生物制品检验大实验
生物制品的质量标准制定及实验研究
生物制品的质量标准制定及实验研究随着生物技术的不断发展，生物制品的应用范围越来越广泛。
比如，血液制品、生物诊断试剂、基因治疗药物等各种生物制品已经成为医学领域中不可或缺的重要治疗手段。
然而，各种生物制品的质量标准制定及实验研究也成为了一个亟待解决的问题。
一、生物制品质量标准的制定生物制品的质量标准制定，是保障其安全性、有效性、稳定性等方面的基础性工作。
生物制品的质量标准制定包含以下几个方面：1、原材料的选择及质量把控。
对于生物制品的生产，原材料的选择至关重要。
因此，必须要对原材料进行充分的筛选、鉴定和质量把控。
2、生产工艺的控制。
生物制品的生产过程中，各个环节的质量控制都非常重要。
必须建立科学的生产工艺技术和生产质量管理体系，制定详细的生产工艺流程和质量控制方案，保证整个生产过程的质量和安全。
3、产品质量的评估和检验。
在生产完毕后，要对生物制品进行质量评估和检验。
这包括对生产批次的严格管控，对产品的外观、理化性质、微生物质量、有效性等各个方面进行检验。
二、生物制品实验研究生物制品生产需要进行大量的实验研究，以便对生产工艺的优化和产品质量的提高。
具体的实验研究内容如下：1、生产工艺的优化。
生产工艺的优化是生物制品生产中非常重要的一环。
通过实验室的研究，可以对生产工艺进行不断的改进和优化，以提高生产效率和产品质量。
2、产品稳定性的研究。
生物制品的稳定性对产品的质量和安全有着至关重要的影响。
因此，需要进行长期的研究以了解其储藏、热稳定性等各个方面的情况。
3、产品安全性的研究。
生物制品的安全性是最为重要的一点。
需要进行各种实验研究以评估其安全性，比如毒性、致突变性、致癌性、免疫原性等。
4、有效性的研究。
针对不同的生物制品，需要进行各种有效性研究，以确定产品是否达到了治疗的效果。
总之，在生物制品的质量标准制定及实验研究方面，需要每一个环节都做到严谨规范。
同时，实验人员需要不断地进行技术创新和知识更新，提高实验研究水平。
综合实验之生物制品分析检测
综合实验之生物制品分析检测实验一:斐林试剂置换法测定还原糖的含量一、实验原理:糖类包括多糖、双糖和单糖，其中单糖和某些双糖具有游离的羰基，称为还原糖，多糖和蔗糖无还原性。
利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定.非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。
斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。
根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。
二、试剂与材料：1、试剂：菲林试剂甲液：称取69.3g硫酸铜晶体，用蒸馏水溶解，定容至1000ml菲林试剂乙液：称取346g酒石酸钾钠，100g氢氧化钠，用蒸馏水溶解定容至1000ml2、1%次甲基蓝溶液：1g次甲基蓝溶于100ml水3、0.2%标准葡萄糖溶液：2g葡萄糖105℃烘干到恒重加水到1000ml4、碱式滴定管5、样品溶液：待测葡萄糖溶液样品1：稀释20倍，样品2：稀释50倍6、电炉三、操作方法：1、斐林试剂标定A 取甲液5ml+乙液5ml，（注意：甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀，应将甲液加入乙液，使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶）置于250ml三角瓶中，加入10ml水，并从滴定管中加入0.2%的标准葡萄糖溶液若干毫升（约23ml）。
（量控制在后滴定时消耗葡萄糖液在0.5－1.0ml)B 电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液用0.2%标准葡萄糖液滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。
记录耗用的葡萄糖液量为V0,必须在1min内完成。
注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。
2、定糖预备试验同1法取斐林试剂，加10ml样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用0.2%葡萄糖液滴定至蓝色消失。
生物制品检验技术实验
本科生课程实验（生物工程专业 10年级 1班 )实验名称生物制品基本成分测定姓名:王帆同组人姓名：王兆、庄琳、卢扬、梁美兰二○一二年十一月目录一、绪论 (1)二、实验 (9)2—1实验目的 (9)2—2实验原理 (9)2—3仪器药品 (10)2-4实验步骤 (10)2—5数据记录与处理 (13)2—6结果与讨论 (14)2-7结束语 (15)三、参考文献 (15)一、绪论生物制品中文名称:生物制品英文名称:biological product定义：一类用于疾病诊断或防治的制剂。
生物制品是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的，用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。
生物制品不同于一般医用药品，它是通过刺激机体免疫系统,产生免疫物质(如抗体）才发挥其功效，在人体内出现体液免疫、细胞免疫或细胞介导免疫。
生物制品的种类:根据采用的材料、制法或用途不同,可分为六类:疫苗类药物、抗毒素及抗血清类药物、血液制品、重组DNA制品、诊断制品以及其他制品。
生物制品是药品的一大类别，但生物制品的其实材料都具有生物活性、其制备过程是无菌操作的生物学过程,并以生物学技术和分析技术来控制其原料，中间品及成品的质量。
因此，应根据生物制品生产和质量管理的固有特性,对生物制品的特殊要求进行规定。
药品：指用于预防、治疗、诊断人的疾病，有目的地调节人的生理机能并规定有适应症，用法和用量的物质。
（包括材料、重要饮片、中成药、化学原料及其制剂、抗生素、生化药品、放射性药品、血清制品和诊断药品等）生物制品检验技术生物制品检验的性质和任务性质：用化学、物理化学或生物化学的方法和技术来研究生物制品的质量及其控制方法，是一门研究和开发生物制品及其质量控制的“技术学科”。
主要包括：生物制品形状的检测、生物制品化学组成的检测、物制品杂质限量的检测、生物制品含量的检测等。
生物制药技术试验
草酸酸化
发酵液
板框压滤
加 NaOH 中和
滤液
板框压滤
上离子交换柱
中和滤液
吸附
1 mol/L H2SO4
饱和树脂
解吸
解吸液
加 NaOH 及 KMnO4 中和、氧化、过滤
中和氧化滤液
加氨水沉淀 离心甩干，洗去氨
多粘菌素游离碱
加 6 mol/L H2SO4,调 pH 6.0~6.5, 溶解
喷雾干燥
多粘菌素 E 硫酸盐
白色粉末（成品）
衡量抗生素发酵液中抗菌物质的含量称效价。抗生素效价测定可采用化学法或生物效价测定法。 生物效价测定有稀释法、比浊法、扩散法三大类。管碟法是扩散法的一种。本实验采用管碟法测定抗 生素的效价。
生物制药技术实验
图 5－2 效价测定示意图 A 800 u/mL；B．1000 u/mL；C.1200u/mL；D. 样品稀释液 按 2～3 个双碟中 1000 u/mL 抑菌圈直径的平均值校正抑菌圈直径。例如：标准状态下 l 000 u／ mL 多粘菌素 E 抑菌圈直径为 18.00 mm，若我们所测 B 管(1 000 u/mL)抑菌圈直径总平均值为 17.8mm， 校正值为 18.00 mm-17.80 mm＝+0.20mm。则双碟中所有钢管浓度的抑菌圈直径也应加上 0.20 mm，即 得校正后的数值。若我们所测 B 管(1 000 u/mL)抑菌直径总平均值为 18.20 mm，校正值为 18.00 mm-18.20 mm＝-0.20 mm，此组某浓度的抑菌圈直径也应加上-0.20 mm，即得校正后的数值。 (6) 标准曲线的绘制 以各浓度的抑菌圈直径的校正值平方为横坐标，以标准品浓度(u/mL)的对数 值为纵坐标，纸上绘制标准曲线。 (7) 发酵样品效价汁算 以样品稀释液抑菌圈直径的校正值查标准曲线，得出相应的效价单位，再 乘以稀释倍数，即得发酵液的效价单位。
生物制品中辛酸含量紫外测定法
生物制品中辛酸含量紫外测定法一、背景介绍1.1 生物制品中辛酸的重要性生物制品中的辛酸是一种重要的有机化合物，具有多种生物活性和药用价值。
对生物制品中辛酸含量的准确测定至关重要。
1.2 紫外光谱测定法的优势传统的辛酸含量测定方法包括色谱法、高效液相色谱法等，但这些方法需要专业设备和技术，操作复杂且耗时。
而紫外光谱测定法则具有操作简便、快速高效的优势，因此备受研究者的青睐。
二、生物制品中辛酸含量紫外测定法的原理2.1 辛酸的紫外吸收特性辛酸在紫外光谱中具有特定的吸收特性，其吸收峰位于210-220nm 范围内。
利用辛酸在紫外光谱中的吸收特性，可以通过测定其吸光度来间接测定其含量。
2.2 样品制备生物制品中的辛酸通常以液态形式存在，需经过适当的前处理步骤，如稀释、过滤等，以获得稳定的测试样品。
2.3 紫外光谱仪的工作原理紫外光谱仪能够分析样品在紫外光谱区域内的吸光度。
通过将样品与标准溶液进行比较，可以计算出样品中辛酸的含量。
三、生物制品中辛酸含量紫外测定法的操作步骤3.1 样品处理将生物制品样品取出并进行适当的前处理。
确保样品中辛酸的浓度在检测范围内。
3.2 仪器准备准备好紫外光谱仪，并进行适当的校准，保证测试结果的准确性。
选择合适的紫外光谱检测波长。
3.3 测定操作按照仪器使用说明进行操作，将样品放入紫外光谱仪中进行测定。
记录下吸光度值。
3.4 数据处理利用已知辛酸标准溶液进行对照测定，计算出待测样品中辛酸的含量。
四、应用范围和不足4.1 应用范围生物制品中辛酸含量紫外测定法适用于各类生物制品，包括制药原料、中间体、成品药等。
并且可以适用于多种环境条件下进行测试。
4.2 不足之处虽然紫外光谱测定法具有操作简便的优势，但是仍然存在着一些不足。
比如样品前处理对测试结果的影响较大，需要严格控制；而且某些杂质可能会对测试结果造成干扰，需要进一步的研究和方法改进。
五、总结与展望生物制品中辛酸含量紫外测定法具有操作简便、快速高效的优势，可以为生物制品生产和质量控制提供重要的技术支持。
Q5c 生物制品的稳定性试验
5．1 方案
在向管理部门申请制品上市的档案中，应包括原料药和制剂稳定性评价的详细方案，．以 支持所建议的贮藏条件和有效期。方案中包括所有能证明生物技术产品及生物制品整个有效 期的稳定性所必需的资料，如明确的标难规范和试验间隔。所使用的统计方法也应在三方制 定的稳定性指导原则中收载。
同。
4．2 半成品
生物技术产品及生物制品生产过程中，某些半成品的质量控制对成品的生产不可缺少。 通常，生产商应检验半成品，以得到内控数据和工艺限度，确保其稳定性在开发的工艺范围 之内。当允许使用试生产资料时，生产商应确定这些数据是否可用于生产规模的工艺中去。
4．3 制剂
应提供至少 3 批能代表生产规模情况的制剂的稳定性资料。如可能，用于制剂稳定性试 验的各批次应源于不同批号的原料药。当贮藏期要求大于 6 个月时，至少需申报 6 个月的用 定性试验资料。如贮藏期小于 6 个月时，最初申报所需的最短稳定性资料将依不同的制剂而 定。制剂的有效期应根据申报的真实数据而定。由于效期是依据所审查资料中的真实时间和 确实温度数据而制定的，因此在审评过程中对原始稳定性的数据可不断更新。进行稳定性试 验的制剂质量应能代表用于临床前和临床研究的产品质量。在向管理机构申报全套资料时， 如果稳定性资料是由试生产工艺制备的制剂研究得来，则申报者应承诺在获得批淮后对最初 三批规模化生产的制剂进行长期稳定性试验。当效期的制定是依据试生产批次制剂的数据， 而生产规模生产的制剂的长期稳定性试验结果与试生产制定的规范不符或其质量不能代表 用于临床前和临床研究的产品质量时，生产商应报告管理机构以便采取适当的措施。
生物制品的质量检验—生物制品的效力检验
将药物的供试品（T）和已知效价的标准品（S）对生物体 进行同时对比，以对T的效价（或毒力）进行检定的方法。 属于对比检定。
S— dS （标准品剂量）； PS （标准品效价） T— dT （供试品剂量）； PT （供试品效价）
常以产生等反应时的效价比值R得出
R= PT/PS
等反应对比检定原理
✓Reed-Muench法计算
(难点、重点)
病C毒C液IDC5P0E孔数 无CPE
累计
出现CPE孔
稀释度
孔数 CPE孔数 无CPE孔数 所占的%
10-1
8
0
27
0
100（27/27）
10 -2
8
0
19
0
100（19/19）
10 -3
7
1
11
1
91.6 （11/12）
10 -4
3
5
4
6
40（4/10）
2 随机区组设计
将分成8各区组（如来自8个窝的动物）的32个受试者随机分配到 A,B,C,D四个处理组各区组中的受试者被随机分配接受的不同处理
3 微量生理活性
物质测定
应用 范围
1 药物效价测定
2 某些有害杂质
限度检查
微量生理活性物质测定
一些神经介质，激素等微量生理活性物质，由于其很 强的生理活性，在体内的浓度很低，加上体液中各种物 质的干扰，很难用理化方法测定。
而不少活性物质的生物测定法由于灵敏度高、专一性 强，对供试品稍作处理即可直接测定。
整体动物
体外测定
(in vitro) 离体器官、组织,微生 物, 酶和细胞
定量、半定量、定性 药品的生物效价、 安全检查、鉴别
生物制品一类新药临床实验
生物制品一类新药临床实验生物制品是指通过采集、提取或改造生物材料得到的药品，它们具有独特的治疗效果和应用领域。
为了确保生物制品的安全有效性，进行临床实验是必要且重要的一步。
本文将探讨生物制品一类新药临床实验所涉及的关键步骤和要点，以及实验中的伦理道德和安全问题。
一、临床实验步骤1. 研究设计：在进行生物制品一类新药临床实验之前，研究者需要制定详细的研究设计方案。
该方案应明确研究目的、研究对象、实验组和对照组设置、随访时间、终点指标等内容。
2. 伦理审批：申请进行临床实验需要经过伦理委员会的审批，确保实验符合伦理道德要求，保护受试者的权益和安全。
3. 受试者招募：研究者根据临床实验设计方案的要求，招募符合条件的受试者。
在招募过程中，应充分向受试者解释实验内容、风险和可能的好处，并取得受试者的知情同意书。
4. 实验进行：按照研究方案中规定的操作程序和时间节点进行临床实验。
需要监测受试者的病情和药物疗效，并记录实验数据。
5. 数据分析和结果评估：实验结束后，研究者需要对数据进行统计分析，评估实验结果的可信度和药物的安全性、有效性。
根据分析结果，可以作出相应的结论和建议。
二、实验中的伦理道德和安全问题1. 受试者权益保护：临床实验过程中，研究者应严格遵守伦理道德规范，尊重受试者的权益和隐私。
在征得受试者知情同意后，确保其对实验过程有清晰的理解，并保证他们的自主选择权。
2. 安全监测：药物试验过程中，需要对受试者进行定期的安全监测，以及不良反应和副作用的评估。
研究者应及时采取措施保证受试者的生命安全和健康。
3. 实验数据真实性：研究者在临床实验中应遵循科学原则，确保实验数据的真实性和可信度。
数据的收集、记录和分析过程应严格按照规定的操作程序进行，并遵守数据保密的原则。
4. 结果公开透明：临床实验结束后，研究者应及时公开实验结果，包括正面和负面的结果。
同时，还需对实验过程进行透明，接受相关部门和公众的监督。
生物制品学实验指导
生物制品技术实验指导生物工程系目录实验规则⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 2 实验一、猪瘟、口蹄疫抗体间接血凝实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ 3 实验二、鸡新城疫灭活疫苗的制备—照蛋及接毒⋯⋯⋯⋯ 4实验三、鸡新城疫灭活疫苗的制备—鸡胚收毒及测效价⋯⋯ 5 实验四、鸡新城疫灭活疫苗的制备—油乳苗的制备⋯⋯⋯⋯ 6实验五、氢氧化铝和蜂胶的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7 实验六、法氏囊炎病高免卵黄抗体的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8 实验七、法氏囊炎病高免卵黄抗体效价的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯9 实验八、兔瘟灭活苗的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10 实验九、大肠杆菌自家灭活疫苗的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11 实验十、动物实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12 实验十一、鸡白痢平板抗原的制备及使用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15 实验十二、免疫血清的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16 实验十二、细菌冷冻真空干燥实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18实验规则实验中所用材料，多具有传染性（如病原微生物、含病原微生物的血、尿、便、痰、脓汁及感染动物等），在实验过程中，必须严肃认真地进行无菌操作，以保证结果准确，防止实验室感染，防止病原微生物污染环境。
必须遵守以下各项。
1、实验前必须预习实验指导书。
若经提问发现没有预习者，须在教师指定的时间内预习完毕，方得参加实验。
、进实验室不得将书包、衣物等放在实验1台上，不必需的物品勿携入室内。
2、实验室内严禁饮食、吸烟及用嘴舔湿铅笔及瓶签，、如发生感染或污染等意外时，应立即报告指导老师，进行紧急处理。
5、保持实验室安静，不得谈笑喧哗，不许搞其他动作，以免影响他人实验。
实验进行时不准随意进出。
实验室中物品未经许可不准带出室外。
6、清洗仪器、用具、材料时，须将固形物倒入指定容器内，不得直接倒入水槽，以免造成水管堵塞。
7、实验过程中，须按操作规程仔细操作，注意观察试验结果，应及时记录。
不得抄写他人的实验实习记录，否则，须重做。
兽药生物制品临床实验项目
兽药生物制品临床实验项目在现代兽药研究领域，生物制品的研发和应用成为了一项重要的任务。
兽药生物制品通过利用生物技术手段，从动物体内提取或合成特定的生物活性物质，用于预防、诊断和治疗动物疾病。
为了确保兽药生物制品在临床应用中的安全性和有效性，临床实验项目的进行显得尤为重要。
一、背景介绍兽药生物制品的临床实验项目是指在动物（通常是实验动物或农畜牲畜）身上进行的实验研究，旨在评估该生物制品在预防、治疗或诊断动物疾病方面的效果和安全性。
这些实验项目为兽药的注册申请和上市提供了必要的科学依据。
二、实验设计1. 动物选择：根据兽药生物制品的应用对象和临床需要，合理选择实验动物，比如小鼠、大鼠、猪、狗等。
动物选择应遵守伦理规范，确保动物福利和合法性。
2. 样本采集：根据实验设计需要，定期采集动物体内样本，如血液、组织、尿液等，在不影响动物生理和行为的前提下进行。
3. 组织培养或处理：根据实验需要，将采集到的样本进行适当的处理，如细胞分离、培养、刺激等，以模拟实际治疗或预防过程。
4. 药物给药：根据兽药生物制品的用途和剂型，采用适当的给药途径和剂量，如口服、注射、涂抹等，确保药物能够达到预期效果。
5. 治疗效果评估：通过临床观察、体检和实验室检查，评估兽药生物制品的疗效和安全性。
需要注意的是，临床评估应严格遵守科学和伦理原则，不得过度损害实验动物的健康和福利。
三、数据收集和分析在实验过程中，必须详细记录实验数据，包括动物的个体信息、样本采集时间、药物给药情况等。
数据的收集可以利用实验记录表格、电子数据采集系统等方式进行。
得到的数据需要进行统计分析，以评估兽药生物制品的效果和安全性。
四、伦理与法律考虑在进行兽药生物制品临床实验项目时，必须严格遵守伦理规范和法律法规，确保实验过程的合法性和动物福利。
研究人员应获得相关伦理委员会的批准，并遵守国家和地区的兽药法规。
五、实验结果及应用展望根据兽药生物制品临床实验项目的结果，得出对于治疗、预防或诊断动物疾病的有效性和安全性评价。
生物制品检验大实验
生物制品检验技术实验总结报告前言：生物制品是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人工原组织和液体等生物材料制备的。
用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品[1]。
一、概述：生物制品的种类，根据采用的材料、制法或用途不同，可分为六类：疫苗类药物、抗毒素及抗血清类药物、血液制品、重组DNA制品、诊断制品以及其他制品[2]。
生物制品的特点，分子量不是定值、生化法结构确证、需检查生物活性、要求安全性检查、需做效价测定[3]。
生物制品检验的性质是运用化学或生物化学的方法和技术来研究生物制品的质量及其控制方法，是一门研究和开发生物制品及其质量控制的“技术学科”[4]。
此次生物制品检验技术实验主要包括生物制品中水分的测定、生物制品中蛋白质含量的测定、氨基酸的分离鉴定。
二、实验原理：实验一生物制品中水分的测定此次实验运用直接干燥法测量奶粉中水分的含量。
其原理基于生物制品中的水分受热以后,产生的蒸汽压高于空气在电热干燥箱重中的分压,使制品中的水分蒸发出来,同时,由于不断的加热和排走水蒸汽,而达到完全干燥的目的,制品干燥的速度取决于整个压差的大小[5]。
实验二生物制品中蛋白质含量的测定此次实验运用经典的凯氏定氮法测量蛋白质含量，其原理是样品用浓硫酸消化时，其中的含氮有机物分解放出氨，氨与硫酸化合生成硫酸铵。
在消化时常加入硫酸铜和硫酸钾作催化剂，以加速分解速度并提高消化的温度。
消化完毕，加入强碱使消化液中的硫酸铵分解，放出氨。
利用蒸汽蒸馏法，用硼酸溶液吸收蒸馏出来的氨，氨与硼酸溶液中的氢离子结合生成离子，使吸收液中的氨离子浓度下降，然后用标准酸溶液滴定，使吸收液中的氢离子恢复到原先的浓度，即可从消耗的酸量，计算样品中的含氮量。
样品消化，蒸馏的化学反应可归纳如下[16]：(NH4)2SO4+2NaOH→2NH3↑+Na2SO4+2H2O实验三氨基酸的分离鉴定——纸层析法此次试验运用纸层析法，其原理是用滤纸作为惰性支持物，层析溶剂由有机溶剂和水组成的物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移）来表示的：Rf=原点到层析中心的距离/原点到层析剂前沿的距离在一定的条件下某种物质的Rf值是常数[10]。
生物制品学实验
- ² O 2 - ² O 2 + + 2H + H 2O 2 + O 2 SOD 实验四 玉米超氧化物歧化酶（SOD ）的提取及活性测定一、本实验的教学目标及基本要求1．通过玉米超氧化物歧化酶（SOD ）的提取及活性测定，掌握硫酸铵盐析沉淀蛋白质及超滤浓缩蛋白质的方法和原理，比较二者的特点。
2．掌握测定超氧化物歧化酶（SOD ）的活力和比活力的方法。
二、本实验的教学内容（一）实验原理超氧化物歧化酶（superoxide dismutase ，简称SOD ），它广泛存在于各类生物体内，按其所含金属离子的不同，可分为3种：Cu,Zn-SOD ，Mn-SOD ，Fe-SOD 。
SOD 催化如下反应：在生物体内，它是一种重要的自由基清除剂，能治疗人类多种病症、放射病、自身免疫性疾病和抗衰老，对生物体有保护作用。
在玉米中，SOD 主要存在胚芽中，当将萌发的玉米籽粒打浆破碎后，以中性盐沉降其蛋白质部分，SOD 就存在于沉淀中，但其中有许多杂蛋白，因此在盐析时先用40% (NH 4)2SO 4去除杂蛋白部分，再用90% (NH 4)2SO 4饱和上清液，则其中SOD 成分即被浓缩分离。
超滤也是一种蛋白质浓缩方法。
超滤的工作原理是运用液压迫使溶质透过膜并按溶质分子量、形状、大小的差异，把大溶质分子阻留在膜的一侧，而小分子溶质则随溶剂透过膜到另一侧，使大小溶质分子得到分离。
利用此原理只要选择适当的超滤膜即可将玉米浆中SOD 与其它小分子杂蛋白、可溶性糖等分离，并去除水份，得到SOD 浓缩液。
SOD 活性测定采用NBT 光还原法。
其原理为核黄素在有氧条件下能产生超氧自由基负离子O 2-，当加入NBT 后，在光照条件下，与超氧自由基反应生成单甲月替（黄色），既而还原成二甲月替（呈兰色）。
该产物在560nm 下有最大吸收峰。
当加入SOD 时，可以使超氧自由基与H +结合生成H 2O 2+O 2，从而抑制了NBT 光还原的进行，使兰色二甲月替 生成速度减慢。
美国FDA生物技术产品／生物制品稳定性试验
生物技术产品质量生物技术产品／生物制品稳定性试验（草案FDA，1995，8）前言本文作为ICH制定的“新药半成品和成品指南””（1993年10月27日）的补充件。
总体来讲，该指南中所制定的原则适用于生物技术产品／生物制品，然而，因生物技术产品/生物制品确有不同的特性，在预计的储存期间，用来证实生物技术/生物品稳定性的任何一种已确定的试验方案都应考虑这些特性。
这些产品的活性成分是由典型的蛋白质和／或多肽组成，保持其分子构型并提高生物活性取决于非共价键和共价键强度。
这些产品对周围环境因素如：温度变化，氧、光、离子含量，切应力等等特别敏感，为了确保其生物活性并避免降解，严格的储存条件是必要的。
稳定性评估可能是综合性分析方法学所必须的。
对生物学活性的测定，是关键性稳定性研究的一个基本部分。
相应的物理化学、生物化学和免疫化学方法对于分子实体的分析和降解制品量的检出，也应是稳定性计划的一部分，无论是制品的纯度还是分子特性都允许利用这些方法学。
首先要关注的是：生物技术产品／生物制品申请者应拿出合适的支持其制品稳定性的数据，并应考虑到能影响制品效力、纯度和质量的诸多外部条件。
无论是半成品还是成品，支持一种被要求的储存期的主要数据，应以在长期、实际时间及实际条件下稳定性研究进行的。
因此，要使一种制品成功地发展成为商品，那么其相应的长期稳定性方案的产生就成为关键。
本文的目的是为那些关注稳定性研究模式的申请者提供指南，这些模式将被用来支持市场应用。
不言而喻，在检查与评估过程中，对最初稳定性资料应不断的更新。
附件的范围在此附件中，已采纳和解释的原则适用于：已充分定性的蛋白质、多肽及其衍生物和由其组成的制品以及从组织、体液、细胞培养物中分离的或以 rDNA生物技术生产的制品。
因此，此文件涉及如下制品稳定性资料的产生和提交：细胞因子（干扰素、白细胞介素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子、促红细胞生成素、血纤维蛋白溶酶原、激活剂、血液血浆因子、生长激素和生长因子、胰岛素、单克隆抗体和由已充分鉴定的蛋白质、多肽制成的疫苗。
生物制品检验技术实验
实验一 生物制品中水分的测定干燥制品中水分含量的高低，直接影响冻干制品的质量和保存效期。
冻干血浆水分含量愈低忿好，能使保存期延长，不易变性。
活菌苗含水量过高，易造成活菌死亡或蛋白变性．使制品失效。
但含水量过低，能使菌体脱水，同样会造成活菌死亡，降低效力。
方法一 直接干燥法1、实验原理基于生物制品中的水分受热以后,产生的蒸汽压高于空气在电热干燥箱重中的分压,使制品中的水分蒸发出来,同时,由于不断的加热和排走水蒸汽,而达到完全干燥的目的,制品干燥的速度取决于整个压差的大小。
2、适用范围本法以样品在蒸发前后的失重来计算水分含量,故适用于在95~105℃范围不含其他挥发成分且对热稳定的各种冻干制品。
3、样品的制备、测定及结果计算①样品必须磨碎，全部经过20~40目筛，混匀。
在磨碎过程中，要防止样品水分含量变化。
一般水分在14%以下时称为安全水分，即在实验室条件下进行粉碎过筛等处理，水分含量一般不会发生变化。
但要求动作迅速。
制备好的样品存于干燥洁净的磨口瓶中备用。
②测定时，精确称取上述样品2~10 g （视样品性质和水分含量而定），置于已干燥、冷却并称至恒重的有盖称量瓶中，移入95~105℃常压烘箱中，开盖2~4小时后取出，加盖置干燥内冷却0.5小时后称重。
再烘1小时左右，又冷却0.5小时后称重。
重复此操作，直至前后两次质量差不超过2mg 即算恒重。
③测定结果按下式计算：水分（%）= % 式中m 1 ----------干燥前样品于称量瓶质量，gm 2 ---------干燥后样品与称量瓶质量，gm 3 --------- 称量瓶质量 ， g4、 操作条件选择操作条件选择主要包括:称样数量,称量皿规格,干燥设备及干燥条件等的选择.①称样数量：测定时称样数量一般控制在其干燥后的残留物质量在1.5~3g 为宜。
对于水分含量较低的生物制品，将称样数量控制在3~5g 。
②称量皿规格：称量皿分为玻璃称量瓶和铝质称量盒两种。
生物制品学实验指导
生物制品学实验指导目录：实验一：细菌的划线分离与纯培养实验二：动物的免疫与接种实验三：灭活疫苗的制备实验四：凝集抗原的制备实验五：平板凝集试验实验六：病料的采集与鸡胚接种实验七：病毒的收集及效价的测定实验八：抗原及疫苗的制备实验九：动物的免疫与接种实验十：抗体水平的检测实验一：细菌的划线分离与纯培养实验二：动物的免疫与接种一：目的与要求：1熟悉细菌划线分离的方法及纯培养的意义。
2掌握动物的保定与接种方法。
二：实验内容与步骤：1种子繁殖：（1）将冻干菌种接种于普通肉汤培养；（略）（2）取种子液接种于普通琼脂平板。
点燃酒精灯后，在火焰上方，左手持皿，底朝下盖在上，以无名指和小指托底，拇指、食指和中指将皿盖揭开20°的角度，角度不要过大，以防空气进入污染培养基；但角度过小又不便于操作，且易造成皿盖边缘与接种环接触，导致杂菌污染；右手持接种环，在火焰上灼烧后，取少许菌料或细菌培养物涂于培养基边缘，将接种环上多余的菌料在火焰上烧掉，选择图1所示划线法中的一种进行划线，然后将平皿盖好，倒置于恒温培养箱中培养，37℃条件下培养24h。
图1 细菌分离培养的划线法2免疫接种：1）小白鼠皮下接种----颈背部、腹侧或后腿内侧，0.1ml/只用右手抓住小白鼠的尾巴上提，使两后肢悬空，让其两前肢的爪抓住饲养罐的铁丝网盖，然后用左手的拇指和食指抓住小白鼠颈部的皮肤并翻转，使其腹部朝上，将鼠尾巴夹在左手中指与无名指之间，右后腿夹在小手指与手掌之中。
右手持注射器，用注射针头轻轻挑起皮肤并刺入皮下，注入接种液时见注射部位微微隆起，注射完拔出针头后，应以酒精棉球按压针孔并稍加按摩。
注射量0.1ml/只。
2）兔子肌肉接种----后腿内侧， 0.5ml/只用左手轻轻压住兔子的头颈部，以拇指夹住兔子的有前肢，食指和中指夹住左前肢，右手紧握腹部和两后肢，使兔子的腹部朝上，由另一人进行接种注射。
注射部位选择动物的股内侧或股外侧，经局部消毒后，将注射针头刺入肌肉深部并推接种液。
生物制品学实验报告----三价副猪嗜血杆菌油乳剂灭活疫苗的制备及检验（小编推荐）
生物制品学实验报告----三价副猪嗜血杆菌油乳剂灭活疫苗的制备及检验（小编推荐）第一篇：生物制品学实验报告----三价副猪嗜血杆菌油乳剂灭活疫苗的制备及检验（小编推荐）三价副猪嗜血杆菌油乳剂灭活疫苗的制备及检验副猪嗜血杆菌是猪格拉泽氏病(Glasser’s disease)的病原菌，属于巴斯德菌科嗜血杆菌属，是一种多形态、非溶血性、不运动、NAD 依赖型、革兰氏阴性细小杆菌。
对营养要求比较苛刻，培养时必须供给含有V 因子（NAD）或（NADP)的新鲜血液才能生长。
此菌有多种血清型，其中强毒力的有1、5、10、12、13、14型，常可致死动物；中等毒力的有2、4、8、15型，多表现为多发性浆膜炎，不致死；低毒力的有3、6、7、9、11型，常无临床表现和病变。
在中国，4型和5型是主要分离株，而澳大利亚和丹麦的主要血清型为5型和13型。
在研究2、4、5、12、13和14型间的交叉保护性时发现，除了血清12型制备的单菌和血清2、12型制备的二价苗外，其他型都能对同源菌株产生保护；用血清4型制备的菌苗，可以保护血清5型的攻击；用血清4、5型制备的二价菌苗，可以抵抗血清13、14型的攻击（仔猪病变的严重性和病死率明显降低）。
三价灭活疫苗主要用于预防猪副嗜血杆菌病。
该苗针对性强，安全可靠，能有效降低发病率和死亡率。
一、实验目的了解副猪嗜血杆菌油乳剂灭活苗制作的流程。
2 掌握副猪嗜血杆菌油乳剂灭活苗制作的操作技术。
二、乳化的原理乳化剂能降低分散物的表面张力，在微滴（粒）表面形成薄膜或双片层，以阻止微滴（粒）的相互凝结。
三、材料，试剂，培养基（1）器材：不锈钢锅（或瓷锅）、电炉、乳化器、量筒、玻璃棒、离心机、吸管等。
（2）试剂：、甲醛（灭活剂）、白油（抗原油相）、Span-80（油相乳化剂）、Tween-80（抗原水相乳化剂）、硬脂酸铝（稳定剂）、4、5、13型分离菌株（抗原）。
（3）培养基的制备：1、配制0.2%的V因子准确称0.2g的NAD（辅酶I）加入100mlddH2O，用0.22um 的细菌过滤器过滤除菌，4°C保存备用。
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生物制品检验技术实验总结报告前言：生物制品是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人工原组织和液体等生物材料制备的。
用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品[1]。
一、概述：生物制品的种类，根据采用的材料、制法或用途不同，可分为六类：疫苗类药物、抗毒素及抗血清类药物、血液制品、重组DNA制品、诊断制品以及其他制品[2]。
生物制品的特点，分子量不是定值、生化法结构确证、需检查生物活性、要求安全性检查、需做效价测定[3]。
生物制品检验的性质是运用化学或生物化学的方法和技术来研究生物制品的质量及其控制方法，是一门研究和开发生物制品及其质量控制的“技术学科”[4]。
此次生物制品检验技术实验主要包括生物制品中水分的测定、生物制品中蛋白质含量的测定、氨基酸的分离鉴定。
二、实验原理：实验一生物制品中水分的测定此次实验运用直接干燥法测量奶粉中水分的含量。
其原理基于生物制品中的水分受热以后,产生的蒸汽压高于空气在电热干燥箱重中的分压,使制品中的水分蒸发出来,同时,由于不断的加热和排走水蒸汽,而达到完全干燥的目的,制品干燥的速度取决于整个压差的大小[5]。
实验二生物制品中蛋白质含量的测定此次实验运用经典的凯氏定氮法测量蛋白质含量，其原理是样品用浓硫酸消化时，其中的含氮有机物分解放出氨，氨与硫酸化合生成硫酸铵。
在消化时常加入硫酸铜和硫酸钾作催化剂，以加速分解速度并提高消化的温度。
消化完毕，加入强碱使消化液中的硫酸铵分解，放出氨。
利用蒸汽蒸馏法，用硼酸溶液吸收蒸馏出来的氨，氨与硼酸溶液中的氢离子结合生成离子，使吸收液中的氨离子浓度下降，然后用标准酸溶液滴定，使吸收液中的氢离子恢复到原先的浓度，即可从消耗的酸量，计算样品中的含氮量。
样品消化，蒸馏的化学反应可归纳如下[16]：(NH4)2SO4+2NaOH→2NH3↑+Na2SO4+2H2O实验三氨基酸的分离鉴定——纸层析法此次试验运用纸层析法，其原理是用滤纸作为惰性支持物，层析溶剂由有机溶剂和水组成的物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值（比移）来表示的：Rf=原点到层析中心的距离/原点到层析剂前沿的距离在一定的条件下某种物质的Rf值是常数[10]。
Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
本试验利用纸层析法分离氨基酸[11]。
三、材料与试剂：实验一实验样品：实验样品为奶粉。
实验二仪器药品：凯氏蒸馏器、凯氏烧瓶、消化架、三角烧瓶、滴定管、移液管、量筒烧杯、天平、2%硼酸、浓硫酸、催化剂：硫酸铜和硫酸钾按3∶1混合，研细。
混合指示剂：0.1%溴甲酚绿酒精溶液10ml，0.1%甲基红酒精溶液2ml，混合即得，贮于棕色瓶内。
器材：层析缸；毛细管；喷雾器；培养皿；层析滤纸实验三试剂：1、扩展剂：将20毫升的正丁醇和5毫升的冰醋酸放入分液漏斗中，与15毫升水混合，充分振荡，静止后分层，放出下层水层备用[13]。
2、氨基酸溶液：0.5%的赖氨酸，脯氨酸，缬氨酸，苯丙氨酸，亮甘酸溶液及他们的混合液3、显色剂：50-100毫升0.1%水和茚三酮正丁醇溶液四、实验方法：实验一测定时，精确称取奶粉2~10g（视样品性质和水分含量而定），置于已干燥、冷却并称至恒重的有盖称量瓶中，移入95~105℃常压烘箱中，开盖2~4小时后取出，加盖置干燥内冷却0.5小时后称重[6]。
再烘1小时左右，又冷却0.5小时后称重。
重复此操作，直至前后两次质量差不超过2mg即算恒重[7]。
实验二1．样品的消化(1)在分析天平上准确称取生物制品干粉（40─60目过筛）100─500mg（视样品中含氮量而定）2份。
(2)取50ml凯氏烧瓶3只，将称好的样品分别送入第1、2只烧瓶底部，第3只烧瓶不加样品，作为空白对照，以测定试剂中的微量含氮化合物。
于各个烧瓶中加入催化剂0.3g，浓硫酸5ml，然后将烧瓶置于通风橱消化架上，先用小火加热，待瓶内水分蒸完，硫酸开始放出SO2白烟，可加大火焰，使液体保持微沸状，直至溶液呈透明蓝绿色为止。
在消化过程中，要经常转动烧瓶，使得瓶壁上的碳化颗粒，为浓硫酸回流至瓶底，使消化完全。
为了缩短消化时间，当溶液变为浅棕色时，可加3─4滴30%过氧化氢。
消化完毕，冷却，待蒸馏。
2．氨的蒸馏(1)蒸馏装置的洗涤：先用自来水将凯氏定氮仪清洗干净，按图1装置好。
在蒸汽发生瓶中（烧瓶1）加入约2/3体积的蒸馏水，加入浓硫酸数滴（在酸性情况下，水中氨不会蒸馏出来）及沸石（或毛细管数根）使沸腾均匀，关闭活塞A和B，将烧瓶1中的水煮沸，使蒸汽充分洗涤仪器，并检查装置的各个部分有无漏气现象，然后打开活塞B，让蒸汽洗涤漏斗约5分钟，再将活塞B关闭，继续蒸馏约5分钟，使全部蒸馏器洗涤干净。
先移去三角烧瓶，再移去煤气灯，略等数秒钟，此时烧瓶1内气压下降，积聚在蒸馏瓶3内的水，被吸到管2内，开启活塞A，废液即从管2底部放出。
以后每个样品蒸馏完毕，都需进行上述的洗涤过程2─3次。
(2)消化液的蒸馏：先打开活塞A和B，再将事先准备好的盛有5ml2%硼酸及2滴混合指示剂的三角烧瓶，放在冷凝管下端，使管口浸入液面下。
取蒸馏水1ml加到凯氏烧瓶中，使与消化液混合，小心地将此溶液从漏斗倒入蒸馏瓶3中，再用少量蒸馏水洗涤克氏烧瓶，洗液也从漏斗倒入蒸馏瓶3中，如此洗涤3次。
然后从漏斗加入30%NaOH7ml，用蒸馏水少许洗涤漏斗2次，每次放液时都应控制活塞B，保留少许蒸馏水于漏斗内，密封之以防逸出氨气。
关闭活塞A和B，立即将烧瓶1加热沸腾，开始蒸馏。
三角烧瓶中的液体由棕紫色变为蓝绿色，再继续蒸3分钟，将三角烧瓶下降，使冷凝管口离开液面约1cm，继续蒸馏1分钟。
用少量蒸馏水冲洗冷凝管下端，洗涤液直接流入三角烧瓶中，然后移去三角烧瓶，再移煤气灯，使蒸馏瓶3中的废液吸到管2中，开启活塞A放出废液。
然后按上述步骤洗涤蒸馏器备用。
3. 滴定蒸馏完毕后，将三角烧瓶内的溶液，用0.01mol/L盐酸滴定，使溶液从蓝绿色变为淡紫色，即为终点。
分别记下样品和空白所消耗的0.01mol/L盐酸ml数，分别以V s和V0表示之[8]。
实验三1、取层析纸一张。
在纸的一端距边缘2厘米处用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔1-1.5厘米作一记号。
2、点样用毛细管将各氨基酸样品分别点在这六个位置上，干后再点一次。
每点在纸上的扩散直径最大不超过3毫米。
3、扩展用线将滤纸缝成筒状，只得两边不能接触。
将盛有扩展剂的培养皿迅速的置于密封的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中（点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1厘米）到溶剂上升15-20厘米时即取出滤纸，用铅笔描绘出溶剂前沿线，自然干燥或用吹风机热风吹干。
4、显色用喷雾器均匀的喷上0.1%的茚三酮正丁醇溶液；然后置于烘干箱烘干5分钟就可显现出各个层析斑点五、数据处理：实验一测定结果按下式计算[9]：水分（%）=m1−m2m1−m3=30.7495−30.661630.7495−27.5786=0.02772×100%=2.77%式中m1----------干燥前奶粉于称量瓶质量，30.7495g m2---------干燥后奶粉与称量瓶质量，30.6616gm 3--------- 称量瓶质量，27.5786g实验二按下式计算样品中的蛋白质含量[14]：蛋白质含量（%）=(V s−V0)×C×14×6.25W×100%=(9.50−0.90)×0.01×14×6.2565×100%=11.58%式中V s为滴定样品用去的盐酸体积，0.90mml。
V0为滴定空白用去的盐酸体积，9.5ml。
C为标准盐酸的摩尔浓度，0.01(mol/L)。
14为氮的原子量。
W为样品重量，65mg。
6.25为氮－蛋白质转换系数的平均值。
材料不同转换系数也不同。
实验三计算分析：1、断混合氨基酸中的单组分。
从下向上依次为：赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸。
2、计算各种氨基酸的R f值（各种单组分、混合氨基酸液）。
六、结果与讨论：实验一通过实验数据处理后可知，奶粉样品中的含水量为2.77%，而一般安全水分为14%。
测定奶粉样品含水量在安全水分之内，此奶粉制品水分认为合格。
经讨论，奶粉中含水量如果过高直接会影响奶粉制品的物理状态、味道、口感和保质期，所以奶粉制品必须严格控制其含水量[17]。
实验二通过凯氏定氮法测量蛋白质含量从实验数据可知，样品蛋白质含量在11.58%,但此法灵敏度较低，况且实验过程中会出现各种误差，误差范围大概为2%，将氮转化为氨，再用酸吸收后测定，实验比较耗时。
所以此种检验方法适用于实验室基本测量不适用于精确测量[15]。
实验三纸层析法分离鉴定氨基酸，从显色剂喷淋烘干后的滤纸清晰看见单组分氨基酸的层析斑点，黄色的斑点是脯氨酸，其余氨基酸均为粉红色斑点。
而混合液层析呈现多个纵向排列的斑点，脯氨酸的黄色斑点在混合液中可明显辨认出，其余氨基酸通过计算比较R f值可以分辨出混合液中氨基酸的种类。
从滤纸显色结果讨论，由于点样量控制不好，导致混合液中分离后缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸的斑点粘连，不清晰也不独立。
分离效果不是很好，但可知混合样中存在以上三种氨基酸。
七、结束语：通过本次生物制品检验技术实验，不仅锻炼了自己的实际动手能力和检测技能，并加深了对理论知识的掌握。
更加全面地掌握了直接干燥法测定水分、凯氏定氮法测定蛋白质含量、纸层析法氨基酸的分离鉴定流程与实际操作过程，深切体会到了实验过程中的注意事项和控制条件，进一步了解了生物制品检验技术在生活中的实际应用与生产中的重大意义。
参考文献：[1]章金刚,倪道明.生物制品的现状与展望[J] 中国输血杂志, 2006, (05) .[2]刘文军.生物制品专刊序言[J]生物工程学报, 2011, (05)[3]廖忠东.生物制品的种类及特点[J]. 中国家禽, 2003, (19)[4]陈玉琴.我国生物制品的现状与发展策略[J]. 中国药事, 2000, (01)[5]中国生物制品标准化委员会办公室.2000.国外生物制品管理和标准[6]Lansky D.Validation of Bioassays for Quality Control. Dev Biol Stand,1999,[7]ICH Q2A.Test on Validation of Analytical Procedures[8]王军志,生物技术药物研究开发和质量控制.北京科学出版社,2002，[9] 张庆新主编，产品质量抽样检验手册。
北京中国标准出版社，1994[10] 杨玉萍.“氨基酸纸层析分离方法”实验教学设计[J]. 新乡学院学报(自然科学版). 2010(03)[11] 尉向海.食品中水分及其测定方法的规范化探讨[J].中外医疗. 2009(02)[12] 张庆新主编，产品质量抽样检验手册。