分解尿素的细菌的分离和计数

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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验方案

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验方案

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验方案尿素是一种含氮有机化合物,广泛用作化肥和动物饲料。

土壤中的细菌可以通过分解尿素来获取氮元素,从而促进土壤微生物群落的生长和发展。

为了研究土壤中分解尿素的微生物群落,可以进行以下实验:
1.采集土壤样品,将其通过蒸馏水过滤器过滤,以去除大颗粒物和悬浮物。

2.将过滤后的土壤样品接种到含有尿素的培养基中,利用不同的培养条件(如温度、pH值、氧气含量等)筛选出适宜于生长的细菌。

3.将筛选出的细菌进行单一克隆培养,然后通过染色、显微镜观察和生化测试等方法对其进行鉴定和分类。

4.最后,可以利用计数板等设备对土壤中分解尿素的细菌进行计数。

实验步骤:
1.收集土壤样品,通过蒸馏水过滤器过滤。

2.制备含尿素的培养基,分别设置不同的培养条件,如温度、pH 值、氧气含量等。

3.将过滤后的土壤样品接种到培养基中,进行培养。

4.观察培养基中是否有细菌生长,记录细菌的数量和形态特征。

5.对生长的细菌进行单一克隆培养,然后进行鉴定和分类。

6.利用计数板等设备对土壤中分解尿素的细菌进行计数。

实验注意事项:
1.在实验过程中要注意卫生,避免污染。

2.制备培养基时要严格按照配方和操作步骤进行。

3.培养时要控制好温度、pH值、氧气含量等条件,以便筛选出适宜于生长的细菌。

4.鉴定和分类时要准确和细致,避免误判。

5.计数时要进行多次重复,以提高结果的精度和可靠性。

实验03土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

实验03土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

专题03土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、实验原理:(1)土壤中的细菌之所以能分解尿素是因为它们能合成尿酶。

(2)配置以尿素为唯一氮源的培养基,能够在这个培养基上生长的细菌就是能分解尿素的细菌。

二、操作步骤:(1)土壤取样①土壤要求:酸碱度接近中性且潮湿。

②取样部位:距地表约3~8 cm的土壤层。

(2)样品的稀释测定土壤中细菌的数量,一般选用1×104、1×105和1×106倍稀释的稀释液进行平板培养,当第一次做这个实验时可以将稀释的范围放宽一点。

(3)微生物的培养与观察①培养:根据不同微生物的需要,控制适宜的培养温度和培养时间。

细菌一般在30~37 ℃的温度下培养1~2 d。

②观察a.观察方法:每隔24 h统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果。

b.记录菌落的特征:包括菌落的形状、大小和颜色等。

2、灭菌培养基:高压蒸汽灭菌法3、培养皿灭菌:干热灭菌法三、操作提示(1)无菌操作①取土样的用具在使用前都需要灭菌。

②实验操作均应在酒精灯火焰旁进行。

(2)做好标记:本实验使用的平板和试管较多,为避免混淆,最好在使用前做好标记。

例如,在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。

(3)制定计划:对于耗时较长的生物实验,需要事先规划时间,以便提高实验效率,在操作时有条不紊。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数操作中需注意的问题(1)为了保证结果准确,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。

(2)恰当的稀释度是成功统计菌落数目的关键。

(3)为增强实验说服力与准确性,设计实验时,需要涂布至少三个平板作为重复组,目的是排除实验中偶然因素对实验结果的影响。

(4)分析实验结果时,要考虑重复组结果是否接近,如果相差太大,意味着操作有误,需重新实验。

(5)为防止培养时间不足导致菌落遗漏,在菌落计数时,每隔24 h统计一次菌落数目,选取菌落数目稳定时的记录作为结果。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
Taq细菌
耐高温的酶
寻找
寻找 耐高温生物体 耐高温环境(热泉等)
小结:从自然界筛选目的菌株的原则:
根据微生物对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找。
耐盐微生物
盐碱地等高盐的环境
冰川
耐寒微生物
分解石油的细菌
油田
2、 实验室中微生物的筛选 筛选原则:人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营 养、温度、pH等),同时抑制或阻止其他微生物生长。
(二)制备培养基
制备选择培养基(尿素为唯一氮源) 制备牛肉膏蛋白胨培养基 思考:为什么要制备牛肉膏蛋白胨培养基? (对照作用)
相同的菌液,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应 明显多于选择培养基上的数目,因此,牛肉膏蛋白胨培养基 可以作为对照,用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
(三)稀释涂布平板
(1)测土壤中细菌数: 一般用104、105、106稀释液
(2)测放线菌: 一般用103、104、105稀释液 (3)测真菌数: 一般用102、103、104稀释液 以保证获得菌落数在30-300之间。
思考:(P24页左侧)
原因:不同微生物在土壤中含量不同
(三)稀释涂布平板
每个稀释度均用3个选择培养基和1个牛肉膏蛋白胨培养基 为保证计算结果准确 ①选择菌落数在30~300的平板上计数。 ②每个稀释度取3个或以上平板做重复组,其平均值。
三、设置对照 (三)设置对照:
(1)设置对照的目的: 是排除实验组中非测试因素对实 验结果的影响,提高实验结果的可信度。 (2)对照实验: 指除了被测试的条件外,其他条件都相同的实验。
请你通过设置对照实验,(P23页),帮助A同学排除上述两个可 能影响实验结果的因素。 可能原因 设置对照 实验结论 其他同学用与A同学 如结果与A同学一致,则证明 土样不同 相同土样进行实验 A无误;反之,则证明A同学 失误 若有菌落出现,则培养基被污染 培 养 基 污 染 或 将A同学的培养基不接种, 培 养 中 混 入 了 进行培养,作为空白对 若无菌落出现,则没污染 照 若菌落数和A同学一致,说明培养基 其他的含氮物 中混入了其他含氮物质,若菌落数 其他同学用A同学的培养 质) 与其他同学一致说明培养基中没有

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

基础知பைடு நூலகம்:
(一)筛选菌株
KH2PO4
1.4g
NaH2PO4
2.1g
MgSO4`7H2O 葡萄糖
0.2g 10.0g
尿素 琼脂
选择培养基
1.0g 15.0g
培养基配方
思 考:该培养基对微生物具有选择作用吗?如果 具有,是如何进行选择的?
只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长
选择培养基:在微生物学中,将允许特定种
• 2.提示:反刍动物的瘤胃中含有大量的微生 物,其中也包括分解尿素的微生物。由于 瘤胃中的微生物多为厌氧菌,接触空气后 会死亡,因此分离其中能分解尿素的微生 物除了需要准备选择培养基外,还应参照 厌氧菌的培养方法进行实验设计。
分析P22实例:
你认为哪个同学的结果更接近真实值?你认 为这两位同学的实验需要改进吗?如果需要,如 何改进?
第一位同学没有重复实验(至少涂布3个平板),结 果不具有说服力。
第二位同学有重复实验,但结果不一致(误差较 大),说明在操作过程中可能出现错误,需要重 新实验。
【例1】为了计数微生物的数量,一位同学在4
1、酚红培养基: 鉴定分解尿素的细菌。 原理:脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增
强,PH升高→酚红指示剂,变红 2、伊红—美蓝培养基: 鉴定大肠杆菌。 原理:代谢产物与伊红-美蓝结合→菌落呈黑
色。
大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征
大肠杆菌呈黑色中心 ,有或无金属光泽
本课题知识小结:
课后练习
——利用血球计数板在显微镜下直接计数。
(2)活菌计数法——统计菌落数目
方法: 稀释涂布平板法。 原理:
当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长 的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

专题2 微生物的培养与应用课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数课题背景尿素是一种重要的农业氮肥。

但是,尿素不能直接被农作物吸收,只有当土壤中的细菌将尿素分解成之后,才能被植物吸收。

细菌为什么能分解尿素?怎样分解的?(写出化学反应式)一、基础知识(一)筛选菌株1、实验室微生物的筛选原理是什么?2、培养基(1)分析右边的培养基配方,回答:○1在该培养基的配方中,为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质?○2分析该培养基的配方,想一想这种培养基对微生物是否有选择作用?如果具有,是如何进行选择的?(2)在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基,称作。

(二)统计菌落数目测定微生物数目的常用方法:、1、显微镜直接计数法:(1)原理?利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。

(2)显微镜直接计数法的缺点是什么?2、稀释涂布平板法(活菌计数法)(1)为什么通过测平板上的菌落数可以推测样品中的活菌数?(2)如何根据平板上的菌落数推测出每克样品中的菌株数?【例题】某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234,那么每毫升样品中菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml)()A. 2.34X108B. 2.34X109C. 234D.23.4(3)统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是低?为什么?特别注意:统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。

【实例分析1】两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。

在对应稀释倍数为106的培养基中,得到以下两种统计结果。

1.第一位同学在该浓度下涂布了一个平板,统计的菌落数为230。

2.第二位同学在该浓度下涂布了三个平板。

统计的菌落数分别为21、212和256.该网学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果你认为哪位同学的结果接近真实值?你认为这两位同学的实验需要改进吗?如果需要,如何改进?【实例分析2】在做本课题的实验时,A同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落。

高中土壤中分解尿素的细菌的分离与计数及答案教案

高中土壤中分解尿素的细菌的分离与计数及答案教案

高中土壤中分解尿素的细菌的分离与计数及答案教案YUKI was compiled on the morning of December 16, 2020课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数要点展示1.研究培养基对微生物的选择作用,进行微生物数量的测定。

2.能利用选择培养基分离细菌,运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。

要点突破一、理论基础1.筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时或其他微生物生长。

(2)选择培养基:在微生物学中,将允许种类的微生物生长,同时和其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基。

(3)配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。

例如,培养基中不加入有机物可以选择培养微生物;培养基中不加入氮元素,可以选择培养;的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

2.统计菌落数目(1)测定微生物数量的常用方法有和。

(2)稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个。

通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确,一般选择菌落数在的平板进行计数。

此外,测定微生物数量的常用方法还有直接计数。

3.设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响,提高实验结果的。

例如为了排除培养基是否被杂菌污染了,需以培养的培养基作为空白对照。

二、实验设计关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下:1.取样:从肥沃、湿润的土壤中取样。

应先 3 cm左右,再取样,将样品装入事先准备好的中。

2.制备:准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目,因此,牛肉膏蛋白胨培养基可以作为,用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

3.微生物的与观察将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL),充分摇匀,吸取上清液,转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中,将土样以1、101、102……依次等比稀释至107稀释度,并按照由107~103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。

2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数

2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
结果:培养一定时间后,该菌数量上升,再通过平板稀释等方 法对它进行纯化培养分离。
(一)筛选菌株
3、选择培养基
根据微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性不
同,配制的允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他
种类微生物生长的培养基。
本课题使用的选择培养基
物理特性:固体培养基 功能特性:选择培养基
例:用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数,在对应 稀释倍数为106的培养基中,得到以下几种统计结果,正确的是
(D )
A.涂布了一个平板,统计的菌落数是230
B.涂布了两个平板,统计的菌落数是215和261,取平均值238
C.涂布了三个平板,统计的菌落数分别是21、212和256,取平 均值163
【解析】稀释倍数为106,0.1 mL稀释液的菌落数的平均值为234,则每 毫升样品中菌落数就为234/0.1×106=2.34×109。
(二)统计菌落数目
2.间接计数法→活菌计数法
(1)原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一 个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。
(2)常用Байду номын сангаас法:稀释涂布平板法。
葡萄糖
10.0g
不缺能乏分氮解源尿的素培,养缺基乏—氮—源分而离不固能氮生微长生物
尿素 琼脂
1.0g 15.0g
发在育无繁氧殖条,件而下受的到普抑通制培,养所基以—用—此分培离厌氧型将和上兼述性物质厌溶氧解型后微,用生蒸物馏水
养基就能够选择出分解尿素的微生物。
定容到1000mL。
例:下列能筛选出分解尿素的细菌的培养基是( A )
但A同学认为自己选用土壤样品不同导致结果不同,但是A同学没 有设计对照,拿不出让同学信服的证据。你能通过设置对照,帮助A同 学排除上述两个可能影响因素吗?

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学反思

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学反思

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学反思引言:在本次实验课中,我们进行了土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验。

通过分离土壤样品中的细菌,培养和计数,探究了土壤中细菌的多样性及其对尿素的降解能力。

在教学过程中遇到了许多困难和挑战,同时也获得了宝贵的经验和教训。

下面我将对本次实验课进行反思,总结教学中的收获和不足之处,并提出改进和完善的建议。

一、教学收获:1. 实践操作能力的培养通过本次实验,学生们不仅了解到细菌分离和计数的基本方法,还提高了实践操作能力。

在分离细菌和培养计数的过程中,学生们需要仔细观察、耐心操作,不断调整实验条件和方法,才能获得准确的结果。

这样的实践操作对学生们的动手能力和实验技能有着很好的锻炼作用。

2. 培养团队合作意识在本次实验中,学生们需要相互协作,共同完成分离和计数的工作。

通过小组之间的合作、帮助和交流,学生们深刻体会到了团队合作的重要性。

在实验过程中,学生们能够相互帮助、相互学习,形成了良好的团队合作氛围。

3. 提高科研素养本次实验的设计是基于科学研究的需求,学生们通过实际操作,探究土壤中分解尿素的细菌的多样性和降解能力。

通过实验,不仅锻炼了学生的科研思维和探究能力,还激发了学生对科学研究的兴趣,提高了他们的科研素养。

二、教学不足:1. 实验操作流程不够清晰在实验操作中,有些学生对细菌分离和计数的操作流程理解不够清晰,容易产生混淆或错误。

这可能是因为在实验前对操作流程说明不够详细,或者在实验中没有进行及时的指导和纠正。

所以,未来需要对实验操作流程进行更为详细和清晰的说明,确保学生能够正确理解并掌握实验操作的要领。

2. 实验设备材料准备不充分在实验过程中,有时由于实验设备和材料准备不充分,导致实验进度受到了一定的影响。

培养基配制和消毒的耗时较长,部分设备不够齐全等。

这些问题的存在导致了实验操作的不顺利,影响了实验效果。

今后需要提前做好实验设备和材料的准备工作,确保实验能够顺利进行。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教案

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教案

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、教学目标:1.能按照科学探究的要求,应用稀释涂布平板法和微生物数量测定的方法,设计从土壤中分离分解尿素的细菌并进行计数的方案。

2.依据设计的方案,运用无菌操作技术和微生物分离、培养的方法初步分离出目标菌。

3.尝试解决生产、生活中与微生物选择培养、计数等有关的实际问题。

二、教学重难点:教学重点:实验设计方案的设计与修正,正确进行实验操作教学难点:设计实验方案。

三、教学过程:提出问题(实验目的):(1)从土壤中分离出能够分解尿素的细菌。

(2)统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。

基础知识(实验原理):绝大多数微生物都能利用葡萄糖,但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基,可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。

选择培养基配方: 组分 含量KH 2PO 41.4g Na 2HPO 42.1gMgSO 4·7H 2O0.2g葡萄糖10.0g 尿素1.0g 琼脂 15.0gH 2O定容至1000mL 实验设计:请同学们阅读教材19页资料,思考有关问题,小组合作进行实验设计,写出详细的实验方案,交流修正。

实验步骤:按照方案,选择合适的实验材料,进行实验。

(一)、土壤取样细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长,绝大多数分布在距地表3~8cm 的土壤层。

因此,取样时一般要铲去表层土。

将样品装入纸袋。

注意事项:取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。

操作完成后,一定要洗手。

(二)、制备培养基用牛肉膏蛋白胨培养基作为对照组,用以尿素为唯一氮源的培养基做实验组,用来判断选择培养基是否具有选择作用。

(三)、样品的稀释与涂布平板(稀释涂布平板法)简要回顾操作梯度稀释:在酒精灯火焰旁称取10g土壤,放入盛有90mL无菌水的锥形瓶中,振荡使土壤与水充分混合,将细菌分散,制成101倍土壤稀释液。

用1支1mL无菌吸管从中吸取1mL土壤悬液注入盛有9mL无菌水的试管中,吹吸三次,充分混匀,制成102倍的土壤稀释液。

人教版高中生物选修一专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学案含解析

人教版高中生物选修一专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学案含解析

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、研究思路1.筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等),同时抑制或阻止其他微生物的生长。

(2)选择培养基:在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基,称做选择培养基。

2.统计菌落数目(1)活菌计数法:常用稀释涂布平板法。

①原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。

通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②计算公式:每克样品中的菌株数=(C ÷V )×M 。

C :代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。

V :代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)。

M :代表稀释倍数。

③统计方法:为了保证结果准确,一般设置3~5个平板,选择菌落数在30~300的平板进行计数,并取其平均值。

.1.实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH 等)同时抑制或阻止其他微生物的生长。

2.在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基,称做选择培养基。

3.测定微生物数量的常用方法有活菌计数法和显微镜直接计数法。

稀释涂布平板法常用来统计活菌的数目,但统计结果往往比活菌的实际数目低。

4.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,因此可用尿素作为唯一氮源的选择培养基分离能分解尿素的细菌。

5.鉴定分解尿素细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,依据是否变红进行判断。

(2)显微镜直接计数法:在显微镜下直接观察和计数微生物的数量。

3.设置对照(1)对照实验:指除了被测试的条件外,其他条件都相同的实验。

(2)主要目的:排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。

二、实验设计1.土壤取样从富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤取样。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数在我们生活的地球上,土壤是一个极其复杂而又充满生机的生态系统。

在这个生态系统中,存在着各种各样的微生物,它们在物质循环和能量流动中发挥着至关重要的作用。

其中,分解尿素的细菌就是一类非常特殊且具有重要功能的微生物。

尿素是一种常见的含氮化合物,广泛应用于农业生产中作为氮肥。

然而,植物并不能直接吸收和利用尿素,需要经过分解尿素的细菌将其转化为氨等植物能够吸收的形式。

因此,研究土壤中分解尿素的细菌对于提高氮肥的利用率、减少环境污染以及深入了解土壤生态系统的功能都具有重要意义。

要分离和计数土壤中分解尿素的细菌,首先需要采集合适的土壤样本。

我们通常会选择那些长期施用尿素肥料的农田、花园或者草地的土壤。

在采样时,需要使用无菌的工具,如无菌铲或者无菌勺,从不同的地点和深度采集土壤,以确保样本的代表性和多样性。

将采集到的土壤放入无菌的塑料袋中,并尽快带回实验室进行处理。

回到实验室后,第一步是制备培养基。

用于分离分解尿素的细菌的培养基通常是选择培养基,其中含有尿素作为唯一的氮源。

除此之外,还需要添加碳源(如葡萄糖)、无机盐、生长因子等营养物质,以及琼脂作为凝固剂。

在制备培养基的过程中,要严格遵守无菌操作,防止杂菌的污染。

接下来,将土壤样本进行稀释。

这是一个关键的步骤,目的是将土壤中的微生物分散开来,以便能够在培养基上形成单个的菌落。

我们可以使用无菌水对土壤样本进行一系列的梯度稀释,比如 10 倍、100 倍、1000 倍等。

稀释的程度要根据土壤中微生物的数量和实验的要求来确定。

然后,将稀释后的土壤溶液涂布在制备好的培养基上。

使用无菌的涂布棒,将溶液均匀地涂布在培养基的表面。

涂布完成后,将培养基倒置放入恒温培养箱中进行培养。

培养的温度和时间要根据所分离的细菌的特性来确定,一般来说,温度在 30℃至 37℃之间,培养时间为2 至 3 天。

在培养的过程中,分解尿素的细菌会在培养基上生长并形成菌落。

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数书本知识背记材料

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数书本知识背记材料

【土壤中分解尿素的细菌的分离和计数】一、研究思路1.筛选菌株尿素是一种重要的农业氮肥,农作物不能直接吸收利用,而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨和CO2,才能被植物利用,土壤中的这些细菌之所以能分解尿素,是因为它们能合成脲酶。

可以利用这一特点,将其从土壤中筛选出来。

(1)实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时抑制或阻止其他微生物生长。

(2)选择培养基:在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制和阻止其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基。

2.统计菌落数目(1)常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法。

即当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。

通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确,一般选择菌落数在30~300 的平板进行计数。

通常统计出的菌落数比活菌的实际数目低。

这是因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。

因此,统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。

(2) 显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。

(3)细菌的数目还可以通过滤膜法来测定。

例如,测定饮水中大肠杆菌的数量,可将已知体积的水用细菌过滤器过滤后,将滤膜放到伊红美蓝培养基上培养,大肠杆菌菌落呈现黑色,可以根据培养基上黑色菌落的数目,计算出水样中大肠杆菌的数量。

二、对分离得到的分解尿素细菌的鉴定在细菌分解尿素的化学反应中,细菌合成的脲酶将尿素分解成了_氨_。

氨会使培养基的碱性增强,pH 升高。

因此,我们可以通过检测培养基PH变化来判断该化学反应是否发生。

在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。

培养某种细菌后,如果pH升高,指示剂将变红,说明该细菌能够分解尿素。

1。

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学反思

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学反思

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学反思本次实验的目的是进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。

通过这个实验,我学到了许多关于土壤中细菌的分离和计数的理论知识,并且锻炼了实验操作的能力。

在整个实验过程中,我也遇到了一些困难和问题,但通过和同学的讨论和老师的指导,逐渐解决了这些问题,并且取得了较好的实验结果。

在实验开始前,我们必须对实验仪器和试剂进行消毒处理,以免外界的细菌污染影响实验结果。

在消毒的过程中,我犯了一个错误,没有充分清洗试剂瓶和培养皿,导致实验过程中出现了一些干净条件下的细菌污染。

这给实验结果的准确性带来一定的影响。

我认识到在进行实验前,必须对实验仪器和试剂进行彻底的消毒处理。

在进行土壤细菌分离的过程中,我遇到了一个困难,就是细菌的生长速度较慢,需要等待较长的时间才能得到可见的细菌菌落。

这使得实验的进展变得缓慢。

我尝试了加大温度和增加营养物浓度等方法,以加快细菌的生长速度,但效果并不理想。

在与同学和老师的讨论中,我了解到细菌的生长速率受到很多因素的影响,如温度、营养物浓度、氧气浓度等。

要想加快细菌的生长速度,需要综合考虑这些因素的影响并进行相应的调控。

这对我来说是一个很好的启示。

在土壤中分解尿素的细菌计数方面,我遇到了一个挑战,就是如何避免细菌的聚集现象。

在使用显微镜观察细菌时,发现细菌聚集在一起,难以进行准确计数。

我通过改变显微镜的放大倍数和视野大小,结合用涡旋器轻轻搅动培养皿来减少细菌的聚集现象。

通过不断尝试和调整,最终取得了比较准确的计数结果。

通过这次实验,我掌握了土壤中分解尿素的细菌的分离和计数的基本方法和技巧,并且对于如何预防细菌污染和减少细菌聚集现象有了更深入的认识。

通过这些问题和困难,我认识到科学实验需要耐心和细心,需要不断地思考和探索,才能取得令人满意的结果。

我会在以后的实验中继续努力,提高自己的实验操作能力和解决问题的能力。

土壤中分解尿素的细菌的分离与记数

土壤中分解尿素的细菌的分离与记数

尿素分解细菌的纯培养
尿素分解细菌的纯培养是分离尿素分解细菌的关键步骤, 通过选择性培养基,将土壤中的尿素分解细菌分离出来, 获得单一菌落。
培养基中添加尿素作为唯一氮源,以筛选出能够分解尿素 的细菌。同时,培养基中还应添加适量的其他营养成分, 以满足尿素分解细菌的生长需求。
尿素分解细菌的计数方法
尿素分解细菌的计数可以采用菌落计数法或细胞计数法。菌落计数法是通过培养 基上形成的菌落数量来计算尿素分解细菌的数量,而细胞计数法则采用显微镜直 接观察和计数细胞。
菌落计数法操作简便,但可能存在菌落重叠和无法区分死菌和活菌的问题。细胞 计数法虽然准确度高,但操作较为复杂,需要使用显微镜和专业的细胞计数器。
尿素分解细菌的计数实验步骤
将土壤样品稀释后涂布在含有尿素的 培养基上,然后进行培养。
对筛选出的尿素分解细菌进行纯培养, 并进行进一步的生理生化实验和分子 生物学鉴定,以确定其种类和特性。
采集时间
采样方法
选择适宜的时间采集土壤样品,通常 在春季或秋季进行,此时土壤中的微 生物活性较高。
采用多点采样法,在不同地点和深度 采集土壤样品,以获得更全面的土壤 信息。
采样地点
选择具有代表性的土壤区域进行采样, 如农田、森林、草地等,确保采集的 土壤样品具有广泛性和代表性。
分离尿素分解细菌的方法
生长特性
这些细菌在尿素培养基上 生长良好,表现出对尿素 的良好分解能力。
尿素分解细菌的记数结果
菌落计数
通过菌落计数法,对分离 出的尿素分解细菌进行数 量统计。
数量分布
在土壤的不同区域,尿素 分解细菌的数量分布存在 差异。
生长条件
部分尿素分解细菌对生长 条件较为敏感,如温度、 pH值等。

分解尿素的细菌的分离与计数步骤

分解尿素的细菌的分离与计数步骤

分解尿素的细菌的分离与计数步骤下载提示:该文档是本店铺精心编制而成的,希望大家下载后,能够帮助大家解决实际问题。

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《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学反思

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学反思

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学反思本次实验是关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,通过本次实验,我对实验的步骤、方法和实验过程有了更深入的了解,并且也对实验结果进行了分析和总结。

在本次实验中,我对实验的步骤有了更加清晰的认识。

在实验开始之前,我首先对实验所需的材料和试剂进行了准备,确保实验进行顺利。

在实验过程中,我根据实验手册上的步骤进行了操作,严格控制每一个步骤,保证实验结果的准确性和可靠性。

在实验操作过程中,我也注意到了一些细节问题,比如对培养基的制备和灭菌过程的控制等,这些细节问题对实验的成功与否起到了关键作用。

通过本次实验,我对实验方法有了更深入的了解。

在实验过程中,我发现了一些问题,并通过及时的调整和改进,解决了实验过程中出现的困难。

比如在分离细菌的过程中,我对培养基的选择和处理进行了一些调整,提高了细菌的分离效率。

在细菌计数的过程中,我也对显微镜的调整和操作进行了一些技巧上的改进,提高了细菌计数的准确性。

通过本次实验,我对实验过程有了更加深入的认识。

在实验过程中,我遇到了一些实验结果与预期不符的情况,通过对实验结果进行分析和探讨,我找到了问题所在,并对实验方案进行了一些调整和改进。

通过这些实验结果的分析,我对细菌在土壤中分解尿素的机制有了更加深入的了解,这对我进一步的研究和探讨具有重要的意义。

通过本次实验,我也对实验结果进行了总结和分析。

通过实验数据的整理和统计,我得出了一些结论,并对实验结果进行了一些解释和探讨。

我也对实验中存在的一些问题和不足进行了分析,并对今后的实验工作提出了一些建议和改进措施。

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学反思

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学反思

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》教学反思在本次《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》实验中,学生通过对土壤样品进行分离培养和计数,探究了细菌在土壤中分解尿素的能力,提高了他们的实验操作能力和科学研究意识。

然而在实施过程中,还存在一些问题和不足,需要做进一步的反思和改进。

在本次实验中,学生们需要对土壤样品进行细菌的分离培养和计数。

这需要较长时间的培养和耐心的观察,而学生的实际操作能力和观察经验有限,因此在进行培养和计数时,出现了一些困难和错误。

比如在分离培养时,有些学生没有严格控制培养条件,导致细菌数量偏低或者有其他杂菌的污染;在计数过程中,学生们对菌落的表现形式和特征不够清晰明了,导致计数结果的不准确。

在今后的教学实践中,需要引导学生加强实验操作技能的训练,提高他们的细菌分离和计数能力,可以通过增加类似实验的次数,或者引导他们阅读相关文献,加深对实验原理和方法的理解。

在本次实验中,学生们对于细菌分解尿素的原理和功能的认识较为欠缺。

他们很难理解细菌是如何分解尿素的,以及这种分解对土壤生态系统和植物生长的影响。

因此在今后的教学中,可以加强对于相关知识的讲解和引导。

可以通过讲解和讨论的形式,让学生了解细菌分解尿素的机制和重要性,引起他们对于这一实验的兴趣。

可以引导学生进行文献查阅,让他们对于相关领域的研究有更深入的了解,从而提高他们的科学研究意识和综合素养。

在本次实验中,学生们在实验报告的撰写和数据分析方面也存在一定的不足。

有些学生对于实验结果和数据的解释较为肤浅,缺乏深入的分析和思考。

因此在今后的教学实践中,需要加强学生对于数据分析和实验报告撰写的指导,让他们了解科学实验的全过程和全部要素,提高他们的科学素养和科学研究能力。

《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》实验是一次很有意义的实践活动,能够提高学生的实验操作能力和科学研究意识,但在实施过程中仍然存在一些问题和不足。

在今后的教学实践中,可以通过引导学生加强实验操作技能的训练,加强对于相关知识的讲解和引导,以及加强对于数据分析和实验报告撰写的指导,逐步完善本实验的教学效果,提高学生的综合素养和实践能力。

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在菌落计数时,每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果,以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
每克样品中的菌落数=(C÷V)×M
其中,C代表某一稀释度下平板上生长的平 均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液 的体积(ml),M代表稀释倍数。
注意事项
①为了保证结果准确,一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。
条件对照:给对照组施以部分实验因素,但不是所要研究的 处理因素。 自身对照:对照组和实验组都在同一研究对象上进行。 相互对照:不单设对照组,而是几个实验组相互对照。
A同学统计的菌落数为150个,而其他 同学统计的结果为50个.
A同学的结果与其他同学不同,可能的 解释有哪些呢?
一是由于土样不同;
二是由于培养基污染或操作失误。
◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板, 则说明稀释操作比较成功,并能够进行菌落的计数,如 果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大,表明试 验不精确,需要重新实验。
㈤.微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌:30~37℃培养1~2d 放线菌:25~28℃培养5~7d 霉菌:25~28℃的温度下培养3~4d。
/kg)是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本 中:好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万,放线 菌数约为477万,霉菌数约为23.1万。
结论:为获得不同类型的微生物,就需要按不
同的稀释度进行分离,同时还应当有针对性地 提供选择培养的条件。
㈣.取样涂布
◆实验时要 对培养皿作 好标记。注 明培养基类 型、培养时 间、稀释度、 培养物等。
4、培养基选择分解尿素的微生物的原理
培养基的氮源为尿素,只有能合成脲酶的微生物 才能分解尿素,以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微 生物由于不能分解尿素,缺乏氮源而不能生长发 育繁殖,而受到抑制,所以用此培养基就能够选 择出分解尿素的微生物。
选择培养基:在微生物学中,将允许
特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止 其他种类微生物生长的培养基。
芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、 棒状杆菌、梭状芽孢杆菌,某些真菌和放线菌 也能分解尿素。
4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
一.研究思路 ㈠.筛选菌株
㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
㈠.筛选菌株
1、实例: DNA多聚酶链式反应是 一种在体外将少量DNA 大量复制的技术,此项 技术要求使用耐高温 (930C)的TaqDNA聚 合酶。 原因:因为热泉温度70~800C,淘汰了绝大 多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。
[三]样品的稀释
◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中,每一步都要在火焰旁进行
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因:不同微生物在土壤中含量不同 目的:保证获得菌落数在30~300之间、适于计数 的平板
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度?
原因:土壤中各类微生物的数量(单位:株
3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基:
KH2PO4 NaH2PO4 MgSO4`7H2O
葡萄糖
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g
尿素
1.0g
琼脂
15.0g
①从物理性质看此培养基属于哪类?从功能上属
于哪类培养基?
固体培养基 选择培养基
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源?
碳源:葡萄糖、尿素 氮源:尿素
㈡板,在显微镜下计算一定容积里 样品中微生物的数量。
缺点
不能区分死菌与活菌; 不适于对运动细菌的计数; 需要相对高的细菌浓度; 个体小的细菌在显微镜下难以观察;有时候 需要染色
2.间接计数法 (1)常用方法:稀释涂布平板法。
(2)原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表
启示:寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求,到相应的环境中去寻找。
2、实验室中微生物的筛选原理:
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营 养、温度、pH等),同时抑制或阻止其他微生 物生长。
要分离一种微生物,必须根据该微生物的特点,包 括营养、生理、生长条件等;配置合适的培养基 方法: ⑴抑制大多数微生物生长 ⑵造成有利于该菌生长的环境, 结果:培养一定时间后,该菌数量上升,再通过稀 释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。
2.提示:选择每个平板上长有30—300个 菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。 同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相 差悬殊,如相差较大,表示实验不精确。
㈢.设置对照:
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素 对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。
设置对照的方法:
空白对照:不给对照组任何处理因素。
方案一:由其他同学用与A同学相同土样进行实验 结果预测:如果结果与A同学一致,则证明A无误; 如果结果不同,则证明A同学存在操作失误或培养 基的配制有问题。
②为了减少误差可将同一稀释度涂布三个或三 个以上的平皿中,经涂布,培养计算出菌落平 均数。
③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
④涂布平板法所选择的稀释度很重要,一般以 三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌 落数在50个左右为最好。
微生物的培养与观察
三.结果分析与评价
1.通过对照实验,若培养物有杂菌污染, 菌落数偏高;若培养物混入其他氮源,则 菌落形态多样,菌落数偏高,难以选择出 分解尿素的微生物。
面生长的一个菌落,来源于样品稀释 液中的一个活菌,通过统计平板上的 菌落数,就能推测出样品中大约含有 多少活菌。
二.实验的具体操作
㈠.土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层 土3cm左右,再取样,将样品装入事先准备好的 信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用 前都要灭菌。
㈡.制备培养基: 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。
题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计
一、课题背景
1、尿素的利用
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农 作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才 能被植物利用。
2、细菌利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶
脲酶
CO(NH2)2 +H2O
NH3 + CO2
3、常见的分解尿素的微生物
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