据量水平上对胎儿游离DNA的碱基序列做出准确判断。
早期的研究中，无创产前DNA分析对三体胎儿检测需要多个胎盘DNA或RNA标记，这使得试验非常耗时和昂贵[2]。
无创产前筛查采血操作规范.
附件3胎儿染色体非整倍体（T21、T18、T13）检测样本采集手册一、受检者准备1．检测对象：孕周范围为孕12-24周的孕妇。
2．采样体位：坐位取血，且在采血前患者需要有10分钟时间稳定自己的体位。
【注意事项】要求受检孕妇先进行B超检测，确认胎儿为单活胎。
采血前24小时内避免运动和饮酒，不宜改变饮食习惯和睡眠习惯。
二、样本采集前准备1、知情同意书签署：送检医生与受检者及其家属作良好沟通，告知该检测的重要性、临床意义及潜在的风险，并指导受检者签署知情同意书。
对于孕周大于24周并坚持要求进行该检测的受检者，由送检医生指导其签署知情同意书补充条款。
2、送检单填写：要求用钢笔或签字笔填写，并使用正楷字体，字迹清晰，填写完整。
3、送检单必填信息：送检单位、送检医生、采血日期、受检者姓名、年龄、孕周、B超检查结果、身份证号码、联系电话。
4、信息核对：仔细核对送检单和受检者的基本信息，确保一致；检查受检者是否按照医嘱准备，并向其解释操作目的以取得配合。
5、样本标识：在采集管、知情同意书、送检单上贴上样本唯一条码，并注明受检者姓名、年龄、孕周、检验项目等信息，确保与送检单一致。
【注意事项】1．粘贴条码标签时，应使条码与采集管的管长平行，字母朝管口方向，避免以环绕管壁粘贴的方式使管周被遮挡，而无法清晰看到管内样本情况。
（条码7个，分配：患者一个、采血机构一个、保健所3个、保健院一个、检测中心一个）2. 样本采集后使用的条码必须为抗冻条码，并且粘贴牢固，确保在运输、检测、储存过程中不会脱落或字迹模糊不清。
三、样本采集1、采样器：医用一次性采血针、10 mL EDTA抗凝管、灭菌棉签、止血带、消毒液。
2、采集操作：全血标本的采集—使用普通的10mlEDTA采血管：严格按照《实验室操作技术规范》的要求采取10 mL孕妇外周血，采血后请立即缓慢颠倒6次使血液与管内成分混匀（如图1），拖延颠倒混匀时间可能会造成检测失败。
混匀后立即放直立于4℃冰箱内，并在6个小时内进行血浆分离。
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- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
注：孕妇需提供个人详细资料，包括出生年月， 末次月经，体重，是否糖尿病、双胎、吸烟，异 常妊娠史等，统计时需根据上述因素做一定的矫 正。孕周需要采用胎儿超声指标（头臀长或双顶 径）矫正。
无创产前检查技术(NIPT)
孕妇的外周血清中约有1%-5%的DNA是来自胎儿的， 通过对胎儿DNA的测序分析，达到诊断染色体倍数 异常和基因突变的目的。
故临床可用无创DNA技术来诊断21,18,13-三体等 染色体异常。
羊膜腔穿刺技术
• 羊膜腔穿刺染色体核型分析的结果较为准确，但 介人性操作可能导致0.5%——1.0%的胎儿死亡风 险。
联合筛查:血清学筛查+超声筛查(NT)
最近10年英国、美国、加拿大分别开展4项前瞻性 研究表明，早孕期联合筛查对DS的检出率明显高于 中孕期血清学筛查方案。在假阳性率为5%时DS检出 率平均可达87%。
早孕期筛查意义
早孕筛查能提供进行早期风险评估的机会， 从而通过绒毛取样技术(CVS)对胎儿非整倍体 做出早期诊断，进而可以根据孕妇意愿在妊 娠早期终止妊娠，降低母体发病率。
与正常孕妇相比,唐氏综合征妊娠孕妇其血清AFP和uE3水平 降低，而hCG和抑制素A升高，18-三体综合征妊娠孕妇其血 清AFP、uE3和hCG水平均降低。 在5%的筛查阳性率的情况下，四联筛查试验能够探测出大约 75%的唐氏综合征患儿。同时在25%的筛查阳性率的情况下， 四联筛查试验能够在预计分娩时年龄≥35岁的孕妇中探测出 85%-95%的唐氏综合征患儿。
因此, 对该类疾病进行产前筛查和产前诊断, 是 防止这类疾病患儿出生的重要措施，对于家庭及 社会均有重大意义。
唐氏综合征（21-三体综合征）
• 又称先天愚型（DS），是一种最常见的非整倍常 染色体异常疾病，位于单病种排位第1,其造成患 儿终生智力残疾，大约有10 %～15 %智力低下儿 童罹患该病。我国发生率约为1/800例活产儿 。
超声软标记物咨询南
• 上世纪50年代末，国外的超声学者开始发现染色体异常的 胎儿常合并微小畸形，后来被称为超声软指标，并非胎儿 畸形,而是一些特殊结构被超声检查所见。
• 目前研究较充分的超声软指标包括：脉络丛囊肿、心内强 回声、颈后皮肤增厚、肠管强回声、肾盂扩张、长骨短、 鼻骨缺损或发育不良、轻度侧脑室增宽和单脐动脉等。
集合式和阶梯式序贯DS筛查,均较单独早、中孕 期筛查灵敏,假阳性率更低，不能行NT测量时, 血清学集合式DS筛查是孕妇的有效选择。
6.引导式序贯筛查
根据孕早期检查结果分为： 阳性:提供孕早期诊断性检查(CVS) 阴性:不做进一步的检测 中间:提供中孕期检测，整合早、中孕期结果评估DS 风险。
注意事项：(参考第八版教材)
3.集合式筛查方案
即在早中孕期筛查试验全部完成后，得出一个单独 的风险评估值再将筛查结果告知孕妇。
方案1:早孕期NT+PAPP-A+中孕期四联筛查 方案2:早孕期NT+中孕期四联筛查
此种筛查方法，在5%的假阳性率的情况下，21-三 体综合征的检出率是94%，是诊断唐氏综合症的最 优筛查方案。
4.步进式筛查
胎儿非整倍体产前筛查原则
非整倍体定义
是指胎儿染色体数目异常, 而非46条染色体组 成的二倍体。
临床常见的是三体型，是指一条单独附加的染 色体, 其21 -三体综合征、18 -三体综合征、 13 -三体综合征是最常见的三体型。
非整倍体产前筛查意义
此类疾病对个体的智能和体格发育均有严重影响 ,且至今尚无有效治疗方法，给社会及家庭带来 巨大负担。
原则：血清学+超声软标记筛查
目前主流的唐氏综合征产前筛查方案
1.早孕期血清学+超声筛查 2.中孕期血清学+超声筛查 3.集合式筛查方案 4.独立式筛查 5.阶梯式序贯筛查 6.引导式序贯筛查 参考文献：中华妇幼临床医学杂志(电子版)2014年2月 第6卷第1期
1.早孕期联合筛查
血清学筛查(8-13+6d孕周):PAPP-A（血浆蛋白A） +β-hCG或PAPP-A筛查； 超声筛查:NT(11-13+6d孕周)、鼻骨、颌面角、三 尖瓣血流、静脉导管血流频谱检查；
• 与DS患儿的区别是：18-三体综合征患儿出生前可 有预兆,如胎儿生长受限、胎动微弱、羊水多、胎 盘小、单脐动脉等。
• 该病多发生在年龄较大父、母所生育新生儿中, 52%孕妇年龄>35岁。该病女孩比男孩发病率高, 约为3∶1 - 4∶1 。
产前筛查与产前诊断流程
产前筛查方案
目前国内外均采用为能够精确定量的血清学 产前筛查技术和(或)接受标准化培训认定的 超声筛查方案。
方案：早孕期的筛查（新的一个前设风险）→被 告知筛查结果→中孕期筛查。
优点:早孕筛查显示高风险状态，则可在早孕期选 择CVS, 进一步明确诊断。否则，待中孕筛查后, 获得更高的唐氏综合征检出率的筛查结果。
5.阶梯式序贯筛查
根据早孕期检查结果分为： 若阳性:提供孕早期诊断性检查(CVS) 若阴性:提供中孕期检查，最后的风险评估要整 合孕早期和中孕期的结果。
• 90%以上的结构异常和染色体异常是来源于无风 险因素的妊娠，出生前无明显预兆，常规产前检 查不能提示胎儿患DS。即使将所有孕妇纳入DS产 前筛查范围，才有可能发现和产前诊断60%以上 DS患儿。
• 因此,对全体待产孕妇人群实施唐氏综合征筛查 是必须的。
18-三体综合征
• 又称Edward 综合征，由18号染色体减数分裂不分 离所致,发生率仅次DS。其患儿均有严重智能低下 伴多发畸形，患儿常为足月低体重儿及过期儿。
2.中孕筛查的必要性
A、许多病人在早孕筛查时不呈现出患病状态；
B、许多病人没有机会接受对NT超声测量或CVS技术 较有经验的专业人员提供的服务；
C、另有部分病人更喜欢选择羊膜腔穿刺术而不愿 选择CVS。
中孕期(14-20+6d孕周)筛查
二联筛查:MsAFP（甲型胎儿蛋白A）+β-hCG 三联筛查:MsAFP+β-hCG+Ue3(游离雌三醇）+MsAFP+hCG+uE3 四联筛查:MsAFP+β-hCG+uE3+inh-A（抑制蛋白A） 超声联合检查:血清学+超声软标记