菌种衰退、复壮、保藏

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(2) 菌种的复壮（rejuvenation）：使衰退的菌种
恢复原来优良性状。狭义的复壮是指在菌种已发生衰退的情况
下，通过纯种分离和生产性能测定等方法，从衰退的群体中找
出未衰退的个体，以达到恢复该菌原有典型性状的措施；广义
的复壮是指在菌种的生产性能未衰退前就有意识的经常、进行
纯种的分离和生产性能测定工作，以期菌种的生产性能逐步提
等）
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(3)菌种保藏的方法
菌
连续在培养基上（内）移种
种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种
保
固体斜面
藏
湿法 半固体琼脂柱
方 休眠态
液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液）
法
干法 藏在玻璃管内
吸附在合适的载体上
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①低温保藏法 方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 原理：低温下，微生物代谢强度明显下降 。 ②石蜡油低温保藏法： 橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。
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(3)防止菌种衰退的方法：
①控制传代次数（一般在DNA的复制过程中，碱基的错
配率是5x10-4，自发突变的频率为10-8~10-9，采用良好的菌种保藏 方法，可以减少移种和传代的数）；
②选择合适的培养条件； ③采用不同类型的细胞进行传代（对丝状微生 ； 物而言，通常采用稳定的单核孢子进行接种） ④采用有效的菌种保藏方法。
高。实际上是利用自发突变（正变）不断地从生产中选种
菌种的复壮措施：
①纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）。
②通过寄主体内生长进行复壮（如Bacillus thuringiensis的复
壮） ；
③淘汰已衰退的个体（采用比较激烈的理化条件进行处理，以杀死生命力较
差的已衰退个体）。
④采用有效的菌种保藏方法。可编辑ppt
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干法保藏菌种的方法
滴入小试管（在放入大试管干燥器中） 藏在玻璃管内 封入安培瓶 菌液直接真空干燥法（L-干燥法）
冷冻真空干燥法 细粒状载体（土壤、沙粒、土壤+沙粒） 球块状载体（硅胶、瓷球） 合适的载体 有机基质（曲料、麦粒）
滤纸片 薄片状载体 明胶小片（滴在蜡纸板上干燥而成）
血清蛋白小片（…乙烯薄膜… ）
③干燥保藏法
将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保
藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌
保藏，保藏时间几至几十年。
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④真空冷冻干燥法
加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干 燥。
适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活 时间长，是目前最好的保藏方法。
⑤液氮超低温保藏法
将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低 温冰箱中（ -196℃）。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法。
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5.2、菌种保藏：
(1) 目的： ①存活，不丢失，不污染 ②防止优良性状丧失 ③随时为生产、科研提供优良菌种
(2) 原理：选用优良的纯种，（最好是休眠体，如分 生孢子、芽胞等），创造降低微生物代谢活动强度，
生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件。（其环
境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂
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国内外菌种保藏机构：
❖菌种保藏机构的任务：广泛收集科研和生产菌种、
菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以及 便于研究、交换和使用的目的。
❖菌种保藏机构：
中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 法国里昂巴斯德研究所（IPL）
有效 5~15年 简便
以上 有效
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几种常用菌种保藏方法的比较
方法名称
冰箱保藏法（斜面） 冰箱保藏法（半固体）
石蜡油封藏法* 沙土保藏法
冷冻干燥法
主要措施 适宜菌种Fra Baidu bibliotek
低温 低温 低温、缺氧 干燥、无营养
各大类 细菌、酵母菌
各大类** 产孢子微生物
干燥、无氧、 低温、有保护
剂
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各大类
保藏期 评 价
3~6月 简便 6~12月 简便 1~2年 简便 1~10年 简便
5 菌种的衰退、复壮及保藏
5.1 菌种的衰退与复壮的概念 (1).衰退（degeneration） ：菌种在培养或保
藏过程中，由于自发突变的存在，出现某些原 有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现 象，称为菌种的衰退。
衰退的原因：①基因突变，②分离现象。
常见的衰退现象：
菌落和细胞形态的改变； 生长速度缓慢，产孢子越来越少； 抵抗力、抗不良环境能力减弱等。 代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力下降；