生物素标记试剂盒使用说明书

生物素标记试剂盒

使用说明书

货号: EBLK0002

产品介绍：

Elabscience生物素标记试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂，用于含有氨基（NH2-）抗体的标记。生物素已经活化，可直接使用，每个试剂盒足以完成3次标记，每次可标记0.2-2mg。试剂盒中包括6个用于抗体标记脱盐的Filtration tube，不用透析，操作简便，熟练操作90min可完成整个标记过程。

产品特点：

试剂全面:本试剂盒提供了生物素标记所需全部试剂。

快速:整个过程仅需90min。

方便:通过Filtration tube即可脱盐，无需透析或者凝胶过滤。

使用灵活:既可用于微量标记又可大量标记，每次可标记0.2-2mg。

理想的标记效果:已经优化确定了最适的标记比例，降低标记不足或由于过度标记而失活的可能性。

产品组成：

标记过程需要仪器：

1. 10ul，50ul，200ul，1000ul可调高精度移液器

2. 恒温箱（37℃）

3. 离心机（离心力可达到12,000×g）

储存条件：

本试剂盒未开封前在2-8℃可稳定保存一年

生物素标记反应原理：

NH2-Reactive Biotin专一地与伯胺反应（N-末端及赖氨酸残基侧链）形成稳定的酰胺键

生物素标记NH

2

-Reactive Biotin使用量的计算：

每个反应中生物素试剂的使用量取决于待标记蛋白质的量和浓度。通过优化，我们确定了标记2mg/ml的抗体（IgG ，150KD），使用生物素和抗体的分子比为20:1能达到较理想的标记效果。

1、标记2mg/ml的抗体，使用生物素和抗体的分子比为20:1时，应加入生物素量的计算方

法：

ml蛋白×2mg蛋白

ml蛋白×1mmolIgG

150,000mgIgG

×20mmol生物素

mmol蛋白

= mmol生物素

2、对于10mmol的生物素溶液，应加入反应中该生物素体积的计算方法：

mmol生物素×1,000,000μL

L ×L

10mmol

= ul生物素

计算示例：

对于0.5ml 2mg/ml的IgG（分子量为150,000）溶液，需加入10mM的生物素溶液13.3ul。

0.5ml IgG×2mgIgG

1mLIgG ×1mmolIgG

150,000mgIgG

×20mmol生物素

1mmolIgG

=0.000133mmol生物素

0.000133mmol生物素×1,000,000μl

L ×L

10mmol

=13.3ul生物素溶液

操作过程：

实验前准备：

1.仔细阅读使用说明书。

2.计算待使用NH2-Reactive Biotin的量。

3.提前20min从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温（注：不需要用到的NH2- Reactive Biotin 继续放置冰箱中）。

4.溶解NH2-Reactive Biotin：加入30ulDMF至NH2-Reactive Biotin瓶中，静置10min，待其充分溶解，此时生物素的浓度为10mM。

操作步骤：（本操作步骤按照1mg的量进行标记）

1. 取1mg待标记抗体于Filtration tube中，并加入相应体积的 Labeling Buffer，使抗体的终浓度为2mg/ml，12,000 x g离心10min。（注：①Filtration tube的最大体积为0.5ml ②待标记抗体浓度低时，可先超滤离心一次）

2. 加入1

3.3ul NH2-Reactive Biotin 和适量Labeling Buffer至上述Filtration tube 中，使终体积为0.5ml，并轻轻吹打混匀。放入37℃恒温箱中避光温育30min。

3. 12,000 x g离心10min。

4. 加入适量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使终体积为0.5ml，并轻轻吹打混匀，12,000 x g离心10min。并重复操作一次。

5. 加0.2ml Labeling Buffer至Filtration tube中，轻轻吹打。将滤芯倒转放置于另一个离心管中，6,000 x g离心10min。

6. 收集离心管中的溶液，即为生物素标记的抗体。

注意事项：

1.本试剂盒也可标记其它含有氨基（NH2-）的抗原、HRP、多肽，具体标记比例根据待标记

物中氨基的数量确定。

2.DMF要密封干燥保存，使用完立即用封口膜封紧。

3.操作步骤5中，可用Labeling Buffer作为回收标记抗体的缓冲液，也可使用其它任何

缓冲液或保护剂。

4.本试剂盒未开封前的有效期为一年，请在有效期内使用。

5.本试剂盒提供的为10KD的Filtration tube，标记抗原或多肽请注意分子量的大小。

6.在步骤2中，标记其它抗体时，我们应先控制抗体的终浓度为2mg/mL，然后再根据抗体

的量计算应加入NH2 - Reactive Biotin的体积。