金线莲总生物碱的提取及含量测定

第17卷第4期

化 学 研 究V o.l 17 N o .42006年12月CHE M I CAL RESEARC H D ec .2006

金线莲总生物碱的提取及含量测定

钟添华1,黄丽英1,王 勇2

(1.福建医科大学药学院,福建福州350004; 2.福建省药物检验所,福建福州350004)

收稿日期:2006-08-02.

作者简介:钟添华(1980-),男,硕士,主要从事天然药物有效成分的提取及结构鉴定工作,E O m ai:l zt h23-1980@163.co m.

摘 要:建立了金线莲总生物碱的提取和测定方法.将金线莲全草粉末用p H =2的水溶液提取,以阳离子交换

树脂吸附后,经酸化,用氯仿/甲醇(体积比2B 1)对其进行索氏提取,蒸发有机溶剂.冷冻干燥即得金线莲总生物

碱.以盐酸麻黄碱为对照品,酸性染料比色法测定总生物碱,折算为盐酸麻黄碱获得总生物碱含量.测得金线莲

总生物碱含量是0.0794%,线性回归方程A =0.0092C -0.0016(r =0.9999),回收率103.13%.本提取及

含量测定方法操作简单,总生物碱的提取率较高.

关键词:金线莲;总生物碱;提取分离;酸性染料;比色法

中图分类号:R 284.2文献标识码:A 文章编号:1008-1011(2006)04-0068-03

Extraction and Deter m i nation of t he A l kaloi ds i n

Anoectochil us For mosanus

Z HONG T i a n-hua 1,HUANG L-i y i n g 1,WANG Y ong 2

(1.P har m ac y C oll ege of Fujian M e d ic a l Un i versit y,Fuzh ou 350004,Fujian,Ch i na;

2.F ujian Insitit u te for D rug Control ,Fuzhou 350004,Fujian,Ch i na )

Abstract :Developed a m ethod to extract and deter m ine the to tal alkaloids fro m anoectoch ilus for m osa -

nus .H erbs of anoectochilus for m osanus w ere leached by aci d ifi e d w ater ,and the total alka l o ids i n t h e

leached so l u ti o n w ere absorbed by cation i c exchange resi n ,then t h e resi n w as acidified and extracted

w ith a m i x ed organ ic so lvent i n a Soxh let extractor .The tota l a l k alo i d s w ere tested at 412n m w ith t h e

spectroscopy by acid dye .The cali b rati o n cur ves of alka l o ids w ere li n ear(r =0.9999).The recovery

w as perfect(103.13%).M ostly ,the content o f the to tal alka loids i n the herb is 0.0794%.The

m et h od for ex traction and de ter m inati o n is si m ple ,qu ick w it h h i g h recovery .

Keywords :anoectochilus for m osanus ;to ta l a l k alo i d s ;extracti o n ;acid dye ;co l o ri m etric m ethod

金线莲系兰科(Orchi d aceae)开唇兰属(Anoectochil u s )多年生草本植物,该属植物已发现35种,在我国约有20种[1].本属的部分种全草民间作药用,其中具有神奇功效、享有/药王0、/金草0、/乌人参0的珍稀草药

金线莲备受人们的关注[2]

,特别在福建和台湾民间,广泛用于治疗肝炎、肾炎、肺炎、小儿惊风高热、糖尿病、高血压、肿瘤、风湿病等

[3],还兼治小儿发育不良及毒蛇咬伤[4].据报道,金线莲中含有糖苷类化合物、有机酸、甾体化合物、黄酮类化合物、糖类化合物、生物碱[5-10]等.作者主要研究了金线莲中总生物碱的提取及测

定.1 实验部分

1.1 仪器与试剂

DJ -10A 型倾倒式粉碎机(上海淀久中药机械制造有限公司),UV-752PC 型紫外分光光度计(上海光谱

第4期钟添华等:金线莲总生物碱的提取及含量测定69

仪器有限公司),KQ-250D型医用数控超声清洗器,RE-52AA型旋转蒸发仪,FD-1冷冻干燥机(北京博医康技术公司).

盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号:714-9903,供含量测定);0.1%溴麝香草酚蓝乙醇溶液;柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH5.4);聚苯乙烯磺酸氢型离子交换树脂(型号:001@7型,北京化工厂);金线莲干燥全草(购自福建省同春药业有限公司,产地广西.经福建省药检所中药室游勇基主任药师鉴定).以上试剂除专门提到外,均为分析醇,实验用水为二次蒸馏水.

1.2实验方法

1.2.1树脂的预处理

将新的树脂加适量的丙酮在索氏提取器中抽提2h,除去有机物,将树脂取出晾干,蒸馏水湿法装柱.柱子先用3%盐酸淋洗,除去Fe3+,铁氰化钾检查不变色后,用3%氢氧化钠淋洗,使树脂转化为钠型,蒸馏水冲洗到弱碱性,用稀盐酸冲洗到p H约为3,使之转化为H型,最后用蒸馏水冲洗到中性,且Ag NO3检验无AgC l为止,准备上样.

1.2.2金线莲总生物碱的提取

将金线莲全草粉末300g(过80目筛)放入下口瓶中;用pH2的盐酸浸泡72h,并加入少许氯仿防止溶液发霉变质;再将下口瓶超声1h,取出,于离心机中离心30m in,转速3500r#m i n-1,抽滤,收集滤液备用.将滤液流经处理好的阳离子交换树脂,调节流速使生物碱完全吸附到树脂上,尔后流速控制在约0.5mL# m in-1.可以观察到当含有生物碱的滤液通过层析柱时,一条棕黑色的色带自上而下缓缓向下移动.取上述滤渣再浸提72h,进行下一次渗漉,操作同上,用碘化铋钾检测直至渗漉液中检测不出生物碱为止.

当层析柱中大部分树脂吸附了生物碱后,用水洗树脂至中性,将柱中吸附有生物碱的树脂全部倒出,在70-80e的水浴中烘烤随时观察,避免树脂烤焦,烘干后的树脂拌入2m o l#L-1的盐酸适量,搅拌均匀.放置4h后将树脂用滤纸包好放入索氏提取器中,先用氯仿/甲醇(2B1)浸泡过夜,然后进行回流提取12h.当提取液接近无色时,可适量滴加几滴浓盐酸,再回流提取,如此重复5次,当提取液中检测不出生物碱时,旋转蒸发溶剂冷冻干燥得粗总生物碱3.3234g.

1.2.3生物碱检定

取2mL浓缩液置于离心管中,同时取一等重蒸馏水作空白放入离心机中离心5m in,转速9000r# m in-1,取上层清液,均加碘化铋钾试剂同上离心5m i n,发现样品管中有棕黑色沉淀生成,而空白管没有沉淀.可证实提取物为生物碱成分.

1.2.4标准曲线

精密称取盐酸麻黄碱对照品0.0134g,置于100m L容量瓶中,加水定容至刻度,得含盐酸麻黄碱浓度为134m g#L-1的对照品溶液.精密量取盐酸麻黄碱对照品标准溶液1,2,3,4,5mL置于干燥的分液漏斗中,分别补水至5m L,再精确加入5mL p H5.4柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,1mL0.1%溴麝香草酚蓝溶液,氯仿10mL,振摇混匀待用.精确量取1mL于10mL容量瓶中用氯仿定容至刻度,摇匀.另取5mL二次纯化水,同法操作,作为空白对照液,在412nm进行测定,以取样量为横坐标,吸收值为纵坐标,得回归方程A= 0.0092C-0.0016,r=0.9999(n=5).结果表明,盐酸麻黄碱在16-80L g#m L-1范围内线性良好. 2结果与讨论

2.1金线莲总生物碱的含量测定[10]

取金线莲总生物碱0.0276g用氯仿溶解并定容到100mL备用.精确移取适量的待测液于分液漏斗中,实验方法同1.2.4测其吸光值,5次测定平均值为0.0794%,RSD为0.12%.

2.2加样回收实验

精密称取金线莲总生物碱16.5m g,准确加入浓度为134m g#L-1的盐酸麻黄碱对照品溶液4mL.按照1.2.4项制备供试液和空白对照液,在最大吸收波长处测定样品,其结果见表1,平均回收率为103.13%, RSD为0.2687%.

2.3讨论

生物碱作为中草药有效成分之一是近年来研究的热点.传统的生物碱提取分离方法有溶剂法,离子交